Способ получения декстраназы - SU388408A3

Код документа: SU388408A3

Описание

Изобретение относится к способам получения ферментов, которые могут найти применение в медицинской практике.

Известен способ получения декстраназы, имеющей, оптимум осахаривающего действия в слабощелочной зоне (рН 7,0-7,5) и оптимум разжижающего действия при рН 5,0- 5,4, путем выращивания культуры из рода Bacteriodes на среде с декстраном с последующим .выделением фермента из культуральной жидкости известными приемами.

Предложен спосо.б получения декстраназы, имеющей оптимум действия в слабощелочной зоне, заключающийся в том, что культуру Brevibacterium fuseum var. dextranlyticum выращивают в аэробных условиях л а среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, .при температуре 20-30° С и начальном рН среды 8,0-9,0 в течение 2- 4 дней, из фильтрата культуральной жидкости целевой продукт выделяют фракционированием ацетоном и очищают хроматографически .

Пример 1. 50 лл среды (рН 8,5), содержащей (%): декстран 1, полипептон 1, дрожл евой экстракт 0,05, монокалийфосфат 0,1, дикалийфосфат 0,1, гептагидрат сульфата

магния 0,1, гексагидрат сульфата марганца 0,005, хлористый кальций 0,002, загружают в колбу Сакагучи и стерилизуют паром при 120° С в течение 20 мин. Затем колбы заливают культурой Brevibacterium fuseum var. dextranlylicum в количестве 3%, выращенной на той же среде при 30° С в течение 20 час. Инкубацию ведут при 26° С в течение 60 час при постоянном встряхивании.

Культуральную лсидкость десяти колб сливают , центрифугируют и получают 450 мл фильтрата с активностью декстраназы 200 ед/мл.

Фильтрат сгущают под вакуумом до Vo объема при 40° С и добавляют i/2 объема ацетона. Затем полученную смесь центрифугируют . К надосадочной жидкости добавляют 1,5 объема ацетона и снова центрифугируют. Осажденные продукты сущат ацетоном и получают 2,4 г порощкообразного фермента (выход активного продукта 75%).

Степень активности полученной порощкообразной декстраназы 30 ед/мг.

Пример 2. 80 г Биогеля Р-30, набухщего при добавлении дистиллированной воды, загружают в колонку с наружным диаметром 3,2 см. 3 Водный раствор 1 г порошкообразного фермента, полученного по примеру 1, растворяют в 10 жл дистиллированной воды, заливают в указанную колонку и проводят хроматографирование на колонке; в каждой фракции определяют активность декстраназы . Фермент собирают из фракций с высоким содержанием фермента и лиофилизируют. Получают 63 мг порошкообразного ферJL iVJuI nCllW i Jt-Jfft 1.1. f, мента (.выход 95,5%) с активностью декстраназы 455 ед/мг. Предмет изобретения Способ Получения декстраназы, отличающийся тем, что, культуру Brevibacterium fuseum var. dextranlyticum выращивают в аэробных условиях на среде, содержашей источники углерода, азота и минеральные соли, при 20-30°С и «ан-альной рН среды 8,0-9,0 в течение 2-4 дней, целевой продукт из фильтрата культура-лыной жидкости выдеXJVriHlLJiLJU .iU.,,j , v.i., .. . .„ ляют фракциюнврованием адеггоном и очишают хроматографичеоки.