Активатор трансглутаминазы - RU2647600C2

Описание

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к активатору трансглутаминазы, стимулятору продукции церамидов и усилителю экспрессии инволюкрина.

Уровень техники

Роговой слой эпидермиса отвечает за обеспечение барьерной функции кожи, предупреждая потерю (испарение) влаги из организма и ирритацию или проникновение посторонних веществ снаружи. Роговой слой состоит из корнеоцитов и межклеточных липидов, и корнеоциты включены в структуру, подобную клеточной мембране, называемую "роговой конверт". Роговой конверт помогает обеспечивать стабильную структуру из корнеоцитов и является важной структурой для поддержания барьерной функции кожи. Роговой конверт формируется благодаря кератинизации кератиноцитов в базальном слое эпидермиса и синтезу инволюкрина (при этом также упоминаемого как "IVL"), лорикрина и других белков, необходимых для кератинизации, после чего белки сшиваются при активации трансглутаминазы. Экспрессия и синтез инволюкрина и активация трансглутаминазы важны для нормального формирования рогового конверта и нормальной эпидермальной кератинизации, а также для поддержания и улучшения функции увлажнения кожи. В этой связи, как сообщалось, повышение уровня экспрессии инволюкрина и активация трансглутаминазы приводят к нормальной кератинизации кожи, улучшению барьерной функции и уменьшению уровня шероховатости кожи (см., например, непатентную литературу 1 и 2 и патентную литературу 1 и 2).

Кроме того, церамиды, которые относятся к одному из классов сфинголипидов, представляют собой липиды, присутствующие только в весьма малом количестве относительно организма в целом. Однако в роговом слое, который является самым наружным слоем кожи, содержание церамидов составляет более половины содержания липидов, и такие церамиды играют важную роль в осуществлении функции увлажнения кожи и барьерной функции кожи. Такие церамиды продуцируются в эпидермальных клетках, затем секретируются для образования ламеллярной структуры в межклеточных пространствах рогового слоя и поддерживают функции рогового слоя. Широко обсуждалось, что при кожных заболеваниях, таких как сухая кожа, шершавая кожа, атопический дерматит, сенильный ксероз и псориаз, нормальный метаболизм церамидов замедляется, и уровень церамидов в роговом слое уменьшается, что приводит к ухудшению осуществления функции увлажнения кожи, неполной эпидермальной кератинизации и ухудшению барьерной и других функций кожи (см. непатентную литературу 3). Есть основания полагать, что вещество, которое стимулирует продукцию церамидов, могло бы обладать такими эффектами, как ингибирование пролиферации животных клеток, индукция дифференциации клеток и индукция апоптоза, и, кроме того, как можно ожидать, может обладать терапевтическими эффектами в отношении заболеваний, обусловленных пролиферацией или аномальной дифференциацией клеток, таких как воспалительные заболевания и злокачественные опухоли (см. непатентную литературу 4). Кроме того, сообщалось, что церамиды обладают ингибирующим действием на атрофию костной ткани, упрочняющим действием на костную ткань и ингибирующим действием на уменьшение альвеолярного отростка, и применимы для предупреждения и улучшения заболеваний костей и суставов, таких как остеопороз, перелом костей, боль в нижней части спины и ревматизм (см. патентную литературу 3), что церамиды обладают эффектом в отношении предупреждения или уменьшения пародонтоза (см. патентную литературу 4), и что церамиды обладают эффектом, обеспечивающим упругость и эластичность волос, и эффектом улучшения состояния волос на ощупь (см. патентную литературу 5).

Таким образом, от церамидов можно ожидать различных лечебных эффектов, и поэтому достижения в открытии веществ, которые могут стимулировать продукцию церамидов, являются желательными.

Кроме того, известно, что белки, связанные с кератинизацией, такие как инволюкрин, также играют роль в росте волос. Например, на основе результатов анализа экспрессии гена инволюкрина в корне волоса сообщалось, что экспрессия гена инволюкрина значительно выше у людей с волнистыми волосами, и что вещество, которое стимулирует экспрессию гена инволюкрина, может действовать в качестве промотора волнистых волос или вьющихся волос или усилителя образования волнистости (см. патентную литературу 6).

С другой стороны, семейство Акантовых содержит около 250 родов и 2500 различных видов растений. Считается, что среди таких растений растения рода Justicia (юстиция) включают в себя около 300 различных видов. Особенно заслуживает внимания то, что Justicia procumbens (юстиция лежачая) применяется в китайской медицине, например, для лечения артритной боли и уменьшения лихорадки, и что Justicia gendarussa (юстиция гендарусса), растение того же самого рода Justicia (юстиция), известно как ингредиент анальгетика для наружного применения для обезболивания кожи и как средство для наружного применения против кожного зуда (см., например, патентную литературу 7 и 8). Кроме того, известно, что Adhatoda vasica (адатода сосудистая), растение другого рода из того же самого семейства Акантовых, обладает стимулирующим действием на продукцию церамидов (например, см. патентную литературу 9). Кроме того, известно, что физиологические активности экстракта Justicia procumbens включают в себя ингибирующее влияние на образование меланина и ингибирующее влияние на активность допа-оксидазы (например, см. патентную литературу 10).

Однако до сих пор не было известно, что экстракт Justicia procumbens активирует трансглутаминазу и стимулирует продукцию церамидов, или что он применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Кроме того, известно, что экстракт Peristrophe japonica, (растение, принадлежащее к семейству Акантовые, роду Peristrophe), проявляет физиологическую активность, включая ингибирующее действие на образование меланина, ингибирующее действие на активность допа-оксидазы и т.п. (например, см. патентную литературу 11). Однако до сих пор не было известно, что экстракт Peristrophe japonica активирует трансглутаминазу и стимулирует продукцию церамидов и экспрессию инволюкрина, или что такой экстракт применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, или для формирования волнистых волос, вьющихся волос или образования волнистости.

Кроме того, известны арилнафталинлигнаны, выделяемые из экстракта растений, таких Haplophyllum patavinum и Cleistanthus collinus (см., например, непатентную литературу 5 и 6). Известно, что физиологические активности арилнафталинлигнанов включают в себя ингибирующее действие на атрофию костной ткани и усиливающее действие на индуктор клеточной дифференцировки остеобластов и нервных клеток (см., например, патентную литературу 12 и 13). Кроме того, известно, что джустицидин A, джустицидин B, дифиллин и туберкулатин обладают антивирусной активностью или противоопухолевой активностью (см., например, непатентную литературу 7 и 8). Кроме того, известно, что джустицидин A и клейстантин A обладают противоопухолевой активностью (см., например, непатентную литературу 9 и 10 и патентную литературу 14), ингибирующим действием на образование меланина и ингибирующим действием на активность допа-оксидазы (например, см. патентную литературу 11) и т.п. Однако до сих пор не было известно, что арилнафталинлигнаны, представленные формулой (1), согласно нижеследующему, активируют трансглутаминазу и увеличивают продукцию церамидов и экспрессию инволюкрина, или что арилнафталинлигнаны применимы для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и формирования волнистых волос или вьющихся волос, или для образования волнистости.

