Получение алкена - RU2016106385A
Код документа: RU2016106385A
Формула
1. Клетка микроорганизма, способная производить по меньшей мере один алкен с концевой двойной связью по меньшей мере из одной короткоцепочечной жирной кислоты, при этом клетка является генетически модифицированной, с тем чтобы содержать
по меньшей мере первую генетическую мутацию, которая увеличивает экспрессию, относительно клетки дикого типа, фермента (Ε1), выбранного из семейства CYP152-зависимых пероксигеназ, и
по меньшей мере вторую генетическую мутацию, которая увеличивает экспрессию, относительно клетки дикого типа, по меньшей мере одной NAD(P)+ оксидоредуктазы (Е2) и соответствующего медиаторного белка,
при этом короткоцепочечная жирная кислота представляет собой С4-С10жирную кислоту.
2. Клетка по п. 1, где Ε1 выбран из группы, включающей CYPSPα (Е1а), CYPBSB (E1b) и OleT (E1c).
3. Клетка по любому из пп. 1 или 2, где Ε1 представляет собой OleT (Е1с) и содержит последовательность, по меньшей мере на 60% идентичную SEQ ID NO: 1.
4. Клетка по любому из пп. 1 или 2, где NAD(P)+ оксидоредуктаза (Е2) и соответствующий медиаторный белок представляют собой:
(a) ферредоксин редуктазу (Е2а) и ферредоксин; или
(b) путидаредоксин редуктазу (E2b) и путидаредоксин.
5. Клетка по любому из пп. 1 или 2, где Е2 содержит последовательность, на 60% идентичную SEQ ID NO: 2, и медиаторный белок содержит последовательность, на 60% идентичную SEQ ID NO: 3.
6. Клетка по любому из пп. 1 или 2, где клетка дополнительно содержит по меньшей мере третью генетическую мутацию, которая увеличивает экспрессию, относительно клетки дикого типа, по меньшей мере одного фермента (Е3), способного к регенерации NAD(P)H.
7. Клетка по п. 6, где фермент (Е3) выбран из группы, включающей глюкозодегидрогеназу, фосфитдегидрогеназу и формиатдегидрогеназу.
8. Клетка по любому из пп. 1 или 2, где клетка дополнительно характеризуется сниженной способностью к разложению жирных кислот относительно клетки дикого типа.
9. Клетка по п. 8, где способность к разложению жирной кислоты снижена в результате делеции в гене, кодирующем фермент, выбранный из группы, включающей импортер жирных кислот, КоА-лигазу жирных кислот, ацил-КоА-дегидрогеназу, 2,4-диеноил-КоА-редуктазу, еноил-КоА-гидратазу и 3-кетоацил-КоА-тиолазу.
10. Клетка по любому из пп. 1, 2, 7 или 9, где клетка представляет собой прокариотическую клетку или клетку низших эукариот.
11. Способ получения по меньшей мере одного алкена с концевой двойной связью по меньшей мере из одной короткоцепочечной жирной кислоты, при этом способ включает
приведение в контакт рекомбинантной клетки микроорганизма по любому из пп. 1-10 со средой, содержащей короткоцепочечную жирную кислоту.
12. Применение клетки по любому из пп. 1-10 для получения по меньшей мере одного алкена с концевой двойной связью.
