Глюкоамилаза trichoderma reesei и ее гомологи - RU2007124552A

Реферат

1. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая фермент, обладающий активностью глюкоамилазы, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 80% идентична глюкоамилазе SEQ ID NO: 4.

2. Выделенная последовательность ДНК по п.1, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 85% идентична глюкоамилазе SEQ ID NO: 4.

3. Выделенная последовательность ДНК по п.2, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 90% идентична глюкоамилазе SEQ ID NO: 4.

4. Выделенная последовательность ДНК по п.3, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 95% идентична глюкоамилазе SEQ ID NO: 4.

5. Выделенная последовательность ДНК по п.4, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 99% идентична глюкоамилазе SEQ ID NO: 4.

6. Выделенная последовательность ДНК по п.1, характеризующаяся SEQ ID NO: 1.

7. Выделенная последовательность ДНК по п.1, характеризующаяся SEQ ID NO: 2.

8. Выделенная последовательность ДНК по п.1, где фермент получен из мицелиального гриба.

9. Выделенная последовательность ДНК по п.8, где мицелиальный гриб является штаммом Trichoderma или Hypocrea.

10. Выделенная последовательность ДНК по п.9, где мицелиальный гриб является штаммом Trichoderma reesei.

11. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая фермент, обладающий активностью глюкоамилазы, где фермент обладает, по меньшей мере, 95% идентичности последовательности с любой из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 43, 44, 45, 46 или 47.

12. Выделенная последовательность ДНК по п.11, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая обладает, по меньшей мере, 95% идентичности последовательности с глюкоамилазой SEQ ID NO: 20.

13. Выделенная последовательность ДНК по п.12, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, которая обладает, по меньшей мере, 99% идентичности последовательности с глюкоамилазой SEQ ID NO: 20.

14. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая фермент, обладающий активностью глюкоамилазы, где фермент обладает, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с любой из следующих последовательностей

a) положения аминокислотных остатков от 1 до 453 SEQ ID NO: 17,

b) положения аминокислотных остатков от 1 до 452 SEQ ID NO: 18,

c) положения аминокислотных остатков от 1 до 454 SEQ ID NO: 19,

d) положения аминокислотных остатков от 1 до 452 SEQ ID NO: 20,

e) положения аминокислотных остатков от 1 до 453 SEQ ID NO: 21,

f) положения аминокислотных остатков от 1 до 453 SEQ ID NO: 22,

g) положения аминокислотных остатков от 1 до 452 SEQ ID NO: 43,

h) положения аминокислотных остатков от 1 до 452 SEQ ID NO: 44,

i) положения аминокислотных остатков от 1 до 453 SEQ ID NO: 45,

j) положения аминокислотных остатков от 1 до 452 SEQ ID NO: 46, и

k) положения аминокислотных остатков от 1 до 452 SEQ ID NO: 47.

15. Вектор, содержащий ДНК по п.1, 11 или 14.

16. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.15.

17. Клетка-хозяин по п.16, где клетка-хозяин получена из штамма мицелиального гриба.

18. Клетка-хозяин по п.17, где штаммом мицелиального гриба является Trichoderma.

19. Клетка-хозяин по п.18, где Trichoderma является T. reesei.

20. Культуральная среда от брожения клетки-хозяина мицелиального гриба, трансформированной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, обладающий активностью глюкоамилазы и, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности SEQ ID NO: 4.

21. Культуральная среда по п.20, где клеткой-хозяином мицелиального гриба является клетка Trichoderma.

22. Выделенный фермент, обладающий активностью глюкоамилазы и, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности SEQ ID NO: 4.

23. Выделенный фермент по п.22, где аминокислотная последовательность выбрана из группы любой из SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 43, 44, 45, 46 и 47.

24. Выделенный фермент по п.22, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 85% идентичной SEQ ID NO: 4.

25. Выделенный фермент по п.24, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 90% идентичной SEQ ID NO: 4.

26. Выделенный фермент по п.25, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной SEQ ID NO: 4.

27. Выделенный фермент по п.26, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 97% идентичной SEQ ID NO: 4.

28. Выделенный фермент по п.22, где фермент обладает аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной SEQ ID NO: 20.

29. Выделенная аминокислотная последовательность, характеризующаяся как биологически функциональный фрагмент последовательности, обладающей, по меньшей мере, 90% идентичности с SEQ ID NO: 4.

30. Выделенная аминокислотная последовательность по п.29, содержащая положения аминокислотных остатков от 1 до 453 SEQ ID NO: 4.

31. Выделенная аминокислотная последовательность по п.29, содержащая положения аминокислотных остатков от 34 до 486 SEQ ID NO: 4.

32. Способ рекомбинантного получения глюкоамилазы, включающий стадию экспрессии полинуклеотида, кодирующего полипептид, обладающий активностью глюкоамилазы в клетке-хозяине мицелиального гриба, где полипептид содержит аминокислотную последовательность по п.22 или 29.

33. Способ по п.32, где полипептид содержит сигнальный пептид.

34. Способ по п.33, где сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 95% идентична последовательности, представленной в положениях от 1 до 20 SEQ ID NO: 3.

35. Способ по п.32, где клеткой-хозяином мицелиального гриба является клетка Trichoderma.

36. Способ по п.35, где хозяином Trichoderma является T. reesei.

37. Способ по п.32, дополнительно включающий выделение полученной глюкоамилазы.

38. Ферментная композиция, содержащая глюкоамилазу, обладающую аминокислотной последовательностью по п.22 или 29.

39. Ферментная композиция по п.38, где глюкоамилаза обладает аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 90% идентична SEQ ID NO: 4.

40. Ферментная композиция по п.38, где композицию применяют в приложении к хлебопекарному производству.

41. Ферментная композиция по п.38, где композиция является композицией корма для животных.

42. Ферментная композиция по п.38, где композицию применяют в способе гидролиза гранулярного крахмала.

43. Ферментная композиция по п.38, где композиция является детергентной композицией.

44. Ферментная композиция по п.38, дополнительно содержащая один или несколько дополнительных ферментов.

45. Ферментная композиция по п.44, где один или несколько дополнительных ферментов выбраны из группы альфа-амилаз, глюкоамилаз, ферментов, гидролизующих гранулярный крахмал, протеаз, целлюлаз, пуллуланаз и их сочетаний.

46. Ферментная композиция по п.45, где дополнительным ферментом является альфа-амилаза.

47. Ферментная композиция по п.45, где дополнительным ферментом является фермент, гидролизующий гранулярный крахмал.

48. Ферментная композиция по п.45, где дополнительным ферментом является протеаза.

49. Способ гидролиза крахмала, включающий обработку крахмалсодержащего субстрата ферментом, обладающим, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 4 или ее биологически активным фрагментом.

50. Способ получения продукта брожения из субстрата, содержащего гранулярный крахмал, включающий

a) контактирование субстрата, содержащего гранулярный крахмал, с глюкоамилазой, обладающей, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 4 или ее биологически функциональным фрагментом при температуре ниже температуры желатинизации, при pH приблизительно от 4 до 7,0 в течение периода времени, для получения композиции, содержащей глюкозу,

b) контактирование глюкозы со сбраживающим организмом в подходящих условиях брожения для получения продукта брожения.

51. Способ по п.50, где продуктом брожения является этанол.

52. Способ осахаривания разжиженного крахмала, включающий обработку разжиженного крахмала полипептидом, обладающим активностью глюкоамилазы, где полипептид обладает, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 4 или ее биологически функциональным фрагментом и получение композиции, которая содержит, по меньшей мере, 80% глюкозы.