Биологически активное соединение, содержащее кодирующий олигонуклеотид (варианты), способ его синтеза, библиотека соединений (варианты), способ ее синтеза, и способ поиска соединения, связывающегося с биологической мишенью (варианты) - RU2006125522A

Реферат

1. Способ синтеза соединения, содержащего функциональный компонент, который эффективно связан с кодирующим олигонуклеотидом, отличающийся тем, что в качестве исходного соединения используют соединение-инициатор, состоящее из исходного функционального компонента, содержащего n структурных фрагментов, где n равно целому числу 1 или более, по крайней мере одну реакционноспособную группу, и эффективно связанного с исходным олигонуклеотидом; осуществляют взаимодействие указанного соединения-инициатора со структурным фрагментом, содержащим по крайней мере одну реакционноспособную группу, комплементарную реакционноспособной группе соединения-инициатора, в условиях, пригодных для образования ковалентной связи между реакционноспособными группами; осуществляют взаимодействие исходного олигонуклеотида с новым вводимым олигонуклеотидом, который определяет структурный фрагмент, ковалентно связанный с соединением инициатором, причем взаимодействие исходного олигонуклеотида с новым олигонуклеотидом осуществляют в присутствии фермента, который катализирует лигирование исходного олигонуклеотида и нового олигонуклеотида в пригодных условиях с образованием кодирующего олигонуклеотида; и в результате получают соединение, содержащее функциональный компонент, содержащий n+1 структурных фрагментов и эффективно связанный с кодирующим олигонуклеотидом.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что функциональный компонент полученного соединения содержит по меньшей мере одну реакционноспособную группу, и указанное соединение используют в качестве соединения-инициатора для проведения повторного цикла всех стадий способа по п.1, которые повторяют по меньшей мере один раз, причем соединение, полученное в результате каждого цикла, служит соединением-инициатором для последующего цикла реакций.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадия взаимодействия с новым олигонуклеотидом предшествует стадии взаимодействия с новым структурным фрагментом, или стадия взаимодействия с новым структурным фрагментом предшествует стадии взаимодействия с новым олигонуклеотидом.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что по крайней мере один из структурных фрагментов выбран из группы, состоящей из аминокислоты или активированной аминокислоты.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из аминогруппы, карбоксильной группы, сульфонильной группы, фосфонильной группы, эпоксидной группы, азиридиновой группы и изоцианатной группы.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из гидроксильной группы, карбоксильной группы, сульфонильной группы, фосфонильной группы, эпоксидной группы, азиридиновой группы и изоцианатной группы.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из аминогруппы и альдегидной или кетогруппы.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что реакцию между реакционноспособной группой и комплементарной реакционноспособной группой проводят в восстанавливающих условиях.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, включающей фосфор-илидную группу и альдегидную или кетогруппу.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакцию между реакционноспособной группой и комплементарной реакционноспособной группой проводят в условиях циклоприсоединения с образованием циклической структуры.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из алкина и азида.

12. Способ по п.10, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из галогенированной гетероароматической группы и нуклеофила.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что галогенированную гетероароматическую группу выбирают из группы, состоящей из хлорированных пиримидинов, хлорированных триазинов и хлорированных пуринов.

14. Способ по п.12, отличающийся тем, что нуклеофилом является аминогруппа.

15. Способ по п.1, отличающийся тем, что фермент выбирают из группы, состоящей из ДНК-лигазы, РНК-лигазы, ДНК-полимеразы, РНК-полимеразы и топоизомеразы.

16. Способ по п.1, отличающийся тем, что исходный олигонуклеотид является двухцепочечным или одноцепочечным.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что исходный олигонуклеотид содержит последовательность праймера ПЦР.

18. Способ по п.16, отличающийся тем, что исходный олигонуклеотид является одноцепочечным и новый олигонуклеотид является одноцепочечным, или исходный олигонуклеотид является двухцепочечным и новый олигонуклеотид является двухцепочечным.

