Способ получения альфа-амилазы - SU328746A1

Описание

Изобретение относится к ферментной нромышленносП .

Известен способ иолучепия а-амилазы путем глубинного культивирования их продуцентов , например Aspergillus oryzae, па питательной среде, содержащей крахмал, азотнокислый Натрий, однозамещеипый фосфорнокислый калИ11 , сернокислое железо, сернокислый магний, экстракт из солодовых pocTi;oB, выделення ферментов нз культуральной жидкости на Ионообменных колонках с последующим элюированием нх.

Известный способ дает низкий выход аамилазы . составляющей 25-30%; гетерогенность KOiieiHoro npenapaia, содержащего кроме tt-амилазы качественно другой белок, в Частности фермент декстрнназу; потерю нативпого состояния очниил1ного фермента аамилазы , выражаюи1,уюся в низкой удельной активиости, составляюп1ей 20 ед/мг белка; больщое число операций и их трудоемкость.

С целью получения гомогенной а-амнлазы с больиюй удельной активностью, в пит::гельную среду дополнительно вводят однозамещен11ый фосфорнокислый и азотнокислый магНИИ , а элюнрование осун1ествляют фосфатпым буфером.

Крахмал, азотнокислый натрий, сернокислый магний, сернок1 слое железо вводят в нитательпую среду в колнчества.ч, соответственно равных ЙО; 12; 1,0; (J,0:i г/л.

С целью упрощения способа выделения и очпстки сс-амнлазы, ее элюнрован11е с ионообх1енника производят 0,1-0,4 Л1 фосфатны.1 буферным раствором с рН 6,8-7,4, содержащим Г),001-0,00003 М СаО.

. Культуру му а}ггного штамма Aspergi lu-s огхгао 3 - 9-15 г,1,-1))Гииив;иот 1лубншнлм методом в колбах на ка-ш.чке 72 чаС на нн1ате.1Ы10й среле слел ющего состава, г/л:

Крахмал

80 К Нор О,

0,1 Mg(NO,), 0,8 МаХО, 12 0,5 КС1

Мо-(ИоРОО 0,7 MgSO,i 1 FeSO.,

0,03

Kyvii-.iypy гриба выраннваьэт нрн . фильтрате 72-часовой кулыуры удельная акiHBHocTb а-амилаз1-.1 8-9 ед/мг белка и 20 ед/мл фнл1,1рата. Оби1,ап активность филь1рата 10000 од.

наносят на колонку с 10 г ДЭАЭ целлюлозы, фракцию белков, не содержащую а-амилазу, вымывают 0,05 М фосфатным буфером рН 7,15. Эта фракция содержит G80 мг белка.

0,1 М фосфатным буфером рН 7,15 полностью вымывается фракция, содержащая только сс-амилазу; сс-амилазы составляет 300 мг, а общая активность 10000 ед., т. е. 100% от количества фермента в диализате. Удельная активность сс-амилазы 35 ед/мг белка . Диализ и хроматографию белка на ДЭу Эцеллюлозс провод5гг ири температуре не выше . Аналогичную картину получают и в случае других указанных вьппе штам.мов, которые также могут быть рекЪмендованы для промыщленного получения сх-амнлазы.

Предмет изобретения

1. Способ получения а-амилазы путем глубинного культивирования их продуцентов, папример Aspergillus oryzae, на ннтательной среде , содержащей крахмал, азотнокислый натри11 , одпозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислое железо, сернокислый магний, экстракт из солодовых ростков, выделения ферментов из культуральной жидкости на ионообменных колонках с последующим элюировапием их, отличающийся тем, что, с целью

получения гомогенной а-амилазы с больщой удельной активностью, в питательную среду дополнительно вводят одпозамещенный фосфорнокислый и азотнокислый магний, а элюирование осуществляют фосфатным буфером.

2. Способ по п. 1, отличающийся те.м, что однозамещенный фосфорнокислый и азогнокпслый магний вводят в количестве, соответственно равном 0,7 и 0,8 г/л.

3.Снособ но н.п. 1 и 2, отличающийся тем, что крахмал, азотнокислый натрий, сернокислый магний, сернокислое железо вводят в питательную среду в количествах, соответственно равных 80, 12, 1,0, 0,03 г/л.

4.Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа выделения

и очистки а-амилазы, ее элюирование с ионообменника производят 0,1-0,4 М фосфатным буферным раствором с рН 6,8-7,4, содержащим 0,001-0,00003 М СаСЬ.

Реферат

Формула