Способ удаления загрязняющей нуклеиновой кислоты из реакций обратной транскрипции и амплификации - RU2012105647A

Реферат

1. Способ удаления загрязняющей нуклеиновой кислоты из реакции обратной транскрипции, при котором используют ДНКазу, которая, по существу, необратимо инактивируется путем нагревания при температуре примерно 50°С в течение 5 мин, и которая, по существу, специфична в отношении двухцепочечной ДНК.2. Способ удаления загрязняющей нуклеиновой кислоты из полимеразной цепной реакции (ПЦР) с горячим стартом, где указанная реакция представляет собой барьерную комбинацию ПЦР с горячим стартом и/или включает ДНК-полимеразу с горячим стартом, при котором используют ДНКазу, которая, по существу, необратимо инактивируется путем нагревания при температуре примерно 50°С в течение 5 мин, и которая, по существу, специфична в отношении двухцепочечной ДНК.3. Способ по любому из пп.1 и 2, где реакционную смесь для обратной транскрипции, комбинацию для ПЦР с горячим стартом, смесь для ПЦР с горячим стартом или любой из их индивидуальных компонентов приводят в контакт с ДНКазой в условиях, которые дают возможность для расщепления любой загрязняющей двухцепочечной ДНК, и затем реакционную смесь нагревают для инактивации ДНКазы.4. Способ обратной транскрипции in vitro нуклеиновой кислоты-мишени, при котором осуществляют стадию обработки реакционной смеси для обратной транскрипции ДНКазой, которая, по существу, необратимо инактивируется путем нагревания при температуре примерно 50°С в течение 5 мин и которая, по существу, специфична в отношении двухцепочечной ДНК, перед началом реакции обратной транскрипции.5. Способ по п.3, где реакционная смесь для обратной транскрипции представляет собой полную смесь, и ее нагревают при рабочей температур