Плазмиды и способ получения вирусных частиц - RU2017121232A
Код документа: RU2017121232A
Формула
1. Способ выработки химерного ns-RNA вируса, включающий в себя следующие действия:
а) трансфицируют клетки животного экспрессионным вектором или набором экспрессионных векторов, способных к экспрессии нуклеопротеина и РНК-зависимой полимеразы РНК;
б) трансфицируют клетку животного из (а) экспрессионным вектором или набором экспрессионных векторов с последовательностью нуклеотидов, кодирующих молекулы рекомбинантной РНК.
2. Способ по п. 1, в котором клетки культивируют в условиях, подходящих для репликации трансфицированных клеток.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором получают функциональные частицы рекомбинантного вируса.
4. Функциональная рекомбинантная плазмида в клетках животных, содержащая плазмиду pSS-URG, в которую могут быть внедрены последовательности генома вирусов, экспрессированные в виде РНК.
5. Плазмида по п. 4, проявляющая функциональность в клетках животных.
6. Плазмида по п. 4, отличающаяся тем, что плазмида pSS-URG содержит последовательность промотора, расположенную в области ITS-1 атлантического лосося; последовательность рибозима рыбы-молота; сайт клонирования; последовательность рибозима вируса гепатита δ; и терминатор транскрипции β-глобина кролика.
7. Плазмида по любому из пп. 4–6, в которой последовательность промотора атлантического лосося соответствует SEQ ID No 1.
8. Плазмида по любому из пп. 4–6, в которой последовательность рибозима рыбы-молота соответствует SEQ ID No 2.
9. Плазмида по любому из пп. 4–6, в которой последовательность сайта клонирования соответствует SEQ ID No 3.
10. Плазмида по любому из пп. 4–6, в которой последовательность рибозима вируса гепатита δ соответствует SEQ ID No 4.
11. Плазмида по любому из пп. 4–6, в которой терминатор транскрипции β-глобина кролика соответствует SEQ ID No 5.
12. Плазмида по любому из пп. 4–11, отличающаяся тем, что указанная плазмида обеспечивает клонирование генетических последовательностей животного, растения, протиста, гриба, бактерии или вируса с использованием фермента удаленной рестрикции SapI.
13. Плазмида по любому из пп. 4–12, отличающаяся тем, что указанная плазмида трансфицируется в клетку животного, обеспечивая транскрипцию гена с получением РНК без дополнительных нуклеотидов на ее концах.
14. Экспрессионная плазмида, кодирующая необходимые протеины для формирования cRNP.
15. Экспрессионная плазмида по п. 14, отличающаяся тем, что последовательности PB2 SEQ ID No 7, PB1 SEQ ID No 8, PA SEQ ID No 9 и NP SEQ ID No 10 вируса ISAV901_09 клонируются раздельно.
16. Способ получения вирусных частиц, включающий в себя следующие действия:
а) трансфицируют клетки животного экспрессионным вектором или набором экспрессионных векторов, способных к экспрессии нуклеопротеина и РНК-зависимой полимеразы РНК, а также последовательностей PB2 SEQ ID No 7, PB1 SEQ ID No 8, PA SEQ ID No 9 и NP SEQ ID No 10 вируса ISAV901_09;
б) трансфицируют клетку животного из (а) экспрессионным вектором или набором экспрессионных векторов pSS-URG с последовательностями нуклеотидов, кодирующими молекулы рекомбинантной РНК под контролем последовательности промотора, расположенной в области ITS-1 атлантического лосося; последовательности рибозима рыбы-молота; сайта клонирования; последовательности рибозима вируса гепатита δ; и терминатора транскрипции β-глобина кролика;
в) получают рекомбинантные вирусные частицы.
17. Использование вирусных частиц с целью экспрессирования нуклеиновых кислот типа РНК.
18. Использование вирусных частиц по п. 17 с целью экспрессирования протеинов, являющихся аутогенными или экзогенными для вируса.
19. Использование вирусных частиц по п. 17 с целью экспрессирования нуклеиновых кислот типа интерферирующей РНК, заглушающей РНК или микро-РНК.