Цитируемая литература

Патентная литература

Патентная литература 1: JP-A-2004-91376 ("JP-A" означает не рассмотренную опубликованную заявку на выдачу патента Японии)

Патентная литература 2: JP-A-2007-1914

Патентная литература 3: JP-A-2001-158736

Патентная литература 4: JP-A-2001-158735

Патентная литература 5: JP-A-10-152421

Патентная литература 6: WO 2011/043330

Патентная литература 7: JP-A-2005-281206

Патентная литература 8: JP-A-2007-230977

Патентная литература 9: JP-A-2011-79755

Патентная литература 10: WO 2013/031403

Патентная литература 11: WO 2012/099247

Патентная литература 12: JP-A-4-211609

Патентная литература 13: JP-A-9-151132

Патентная литература 14: патент Японии № 3099243

Непатентная литература

Непатентная литература 1: Kalinin A. и др., Journal of Cell Science, 2001, т. 114, стр. 3069-3070

Непатентная литература 2: Rawlings A. V., и др., Journal of Investigative Dermatology, 2005, т. 124, стр. 1099-1110

Непатентная литература 3: Ishikawa J. и др., Journal of cosmetic Dermatology, 2013, т. 12, стр. 3-11

Непатентная литература 4: David E. Modrak и др., Molecular Cancer Therapeutics, 2006, т. 5(2), стр. 200-208

Непатентная литература 5: G. Innocenty и др., Chem. Pharm. Bull., 2002, т. 50, стр. 844-846

Непатентная литература 6: Govindachari T. R., и др., Tetrahedron, 1969, т. 25, стр. 2815-2821

Непатентная литература 7: Asano Jun и др., Phytochemistry, 1996, т. 42, стр. 713-717

Непатентная литература 8: Jenq-Chang Lee и др., Carcinogenesis, 2005, т. 26, стр. 1716-1730

Непатентная литература 9: Valerian E. Kagan и др., Biochemistry, 1994, т. 33, стр. 9651-9660

Непатентная литература 10: Parasuraman S. и др., International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences, 2010, т. 1(3), стр. 333-337

Сущность изобретения

Задачи, которые подлежат решению в изобретении

Настоящее изобретение направлено на получение нового промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитора уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и средства для формирования волнистых волос.

Настоящее изобретение также направлено на получение активатора трансглутаминазы, который активирует трансглутаминазу, и применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Настоящее изобретение также направлено на получение стимулятора продукции церамидов, который стимулирует продукцию церамидов, и применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Настоящее изобретение также направлено на получение усилителя экспрессии инволюкрина, который стимулирует экспрессию инволюкрина, и применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и для формирования волнистых волос, вьщихся волос или образования волнистости.

Средство для решения проблемы

С учетом описанных выше проблем авторы настоящего изобретения прилагали усилия для проведения исследования. В результате авторы настоящего изобретения обнаружили, что экстракт Justicia procumbens активирует трансглутаминазу, стимулирует продукцию церамидов, увеличивает уровень увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибирует уменьшение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и предупреждает или уменьшает уровень шероховатости кожи.

Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что экстракт Peristrophe japonica активирует трансглутаминазу и стимулирует продукцию церамидов и экспрессию инволюкрина.

Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что арилнафталинлигнаны конкретной структуры активируют трансглутаминазу и увеличивают продукцию церамидов и экспрессию инволюкрина.

Настоящее изобретение выполнено, исходя из результатов таких исследований.

Настоящее изобретение относится к активатору трансглутаминазы, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к стимулятору продукции церамидов, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к промотору эпидермальной кератинизации, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к улучшителю функции увлажнения кожи, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к улучшителю барьерной функции кожи, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к средству для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к ингибитору уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к средству для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащему экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

Приводимый ниже первый вариант осуществления настоящего изобретения включает в себя активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Настоящее изобретение относится к активатору трансглутаминазы, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к стимулятору продукции церамидов, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к усилителю экспрессии инволюкрина, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к промотору эпидермальной кератинизации, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к улучшителю функции увлажнения кожи, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к улучшителю барьерной функции кожи, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к средству для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к средству для формирования волнистых волос, содержащему экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

Приводимый ниже второй вариант осуществления настоящего изобретения включает в себя активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и средство для формирования волнистых волос.

Настоящее изобретение относится к активатору трансглутаминазы, содержащему, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

В формуле (1) каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода; R₃ представляет собой атом водорода или группу, образующую метилендиоксигруппу при соединении с R₂; каждый из R₄ и R₅ представляет собой атом водорода, или R₄ и R₅ при соединении друг с другом образуют метилендиоксигруппу; R₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, или сахарный остаток, выбранный из группы, состоящей из (D-апио-β-D-фуранозил)окси, (5-O-ацетил-D-апио-β-D-фуранозил)окси, (β-D-глюкопиранозил)окси, (3-O,4-O-диметил-D-ксилопиранозил)окси, (2-O,3-O,4-O-триметил-β-D-ксилопиранозил)окси и (3-O-метил-β-D-глюкопиранозил)окси; и гидроксильная группа сахарного остатка может образовывать сложный эфир с карбоновой кислотой.

Кроме того, настоящее изобретение относится к стимулятору продукции церамидов, содержащему в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1).

Кроме того, настоящее изобретение относится к усилителю экспрессии инволюкрина, содержащему в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1).

Кроме того, настоящее изобретение относится к промотору эпидермальной кератинизации, содержащему в качестве активного ингредиента, меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1).

Кроме того, настоящее изобретение относится к улучшителю функции увлажнения кожи, содержащему, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к улучшителю барьерной функции кожи, содержащему, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к средству, предупреждающему или уменьшающему уровень шероховатости кожи, содержащему, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к средству для формирования волнистых волос, содержащему в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1).

Представленный далее третий вариант осуществления настоящего изобретения включает в себя активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство, предупреждающее или уменьшающее уровень шероховатости кожи, и средство для формирования волнистых волос.

При этом настоящее изобретение включает в себя все упомянутые выше первый, второй и третий варианты осуществления, если специально не оговорено иное.

Эффекты от изобретения

Активатор трансглутаминазы согласно настоящему изобретению активирует трансглутаминазу, и применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Стимулятор продукции церамидов согласно настоящему изобретению стимулирует продукцию церамидов, и применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи или функции увлажнения кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и т.п.

Усилитель экспрессии инволюкрина согласно настоящему изобретению стимулирует экспрессию инволюкрина, и применим для поддержания или улучшения барьерной функции кожи, или для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, и для формирования волнистых волос, вьющихся волос и образования волнистости.

Другие и дополнительные признаки и преимущества изобретения станут очевидными в полной мере из следующего описания.

Способ осуществления изобретения

В настоящем описании упоминаемый здесь термин "улучшает" охватывает изменение к лучшему заболеваний, симптомов или состояний; предупреждение или замедление ухудшения заболеваний, симптомов или состояний; и купирование развития, предупреждение развития и замедление развития заболеваний, симптомов или состояний.

Кроме того, упоминаемый в настоящем описании термин "нетерапевтический" относится к принципу, который не охватывает врачебные практики, а именно, не охватывает способы обработки организма человека с целью лечения.

Кроме того, упоминаемый в настоящем описании термин "предупреждает" означает, что развитие заболеваний или симптомов у отдельных людей предупреждается или замедляется, или риск развития заболеваний или симптомов у отдельных людей становится ниже.

Кроме того, упоминаемый в настоящем описании термин "шероховатость кожи" означает такое состояние кожи, при котором способность кожи к увлажнению уменьшается, а количество влаги в коже истощается, и процесс слущивания клеток кожи или трещины на коже становятся очевидными на поверхности кожи, или состояние кожи, при котором увеличивается шероховатость поверхности кожи. Кожа в таком состоянии также упоминается как "шершавая кожа" или "сухая кожа".

Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса согласно первому варианту осуществления настоящего изобретения в качестве активного ингредиента содержат экстракт Justicia procumbens. Как показано в описанном ниже разделе "Примеры", экстракт Justicia procumbens обладает эффектом активации трансглутаминазы, эффектом стимулирования продукции церамидов, эффектом повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и ингибирующим действием на уменьшение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса.

Кроме того, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи и средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи согласно первому варианту осуществления настоящего изобретения также содержат экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента. Как упоминалось выше, активация трансглутаминазы, увеличение уровня продукции церамидов, увеличение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и ингибирование уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса являются весьма важными факторами для улучшения эпидермальной кератинизации, улучшения функции увлажнения кожи, поддержания барьерной функции кожи и предупреждения или уменьшения шероховатости кожи. Кроме того, как показано в описанных ниже примерах, экстракт Justicia procumbens улучшает эпидермальную кератинизацию, функцию увлажнения кожи и барьерную функцию кожи и предупреждает или уменьшает уровень шероховатости кожи. Соответственно, экстракт Justicia procumbens, обладающий эффектом активации трансглутаминазы, эффектом стимулирования продукции церамидов, эффектом повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и ингибирующим действием на уменьшение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи и в средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Кроме того, как упоминалось выше, церамиды играют важную роль в регулировании пролиферации, дифференциации, апоптоза и т.п. клеток. Следовательно, экстракт Justicia procumbens, который стимулирует продукцию церамидов, применим в качестве лекарственного средства, квазилекарственного средства или т.п. для предупреждения или лечения заболеваний, вызванных анормальной пролиферацией или дифференциацией клеток, таких как воспалительные заболевания и злокачественные опухоли, благодаря ингибированию пролиферации животных клеток, индукции дифференциации, индукции апоптоза и т.п. Кроме того, экстракт Justicia procumbens также можно применять в качестве лекарственного средства, квазилекарственного средства или т.п. для предупреждения или улучшения заболеваний костей и суставов, таких как остеопороз, перелом кости, люмбаго и ревматоидный артрит, или для предупреждения или уменьшения пародонтоза. Кроме того, экстракт Justicia procumbens также применим в качестве квазилекарственного средства, косметического средства или т.п. для придания волосам упругости и эластичности или улучшения состояния волос на ощупь.

В настоящем описании "Justicia procumbens" представляет собой однолетнее растение, принадлежащее к семейству Акантовых, роду Justicia.

При производстве экстракта Justicia procumbens можно применять любую, произвольно взятую часть растения Justicia procumbens; и для этого можно применять растение в целом, корень, клубневидный корень, ризом, стебель, веточку, соплодие, лист (пластинку листа, черешок листа или т.п.), наружную часть стебля, сок растения, смолу, цветок (лепесток, завязь или т.п.), плод (зрелый плод, незрелый плод или т.п.), семена или т.п. Несколько таких частей можно применять в их сочетании. Прежде всего, экстракт Justicia procumbens, применяемый в первом варианте осуществления настоящего изобретения, предпочтительно представляет собой экстракт растения Justicia procumbens в целом.

Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов и усилитель экспрессии инволюкрина согласно второму варианту осуществления настоящего изобретения содержат экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента. Как показано в описанном ниже разделе "Примеры", экстракт Peristrophe japonica обладает эффектом активации трансглутаминазы, эффектом стимулирования продукции церамидов и эффектом увеличения экспрессии инволюкрина.

Кроме того, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи и средство для предупреждения или уменьшения уровня шероховатости кожи согласно второму варианту осуществления настоящего изобретения также содержат в качестве активного ингредиента экстракт Peristrophe japonica. Как упоминалось выше, активация трансглутаминазы, увеличение продукции церамидов и увеличение экспрессии инволюкрина являются весьма важными факторами для улучшения эпидермальной кератинизации, улучшения функции увлажнения кожи, поддержания барьерной функции кожи и предупреждения или уменьшения шероховатости кожи. Соответственно, экстракт Peristrophe japonica, обладающий эффектом активации трансглутаминазы, эффектом стимулирования продукции церамидов и эффектом увеличения экспрессии инволюкрина, может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи и в средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Кроме того, как упоминалось выше, церамиды играют роль в регулировании пролиферации, дифференциации, апоптоза клеток и т.п. Следовательно, экстракт Peristrophe japonica, который стимулирует продукцию церамидов, применим в качестве лекарственного средства, квазилекарственного средства или т.п. для предупреждения или лечения заболеваний, вызванных анормальной пролиферацией или дифференциацией клеток, таких как воспалительные заболевания и злокачественные опухоли, благодаря ингибированию пролиферации животных клеток, индукции дифференциации, индукции апоптоза и т.п. Кроме того, экстракт Peristrophe japonica также можно применять в качестве лекарственного средства, квазилекарственного средства или т.п. для предупреждения или улучшения заболеваний костей и суставов, таких как остеопороз, перелом кости, люмбаго и ревматоидный артрит, или для предупреждения или уменьшения пародонтоза. Кроме того, экстракт Peristrophe japonica также применим в качестве квазилекарственного средства, косметического средства или т.п. для придания волосам упругости и эластичности или улучшения состояния волос на ощупь.

Кроме того, как упоминалось выше, вещество, которое стимулирует экспрессию гена инволюкрина, может представлять собой усилитель образования волнистых волос или вьющихся волосы или усилитель образования волнистости. Соответственно, экстракт Peristrophe japonica, обладающий эффектом увеличения экспрессии инволюкрина, может быть включен в качестве активного ингредиента в средство для формирования волнистых волос. При этом термин "формирование волнистых волос" распространяется на улучшение волнистых волос или вьющихся волос или усиление образования волнистости.

В настоящем описании "Peristrophe japonica" представляет собой растение, которое принадлежит к семейству Акантовых, роду Peristrophe.

При производстве экстракта Peristrophe japonica можно применять любую, произвольно взятую часть растения Peristrophe japonica; и для этого можно применять растение в целом, корень, клубневидный корень, ризом, стебель, веточку, соплодие, лист (пластинку листа, черешок листа или т.п.), наружную часть стебля, сок растения, смолу, цветок (лепесток, завязь или т.п.), плод (зрелый плод, незрелый плод или т.п.), семена или т.п. Несколько таких частей можно применять в их сочетании. Прежде всего, экстракт Peristrophe japonica, применяемый во втором варианте осуществления настоящего изобретения, предпочтительно представляет собой экстракт растения Peristrophe japonica в целом.

Экстракт Justicia procumbens или экстракт Peristrophe japonica, применяемые в первом и втором вариантах осуществления настоящего изобретения, можно получать с помощью обычного способа экстракции, применяемого для экстракции из растений или т.п. Способ экстракции можно наладить соответствующим образом, и экстракт предпочтительно получают путем экстракции из описанного выше растения при комнатной температуре или при нагревании, или применяя устройство для экстракции, такое как экстрактор Сокслета.

