Способ специфического выделения полного днк-содержимого бактериальных вобудителей инфекции и набор, использующийся для этих целей - RU2013104648A

Реферат

1. Способ специфического выделения полного ДНК-содержимого бактериальных возбудителей инфекции из образцов, в ходе которого клетки лизируют, ДНК-содержимое лизата выборочно связывают, промывают и затем обессоленную линейную полимерную нуклеиновую кислоту элюируют со связывающей поверхности водным раствором, отличающийся тем, что на предварительном этапе нежизнеспособные клетки отделяют от жизнеспособных на основе различных физико-химических свойств их клеточной поверхности, различной проницаемости поверхности этих клеток и аффинитета ионов, используя промывочный раствор с различной проникающей способностью, содержащий детергент и электролит, предпочтительно буферную смесь из Тритона Х-100, этилендиаминтетрауксусной кислоты, KCl или NaCl, моногидрата лимонной кислоты; при этом изменяют центробежную силу, влияющую на осаждение клеток, в результате чего только двухцепочечные ДНК, полученные при лизисе жизнеспособных клеток, связывают с матрицей -SiO-TiO-, содержащей химически активированные группы -ОН и додециламиновые группы.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что лизис жизнеспособных бактериальных клеток проводят путем механического разрушения, производимого с использованием настольного оборудования, или комбинированного механического и ферментативного разрушения, предпочтительно расщепления лизоцимом, в специально изготовленных пробирках для разрушения клеток.3. Способ по п.2, отличающийся тем, что двухцепочечное ДНК-содержимое бактериального образца, содержащего не менее 10КОЕ/мл, выделяют с использованием буфера для лизиса, содержащего окислительно-восстановительный компонент, хелатирующий агент