Генетическая модификация продуцирующих(s)-молочную кислоту термофильных бактерий - RU2017102895A
Код документа: RU2017102895A
Формула
1. Полученная генно-инженерным путем термофильная бактериальная клетка, представляющая собой факультативный анаэроб и продуцирующая (S)-молочную кислоту, в которой эндогенный ген mgsA метилглиоксальсинтазы инактиван или делетирован.
2. Клетка по п. 1, в которой дополнительно инактивирован или делетирован эндогенный ген А и/или В пируват-формиат-лиазы.
3. Клетка по п. 1 или 2, представляющая собой производное, дефектное по споруляции в результате инактивации или делеции эндогенного гена споруляции.
4. Клетка по п. 3, где ген споруляции представляет собой sigF.
5. Клетка по любому из пп. 1-4, где эндогенный ген А и/или В пируват-формиат-лиазы инактивирован путем инактивации или делеции локуса pflBA-adhE пируват-формиат-лиаза/алкогольдегидрогеназа.
6. Клетка по любому из пп. 1-5, продуцирующая (S)-молочную кислоту с энантиомерной чистотой по меньшей мере 98%, более предпочтительно по меньшей мере 99%, 99,5%, 99,8% или 99,9%.
7. Клетка по любому из пп. 1-6, где дополнительно инактивирован или делетирован эндогенный ген фосфотрансацетилазы (pta).
8. Бактериальная клетка по любому из пп. 1-7, где гены инактивированы или делетированы посредством гомологичной рекомбинации.
9. Клетка по любому из пп. 1-8, представляющая собой грамположительную бактериальную клетку.
10. Клетка по п. 9, принадлежащая роду Geobacillus.
11. Клетка по п. 10, где вид Geobacillus представляет собой Geobacillus thermoglucosidans.
12. Способ продуцирования энантиомерно чистой (S)-молочной кислоты, включающий культивирование термофильной бактериальной клетки по любому из пп. 1-11 с использованием подходящего ферментируемого углеродсодержащего источника питания и выделение (S)-молочной кислоты.
13. Способ по п. 12, где углеродсодержащий источник питания содержит ксилозу, глюкозу или сахарозу.
14. Способ по п. 12 или 13, где культивирование осуществляют при температуре от 50°C до 70°C.
15. Способ по любому из пп. 12-14, при котором образуется не более 15% (масс./масс.) побочных продуктов, исходя из общей массы побочных продуктов относительно общей массы продуцированной молочной кислоты, в частности или не более 10% (масс./масс.), или не более 5%, 4%, 3% или 2% (масс./масс.).
16. Способ по любому из пп. 12-15, где образованное количество по меньшей мере одного из муравьиной кислоты, этанола и уксусной кислоты составляет не более 10% (масс./масс.), исходя из общей массы муравьиной кислоты, этанола или уксусной кислоты относительно общей массы продуцированной молочной кислоты, в частности не более 6%, 1%, 0,25% или 0,1% (масс./масс.).