При получении экстракта Justicia procumbens или экстракта Peristrophe japonica, растения Justicia procumbens или Peristrophe japonica можно применять непосредственно или сушить и измельчать для последующего применения. Кроме того, также можно применять продукты из растений Justicia procumbens или Peristrophe japonica, перегнанные с водяным паром, или прессованные из них продукты; и в качестве таких продуктов также можно применять очищенные продукты в эфирном масле или т.п., или коммерческие продукты. Растения Justicia procumbens или Peristrophe japonica, или их продукты, перегнанные с водяным паром, или прессованные из них продукты можно применять сами по себе в любом виде или в виде сочетания двух или более их видов.

Растворитель для экстракции, применяемый для получения экстракта Justicia procumbens или экстракта Peristrophe japonica, можно выбирать подходящим образом. Их примеры включают в себя растворитель, обычно применяемый для экстракции растений, такой как вода; спирты, такие как метанол, этанол, пропанол и бутанол; многоатомные спирты, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль, 1,2-бутиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, 1,4-бутиленгликоль и 2,3-бутиленгликоль; кетоны, такие как ацетон и метилэтилкетон; сложные эфиры, такие как метилацетат и этилацетат; линейные или циклические простые эфиры, такие как тетрагидрофуран и простой диэтиловый эфир; простые полиэфиры, такие как полиэтиленгликоль; галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, дихлорэтан, хлороформ и тетрахлорид углерода; углеводороды, такие как гексан, циклогексан и петролейный эфир; ароматические углеводороды, такие как бензол и толуол; пиридины; сверхкритический диоксид углерода; масла и жиры, воск и другие масла. Указанные растворители можно применять сами по себе или в сочетании двух или более видов. Прежде всего предпочтительными являются вода, этанол или водный раствор этанола; более предпочтительным является водный раствор этанола; еще более предпочтительным является водный раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более; и особенно предпочтительным является водный раствор этанола с содержанием этанола 40 об. % или более. Кроме того, при экстракции можно добавлять кислоту, щелочь или т.п. для регулирования pH растворителя для экстракции.

В качестве условий осуществления экстракции также можно применять обычные условия.

Например, чтобы получить экстракт из Justicia procumbens, применяемый в первом варианте осуществления настоящего изобретения, растение Justicia procumbens можно подвергать погружению (в растворитель) или нагреванию с обратным холодильником при 0°C или выше (предпочтительно при 4°C или выше) и 100°C или ниже (предпочтительно при 80°C или ниже, и более предпочтительно при 40°C или ниже) в течение 1 минуты или более (предпочтительно в течение 1 часа или более, и более предпочтительно в течение 1 дня или более) и 50 дней или менее (предпочтительно 30 дней или менее). Чтобы повысить эффективность экстракции, одновременно можно осуществлять перемешивание или применять обработку в растворителе с целью гомогенизации. Количество растворителя, применяемого для экстракции, в один раз или более (предпочтительно в 5 раз или более) и в 100 раз или менее (предпочтительно в 50 раз или менее, более предпочтительно в 40 раз или менее) превышает количество Justicia procumbens в расчете на массу (в пересчете на сухое вещество).

Кроме того, чтобы получить экстракт Peristrophe japonica, применяемый во втором варианте осуществления настоящего изобретения, Peristrophe japonica можно подвергать погружению (в растворитель) или нагреванию с обратным холодильником при 0°C или выше и при 100°C или ниже в течение 0,5 часов или более и в течение 30 дней или менее. Чтобы повысить эффективность экстракции, одновременно можно осуществлять перемешивание или применять обработку в растворителе с целью гомогенизации. Количество растворителя, применяемого для экстракции, в один раз или более (предпочтительно в 5 раз или более) и в 100 раз или менее (предпочтительно в 50 раз или менее, более предпочтительно в 40 раз или менее) превышает количество Peristrophe japonica в расчете на массу (в перечете на сухое вещество).

В настоящем изобретении экстракт Justicia procumbens или экстракт Peristrophe japonica можно применять непосредственно. Альтернативно, также можно применять фракцию с более высокой активностью, получаемую путем дополнительного фракционирования экстракта с помощью подходящего способа разделения, такого как гель-фильтрация, хроматография или вторичная (более четкая) перегонка. Кроме того, экстракт Justicia procumbens или экстракт Peristrophe japonica, получаемый из растений, разбавляют, концентрируют или лиофилизуют и затем готовят в форме порошка или пасты, и полученный в результате материал также можно применять. Кроме того, экстракт, получаемый описанным выше способом, подвергают вытеснению растворителем путем применения растворителя, отличающегося от растворителя для экстракции, и полученный в результате материал затем также можно применять.

Экстракт согласно настоящему изобретению включает в себя экстракты, полученные с помощью различного вида растворителей, такие как экстракты, полученные с помощью описанных выше способов экстракции, в виде разбавленной жидкости, концентрированной жидкости, их очищенной фракции, сухого порошка или жидкости, подвергнутой вытеснению растворителем.

Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов и усилитель экспрессии инволюкрина согласно третьему варианту осуществления настоящего изобретения в качестве активного ингредиента содержат, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1). Как показано в описанном ниже разделе "Примеры", соединение представленное формулой (1), обладает эффектом активации трансглутаминазы, эффектом стимулирования продукции церамидов и эффектом увеличения экспрессии инволюкрина.

Кроме того, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи и средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи согласно третьему варианту осуществления настоящего изобретения в качестве активного ингредиента также содержат, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1). Как упоминалось выше, активация трансглутаминазы, увеличение продукции церамидов и увеличение экспрессии инволюкрина являются весьма важными факторами для улучшения эпидермальной кератинизации, улучшения функции увлажнения кожи, поддержания барьерной функции кожи и предупреждения или уменьшения шероховатости кожи. Соответственно, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), обладающего эффектом активации трансглутаминазы, эффектом стимулирования продукции церамидов и эффектом увеличения экспрессии инволюкрина, может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи и средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Кроме того, как упоминалось выше, церамиды играют роль в регулировании пролиферации, дифференциации, апоптоза клеток и т.п. Следовательно, соединение, представленное формулой (1), которое стимулирует продукцию церамидов, применимо в качестве лекарственного средства, квазилекарственного средства или т.п. для предупреждения или лечения заболеваний, вызванных анормальной пролиферацией или дифференцировкой клеток, таких как воспалительные заболевания и злокачественные опухоли, путем ингибирования пролиферации, индукции дифференцировки, индукции апоптоза и т.п. животных клеток. Кроме того, соединение, представленное формулой (1), также можно применять в качестве лекарственного средства, квазилекарственного средства или т.п. для предупреждения или улучшения заболеваний костей и суставов, таких как остеопороз, перелом костей, люмбаго и ревматоидный артрит, или для предупреждения или уменьшения пародонтоза. Кроме того, соединение, представленное формулой (1), также применимо в качестве квазилекарственного средства, косметического средства или т.п. для придания волосам упругости и эластичности или улучшения состояния волос на ощупь.

Кроме того, как упоминалось выше, вещество, которое стимулирует экспрессию гена инволюкрина, может представлять собой усилитель формирования волнистых волос или вьющихся волосы или усилитель образования волнистости. Соответственно, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), обладающего эффектом увеличения экспрессии инволюкрина, может быть включен в качестве активного ингредиента в средство для формирования волнистых волос.

Ниже соединение, представленное формулой (1), будет описано подробно.

В формуле (1) каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Однако R₁ и R₂ не связаны друг с другом с образованием какого-либо цикла. R₁ и R₂ могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга, но предпочтительно они являются одинаковыми.

