Генетическая абляция клеток, несущих ген prp, с использованием стратегии направленной промоторной ловушки для получения бессывороточных рекомбинантных белков в качестве терапевтических препаратов - RU2009123458A

Реферат

1. Свободная от прионного белка (PrP), бессмертная, соматическая клеточная линия человека, в которой полностью удалены оба аллеля гена PrP. ! 2. Клеточная линия по п.1, ! (i) которую можно трансфицировать или культивировать в бессывороточных условиях, и/или (ii) которая имеет встроенные аденовирусные последовательности в своем геноме, и/или (iii) которая получена из исходной клетки, выбранной из группы клеток почки, мочевого пузыря, печени, легкого, сердечной мышцы, гладкой мускулатуры, яичника и желудочно-кишечного тракта, предпочтительной исходной клеткой является линия клеток почки человека, и/или (iv) которая подходит для получения рекомбинантных белков. ! 3. Клеточная линия по п.2, в которой клетки почки являются клетками почки человеческого эмбриона, предпочтительно клетки почки эмбриона человека выбирают из клеток 293 (ATCC CRL-1573; DSM ACC 305), клеток FreeStyle 293 (клетки 293F; Invitrogen R79007) и клеток 293T (DSM ACC 2494), предпочтительно это клетки 293F (Invitrogen R79007). ! 4. Клеточная линия по любому одному из пп.1-3, в которой аллели гена PrP полностью удалены гомологичной рекомбинацией с нокаутными ловушками, несущими гены селективных или селекционных маркеров, так что экспрессия селективного или селекционного маркера осуществляется с эндогенного PrP-промотора. ! 5. Клеточная линия по п.3, включающая, но не ограниченная этим, бесприонную клеточную линию 293F, pf293F и все промежуточные смешанные популяции и полученные клоны, необходимые для ее получения. ! 6. Способ получения свободной от PrP, бессмертной, соматической клеточной линии человека по любому одному из пп.1-5, который включает последовательную делецию ОРС PrP в соответствующей исходной клетке путем гомологичн