Новая полифосфат-зависимая глюкокиназа и способ получения глюкозо-6-фосфата с ее использованием - RU2018134187A

1. Терморезистентная полифосфат-зависимая глюкокиназа, получаемая из рода Anaerolinea.

2. Полифосфат-зависимая глюкокиназа по п. 1, где глюкокиназу экспрессируют с последовательности ДНК, приведенной в SEQ ID NO. 1.

3. Полифосфат-зависимая глюкокиназа по п. 1, где глюкокиназа имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO. 2.

4. Композиция для получения глюкозо-6-фосфата, содержащая терморезистентную полифосфат-зависимую глюкокиназу, получаемую из рода Anaerolinea, глюкозу и полифосфат.

5. Композиция по п. 4, где композиция содержит от 1% до 3% по массе глюкозы, от 1% до 10% по массе полифосфата и от 10 Ед/мл до 50 Ед/мл полифосфат-зависимой глюкокиназы на основании общего объема композиции и достигает выхода превращения по меньшей мере 70% до глюкозо-6-фосфата.

6. Композиция по п. 4, где композиция содержит от 5% до 20% по массе глюкозы, от 5% до 12% по массе полифосфата и от 10 Ед/мл до 50 Ед/мл полифосфат-зависимой глюкокиназы на основании общего объема композиции и достигает выхода превращения по меньшей мере 50% до глюкозо-6-фосфата.

7. Композиция по п. 5 или 6, которая дополнительно содержит ионы магния.

8. Композиция по п. 7, в которой ионы магния присутствуют в концентрации от 0,2 мМ до 20 мМ.

9. Композиция по п. 4, в которой глюкозо-6-фосфат получают при температуре от 45°C до 90°C и/или pH от 4 до 10.

10. Способ получения глюкозо-6-фосфата из композиции, содержащей терморезистентную полифосфат-зависимую глюкокиназу, получаемую из рода Anaerolinea, глюкозу и полифосфат.

11. Способ по п. 10, в котором глюкозу получают посредством разжижения или гликозилирования крахмала или целлюлозы.

12. Способ по п. 10, в котором полифосфат представляет собой гексаметафосфат натрия.

13. Способ по п. 10, в котором глюкозо-6-фосфат получают при температуре от 45°C до 90°C и/или pH от 4 до 10.

14. Способ по п. 10, в котором композиция дополнительно содержит ионы магния.

15. Способ по п. 10, в котором полифосфат-зависимая глюкокиназа присутствует в количестве от 10 Ед/мл до 50 Ед/мл.

16. Способ по п. 10, в котором глюкоза присутствует в количестве от 0,1% до 40% по массе на основании общей массы композиции.

17. Способ по п. 10, в котором полифосфат присутствует в количестве от 0,5% до 25% по массе на основании общей массы композиции.

18. Способ получения глюкозо-6-фосфата из композиции, содержащей терморезистентную полифосфат-зависимую глюкокиназу, получаемую из рода Anaerolinea, ферменты для разжижения и осахаривания, крахмал и полифосфат.

19. Способ по п. 18, в котором ферменты для разжижения и осахаривания представляют собой один или несколько, выбранных из α-амилаз, глюкоамилаз и α-гликозидаз.

20. Рекомбинантный экспрессирующий вектор, содержащий ген, кодирующий полифосфат-зависимую глюкокиназу по п. 3.

21. Escherichiacoli BL21(DE3)/CJ_at_ppgk(KCCM11814P), трансформированная рекомбинантным экспрессирующим вектором, содержащим ген с SEQ ID NO. 1.

22. Способ получения соединения, выбранного из D-глюкозо-1-фосфата, D-фруктозо-6-фосфата, D-фруктозо-1,6-бисфосфата, D-миоинозитол-3-фосфата, D-миоинозитола, D-глюкуроната, D-глюкозамин-6-фосфата, D-глюкозамина, N-ацетил-D-глюкозамин-6-фосфата, N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-D-маннозамин-6-фосфата, N-ацетил-D-маннозамина, N-ацетилнейраминовой кислоты (сиаловой кислоты), D-маннозо-6-фосфата, D-маннозы, D-тагатозо-6-фосфата, D-тагатозы, D-аллюлозо-6-фосфата, D-аллюлозы, D-глицеральдегид-3-фосфата и дигидроксиацетонфосфата, способ включает проведение реакции терморезистентной полифосфат-зависимой глюкокиназы, получаемой из рода Anaerolinea, глюкозы или крахмала, полифосфата и дополнительного фермента.