Новый полипептид системы цитохрома р450 с повышенной ферментной активностью - RU2016133705A
Код документа: RU2016133705A
Формула
1. Выделенный фермент P450, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 1, или состоящий из нее, где указанная последовательность содержит треонин в положении, соответствующем положению 225, и/или аспарагиновую кислоту в положении, соответствующем положению 289.
2. Фермент по п. 1, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, или состоящий из нее.
3. Фермент по п. 1 или 2, состоящий из последовательности SEQ ID NO: 1.
4. Выделенная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую фермент по любому из пп. 1-3, или состоит из нее.
5. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 4, которая функционально связана с последовательностями, контролирующими экспрессию.
6. Вектор по п. 5, дополнительно содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую адренодоксин (Adx), и/или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую адренодоксинредуктазу (AdR).
7. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 4 или вектор по п. 5 или 6.
8. Клетка-хозяин по п. 7, которая представляет собой микроорганизм, полученный при помощи генной инженерии.
9. Клетка-хозяин по п. 7 или 8, которая представляет собой Saccharomyces cerevisiae.
10. Микроорганизм, полученный при помощи генной инженерии, который способен превращать субстрат, выбранный из группы, состоящей из полициклических и ненасыщенных одноатомных спиртов с алифатической боковой цепью, таких как холестерин, аналог холестерина и производное холестерина, в предшественника стероидных гормонов, где указанный микроорганизм содержит нуклеиновую кислоту по п. 4 и необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую адренодоксин (Adx), и/или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую адренодоксинредуктазу (AdR).
11. Способ in vitro получения фермента по любому из пп. 1-3, при этом указанный способ включает стадии
а) культивирования клетки-хозяина по любому из пп. 7-9 в условиях, подходящих для достижения экспрессии фермента по любому из пп. 1-3; и
b) извлечения экспрессируемого фермента.
12. Применение фермента по любому из пп. 1-3 для получения предшественника стероидных гормонов.
13. Способ получения предшественника стероидных гормонов, включающий стадии
a) получения микроорганизма по любому из пп. 8-10,
b) культивирования указанного микроорганизма в условиях, обеспечивающих возможность экспрессии фермента по любому из пп. 1-3,
c) приведения культуры микроорганизма, полученной на стадии b), в контакт с субстратом, выбранным из группы, состоящей из полициклических и ненасыщенных одноатомных спиртов с алифатической боковой цепью, таких как холестерин, аналог холестерина и производное холестерина, в условиях, обеспечивающих возможность получения предшественника стероидных гормонов из указанного субстрата при помощи микроорганизма, и
d) извлечения получаемого предшественника стероидных гормонов.
14. Способ получения предшественника стероидных гормонов, включающий стадии
a) приведения фермента по любому из пп. 1-3 в контакт с выделенным полипептидом адренодоксином (Adx), выделенным полипептидом адренодоксинредуктазой (AdR) и субстратом, выбранным из группы, состоящей из полициклических и ненасыщенных одноатомных спиртов с алифатической боковой цепью, таких как холестерин, аналог холестерина и производное холестерина, в условиях, обеспечивающих возможность преобразования указанного субстрата в предшественника стероидных гормонов, и
b) извлечения получаемого предшественника стероидных гормонов.
15. Способ по п. 13 или 14, где предшественник стероидных гормонов представляет собой прегненолон.
