Способ получения ароматических спиртов - RU2016114987A

1. Способ получения сесквитерпенового спирта, включающий:

i) контактирование терпена Формулы I:

с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45% с полипептидом, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 81; и

необязательно выделение спирта, в котором R является насыщенной, мононенасыщенной или полиненасыщенной алифатической группой, состоящей из 9 атомов углерода, и в котором R может представлять собой разветвленную цепь или состоит из одного или более неароматических колец.

2. Способ по п. 1, согласно которому спирт включает α-синенсол, β-синенсол, α-санталол, β-санталол, α-транс-бергамотол, эпи-β-санталол, ланцелол и/или их смеси.

3. Способ получения сесквитерпенового спирта, в том числе α-синенсола, β-синенсола, α-санталола, β-санталола, α-транс-бергамотола, эпи-β-санталола, ланцелола и/или их смеси, включающий контактирование α-фарнезена, β-фарнезена, α-санталена, β-санталена, α-транс-бергамотена, эпи-β-санталена и/или β-бисаболена с полипептидом, обладающим Р450 монооксигеназной активностью, при этом полученный сесквитерпеновый спирт содержит, по меньшей мере, около 36% цис-изомера.

4. Способ по п. 3, согласно которому полученный сесквитерпеновый спирт содержит, по меньшей мере, около 46% цис-изомера.

5. Способ по п. 3, согласно которому полученный сесквитерпеновый спирт содержит более 50% цис-изомера.

6. Способ по п. 3, согласно которому полученный сесквитерпеновый спирт содержит, по меньшей мере, 72% цис-изомера.

7. Способ по п. 3, согласно которому полученный сесквитерпеновый спирт

содержит, по меньшей мере, около 96% цис-изомера.

8. Способ по п. 3, согласно которому полученный сесквитерпеновый спирт содержит, по меньшей мере, около 100% цис-изомера.

9. Способ по п. 3, согласно которому полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

10. Способ по п. 4, согласно которому полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

11. Способ по п. 5, согласно которому полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

12. Способ по п. 6, согласно которому полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

13. Способ по п. 7, согласно которому полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

14. Способ по п. 8, согласно которому полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с

полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71 и 73.

15. Изолированный полипептид, обладающий монооксигеназной активностью, содержащий последовательность аминокислот, которая имеет идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%), 90%, 95% или 98%) или более с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

16. Изолированный полипептид, обладающий монооксигеназной активностью и содержащий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

17. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из i) нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность нуклеиновых кислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 70 и 72; и ii) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, обладающий Р450-монооксигеназной активностью, при этом полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая является идентичной не менее или, по меньшей мере, примерно на 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%), 95% или 98% или более с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

18. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 17, отличающаяся тем, что кодированный полипептид имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73.

19. Изолированный полипептид, обладающий монооксигеназной активностью и содержащий аминокислотную последовательность, которая является идентичной не менее или, по меньшей мере, примерно на 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% или более с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 81.

20. Изолированный полипептид, обладающий монооксигеназной активностью и содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 81.

21. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из: i) нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность нуклеиновых кислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID. №: 78 и 80; и ii) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, обладающий Р450-монооксигеназной активностью, при этом полипептид содержит аминокислотную последовательность,

которая является идентичной не менее или, по меньшей мере, примерно на 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% или более с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 81.

22. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 21, отличающаяся тем, что кодированный полипептид имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 79 и SEQ ID NO: 81.

23. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из i) нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность нуклеиновых кислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID. №: 27, 29, 31, 33, и 35; и ii) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, обладающий Р450 монооксигеназной активностью, при этом полипептид имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36.

24. Способ получения полипептида, обладающего Р450-монооксигеназной активностью, включающий стадии трансформации клетки-хозяина или нечеловеческого организма нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид, имеющий идентичность последовательности не менее или, по меньшей мере, около 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% с полипептидом, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 81, и культивирования клетки-хозяина или организма при условиях, обеспечивающих возможность выработки данного полипептида.

25. Способ получения полипептида, обладающего Р450 монооксигеназной активностью, включающий стадии трансформации клетки-хозяина или нечеловеческого организма нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73 SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 81, и культивирования клетки-хозяина или организма при условиях, обеспечивающих возможность выработки данного полипептида.

26. Способ получения α-синенсола, β-синенсола, α-санталола, β-санталола, α-транс-бергамотола, эпи-β-санталола, ланцелола и/или их смесей, включающий

i) культивирование клетки при условиях, подходящих для продуцирования Р450 полипептида, обладающего монооксигеназной активностью, при котором клетка: а) продуцирует пирофосфат, предшественник ациклических терпенов; b) экспрессирует Р450 редуктазу, с) экспрессирует полипептид, который имеет α-фарнезен, β-фарнезен, α-сантален, β-сантален, α-транс-бергамотен и/или эпи-β-сантален синтазную активность и продуцирует α-фарнезен, β-фарнезен, α-сантален, β-сантален, α-транс-бергамотен, эпи-β-сантален и/или β-бисаболен, и d) экспрессирует полипептид по п. 1; и

ii) необязательно, выделение спирта из клетки.

27. Способ по п. 26, согласно которому ациклический пирофосфатный предшественник терпенов выбирают из группы, состоящей из геранил-пирофосфата (GPP), фарнезил-дифосфата (FPP) и геранилгеранил-пирофосфата (GGPP).

28. Способ по п. 27, согласно которому ациклический пирофосфатный предшественник терпена выбирают из группы, состоящей из FPP.

29. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 17, 18, 21, 22 или 23.

30. Вектор по п. 29, отличающийся тем, что вектор является прокариотическим вектором, вирусным вектором или эукариотическим вектором.

31. Вектор по п. 29 или 30, являющийся экспрессирующим вектором.

32. Способ по п. 24, 25 или 26, в котором клетка является прокариотической клеткой.

33. Способ по п. 24, 25 или 26, в котором клетка является бактериальной клеткой.

34. Способ по п. 24, 25 или 26, в котором клетка является эукариотической клеткой.

35. Способ по п. 34, согласно которому эукариотическая клетка является дрожжевой клеткой или растительной клеткой.