Примеры алкоксигруппы, представленной радикалами R₁ и R₂, включают в себя метоксигруппу, этоксигруппу, н-пропоксигруппу, изопропоксигруппу, н-бутоксигруппу, трет-бутоксигруппу, втор-бутоксигруппу и изобутоксигруппу.

Каждый из R₁ и R₂ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно - атом водорода или алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода (например, метоксигруппу и этоксигруппу), и более предпочтительно - атом водорода или метоксигруппу.

В формуле (1) R₃ представляет собой атом водорода или группу, образующую метилендиоксигруппу при связывании с R₂. Когда R₃ представляет собой атом водорода, каждый из R₁ и R₂ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода; более предпочтительно - атом водорода или алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода; и более предпочтительно - атом водорода или метоксигруппу. Когда R₃ связан с R₂ с образованием метилендиоксигруппы, R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода.

В формуле (1) каждый из R₄ и R₅ представляет собой атом водорода, или R₄ и R₅ при соединении друг с другом образуют метилендиоксигруппу. Когда R₄ и R₅ связаны друг с другом с образованием метилендиоксигруппы, каждый из R₁ и R₂ предпочтительно представляет собой алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, или R₃ предпочтительно представляет собой группу, образующую метилендиоксигруппу при образовании связи с R₂.

В формуле (1) R₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу; алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода; ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода; или сахарный остаток, выбранный из группы, состоящей из (D-апио-β-D-фуранозил)окси, (5-O-ацетил-D-апио-β-D-фуранозил)окси, (β-D-глюкопиранозил)окси, (3-O,4-O-диметил-D-ксилопиранозил)окси, (2-O,3-O,4-O-триметил-β-D-ксилопиранозил)окси и (3-O-метил-β-D-глюкопиранозил)окси. При этом гидроксильная группа сахарного остатка может образовывать сложный эфир с карбоновой кислотой. В качестве карбоновой кислоты предпочтительной является карбоновая кислота, содержащая от 2 до 4 атомов углерода, и ее примеры включают уксусную кислоту, пропионовую кислоту и масляную кислоту.

Примеры алкоксигруппы, представленной радикалом R₆, включают метоксигруппу, этоксигруппу, н-пропоксигруппу, изопропоксигруппу, н-бутоксигруппу, трет-бутоксигруппу, втор-бутоксигруппу, изобутоксигруппу и пентилоксигруппу. Среди них предпочтительной является алкоксигруппа, содержащая 1 или 2 атома углерода (например, метоксигруппа или этоксигруппа).

Примеры ацилоксигруппы, представленной радикалом R₆, включают формилоксигруппу, ацетоксигруппу, пропионилоксигруппу и бутирилоксигруппу. Среди них предпочтительными являются ацетоксигруппа и пропионилоксигруппа, и более предпочтительной является ацетоксигруппа.

Когда каждый из R₄ и R₅ представляет собой атом водорода, R₆ предпочтительно представляет собой атом водорода.

В настоящем изобретении в качестве соединения, представленного формулой (1), предпочтительным является соединение, представленное формулой (11), соединение, представленное формулой (2), соединение, представленное формулой (3), и соединение представленное формулой (4).

В формуле (2) каждый из R₁₁ и R₁₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Однако R₁₁ и R₁₂ не связаны друг с другом с образованием какого-либо цикла. R₁₁ и R₁₂ могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга, но предпочтительно они являются одинаковыми.

Примеры алкоксигруппы, представленной радикалами R₁₁ и R₁₂, включают метоксигруппу, этоксигруппу, н-пропоксигруппу, изопропоксигруппу, н-бутоксигруппу, трет-бутоксигруппу, втор-бутоксигруппу и изобутоксигруппу.

Каждый из R₁₁ и R₁₂ предпочтительно представляет собой алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода (например, метоксигруппу и этоксигруппу), и более предпочтительно метоксигруппу.

В формуле (2) R₁₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, или ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Конкретные примеры и предпочтительные диапазоны алкоксигруппы и ацилоксигруппы, представленных радикалом R₁₆, в каждом случае являются такими же, как для группы R₆ в формуле (1). R₁₆ предпочтительно представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, или ацетоксигруппу.

В формуле (3) каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Однако R₂₁ и R₂₂ не связаны друг с другом с образованием какого-либо цикла. R₂₁ и R₂₂ могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга, но предпочтительно они являются одинаковыми.

Примеры алкоксигруппы, представленной радикалами R₂₁ и R₂₂, включают метоксигруппу, этоксигруппу, н-пропоксигруппу, изопропоксигруппу, н-бутоксигруппу, трет-бутоксигруппу, втор-бутоксигруппу и изобутоксигруппу.

Каждый из R₂₁ и R₂₂ предпочтительно представляет собой алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода (например, метоксигруппу и этоксигруппу), и более предпочтительно метоксигруппу.

В формуле (3) R₂₆ представляет собой сахарный остаток, выбранный из группы состоящей из (D-апио-β-D-фуранозил)окси, (5-O-ацетил-D-апио-β-D-фуранозил)окси, (β-D-глюкопиранозил)окси, (3-O,4-O-диметил-D-ксилопиранозил)окси, (2-O,3-O,4-O-триметил-β-D-ксилопиранозил)окси и (3-O-метил-β-D-глюкопиранозил)окси. При этом гидроксильная группа сахарного остатка может образовывать сложный эфир с карбоновой кислотой. В качестве карбоновой кислоты предпочтительной является карбоновая кислота, содержащая от 2 до 4 атомов углерода, и ее примеры включают в себя уксусную кислоту, пропионовую кислоту и масляную кислоту.

В формуле (4) R₃₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, или ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Конкретные примеры и предпочтительные диапазоны алкоксигруппы и ацилоксигруппы, представленных радикалами R₃₆, в каждом случае являются такими же, как для группы R₆ в формуле (1). R₃₆ предпочтительно представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, и более предпочтительно - гидроксильную группу.

Ниже приведены конкретные примеры соединения, представленного формулой (1), однако настоящее изобретение не ограничивается приведенными примерами.

Иллюстративное соединение (11): 9-фенилнафто[2,3-c]фуран-1(3H)-он

Иллюстративное соединение (12): джустицидин B (6,7-диметокси-9-(1,3-бензодиоксол-5-ил)нафто[2,3-c]фуран-1(3H)-он)

Иллюстративное соединение (13): дифиллин (4-гидрокси-6,7-диметокси-9-(1,3-бензодиоксол-5-ил)нафто[2,3-c]фуран-1(3H)-он)

Иллюстративное соединение (14): джустицидин A (4,6,7-триметокси-9-(1,3-бензодиоксол-5-ил)нафто[2,3-c]фуран-1(3H)-он)

Иллюстративное соединение (15): 4-этокси-6,7-диметокси-9-(1,3-бензодиоксол-5-ил)нафто[2,3-c]фуран-1(3H)-он

Иллюстративное соединение (16): 4-ацетокси-6,7-диметокси-9-(1,3-бензодиоксол-5-ил)нафто[2,3-c]фуран-1(3H)-он

Иллюстративное соединение (17): туберкулатин ((-)-4-[(D-апио-β-D-фуранозил)окси]-9-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-6,7-диметокси-1H-нафто[2,3-c]фуран-3-он)

Иллюстративное соединение (18): туберкулатин-5''-ацетат

Иллюстративное соединение (19): джустирумарин (фуро[3',4',6,7]нафто[1,2-d]-1,3-диоксол-9(7H)-он)

В активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов, усилителе экспрессии инволюкрина, промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и средстве для формирования волнистых волос согласно третьему варианту осуществления настоящего изобретения в качестве активного ингредиента можно применять соединение, представленное формулой (1), само по себе в виде одного типа или в виде сочетания двух или более его типов.

