Вирусные частицы, содержащие вектор, происходящийиз альфавируса, и способ получения указанной вирусной частицы - RU2006123079A

Реферат

1. Вирусная частица, состоящая из структурных элементов, не происходящих из альфавируса, и содержащая вектор, происходящий из альфавируса, дефектный по репликации в результате делеции или замещения структурных генов по меньшей мере одним трансгеном, отличающаяся тем, что структурные элементы указанной частицы не кодируются геномом вектора, происходящего из альфавируса.

2. Вирусная частица по п.1, отличающаяся тем, что структурные элементы соответствуют одному белку оболочки VSV-G.

3. Вирусная частица по п.1, отличающаяся тем, что структурные элементы соответствуют структурным белкам ретровируса.

4. Частица по п.1, отличающаяся тем, что альфавирус представляет собой вирус леса Семлики.

5. Частица по п.1, отличающаяся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, содержит протяженную последовательность для упаковки из MLV-векторов.

6. Частица по п.1, отличающаяся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, лишен psi-последовательности.

7. Частица по п.1, отличающаяся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, содержит расположенный на 5'-конце эукариотический промотор.

8. Частица по п.1, отличающаяся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, содержит мутантный промотор p26S.

9. Применение вирусной частицы по любому из пп.1-8 для инфицирования эукариотической клетки in vitro.

10. Фармацевтическая композиция, содержащая вирусную частицу по любому из пп.1-8.

11. Применение вирусной частицы по любому из пп.1-8 для изготовления лекарственного препарата для применения в лечении рака.

12. Способ получения вирусных частиц, состоящих из структурных элементов, не происходящих из альфавируса, и содержащих вектор, происходящий из альфавируса, дефектный по репликации в результате делеции или замещения структурных генов по меньшей мере одним трансгеном, заключающийся

в экспрессии in trans, в клеточной линии, генов, кодирующих структурные элементы, не происходящие из альфавируса и вектора, происходящего из альфавируса,

в выделении вирусных частиц, присутствующих в супернатанте клеточной культуры.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что структурные элементы соответствуют белку оболочки VSV-G.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что экспрессия in trans получена путем котрансфекции клеточной линии вектором для экспрессии VSV-G-оболочки и вектором, происходящим из альфавируса, причем котрансфекцию осуществляют в две отдельные стадии соответственно трансфекции клеточной линии вектором, экспрессирующим ген оболочки VSV-G, и затем второй трансфекции вектором, происходящим из альфавируса.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что трансфицированная клеточная линия представляет собой клеточную линию 293Т.

16. Способ по п.12, отличающийся тем, что структурные элементы соответствуют структурным белкам ретровируса.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что экспрессия in trans получена путем трансфекции упаковывающей клеточной линии, которая продуцирует дефектные по репликации ретровирусы, вектором, происходящим из альфавируса.

18. Способ по п.17, отличающийся тем, что упаковывающая клеточная линия получена путем стабильной трансфекции клеточной линии первым вирусным элементом, экспрессирующим ретровирусные гены GAG и POL, и вторым вирусным элементом, экспрессирующим ретровирусный ген ENV.

19. Способ по п.16, отличающийся тем, что экспрессия in trans получена тройной трансфекцией клеточной линии 293Т путем введения первого вирусного элемента, экспрессирующего ретровирусные гены GAG и POL, второго вирусного элемента, экспрессирующего ретровирусный ген ENV, и вектора, происходящего из альфавируса.

20. Способ по п.12, отличающийся тем, что альфавирус представляет собой вирус леса Семлики.

21. Способ по п.12, отличающийся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, содержит протяженную последовательность для упаковки из MLV-векторов.

22. Способ по п.12, отличающийся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, лишен psi-последовательности.

23. Способ по п.12, отличающийся тем, что геном вектора, происходящего из альфавируса, содержит расположенный на 5'-конце эукариотический промотор.

24. Способ по п.12, отличающийся тем, что вектор, происходящий из альфавируса, содержит мутантный промотор p26S.