Способ получения амилолитических ферментов - SU345815A1

Описание

Из()6)етС1111С ol носится к фермент iioii про .MbiuLieiiiiocTU, а и.менпо к ciiocoo iio.i чеппя а.1и;юли Т1ческ11х i)c).icii гив.

И;шесте1 ) получения амилолн i ических фе1)менгои путем гл} бишкич) 1чульт11Н1:рования нх нродуценюи, iiaujiiixiei) 11леепе1ял. г)иОов, на 11111 а 1ел1Л1о|; среде, еодержапкч иеточппки глерода, a;ioia и нриеу re i вин минеральных солен и сгн.1 ля Юрон joeia с последуклнн .м уда.ченнем on(j iaccbi 1И , рал1,Hoii ЖН.ЧКОС111, 1ялдо.кч1нем («ерлкчпа на iiiiiub обменных К() и .ноированнем нх (|п;с (|)ат ным бу()ером.

Цель н.обре ення --но;1 ченне гомогенн1)1х ii:u)()epMeH-ion гл1(Я().ia.-iiji.

Для i1ого РП ку;11 1урал1Л10|| /кндкое н, (jc юбожденно (П бно.ма.ссы продуцента, ciaнавливаю на знаненин, завиом 1,Г) 2,.i, нреимун1 ,сственно 2,1), выде)жннаи)1 нрн HiHKoii темнсратхрс, нанрнме}) ,V(;, прн -/юм .молярность (|)oc(jiai lioio б(|1(.ра равна (UKi (t.l3.

Для нолуче1П я н:к)1|)ерме11та (Чпокоамн.ча ii.i с удс:пд1011 11ло 100 ед/мг белка i: it ированно с нонообменннка осхчнестшяют фосфатн1 )1Л 6yij)epoM О,(Jo- (),() ., pli которого равен 6,7--7,5, а д.тя получения нзо|рермента глюкоамилазы с хде.тьноГ актгинюстыо

Впсденно li ннта re.ibiiyio cpe.iy 0)ДНо.амеHUHiiioio фоесрага ма1Ч1ня и ко.1нчее1Т е (1,5 г/л II HHipaia .магния Б количестве (1,4 1;л сноC (i6ciB er ни reiiciiHiioi секреции и.501| ерментоп

г.иокоамилазы в ку.1Ь рал1Н1 ю 1 ндк1ЧЧЧ, ..sper 4llHS a aiii()ri н Asjicro-jHns niijer, ноеле чего об|Ц1и 1 ровень бноенапе.а i. покоа мнл;| ил BOi.ipae i ае г на .

I р|едлагае.мы;1 способ осног.ан на r.i(iHHiioM lUiipaiHiiBaiHUi нлееневых грибов р1)да As lert illns a aniori н .Asjieit ilhis на спи1егнческо 1 1111 Г1ел1 но11 среД1.

)ipai 12(1 чаеовоц к. но1кнеля10 1 н. 1 К1 .U) р1 1,0- 2,Г1 и егавиг на -18 чис

11|м1 Г) ( З.пем paeiiiop (рилвтруют н (чпьтрат ставят :.а д.иали. прогни бн.чнс гнллироBaiiHoii воды в течение 24 чае. 1 Ь луче-ннын диа.пиат нанося на ко.тогн )м Д,-)Л.-)He .i.iio.uMiHi, а ,1 i ллокиамила.п, нлк ирхют: 4 еф бхфером, гМ i oiopiHo ().7 S.ri, Mo.iHpiiiieiT, li,lt(i и.(I) .1.1Я iiepBoii ii.ioiiopMBi г.покоамила.;ы и i),6ii,) С..) д.

BiOpOll H.UxlH.lpM;, : л K i o;iMH.Ta.bi .