Соединение, представленное формулой (1), можно синтезировать согласно обычному способу. В качестве способа синтеза соединения, представленного формулой (1), можно применять способ синтеза, описанный в публикациях: J. Org. Chem., 1996, т. 61, стр. 3452-3457; Med. Chem. Res., 2010, т. 19, стр. 71-76; The Fifth Series of Experimental Chemistry (Jikken Kagaku Koza, 5-е издание, Япония), стр. 42 или т.п.

Примеры синтеза соединения, представленного формулой (1), приведены ниже.

Пример синтеза иллюстративного соединения (13)

Иллюстративное соединение (13) можно синтезировать, предоставив возможность ацетальному соединению, полученному реакцией между 2-бром-5,6-диметоксибензальдегидом и этиленгликолем, взаимодействовать с 3,4-(метилендиокси)бензальдегидом в основных условиях, дополнительно осуществляя реакцию в присутствии DEADC (диэтилацетиленкарбоксилат) при нагревании, и в заключение осуществляя восстановление с применением NaBH₄.

Пример синтеза иллюстративного соединения (12)

Иллюстративное соединение (12) можно получать, предоставив возможность ацетальному соединению, полученному реакцией между 2-бром-5,6-диметоксибензальдегидом и этиленгликолем, взаимодействовать с 3,4-(метилендиокси)бензальдегидом в основных условиях, и нагревая полученный реакционный продукт в присутствии малеинового ангидрида в кислотных условиях, и в заключение осуществляя восстановление с применением NaBH₄.

Пример синтеза иллюстративного соединения (14)

Иллюстративное соединение (14) можно получать путем воздействия метилйодида на иллюстративное соединение (13) в основных условиях.

Пример синтеза иллюстративного соединения (15)

Иллюстративное соединение (15) можно получать путем добавления бромалкана к иллюстративному соединению (13) в основных условиях.

Пример синтеза иллюстративного соединения (16)

Иллюстративное соединение (16) можно получать с применением иллюстративного соединения (13) в качестве исходного материала и ацилирования гидроксигруппы иллюстративного соединения (13) с помощью обычного способа ацилирования.

В настоящем изобретении в качестве соединения, представленного формулой (1), можно получать и применять коммерческий продукт. Примеры имеющегося в продаже соединения, представленного формулой (1), включают соединения под каталожным № ST077116 от компании TimTec Inc.; под каталожными №№ P2000H-07371, P2000H-22338 и P2000H-10719 от компании Pharmeks LTD.; и под каталожным № ABS-00020012-001 от компании ChromaDex Inc.

Соединение, представленное формулой (1), можно выделять из экстракта растений, таких как Peristrophe japonica, Justicia procumbens, Haplophyllum patavinum и Cleistanthus Collinus.

При производстве экстракта можно применять любую, произвольно взятую часть описанного выше растения и для этого можно применять растение в целом, корень, клубневидный корень, ризом, стебель, веточку, соплодие, лист (пластинку листа, черешок листа или т.п.), наружную часть стебля, сок растения, смолу, цветок (лепесток, завязь или т.п.), плод (зрелый плод, незрелый плод или т.п.), семена или т.п. Несколько таких частей можно применять в их сочетании.

Экстракт можно получать с помощью обычного способа экстракции, применяемого для экстракции из растений или т.п. Способ экстракции можно наладить соответствующим образом, и экстракт предпочтительно получают путем экстракции из описанного выше растения при комнатной температуре или при нагревании, или применяя устройство для экстракции, такое как экстрактор Сокслета.

При получении экстракта описанное выше растение можно применять непосредственно или сушить и измельчать для последующего применения. Кроме того, также можно применять продукт из описанного выше растения, перегнанный с водяным паром, или прессованный из него продукт, и в качестве таких продуктов также можно применять очищенные продукты в эфирном масле или т.п., или коммерческие продукты. Описанное выше растение или его продукт, перегнанный с водяным паром, или прессованный из него продукт можно применять сам по себе в любом виде или в виде сочетания двух или более их видов.

Растворитель для экстракции, применяемый для получения экстракта, можно выбирать подходящим образом. Их примеры включают в себя растворитель, обычно применяемый для экстракции растений, например, воду; спирты, такие как метанол, этанол, пропанол и бутанол; многоатомные спирты, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль, 1,2-бутиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, 1,4-бутиленгликоль и 2,3-бутиленгликоль; кетоны, такие как ацетон и метилэтилкетон; сложные эфиры, такие как метилацетат и этилацетат; линейные или циклические простые эфиры, такие как тетрагидрофуран и простой диэтиловый эфир; простые полиэфиры, такие как полиэтиленгликоль; галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, дихлорэтан, хлороформ и тетрахлорид углерода; углеводороды, такие как гексан, циклогексан и петролейный эфир; ароматические углеводороды, такие как бензол и толуол; пиридины; сверхкритический диоксид углерода; масла и жиры, воск и другие масла. Указанные растворители можно применять сами по себе или в сочетании двух или более видов. Прежде всего предпочтительными являются вода, этанол или водный раствор этанола; более предпочтительным является водный раствор этанола; еще более предпочтительным является водный раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более; и особенно предпочтительным является водный раствор этанола с содержанием этанола 40 об. % или более. Кроме того, при экстракции можно добавлять кислоту, щелочь или т.п. для регулирования pH растворителя для экстракции.

Способы описанной выше экстракции можно выбирать соответствующим образом, и примеры включают в себя экстракцию в системе "жидкость-жидкость", экстракцию в системе "твердое-жидкость", экстракцию при погружении, получение настоек, вываривание, экстракцию при нагревании с обратным холодильником, ультразвуковую экстракцию, микроволновую экстракцию и экстракцию с помощью центрифугирования. Такие способы можно применять по отдельности или при сочетаниях двух или более способов. В то же время можно применять экстрактор периодического действия, экстрактор Сокслета или т.п. Кроме того, экстракцию можно осуществлять в неокислительной атмосфере, при этом растворенный кислород удаляют при кипячении и осуществляют дегазацию экстракта, или пропускают через экстракт инертный газ, такой как газообразный азот.

Полученный выше экстракт можно применять непосредственно. Альтернативно, полученный выше экстракт можно подвергать фракционированию с помощью подходящего способа разделения, такого как гель-фильтрация, также можно применять хроматографию или вторичную (более четкую) перегонку. Кроме того, полученный экстракт можно разбавлять, концентрировать или лиофилизовать и затем получать в форме порошка или пасты.

Когда соединение, представленное формулой (1), выделяют из экстракта Justicia procumbens или экстракта Peristrophe japonica, соединение, представленное формулой (1), можно получать путем очистки экстрактов таких растений с помощью колоночной хроматографии или т.п. Более конкретно, соединение представленное формулой (1), можно получать путем экстракции из материала, полученного путем сушки или измельчения любой части (например, целого растения) растений Peristrophe japonica или Justicia procumbens, и в случае необходимости концентрирования полученного экстракта или удаления примесей из экстракта с последующей очисткой полученного материала колоночной хроматографией. Конкретные примеры соединения, представленного формулой (1) и выделенного из экстрактов таких растений, включают иллюстративное соединение (12), иллюстративное соединение (14) и иллюстративное соединение (17).

