Композиция предшественника гидрогеля и её применение - RU2019105503A
Код документа: RU2019105503A
Формула
1. Композиция предшественника гидрогеля в форме непрореагировавшего порошка, включающая
активирующий фермент, предпочтительно тромбин,
сшивающий фермент, предпочтительно трансглутаминазу, более предпочтительно трансглутаминазу фактор XIII, где сшивающий фермент активируется активирующим ферментом в воде с буфером или без буфера, предпочтительно в воде с проводимостью <5 мкС/см с буфером или без буфера, и/или предпочтительно с pH в диапазоне от 5 до 8, более предпочтительно от 6 до 8, наиболее предпочтительно от 6,5 до 8,
по меньшей мере одно структурное соединение A, предпочтительно два различных структурных соединения A и B,
где указанное структурное соединение сшивается с помощью избирательной реакции, опосредованной сшивающим ферментом, с образованием гидрогеля, где сшивающий фермент активируется предпочтительно со степенью активации от 50 до 100%, предпочтительно от 75% до 100%, более предпочтительно от по существу 100%.
2. Композиция предшественника гидрогеля по п.1, по существу лишенная двухвалентных ионов, предпочтительно ионов кальция, где концентрация двухвалентных ионов предпочтительно составляет <10 мкМ, более предпочтительно <1 мкМ, наиболее предпочтительно <10 ч./млн.
3. Композиция предшественника гидрогеля по любому из пп.1 или 2, где по меньшей мере одно структурное соединение содержит по меньшей мере две различные реакционноспособные группы.
4. Композиция предшественника гидрогеля по любому из пп.1-3, где по меньшей мере одно структурное соединение содержит ацильный компонент, предпочтительно два ацильных компонента, и аминный компонент, предпочтительно два аминных компонента.
5. Композиция предшественника гидрогеля по любому из пп.1-4, включающая по меньшей мере одно дополнительное соединение гидрогеля, предпочтительно по меньшей мере одно сшиваемое биоактивное соединение.
6. Композиция предшественника гидрогеля по любому из пп.1-5, где структурное соединение представляет собой полиэтиленгликоль с множеством ветвей, предпочтительно 8-лучевой полиэтиленгликоль.
7. Способ получения композиции предшественника гидрогеля в форме непрореагировавшего порошка, предпочтительно по пп.1-6, включающий этапы:
а) смешивания
активирующего фермента, предпочтительно тромбина,
сшивающего фермента, предпочтительно трансглутаминазы, более предпочтительно трансглутаминазы фактора XIII, где сшивающий фермент активируется активирующим ферментом в воде,
по меньшей мере одного структурного соединения A, предпочтительно двух различных структурных соединений A и B,
в воде с буфером или без буфера, предпочтительно в воде с проводимостью <5 мкС/см с буфером или без буфера, и/или предпочтительно с pH в диапазоне от 5 до 8, более предпочтительно от 6 до 8, наиболее предпочтительно от 6,5 до 8,
b) до или после этапа (а) инкубации сшивающего фермента и активирующего фермента в течение времени, достаточного для того, чтобы характеристики геля оставались по существу постоянными, независимо от продолжительности времени изготовления;
с) при необходимости, после последнего из этапов (а) или (b), лиофилизации смеси,
где структурное соединение является сшиваемым посредством избирательной реакции, опосредованной сшивающим ферментом, и
где компоненты смешивают на этапе (а) в условиях, которые препятствуют реакции сшивания, опосредованной сшивающим ферментом.
8. Способ по п.7, где инкубацию смеси, полученной на этапе (а), проводят в течение по меньшей мере 0,5 часа, предпочтительно менее 24 часов, предпочтительно от 2 до 4 часов, при температуре в диапазоне от 4°С до 37°С, предпочтительно от 10°С до 25°С, более предпочтительно при комнатной температуре.
9. Способ по п.7 или 8, где сшивающий фермент имеет степень активации от 50% до 100%, предпочтительно от 75% до 100%, более предпочтительно по существу 100%, после этапа (b).
10. Способ по любому из пп.7-9, в котором по меньшей мере одно дополнительное соединение гидрогеля, предпочтительно по меньшей мере одно сшиваемое биоактивное соединение, добавляют на этапе (а).
11. Композиция предшественника гидрогеля, получаемая или полученная способом по любому из пп.7-10.
12. Набор, содержащий по меньшей мере один контейнер, заполненный композицией предшественника гидрогеля по любому из пп.1-6, контейнер с реакционным буфером, и при необходимости, инструкции для пользователя.
13. Набор по п.12, где реакционный буфер содержит ионы кальция в диапазоне от 1 мМ до 200 мМ, предпочтительно от 10 мМдо 100 мМ, более предпочтительно от 20 мМ до 100 мМ.
14. Набор по п.12 или 13, где реакционный буфер имеет рН от 5 до 8, предпочтительно от 6 до 8, более предпочтительно от 7 до 8.
15. Способ получения гидрогеля, включающий этапы:
а) ресуспендирования композиций предшественника гидрогеля по пп.1-6 в реакционном буфере, предпочтительно содержащем ионы кальция,
b) при необходимости, добавления клеточной суспензии.
16. Способ по п.15, в котором по меньшей мере один гель отливают с раствором предшественника гидрогеля.
17. Способ по п.15 или 16, где время образования геля для раствора предшественника геля находится в диапазоне от 1 до 20 минут, предпочтительно от 2 до 10 минут, более предпочтительно от 2 до 7 минут, при температуре в диапазоне 4°С до 37°С, предпочтительно от 10°С до 30°С, более предпочтительно от 15°С до 25°С.
