Высокопроизводительная сборка фрагментов днк - RU2015106549A

Реферат

1. Способ сборки фрагментов ДНК, включающий,(а) предоставление молекулы первой ДНК, содержащей последовательность Козак;(b) предоставление молекулы второй ДНК, содержащей последовательность Козак на одном конце и шестирамочную стоп-последовательность на другом конце;(с) предоставление молекулы третьей ДНК, содержащей шестирамочную стоп-последовательность;(d) предоставление молекулы четвертой ДНК, содержащей последовательность линейного вектора; и(e) сборка продукта вектора с использованием ДНК-фрагментов стадий (а), (b), (c) и (d) в присутствии, по крайней мере, одной рекомбиназы.2. Способ по п. 1, в котором ДНК-фрагменты получают с использованием ПЦР-амплификации или прямого синтеза ДНК.3. Способ сборки фрагментов ДНК, включающий,(а) расщепление молекулы первой ДНК, по крайней мере, одним ферментом рестрикции типа II, в котором продукт расщепления молекулы первой ДНК содержит последовательность Козак;(b) расщепление молекулы второй ДНК, по крайней мере, одним ферментом рестрикции типа II, в котором продукт расщепления молекулы второй ДНК содержит последовательность Козак на одном конце и шестирамочную стоп-последовательность на другом конце;(c) расщепление молекулы третьей ДНК, по крайней мере, одним ферментом рестрикции типа II, в котором продукт расщепления молекулы третьей ДНК содержит шестирамочную стоп-последовательность;(d) расщепление молекулы четвертой ДНК, по крайней мере, одним ферментом рестрикции типа II, в котором продукт расщепления молекулы четвертой ДНК содержит последовательность вектора; и(e) сборку продукта вектора с использованием ДНК-фрагментов стадий (а), (b), (c) и (d) в присутствии, по крайней мере, одной рекомбиназы.4. Способ по п. 1, включающий также