19. Способ по п.18, отличающийся тем, что исходный функциональный компонент и исходный олигонуклеотид связаны посредством связующей группы.

20. Способ по п.19, отличающийся тем, что исходный олигонуклеотид является двухцепочечным, а связующая группа ковалентно связана с исходным функциональным компонентом и с обеими цепями исходного олигонуклеотида.

21. Способ по п.1, отличающийся тем, что новый олигонуклеотид характеризуется длиной от 3 до 10 нуклеотидов.

22. Способ по п.2, отличающийся тем, что новый олигонуклеотид в последнем цикле включает конечный праймер ПЦР.

23. Способ по п.2, отличающийся тем, что в последнем цикле осуществляют дополнитильную заключительную стадию лигирования полученного кодирующего олигонуклеотида с олигонуклеотидом, содержащим последовательность конечного праймера ПЦР.

24. Способ по п.23, отличающийся тем, что реакцию лигирования проводят в присутствии фермента, катализирующего указанное лигирование.

25. Способ по п.2, отличающийся тем, что после завершения последнего цикла дополнительно осуществляют стадию циклизации функционального компонента.

26. Способ по п.25, отличающийся тем, что функциональный компонент содержит алкинильную группу и азидную группу, а циклизацию осуществляют в условиях, пригодных для циклоприсоединения алкинильной группы и азидной группы с образованием триазольной группы.

27. Способ синтеза библиотеки соединений, содержащих функциональный компонент, содержащий по меньшей мере два структурных фрагмента, и эффективно связанный с исходным олигонуклеотидом, который определяет структуру функционального компонента, отличающийся тем, что в качестве исходного раствора используют раствор, содержащий по меньшей мере одно соединение-инициатор, содержащий функциональный компонент, включающий n структурных фрагментов, где n равно целому числу 1 или более, и эффективно связанный с исходным олигонуклеотидом, определяющим n структурных фрагментов; помещают аликвотные части полученного раствора в по меньшей мере два реакционных сосуда; осуществляют взаимодействие соединений инициаторов в каждом реакционном сосуде с одним структурным фрагментом с образованием соединений, содержащих функциональный компонент, включающий n+1 структурных фрагментов, и эффективно связанный с исходным олигонуклеотидом; и осуществляют в пригодных условиях взаимодействие исходного олигонуклеотида в составе каждой аликвотной части с одним вводимым олигонуклеотидом в присутствии фермента, который катализирует лигирование нового и исходного олигонуклеотидов; и в результате получают по меньшей мере две аликвотные части, содержащие соединения, имеющие в своем составе функциональный компонент, включающий n+1 структурных фрагментов, и эффективно связанный с удлиненным олигонуклеотидом, который кодирует n+1 структурных фрагментов.

28. Способ по п.27, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют объединение по меньшей мере двух полученных аликвотных частей с получением единого раствора.

29. Способ по п.28, отличающийся тем, что объединяют все полученные аликвотные части.

30. Способ по п.28, отличающийся тем, что полученный раствор используют в качестве исходного раствора, содержащего по меньшей мере одно соединение-инициатор, для проведения повторного цикла всех стадий способа по п.28, которые повторяют по меньшей мере один раз, причем раствор, полученный в результате каждого цикла, служит исходным раствором, содержащим по меньшей мере одно соединение-инициатор для последующего цикла реакций.

31. Способ по п.30, отличающийся тем, что по крайней мере в одном цикле стадия взаимодействия с новым олигонуклеотидом предшествует стадии взаимодействия с новым структурным фрагментом,

32. Способ по п.28, отличающийся тем, что по крайней один структурный фрагмент означает аминокислоту.

33. Способ по п.27, отличающийся тем, что фермент выбран из группы, содержащей ДНК-лигазу, РНК-лигазу, ДНК-полимеразу, РНК-полимеразу или топоизомеразу.

