Новая термостабильная фруктозо-6-фосфат-3-эпимераза и способ получения аллюлозы с ее использованием - RU2019100788A

1. Фруктозо-6-фосфат-3-эпимераза, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.

2. Нуклеиновая кислота, кодирующая фруктозо-6-фосфат-3-эпимеразу по п. 1.

3. Трансформант, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 2.

4. Композиция для получения аллюлозы, содержащая фруктозо-6-фосфат-3-эпимеразу по п. 1, микроорганизм, экспрессирующий фруктозо-6-фосфат-3-эпимеразу, или культуру указанного микроорганизма.

5. Композиция по п. 4, дополнительно содержащая аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, микроорганизм, экспрессирующий аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, или культуру указанного микроорганизма.

6. Композиция по п. 4, дополнительно содержащая:

а) (1) крахмал, мальтодекстрин, сахарозу или их комбинацию; (2) фосфат; (3) аллюлозо-6-фосфатфосфатазу; (4) глюкозо-6-фосфатизомеразу; (5) фосфоглюкомутазу или глюкокиназу; и (6) α-глюканфосфорилазу, фосфорилазу крахмала, фосфорилазу мальтодекстрина, фосфорилазу сахарозы, α-амилазу, пуллуланазу, изоамилазу, глюкоамилазу или сахаразу; или

б) микроорганизм, экспрессирующий любой из указанных ферментов, или культуру указанного микроорганизма.

7. Способ получения аллюлозы, включающий: превращение фруктозо-6-фосфата в аллюлозо-6-фосфат путем взаимодействия фруктозо-6-фосфата с фруктозо-6-фосфат-3-эпимеразой, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, микроорганизмом, экспрессирующим фруктозо-6-фосфат-3-эпимеразу, или культурой указанного микроорганизма.

8. Способ по п. 7, дополнительно включающий превращение аллюлозо-6-фосфата в аллюлозу путем взаимодействия аллюлозо-6-фосфата с аллюлозо-6-фосфатфосфатазой, микроорганизмом, экспрессирующим аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, или культурой указанного микроорганизма, после превращения фруктозо-6-фосфата в аллюлозо-6-фосфат.

9. Способ по п. 7, дополнительно включающий превращение глюкозо-6-фосфата во фруктозо-6-фосфат путем взаимодействия глюкозо-6-фосфата с глюкозо-6-фосфатизомеразой, микроорганизмом, экспрессирующим глюкозо-6-фосфатизомеразу, или культурой указанного микроорганизма, перед превращением фруктозо-6-фосфата в аллюлозо-6-фосфат.

10. Способ по п. 9, дополнительно включающий превращение глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат путем взаимодействия глюкозо-1-фосфата с фосфоглюкомутазой, микроорганизмом, экспрессирующим фосфоглюкомутазу, или культурой указанного микроорганизма, перед превращением глюкозо-6-фосфата в фруктозо-6-фосфат.

11. Способ по п. 9, дополнительно включающий превращение глюкозы в глюкозо-6-фосфат путем взаимодействия глюкозы с глюкокиназой, микроорганизмом, экспрессирующим глюкокиназу, или культурой указанного микроорганизма, и фосфатом, перед превращением глюкозо-6-фосфат во фруктозо-6-фосфат.

12. Способ по п. 10, дополнительно включающий превращение крахмала, мальтодекстрина, сахарозы или их комбинации в глюкозо-1-фосфат путем взаимодействия крахмала, мальтодекстрина, сахарозы или их комбинации с фосфатом и α-глюканфосфорилазой, фосфорилазой крахмала, фосфорилазой мальтодекстрина или фосфорилазой сахарозы; микроорганизмом, экспрессирующим α-глюканфосфорилазу, фосфорилазу крахмала, фосфорилазу мальтодекстрина или фосфорилазу сахарозы; или культурой указанного микроорганизма, перед превращением глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат.

13. Способ по п. 11, дополнительно включающий превращение крахмала, мальтодекстрина, сахарозы или их комбинации в глюкозу путем взаимодействия крахмала, мальтодекстрина, сахарозы или их комбинации с α-амилазой, пуллуланазой, глюкоамилазой, сахаразой или изоамилазой; микроорганизмом, экспрессирующим α-амилазу, пуллуланазу, глюкоамилазу, сахаразу или изоамилазу; или культурой указанного микроорганизма, перед превращением глюкозы в глюкозо-6-фосфат.

14. Способ по любому из пп. 7-13, где взаимодействие осуществляют при рН от 5,0 до 10,0, при температуре от 50°С до 90°С и/или в течение времени от 1 минуты до 24 часов.

15. Способ получения аллюлозы, включающий взаимодействие крахмала, мальтодекстрина, сахарозы или их комбинации и фосфата с (а) аллюлозо-6-фосфатфосфатазой; фруктозо-6-фосфат-3-эпимеразой, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1; глюкозо-6-фосфатизомеразой; фосфоглюкомутазой или глюкокиназой; и α-глюканфосфорилазой, фосфорилазой крахмала, фосфорилазой мальтодекстрина, фосфорилазой сахарозы, α-амилазой, пуллуланазой, изоамилазой, глюкоамилазой или сахаразой; или (б) микроорганизмом, экспрессирующим любой из указанных ферментов, или культурой указанного микроорганизма.