Ген streptomyces avermitilis и его применение для изменения соотношения авермектинов b2:b1 - RU2004124521A

Реферат

1. Молекула полинуклеотида, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по существу аналогична аллелю aveC Streptomyces avermitilis, последовательности плазмиды pSE186 (АТСС 209604), кодирующей продукт гена AveC S. avermitilis, нуклеотидной последовательности открытой рамки считывания (ORF) aveC S. avermitilis, показанной на фигуре 1 (SEQ ID No.1), или их варианту, содержащему одну или несколько молчащих замен в нуклеотидной последовательности в соответствии с вырожденностью генетического кода, но при этом имеет мутации, кодирующие комбинацию замен аминокислот в положении аминокислотных остатков, соответствующих положениям амнокислот SEQ ID No.2, благодаря чему клетки штамма S. avermitilis АТСС 53692, в которых инактивирован аллель aveC дикого типа и которые экспрессируют молекулу полинуклеотида, содержащую мутированную нуклеотидную последовательность, способны продуцировать авермектины класса 2:1 с меньшим соотношением по сравнению с соотношением, продуцируемым клетками штамма S. avermitilis АТСС 53692, экспрессирующими только аллель aveC дикого типа, причем, когда авермектины класса 2:1 являются авермектинами циклогексил В2:циклогексил В1, соотношение авермектинов класса 2:1 составляет 0,35:1 или меньше.

2. Молекула полинуклеотида по п.1, в которой соотношение авермектинов циклогексил В2:циклогексил В1 составляет примерно 0,20:1 или меньше.

3. Молекула полинуклеотида по п.1, в которой комбинация замен аминокислот включает комбинацию, выбираемую из нижеследующей группы:

4. Молекула полинуклеотида, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по существу аналогична аллелю aveC Streptomyces avermitilis, последовательности плазмиды pSE186 (АТСС 209604), кодирующей продукт гена AveC S. avermitilis, нуклеотидной последовательности открытой рамки считывания (ORF) aveC S. avermitilis, показанной на фигуре 1 (SEQ ID No.1), или их варианту, содержащему одну или несколько молчащих замен в нуклеотидной последовательности в соответствии с вырожденностью генетического кода, но при этом имеет мутации, кодирующие комбинацию замен аминокислот в положении аминокислотных остатков, соответствующих положениям аминокислот SEQ ID No.2, благодаря чему клетки штамма S. avermitilis АТСС 53692, в которых инактивирован аллель aveC дикого типа и которые экспрессируют молекулу полинуклеотида, содержащую мутированную нуклеотидную последовательность, способны продуцировать авермектины класса 2:1 с меньшим соотношением по сравнению с соотношением, продуцируемым клетками штамма S. avermitilis АТСС 53692, экспрессирующими только аллель aveC дикого типа, причем, когда авермектины класса 2:1 являются авермектинами циклогексил В2:циклогексил В1, соотношение авермектинов класса 2:1 уменьшается примерно до 0,40:1 или меньше и комбинация замен аминокислот включает комбинацию, выбираемую из нижеследующей группы:

(bf) D48E, S138T, A139T, G179S, E238D; и

(bg) Y28C, Q38R, D48E, L136P, G179S, E238D.

5. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п.1 или 4.

6. Способ получения штамма Streptomyces avermitilis, который включает (i) мутирование аллеля aveC в клетке штамма S. avermitilis, вызывающее комбинацию замен аминокислот в продукте гена AveC, или (ii) введение в клетку штамма S. avermitilis мутированного аллеля aveC или его варианта, содержащего одну или несколько молчащих замен в нуклеотидной последовательности в соответствии с вырожденностью генетического кода и кодирующего продукт гена AveC, содержащий комбинацию замен аминокислот, причем комбинация замен аминокислот в продукте гена AveC включает комбинацию, выбираемую из нижеследующей группы:

7. Способ получения штамма Strepromyces avermitilis, который включает (i) мутирование аллеля aveC в клетке штамма S. avermitilis, вызывающее комбинацию замен аминокислот в продукте гена AveC, или (ii) введение в клетку штамма S. avermitilis мутированного аллеля aveC или его варианта, содержащего одну или несколько молчащих замен в нуклеотидной последовательности в соответствии с вырожденностью генетического кода и кодирующего продукт гена AveC, содержащий комбинацию замен аминокислот, благодаря чему клетки, содержащие мутированный аллель aveC или его вырожденный вариант, способны продуцировать авермектины циклогексил В2:циклогексил В1 в соотношении 0,35:1 или меньше.

8. Способ по п.7, в котором комбинация замен аминокислот в продукте гена AveC включает комбинацию, выбираемую из нижеследующей группы:

9. Способ по п.7, в котором соотношение авермектинов циклогексил В2:циклогексил В1 составляет примерно 0,20:1 или меньше.

10. Способ получения нового штамма Streptomyces avermitilis, который включает (i) мутирование аллеля aveC в клетке штамма S. avermitilis, вызывающее комбинацию замен аминокислот в продукте гена AveC, или (ii) введение в клетку штамма S. avermitilis мутированного аллеля aveC или его вырожденного варианта, кодирующего продукт гена AveC и включающего комбинацию замен аминокислот, выбираемую из нижеследующей группы:

(bf) D48E, S138T, A139T, G179S, E238D; и

(bg) Y28C, Q38R, D48E, L136P, G179S, E238D.

11. Клетка вида из рода Streptomyces, которая содержит мутированный аллель aveC S. avermitilis или его вырожденный вариант, кодирующий продукт гена AveC, включающий комбинацию замен аминокислот, выбираемую из нижеследующей группы:

12. Клетка по п.11, которая является клеткой Streptomyces avermitilis.

13. Клетка вида из рода Streptomyces, которая содержит мутированный аллель aveC S.avermitilis или его вырожденный вариант, кодирующий продукт гена AveC, включающий комбинацию замен аминокислот, выбираемых из нижеследующей группы:

(bf) D48E, S138T, A139T, G179S, E238D; и

(bg) Y28C, Q38R, D48E, L136P, G179S, E238D.