34. Способ по п.28, отличающийся тем, что исходный олигонуклеотид является двухцепочечным.

35. Способ по п.34, отличающийся тем, что новый олигонуклеотид является двухцепочечным.

36. Способ по п.28, отличающийся тем, что соединение-инициатор содержит связующее звено, содержащее первую функциональную группу, связанную со структурным фрагментом, вторую функциональную группу, связанную с 5'-концевым участком олигонуклеотида, и третью функциональную группу, связанную с 3'-концевым участком олигонуклеотида.

37. Способ по п.36, отличающийся тем, что связующее звено означает группу формулы

где А означает функциональную группу, ковалентно связанную со структурным фрагментом,

В означает функциональную группу, связанную с 5'-концевым участком олигонуклеотида,

С означает функциональную группу, связанную с 3'-концевым участком олигонуклеотида,

S означает атом или каркас,

D означает химическую структуру, соединяющую группу А с группой S,

Е означает химическую структуру, соединяющую группу В с группой S, и

F означает химическую структуру, соединяющую группу С с группой S.

38. Способ по п.37, отличающийся тем, что А означает аминогруппу, В означает фосфатную группу, а С означает фосфатную группу.

39. Способ по п.37, отличающийся тем, что группы D, Е и F каждая независимо выбрана из группы, состоящей из алкиленовой группы или олиго(этиленгликольной) группы.

40. Способ по п.37, отличающийся тем, что S выбран из группы, состоящей из атома углерода, атома азота, атома фосфора, атома бора, фосфатной группы, циклической группы или полициклической группы.

41. Способ по п.40, отличающийся тем, что связующее звено означает группу формулы

где каждый n, m и p независимо равен целому числу от 1 до приблизительно 20.

42. Способ по п.41, отличающийся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 2 до 8.

43. Способ по п.42, отличающийся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 3 до 6.

44. Способ по п.41, отличающийся тем, что связующее звено означает группу формулы

45. Способ по п.27, отличающийся тем, что каждое из упомянутых соединений-инициаторов содержит реакционноспособную группу, а каждый из упомянутых структурных фрагментов, добавляемых в каждую аликвотную часть раствора, содержит реакционноспособную группу, комплементарную упомянутой реакционноспособной группе соединения-инициатора.

46. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из аминогруппы, карбоксильной группы, сульфонильной группы, фосфонильной группы, эпоксидной группы, азиридиновой группы и изоцианатной группы.

47. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из гидроксильной группы, карбоксильной группы, сульфонильной группы, фосфонильной группы, эпоксидной группы, азиридиновой группы и изоцианатной группы.

48. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из аминогруппы, альдегидной группы и кетогруппы.

49. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакцию между реакционноспособной группой и комплементарной реакционноспособной группой проводят в восстанавливающих условиях.

50. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из фосфор-илидной группы, альдегидной группы и кетогруппы.

51. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакцию между реакционноспособной группой и комплементарной реакционноспособной группой проводят в условиях циклоприсоединения с образованием циклической структуры.

52. Способ по п.51, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из алкина и азида.

53. Способ по п.45, отличающийся тем, что реакционноспособную группу и комплементарную реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из галогенированной гетероароматической группы и нуклеофила.

54. Способ по п.53, отличающийся тем, что галогенированную гетероароматическую группу выбирают из группы, состоящей из хлорированных пиримидинов, хлорированных триазинов и хлорированных пуринов.

55. Способ по п.53, отличающийся тем, что нуклеофилом является аминогруппа.

56. Способ по п.28, отличающийся тем, что после завершения последнего цикла дополнительно осуществляют стадию циклизации по меньшей мере одного функционального компонента.

57. Способ по п.56, отличающийся тем, что функциональный компонент на стадии циклизации содержит азидную группу и алкинильную группу.

58. Способ по п.57, отличающийся тем, что циклизацию осуществляют в условиях, пригодных для циклоприсоединения азидной группы и алкинильной группы с образованием триазольной группы.

