Штаммы микроорганизмов, оптимизированные для путей биосинтеза с использованием надфн - RU2006119625A

Реферат

1. Штамм микроорганизма, отличающийся тем, что он включает ограничение одной или нескольких активностей, окисляющих НАДФН.

2. Штамм по п.1, отличающийся тем, что одну или несколько активностей, окисляющих НАДФН, ограничивают путем делеции одного или нескольких генов, кодирующих хиноноксидоредуктазу и/или растворимую трансгидрогеназу.

3. Штамм по п.1, отличающийся тем, что он также включает модификации, позволяющие создать благоприятные условия для одной или нескольких ферментативных активностей, восстанавливающих НАДФ⁺.

4. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он включает делецию одного или нескольких генов, кодирующих фосфоглюкозизомеразу и/или фосфофруктокиназу.

5. Штамм по п.2, отличающийся тем, что он также включает модификации, позволяющие создать благоприятные условия для одной или нескольких ферментативных активностей, восстанавливающих НАДФ⁺.

6. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он включает делецию одного или нескольких генов, кодирующих фосфоглюкозизомеразу и/или фосфофруктокиназу.

7. Штамм по п.1, отличающийся тем, что он также включает модификацию одного или нескольких генов, кодирующих дигидролипоамиддегидрогеназу и/или глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, таким образом, чтобы они предпочтительно использовали НАДФ.

8. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он также включает модификацию одного или нескольких генов, кодирующих дигидролипоамиддегидрогеназу и/или глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, таким образом, чтобы они предпочтительно использовали НАДФ.

9. Штамм по п.1, отличающийся тем, что он также включает суперэкспрессию одного или нескольких генов, кодирующих глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, 6-фосфоглюконолактоназу, 6-фосфоглюконатдегидрогеназу, изоцитратдегидрогеназу или мембранную трансгидрогеназу.

10. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он также включает суперэкспрессию одного или нескольких генов, кодирующих глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, 6-фосфоглюконолактоназу, 6-фосфоглюконатдегидрогеназу, изоцитратдегидрогеназу или мембранную трансгидрогеназу.

11. Штамм по п.1, отличающийся тем, что он также включает делецию одного или нескольких генов, кодирующих 6-фосфоглюконатдегидратазу, малатсинтазу, изоцитратлиазу и изоцитратдегидрогеназкиназу/фосфатазу.

12. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он также включает делецию одного или нескольких генов, кодирующих 6-фосфоглюконатдегидратазу, малатсинтазу, изоцитратлиазу и изоцитратдегидрогеназкиназу/фосфатазу.

13. Штамм по п.1, отличающийся тем, что он содержит один или несколько генов, эндогенных или экзогенных, кодирующих ферменты, участвующие в биотрансформации целевой молекулы.

14. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он содержит один или несколько генов, эндогенных или экзогенных, кодирующих ферменты, участвующие в биотрансформации целевой молекулы.

15. Штамм по п.1, отличающийся тем, что он содержит один или несколько селекционных маркерных генов.

16. Штамм по п.3, отличающийся тем, что он содержит один или несколько селекционных маркерных генов.

17. Штамм по п.1, отличающийся тем, что его выбирают из следующих видов: Aspergillus sp., Bacillus sp., Brevibacteriumsp., Clostridium sp., Corynebacterium sp., Escherichia sp.,Gluconobacter sp., Penicillium sp., Pichia sp., Pseudomonas sp.,Rhodococcus sp., Saccharomyces sp., Streptomyces sp.,Xanthomonas sp. и Candida sp.

18. Штамм по п.3, отличающийся тем, что его выбирают из следующих видов: Aspergillussp., Bacillus sp., Brevibacterium sp., Clostridium sp., Corynebacterium sp., Escherichia sp., Gluconobacter sp., Penicillium sp., Pichia sp., Pseudomonas sp., Rhodococcus sp., Saccharomyces sp., Streptomyces sp., Xanthomonas sp. и Candida sp.

19. Способ получения оптимизированных штаммов по одному из пп.1-18, отличающийся тем, что осуществляют делецию одного или нескольких генов, кодирующих фосфоглюкозизомеразу, фосфофруктокиназу, 6-фосфоглюконатдегидратазу, малатсинтазу, изоцитратлиазу или изоцитратдегидрогеназкиназу/фосфатазу, и/или модифицируют один или несколько генов, кодирующих дигидролипоамиддегидрогеназу и/или глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, таким образом, чтобы они предпочтительно использовали НАДФ, причем эти делеции и модификации осуществляют при помощи подходящего средства, и/или осуществляют суперэкспрессию одного или нескольких генов, кодирующих глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, 6-фосфоглюконолактоназу, 6-фосфоглюконатдегидрогеназу, изоцитратдегидрогеназу или мембранную трансгидрогеназу, либо трансформируя штамм соответствующим вектором, содержащим один или несколько генов, кодирующих один или несколько ферментов, участвующих в биотрансформации целевой молекулы, и/или один или несколько селективных маркерных генов, либо модифицируя силу эндогенного промотора или промоторов, контролирующего(щих) суперэкспрессируемый ген или гены.

20. Способ получения целевой молекулы, по меньшей мере одна из реакций пути биосинтеза которой является НАДФН-зависимой, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:

a) культивирование оптимизированных микроорганизмов по одному из пп.1-10 в соответствующей культуральной среде, способствующей их росту и включающей вещества, необходимые для осуществления биотрансформации путем ферментации или биотрансформации, за исключением НАДФН, и

b) экстракция целевой молекулы из среды и, в случае необходимости, очистка.

21. Способ по п.20, отличающийся тем, что целевую молекулу выбирают из аминокислот, витаминов, стеролов, флавоноидов, жирных кислот, органических кислот, полиолов и сложных гидроксиэфиров.