Выделение соединения (1), представленного формулой (1), из экстракта Haplophyllum patavinum или экстракта Cleistanthus Collinus можно осуществлять согласно способам, описанным в публикациях: Chem. Pharm. Bull., 2002, т. 50, стр. 844-846; Tetrahedron, 1969, т. 25, стр. 2815-2821 или т.п. Конкретные примеры соединения, представленного формулой (1) и выделенного из экстрактов таких растений, включают иллюстративное соединение (12) и иллюстративное соединение (13).

Далее будет описан способ очистки экстракта Peristrophe japonica или экстракта Justicia procumbens колоночной хроматографией или т.п. с целью выделения соединения, представленного формулой (1).

Экстракт Peristrophe japonica или экстракт Justicia procumbens, полученный согласно описанной выше процедуре, или экстракт, подвергнутый в случае необходимости дополнительной экстракции или распределению между несмешивающимися жидкостями путем описанного выше добавления растворителя, подвергают колоночной хроматографии на силикагеле или т.п. При колоночной хроматографии, например, применяют смесь гексан/этилацетат с градиентом от 0% до 100% этилацетата на протяжении 60 минут с последующим применением смеси этилацетат/метанол с градиентом от 0% до 10% метанола на протяжении 30 минут, и затем в течение 30 минут осуществляют элюирование с применением 100% метанола, при этом эпизодически можно собирать фракции, элюированные 100% метанолом в районе отношения 1/9 применяемой смеси гексан/этилацетат. Фракции можно разделять на фракцию, не растворимую в метаноле, и фракцию, растворимую в метаноле. Фракцию, не растворимую в метаноле, подвергают ВЭЖХ с обращенной фазой с применением двухфазной системы 0,1% водный раствор муравьиной кислоты/ацетонитрил, и можно собирать фракции, элюированные в диапазоне от 10 до 15 минут, при элюировании с применением смеси, содержащей 50% ацетонитрила, в течение 20 минут. С другой стороны, фракцию, растворимую в метаноле, подвергают ВЭЖХ с обращенной фазой с применением двухфазной системы 0,1% водный раствор муравьиной кислоты/ацетонитрил, и можно собирать фракции, элюированные в диапазоне 12-15 минут, при элюировании с применением смеси, содержащей 35% ацетонитрила, в течение 16 минут.

В случае необходимости путем измерения в полученной фракции активности трансглутаминазы можно подтверждать, что фракция содержит соединение, представленное формулой (1). Можно применять способ измерения активности трансглутаминазы, например, описанный далее в разделе "Примеры".

Форму активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов, усилителя экспрессии инволюкрина, промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитора уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и средства для формирования волнистых волос согласно настоящему изобретению можно выбирать соответствующим образом, и такой продукт можно перерабатывать в медицинскую композицию, косметическую композицию или пищевую композицию, включая туда такой продукт.

При получении медицинской композиции такую композицию обычно готовят в виде препарата, содержащего описанный выше активный ингредиент и предпочтительно фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемый носитель обычно означает инертный, нетоксичный, твердый или жидкий наполнитель, разбавитель, материал для капсулирования или т.п., который не взаимодействует с описанным выше активным ингредиентом, и конкретные примеры включают растворитель или дисперсионную среду, такую как вода, этанол, полиолы (пропиленгликоль, бутиленгликоль, глицерин и полиэтиленгликоль), их подходящую смесь и растительное масло.

Медицинскую композицию вводят орально или парентерально, например, в ротовую полость, кожу, гиподерму, слизистую оболочку, вену, артерию, мышцу, брюшную полость, влагалище, легкое, голову, глаз или носовую полость. Конкретные примеры орально вводимых препаратов включают таблетку, гранулу, мелкозернистую гранулу, порошок, капсулу, жевательное средство, драже, сироп, жидкость, суспензию и средство для ингаляции. Конкретные примеры парентерально вводимых препаратов включают в себя суппозиторий, клизму удерживающего типа, капли, офтальмологический раствор, капли в нос, вагинальный суппозиторий, инъекцию и средство для очистки ротовой полости, и препарат для наружного нанесения на кожу, такой как мазь, фармацевтический крем, гель, трансдермальное средство и пластырь с контролируемым высвобождением. Медицинскую композицию можно парентерально вводить в форме подкожного импланта с пролонгированным высвобождением или системы направленного транспорта лекарственных средств (например, применение моноклональных антител, векторной трансмиссии, ионной имплантации, полимерного матрикса, липосом и микросфер).

Медицинская композиция дополнительно может содержать добавку, общеизвестную в медицинской области. Примеры такой добавки включают инертный наполнитель, связующее, разрыхлитель, смазку, антиоксидант, краситель и корригент. Добавку можно применять при необходимости. Чтобы обеспечить пролонгированное высвобождение, для того чтобы композиция могла действовать в течение длительного времени, композицию также можно покрывать известным замедлителем высвобождения или т.п. В качестве инертного наполнителя можно применять, например, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, агар, малообезвоженную кремниевую кислоту, желатин, кристаллическую целлюлозу, сорбит, тальк, декстрин, крахмал, молочный сахар, мягкий белый сахар, глюкозу, метаалюмосиликат магния, гидрофосфат кальция или т.п. Примеры связующего включают в себя гуммиарабик, альгинат натрия, этилцеллюлозу, казеин натрия, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, агар, очищенную воду, желатин, крахмал, трагакантовую камедь и молочный сахар. Примеры разрыхлителя включают карбоксиметилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, кальцийкарбоксиметилцеллюлозу, кристаллическую целлюлозу, крахмал и гидроксипропилкрахмал. Примеры смазки включают стеариновую кислоту, стеарат кальция, стеарат магния, тальк, отвержденный жир, сложные эфиры жирных кислот и сахарозы и воск. Примеры антиоксиданта включают в себя токоферол, сложные эфиры галлиевой кислоты, дибутилгидрокситолуол (BHT), бутилированный гидроксианизол (BHA) и аскорбиновую кислоту. В случае необходимости к композиции можно добавлять другие добавки или химикаты, например, можно добавлять антацидное средство (например, гидрокарбонат натрия, карбонат магния, осажденный карбонат кальция и синтетический гидроталькит) или средство для защиты слизистой оболочки желудка (например, синтетический силикат алюминия, сукралфат и медные комплексы хлорофиллина натрия).

Когда получают косметическую композицию, соответствующим образом можно выбирать ее форму. Косметическую композицию можно перерабатывать в любую произвольную форму, такую как раствор, лосьон типа молочка, порошок, двухфазная система "вода-масло", трехфазная система "вода-масло-порошок", гель, твердая форма, такая как таблетка, аэрозоль, спрей (блеск), капсула и тонколистовой материал. Кроме того, форма продукта, содержащего косметическую композицию, также является произвольной, и конкретные примеры включают в себя косметический продукт для ухода за кожей, такой как пенка для умывания, средство для снятия макияжа, лосьон для кожи, сыворотка, маска для лица, лосьон типа молочка, крем и солнцезащитное средство; косметический продукт для макияжа, такой как крем под пудру (увлажняющий крем), основа для макияжа, губная помада, тени для век, подводка для глаз, тушь для ресниц и бровей, карандаш для бровей, румяна и лак для ногтей; косметический продукт для ухода за волосами, такой как шампунь для волос, ополаскиватель для волос, сыворотка-заполнитель для стрижки, краска для волос и восстановитель для волос; препарат для ухода за телом, такой как мыло, мыло для ухода за телом, косметический продукт для уничтожения запаха и средство для ванн; косметическую материал для ухода за полостью рта, такой как зубная паста и жидкость для полоскания рта; и ароматический косметический продукт, такой как парфюмерные средства. Кроме того, такой косметический продукт может относиться либо к косметическому средству, либо к квазилекарственному средству согласно закону о фармацевтической продукции Японии (Phamaceutical Affairs Law of Japan).

