Нуклеотидные последовательности гена tal - RU2001108535A

Реферат

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных нуклеотидов полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п.1, который представляет собой реплицируемую в коринебактериях, предпочтительно рекомбинантную, ДНК и дополнительно содержит по крайней мере одну из нуклеотидных последовательностей, кодирующих гены tkt, zwf, opcA и devB.

3. Полинуклеотид по п.1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п.2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

5. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 4.

6. Реплицируемая ДНК по п.2, которая включает: (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и необязательно (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

7. Коринебактерии, служащие в качестве клеток-хозяев и содержащие вектор, который несет полинуклеотид по п.1.

8. Способ получения L-аминокислот, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: а) ферментацию с использованием продуцирующих целевую L-аминокислоту бактерий, в которых амплифицируют по крайней мере ген tal и необязательно одновременно амплифицируют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей ген tkt, ген zwf, ген орсА и ген devB, б) накопление целевого продукта в среде или в клетках бактерий и в) выделение целевой L-аминокислоты.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно амплифицируют другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути метаболизма, которые препятствуют образованию целевой L-аминокислоты.

11. Способ по любому из пп.8-10, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие одну из аминокислот, выбранных из группы, включающей L-лизин, L-треонин, L-изолейцин и L-триптофан.

12. Способ ферментативного получения L-аминокислот, прежде всего лизина, по п.8, отличающийся тем, что применяют коринеформные микроорганизмы, прежде всего такие, которые уже обладают способностью продуцировать L-аминокислоты и в которых одновременно амплифицируют или сверхэкспрессируют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей: 12.1. ген dapA, кодирующий дигидродипиколинат-синтазу, 12.2. ген lysC, кодирующий устойчивую в отношении обратной связи аспартаткиназу, 12.3. ген gap, кодирующий глицеролальдегид-3-фосфат-дегидрогеназу, 12.4. ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу, 12.5. ген mqo, кодирующий малат-хиноноксидоредуктазу, 12.6. ген tkt, кодирующий транскетолазу, 12.7. ген gnd, кодирующий 6-фосфоглюконат-дегидрогеназу, 12.8. ген zwf, кодирующий глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназу, 12.9. ген lysE, кодирующий экспорт лизина, 12.10. ген zwal, 12.11. ген eno, кодирующий энолазу, 12.12. ген орсА.

13. Способ ферментативного получения L-треонина по п.8, отличающийся тем, что применяют коринеформные микроорганизмы, прежде всего такие, которые уже обладают способностью продуцировать L-треонин и в которых одновременно амплифицируют, прежде всего сверхэкспрессируют, один или несколько генов, выбранных из группы, включающей: 13.1. ген hom, кодирующий гомосерин-дегидрогеназу или аллель hom^dr, кодирующий "устойчивую в отношении обратной связи" гомосерин-дегидрогеназу, 13.2. ген gap, кодирующий глицеролальдегид-3-фосфат-дегидрогеназу, 13.3. ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу, 13.4. ген mqo, кодирующий малат-хиноноксидоредуктазу, 13.5. ген tkt, кодирующий транскетолазу, 13.6. ген gnd, кодирующий 6-фосфоглюконат-дегидрогеназу, 13.7. ген zwf, кодирующий глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназу, 13.8. ген thr, кодирующий экспорт треонина, 13.9. ген zwal, 13.10. ген eno, кодирующий энолазу, 13.11. ген орсА.

14. Способ по п.10, отличающийся тем, что для ферментативного получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, L-треонина, L-изолейцина или L-триптофана, применяют бактерии, в которых одновременно ослабляют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей: 14.1. ген pck, кодирующий фосфоенолпируваткарбоксикиназу, 14.2. ген pgi, кодирующий глюкозо-6-фосфатизомеразу, 14.3. ген рохВ, кодирующий пируват-оксидазу, 14.4. ген zwa2.

15. Применение полинуклеотидных последовательностей по п.1 в качестве гибридизационных зондов для выделения кДНК, кодирующей продукт гена tal.

16. Применение полинуклеотидных последовательностей по п.1 в качестве гибридизационных зондов для выделения кДНК или генов, обладающих высокой степенью сходства с последовательностью гена tal.