59. Способ по п.58, отличающийся тем, что реакцию циклоприсоединения проводят в присутствии медного катализатора.

60. Способ по п.59, отличающийся тем, что по крайней мере один из функциональных компонентов на стадии циклизации содержит по крайней мере две сульфгидрильные группы, и упомянутый функциональный компонент обрабатывают в условиях, пригодных для взаимодействия двух сульфгидрильных групп с образованием дисульфидной связи.

61. Способ по п.27, отличающийся тем, что исходный олигонуклеотид содержит последовательность праймера ПЦР.

62. Способ по п.28, отличающийся тем, что новый олигонуклеотид в последнем цикле содержит конечный праймер ПЦР.

63. Способ по п.28, отличающийся тем, что по завершении последнего цикла осуществляют дополнитильную стадию лигирования полученного кодирующего олигонуклеотида с олигонуклеотидом, содержащим последовательность конечного праймера ПЦР.

64. Способ по п.63, отличающийся тем, что заключительную реакцию лигирования проводят в присутствии фермента, катализирующего указанное лигирование.

65. Соединение формулы

где

Х означает функциональный компонент, содержащий по меньшей мере один структурный фрагмент,

Z означает олигонуклеотид, соединенный по 3'-концевому участку с группой В,

Y означает олигонуклеотид, соединенный по 5'-концевому участку с группой С,

А означает функциональную группу, которая образует ковалентную связь с Х,

В означает функциональную группу, которая образует связь с 3'-концевым участком олигонуклеотида Z,

С означает функциональную группу, которая образует связь с 5'-концевым участком олигонуклеотида Y,

D, F и Е каждый независимо означает бифункциональную связующую группу, а

S означает атом или каркас, причем Y и Z соединены ковалентной связью.

66. Соединение по п.65, отличающееся тем, что D, F и Е каждый независимо выбраны из группы, состоящей из алкиленовой цепи или олиго(этиленгликольной) цепи.

67. Соединение по п.65, отличающееся тем, что Y и Z являются в основном комплементарными и ориентированы в соединении таким образом, чтобы в пригодных условиях обеспечивать образование пары Уотсона-Крика и дуплекс.

68. Соединение по п.65, отличающееся тем, что Y и Z имеют одинаковую или различную длину.

69. Соединение по п.68, отличающееся тем, что Y и Z имеют одинаковую длину.

70. Соединение по п.65, отличающееся тем, что каждый Y и Z характеризуется длиной по меньшей мере 10 оснований и содержит комплементарные участки длиной по меньшей мере 10 пар оснований.

71. Соединение по п.65, отличающееся тем, что S выбран из группы, состоящей из атома углерода, атома бора, атома азота, атома фосфора и многоатомного каркаса.

72. Соединение по п.71, отличающееся тем, что S выбран из группы, состоящей из фосфонатной группы или циклической группы.

73. Соединение по п.72, отличающееся тем, что S выбран из группы, состоящей из циклоалкила, циклоалкенила, гетероциклоалкила, гетероциклоалкенила, арила и гетероарила.

74. Соединение по п.65, отличающееся тем, что связующее звено означает группу формулы

где каждый n, m и p независимо равен целому числу от 1 до приблизительно 20.

75. Соединение по п.74, отличающееся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 2 до 8.

76. Соединение по п.75, отличающееся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 3 до 6.

77. Соединение по п.65, отличающееся тем, что связующее звено означает группу формулы

78. Соединение по п.65, отличающееся тем, что Х и Y содержат последовательность праймера ПЦР.

79. Библиотека соединений, содержащая по крайней мере порядка 10² отдельных соединений, причем упомянутые соединения имеют в составе функциональный компонент, содержащий по меньшей мере два структурных фрагмента, и эффективно соединенный с олигонуклеотидом, который определяет структуру функционального компонента.

80. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10⁵ копий каждого из отдельных соединений.

81. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10⁶ копий каждого из отдельных соединений.

82. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10⁴ отдельных соединений.

83. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10⁶ отдельных соединений.

84. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10⁸ отдельных соединений.

85. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10¹⁰ отдельных соединений.

86. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит по крайней мере порядка 10¹² отдельных соединений.

87. Библиотека соединений по п.79, отличающаяся тем, что она содержит множество соединений, которые независимо представлены формулой I

где

X означает функциональный компонент, содержащий один или более структурных фрагментов,

Z означает олигонуклеотид, соединенный по 3'-концевому участку с группой В,

Y означает олигонуклеотид, соединенный по 5'-концевому участку с группой С,

А означает функциональную группу, которая образует ковалентную связь с Х,

В означает функциональную группу, которая образует связь с 3'-концевым участком олигонуклеотида Z,

С означает функциональную группу, которая образует связь с 5'-концевым участком олигонуклеотида Y,

D, F и Е каждый независимо означает бифункциональную связующую группу, а

S означает атом или каркас, причем Y и Z соединены ковалентной связью.

88. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что каждый из А, В, С, D, Е, F и S имеет одинаковое значение во всех соединениях формулы

89. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что она содержит в основном множество соединений формулы 1.

90. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что D, F и Е каждый независимо выбраны из группы, состоящей из алкиленовой цепи и олиго(этиленгликольной) цепи.

91. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что Y и Z являются в основном комплементарными и ориентированы в соединении таким образом, чтобы в пригодных условиях обеспечивать образование пары Уотсона-Крика и дуплекс.

92. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что Y и Z имеют одинаковую или различную длину.

93. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что Y и Z имеют одинаковую длину.

94. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что каждый Y и Z характеризуется длиной по меньшей мере 10 оснований и содержит комплементарные участки длиной по меньшей мере 10 пар оснований.

95. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что S выбран из группы, состоящей из атома углерода, атома бора, атома азота, атома фосфора и многоатомного каркаса.

96. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что S выбран из группы, состоящей из фосфонатной группы или циклической группы.

97. Библиотека соединений по п.96, отличающаяся тем, что S выбран из группы, состоящей из циклоалкила, циклоалкенила, гетероциклоалкила, гетероциклоалкенила, арила и гетероарила.

98. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что связующее звено означает группу формулы

где каждый n, m и p независимо равен целому числу от 1 до приблизительно 20.

99. Библиотека соединений по п.98, отличающаяся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 2 до 8.

100. Библиотека соединений по п.99, отличающаяся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 3 до 6.

101. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что связующее звено означает группу формулы

102. Библиотека соединений по п.87, отличающаяся тем, что Х и Z содержат последовательность праймера ПЦР.

103. Соединение, полученное способом по п.1.

104. Библиотека соединений, полученная способом по п.27.

105. Способ поиска одного или более соединений, которые связываются с биологической мишенью, отличающийся тем, что осуществляют контактирование биологической мишени с соединением библиотеки, полученной способом по п.27, в условиях, пригодных для связывания по крайней мере одного члена библиотеки с мишенью; отделяют те члены библиотеки, которые не связаны с мишенью; амплифицируют кодирующие олигонуклеотиды по крайней мере одного соединения, связанного с мишенью; секвенируют полученные кодирующие олигонуклеотиды, и определяют структуры функциональных компонентов, входящих в состав соединений, связанных с биологической мишенью с использованием последовательностей, определенных при секвенировании кодирущих олигонуклеотидов.

