Способ получения дрожжей-мутантов и их применение - RU2017128466A

1. Способ получения дрожжей-мутантов, согласно которому по меньшей мере один штамм дрожжей на первой стадии мутагенеза приводят в контакт с первым мутагеном, а на второй стадии мутагенеза приводят в контакт со вторым мутагеном, причем способ отличается тем, что:

- первый и второй мутагены отличаются друг от друга и выбраны из следующей группы:

агента, алкилирующего нуклеотиды, агента, дезаминирующего нуклеотида, и УФ-излучения;

- между первой и второй стадией мутагенеза осуществляют первую стадию селекции, а после второй стадии мутагенеза осуществляют вторую стадию селекции, на которых мутанты, соответственно образующиеся на предшествующей стадии мутагенеза, подвергают действию фактора селекции, выбранного из:

(a) гипертонической среды и

(b) ингибитора алкогольдегидрогеназы.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что агент, алкилирующий нуклеотиды, выбирают из следующих агентов: диметилсульфат (DMS), этилметансульфонат (EMS), метилметансульфонат (MMS), 1-метил-3-нитро-1-нитрозогуанидин (MNNG), метилнитрозоцианамид (MNC), метилнитрозомочевина (MNU) и ДНК-метилтрансферазы.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что агент, дезаминирующий нуклеотиды, выбирают из следующих агентов: неорганическая нитритная соль, органическая нитритная соль и азотистая кислота.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что первый мутаген представляет собой агент, алкилирующий нуклеотиды, или агент, дезаминирующий нуклеотиды.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что первый мутаген представляет собой агент, алкилирующий нуклеотиды, а второй мутаген представляет собой агент, дезаминирующий нуклеотиды, или УФ-излучение.

6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что гипертоническую среду получают прибавлением одного из следующих веществ: хлориды и сульфаты натрия, калия, магния, кальция, а также сахар, включая фруктозу и глюкозу, и сахарные спирты, включая сорбит и маннит.

7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что ингибитор алкогольдегидрогеназы выбирают из следующих агентов: пиразол, 3-метилпиразол, 4-метилпиразол и ацетилсалициловая кислота.

8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что один из факторов селекции выбирают из группы (a) и еще один из факторов селекции выбирают из группы (b).

9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что после первой стадии селекции осуществляют стадию испытания, на которой промежуточные дрожжи-мутанты, полученные после первой стадии селекции, исследуют в отношении продуцирования глицерина в большем количестве по сравнению с первоначально примененным штаммом дрожжей при этанольном брожении в соответствующих одинаковых условиях, причем на вторую стадию мутагенеза и вторую стадию селекции направляют только промежуточные дрожжи-мутанты, в случае которых это подтверждается.

10. Дрожжи-мутанты, полученные способом по любому из пп. 1-9 и депонированные в "Leibnitz-Institut DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH" под регистрационным номером "DSM 29822".

11. Дрожжи-мутанты, полученные способом по любому из пп. 1-9 и отличающиеся тем, что мутанты при сбраживании сусла с плотностью, равной 90° Oe (21,6% по Бриксу), и со значением NOPA, равным 107 мг/мл (+/- 5 мг/л), при прибавлении дрожжей с дозой 4·10⁶/мл через 35 дней при температуре брожения 15-25°C продуцируют вино со следующим содержанием этанола и глицерина, г/л:

12. Применение дрожжей-мутантов, полученных способом по любому из пп. 1-9, или дрожжей-мутантов по п. 10, или дрожжей-мутантов по п. 11 в способе производства спиртсодержащего напитка.

13. Применение по п. 12, отличающееся тем, что спиртсодержащий напиток получают из виноградного сусла.