Пример. Ку, м тангно:Ч1 нггамма

Aspergillii. a v;Hiiori i ipariUHia o г r.iyriiiiiiibi м

методом в колбах на качалке в чеченце 2(}ч(с

нри ЛОС iia интательноГ с;нме сле,; - 01него

10%-iioi0 экстра|-;га со;1одовых росгков. Onщаи актиБиость фильтрата культ -1)|,1 IKJ I.iioKoa .viiLia.ic состав;| ст 106000 сд, а но а-амиjia .io--4870, pll с|и1,1ьтрата 7,ho. l)iLii/rpa г подкисляют для осаждсипя с/.-ами;1а ;ы 1 и. ll(;i до ) 1,97 и станят и|)11 . на час. Осадок дс11;1Т рироиаи11 л я-а 1ила:а,1 и други .х 6c,:iKOii уда;1я1о1 (|)и.тьтраиио1 на иоронке Бю.хисра. За1См ку.тьтура.илрдо жидкос1 ь подИ1слачииа1от NailC-O;; до pll 7,0 и ставит на диа;111з нротив дистилстироваинон водв is тсчсние 24 час. Количссттю ooiuci) Пслка li диа .iiiriaTC сос1авляст 2200 .мг, а оГицая ак1Т1вliocib глк)коа: 1Ила:.1)1 100 ОНО сд, активиоси, а-амила:И)1 в Д11ал1 : а1с не оПпаруживасгся. Диализа 1 наносят на колонку с 4Г) г ДЭЛ-)цсллюлозы . Фракн1 о оелксл), не содержауцую г.:11окоамила:и,1, вы 1В1ва1от 0.047 Л (|)осфат111 )1М бу(|)сром, рП 7,05. Эта (|))ак11ия содержит 820 мг нсактииио1о но 1 покоамила.че oc;iка , Т , с. З7уо ОТ исходного К()личес1ва oc/iKa в диалилатс. 0,78 М фос(|)атиым riy(|iepOi i вимывают (jipaKUiiio r,TioKoa n.ia:siji (и.тоформа 1). Эта (1)ракцня содсржи1 200 мг активнои глюкоамилазы с актииностыо 20П()() c/i, i удсльиоГ актп1 ност1)1о 101) сд/н| Ги-лка, чго составляет ,) активи()С1и глюкоами.тазы в диа.тизатс и 19;о актш.ностн |Л1окоамнла;,ы в исходном фильтрате.

0,11 Л ()ОС()ат111)1м оу(|)с|К).1 тaкж 1 ымь вают фракцию aKTHBHoii глюкоамилазы (изоформа 2). Эта (рракиия С1)держнт М()0 MI- пслка с ooincii а тивиос1ыо г.тюкоамилазы 52000 сд и y.ae,Ti,ii() ак1 нвносп ю (iO ед/М1 бе,1ка. Эта (|)ракция соскшляет Г)2л, акднвности глюкоамилазы в диали.зате и 50у;, активис/сти в (р11.1ьтрате.

1.(люсоГ) ио;1учения амн/ю: итичсских liiei мсшов iiyiCM 1-; 01Н1Н01Ч) инирования их нроду1кчггов, .-() 1К1еснсВЬГ ipiHooB, lia ннта ,iioii среде, содер/канки исг1)Чннки у:.1срода, азота is приеу: е i вни .1ине|К1.: ын,гх со,.КМ п сI HMy.iMTopoii )oci а с ноеле,; киинм да,:|1Д1нем пномасс, ii:i K.:ibi урально;; Ж11.11 ()сти, В1лделсиием (|ie|)ieii га на ионоиомеишлх ,Т1)Нкмх н -лТ1оирив,ан..1 их фос||1ат:1|, (|jepo.i, ()T.iti4i/ iiiiiiii/c:i п/м, что, с иел|,о иилучеиня омогеииых и loipepMcin (JB .ni ,.ia ;Ы, pll )Т раЛ:) ЖН.ТКОСТН. ОСВОООЖ

Деиион от Г)Н1 маес1)1 H)o.i iUiri а cl aiiais.iHвают на ;наченнн, paiUio.M 1,5 2,5, нренм Н1еС Всиио 2,1), 1;ы,..ержН1 а|от при 1:и/,ь.|);; 1емнерат ре , иаирнмер (,. а моля|)1()С 11, фссфаь ного оу(|)ера равна О,(КЗ - О, l.i.

2.(aiiicoo IK) п. 1, ог.Шкисщт/С leM, ч;о, с iie,.ii,io Ho.:i чсиня из()ферме1Г1а глюкиамилазь1 с удельно|1 ак1 ииностыо 100 e.i на 1 мг ое.тка, ;..|1онрование е ионообменннка ocyiHeС В .1ЯЮ1- ф()С(|)а-1 Hi.iM )м d.lK) и,О) ., р1 I К1)1 орого равен (),7 7.5.

Л. (HKICIIU ||{) н. I, ))iniiiic:i тем, что. с iu,:ibi) iio,:i чсния H3O{|ie)MeiГ| а i iioi(iaMH;ia3i ,i с уде. а ти иостью ()0 ед на 1 .ii ое.к ка лионр 1вание ос iiieci в/1яю-| (| осфагиым )1.р(1м (1,0)5 - 0,1:-) , pll Которого paiicH ().7 8.0.

Реферат

Формула