Дифференцировка человеческих эмбриональных стволовых клеток - RU2017102194A
Код документа: RU2017102194A
Формула
1. Способ получения популяции клеток, соэкспрессирующих NKX6.1 и инсулин, экспрессирующих маркеры, характерные для панкреатической эндокринной линии, включающий культивирование клеток панкреатической эндодермы в среде, обогащенной фактором, способным ингибировать BMP, ингибитором сигнализации рецептора TGFβ и активатором протеинкиназы С.
2. Способ по п. 1, где менее чем 10% клеток в популяции экспрессируют глюкагон.
3. Способ по п. 1, где фактор, способный ингибировать BMP, представляет собой ноггин.
4. Способ по п. 3, где ноггин используют в концентрации от около 500 нг/мл до около 500 мкг/мл.
5. Способ по п. 3, где ноггин используют в концентрации 100 нг/мл.
6. Способ по п. 1, где ингибитор сигнализации рецептора TGFβ представляет собой ингибитор ALK5.
7. Способ по п. 6, где ингибитор ALK5 представляет собой ингибитор ALK II.
8. Способ по п. 7, где ингибитор ALK II используется при концентрации от около 0,1 мкМ до около 10 мкМ.
9. Способ по п. 7, где ингибитор ALK II используется при концентрации 1 мкМ.
10. Способ по п. 1, где способ включает культивирование клеток панкреатической эндодермы в среде, обогащенной ноггином и ингибитором ALK5.
11. Способ по п. 1, где активатор протеинкиназы С выбирают из группы, состоящей из (2S,5S)-(E,E)-8-(5-(4-(трифторметил)
фенил)-2,4-пентадиеноиламин)бензолактама, индолактама V, форбол-12,13-дибутирата и форбол-12-миристат-13-ацетата.
12. Способ по п. 11, где активатор протеинкиназы С представляет собой (2S,5S)-(E,E)-8-(5-(4-(трифторметил)фенил)-2,4-пентадиеноиламин)бензолактам.
13. Способ по п. 12, где (2S,5S)-(E,E)-8-(5-(4-(трифторметил)фенил)-2,4-пентадиеноиламин)бензолактам используют при концентрации от около 20 нМ до около 500 нМ.
14. Способ по п. 11, где активатор протеинкиназы С представляет собой индолактам V.
15. Способ по п. 11, где активатор протеинкиназы С представляет собой форбол-12,13-дибутират.
16. Способ по п. 11, где активатор протеинкиназы С представляет собой форбол-12-миристат-13-ацетат.
17. Способ по п. 1, где клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для панкреатической эндокринной линии, представляют собой панкреатические эндокринные клетки.
18. Способ по п. 1, где клетки панкреатической эндодермы получают поэтапной дифференцировкой плюрипотентных стволовых клеток.
19. Способ по п. 1, где клетки культивируют в течение 6 дней.
20. Способ по п. 1, 10 или 11, где среду дополнительно обогащают GÖ 6976.
21. Способ лечения диабета, включающий имплантирование панкреатических эндокринных клеток, полученных способом по любому из пп. 1, 10 или 11.