106. Способ поиска соединения, которое связывается с биологической мишенью, отличающийся тем, что осуществляют контактирование биологической мишени с соединением библиотеки, содержащей по крайней мере порядка 10² отдельных соединений, причем упомянутые соединения имеют в своем составе функциональный компонент, содержащий два или более структурных фрагмента, и эффективно связанный с олигонуклеотидом, определяющим структуру функционального компонента, в условиях, пригодных для связывания по крайней мере одного члена библиотеки с мишенью; отделяют те члены библиотеки, которые связаны с мишенью; амплифицируют кодирующие олигонуклеотиды по крайней мере одного соединения, связанного с мишенью; секвенируют полученные кодирующие олигонуклеотиды и определяют структуры функциональных компонентов, входящих в состав соединений, связанных с биологической мишенью, с использованием последовательностей, определенных при секвенировании кодирующих олигонуклеотидов.

107. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека соединений содержит по крайней мере порядка 10⁵ копий каждого из отдельных соединений.

108. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека содержит по крайней мере порядка 10⁶ копий каждого из отдельных соединений.

109. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека содержит по крайней мере порядка 10⁴ отдельных соединений.

110. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека включает по крайней мере порядка 10⁶ отдельных соединений.

111. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека содержит по крайней мере порядка 10⁸ отдельных соединений.

112. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека содержит по крайней мере порядка 10¹⁰ отдельных соединений.

113. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека содержит по крайней мере порядка 10¹² отдельных соединений.

114. Способ по п.106, отличающийся тем, что библиотека соединений содержит множество соединений, которые независимо представлены формулой I

где

X означает функциональный компонент, содержащий один или более структурных фрагментов,

Z означает олигонуклеотид, соединенный по 3'-концевому участку с группой В,

Y означает олигонуклеотид, соединенный по 5'-концевому участку с группой С,

А означает функциональную группу, которая образует ковалентную связь с Х,

В означает функциональную группу, которая образует связь с 3'-концевым участком олигонуклеотида Z,

С означает функциональную группу, которая образует связь с 5'-концевым участком олигонуклеотида Y,

D, F и Е каждый независимо означает бифункциональную связующую группу, а

S означает атом или каркас молекулы.

115. Способ по п.114, отличающийся тем, что каждый из А, В, С, D, Е, F и S имеет одинаковое значение для каждого соединения формулы 1.

116. Способ по п.114, отличающийся тем, что библиотека соединений содержит в основном множество соединений формулы 1.

117. Способ по п.114, отличающийся тем, что D, F и Е каждый независимо выбран из группы, состоящей из алкиленовой цепи или олиго(этиленгликольной) цепи.

118. Способ по п.114, отличающийся тем, что Y и Z являются в основном комплементарными и ориентированы в соединении таким образом, чтобы обеспечивать в пригодных условиях образование пары Уотсона-Крика и дуплекс.

119. Способ по п.114, отличающийся тем, что Y и Z имеют одинаковую или различную длину.

120. Способ по п.119, отличающийся тем, что Y и Z имеют одинаковую длину.

121. Способ по п.114, отличающийся тем, что каждый Y и Z характеризуется длиной по меньшей мере 10 оснований и содержит комплементарные участки длиной по меньшей мере 10 пар оснований.

122. Способ по п.114, отличающийся тем, что S выбирают из группы, состоящей из атома углерода, атома бора, атома азота, атома фосфора и многоатомного каркаса.

123. Способ по п.114, отличающийся тем, что S выбирают из группы, состоящей из фосфонатной группы и циклической группы.

124. Способ по п.123, отличающийся тем, что S выбирают из группы, состоящей из циклоалкила, циклоалкенила, гетероциклоалкила, гетероциклоалкенила, арила и гетероарила.

125. Способ по п.114, отличающийся тем, что связующее звено означает группу формулы

где каждый n, m и p независимо равен целому числу от 1 до приблизительно 20.

126. Способ по п.125, отличающийся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 2 до 8.

127. Способ по п.126, отличающийся тем, что каждый n, m и p независимо равен целому числу от 3 до 6.

128. Способ по п.127, отличающийся тем, что связующее звено означает группу формулы

129. Способ п.114, отличающийся тем, что Х и Z содержат последовательность праймера ПЦР.