Косметическую композицию можно производить с помощью обычного способа составления смеси с использованием любого другого ингредиента, который традиционно применяется для косметических, квазилекарственных и медицинских продуктов, например, с использованием порошкообразного ингредиента, жидкого жира и масла, твердого жира и масла, воска, углеводорода, высшей жирной кислоты, высшего спирта, сложного эфира, силикона, анионного поверхностно-активного вещества, катионного поверхностно-активного вещества, амфотерного поверхностно-активного вещества, неионогенного поверхностно-активного вещества, увлажнителя, водорастворимого полимера, загустителя, пленкообразователя, поглотителя ультрафиолетовых лучей, комплексообразующего средства, низшего спирта, многоатомного спирта, сахара, аминокислоты, органического амина, эмульсии полимера, регулятора pH, средства для питания кожи, витамина, антиоксиданта, вспомогательного антиокислительного средства, парфюмерного средства и воды в случае необходимости.

Конкретные примеры других ингредиентов, которые можно использовать для составления косметической композиции, включают в себя консервирующую добавку (например, этилпарабен и бутилпарабен), противовоспалительное средство (например, производное глицирризиновой кислоты, производное глицирретиновой кислоты, производное салициловой кислота, тиол, выделяемый из кипариса, оксид цинка и аллантоин), средство для отбеливания кожи (например, аскорбиновая кислота и ее производные, экстракт плаценты, экстракт камнеломки плетеносной (Saxifraga stolonifera) и арбутин), различные виды экстрактов (например, экстракт коры бархата амурского (Phellodendron amurense), экстракт корневища коптиса японского (Coptis japonica), экстракт воробейника краснокоричневого (Lithospermum erythrorhizon), экстракт пиона белоцветкового (Paeonia lactiflora), экстракт сверции японской (Swertia japonica), экстракт березы, экстракт шалфея, экстракт мушмулы японской (Eriobotrya japonica), экстракт моркови, экстракт алоэ, экстракт мальвы, экстракт ириса, экстракт винограда, экстракт бусенника обыкновенного (Coix lachryma-jobi), экстракт люфы (тыквы), экстракт лилии, экстракт шафрана, экстракт жгун-корня (Cnidium officinale), экстракт имбиря, экстракт зверобоя прямостоящего (Hypericum erectum), экстракт стальника колючего (Ononis spinosa), экстракт чеснока, экстракт красного перца, экстракт померанца (Aurantii nobllis pericarpium), экстракт корня дудника и экстракт морских водорослей), активирующее средство (например, маточное молочко пчел, фоточувствительное основание и производное холестерина), ускоритель кровообращения (например, ванилиламид пеларгоновой кислоты, сложный бензиловый эфир никотиновой кислоты, сложный β-бутоксиэтиловый эфир никотиновой кислоты, капсаицин, зингерон, настой шпанской мухи (Tinctura cantharidis), ихтиол, дигалловая кислота, α-борнеол, токоферолникотинат, инозитгексаникотинат, цикланделат, циннаризин, толазолин, ацетилхолин, верапамил, цефарантин и γ-оризанол), противосеборейное средство (например, серу и тиантол), противовоспалительное средство (например, транексамовую кислоту, тиотаурин и гипотаурин) и бактерицидное средство (например, триклозан, хлорид цетилпиридиния, Timors и хлорид бензалкония).

Описанную выше медицинскую композицию и косметическую композицию можно наносить в форме стоматологической композиции, композиции для наружного применения, использовать в форме композиции для внутреннего применения или т.п.; и предпочтительно композицию наносят на кожу в форме композиции для наружного применения.

В случае нанесения композиции на кожу в форме композиции для наружного применения композиция вдобавок к описанному выше активному ингредиенту может соответствующим образом смешиваться с ингредиентом, применяемым в обычной композиции для наружного применения, таким как поверхностно-активное вещество, маслянистое вещество, полимерное соединение, консервирующая добавка, различные виды медицинских ингредиентов, порошок, поглотитель ультрафиолетовых лучей, краситель, корригент, стабилизатор эмульсии и регулятор pH. В случае промотора эпидермальной кератинизации или улучшителя функции увлажнения кожи конкретные примеры медицинского ингредиента включают в себя витамин D3, производное сфингозина, олеаноловую кислоту, клофибриновую кислоту и этаноламид олеиновой кислоты.

В случае получения пищевой композиции ее форму можно выбирать подходящим образом, и такая форма также включает в себя напиток. Форма включает в себя обычный пищевой продукт, а также пищевой продукт и напиток, обладающие эффектом лечения, предупреждения, улучшения или т.п. заболевания или состояния, которое можно лечить, предупреждать или улучшать с помощью любого из следующих способов: увеличение эпидермальной кератинизации, улучшение и поддержание функции увлажнения кожи или барьерной функции кожи или т.п., активация трансглутаминазы, стимулирование продукции церамидов и увеличение экспрессии инволюкрина. Более конкретно, форма композиции включает продукты лечебного питания, физиологически функциональные пищевые продукты, пищевые продукты для больных людей и продукты лечебного питания для конкретного применения. Продукты лечебного питания, физиологически функциональные пищевые продукты, пищевые продукты для больного человека и продукты лечебного питания для конкретного применения можно применять специально, в форме препаратов различного типа, таких как мелкозернистая гранула, таблетка, гранула, порошок, капсула, сироп, жидкость и жидкая пища, и можно применять для таких препаратов. Пищевую композицию в форме препарата можно производить, как и в случае медицинского препарата, путем смешивания описанного выше активного ингредиента, приемлемого носителя в виде пищевого продукта и, например, подходящего инертного наполнителя (например, крахмала, обработанного крахмала, лактозы, глюкозы или воды) и т.д., и применения общеизвестных способов. Кроме того, пищевая композиция может принимать форму жидкой пищевой композиции, такой как супы, соки, молочный напиток, чайный напиток, кофейный напиток, напиток типа какао и желеподобный напиток; форму полутвердой пищевой композиции, такой как пудинг и йогурт; форму хлебобулочных изделий; макаронных изделий, таких как мучные макаронные изделия; форму кондитерских изделий, таких как сладкое печенье, шоколад, конфеты и жевательная резинка; и спредов, таких как пряная рисовая смесь, масло и джем. Кроме того, пищевой продукт включает в себя корм для скота.

Пищевая композиция может быть получена с различными видами пищевых добавок, взятых по отдельности или в их сочетании, такими как антиоксидант, специи, различные виды сложных эфиров, органические кислоты, соли органических кислот, неорганические кислоты, соли неорганических кислот, красители, эмульгатор, консервирующая добавка, приправа, подсластитель, подкислитель, плодово-ягодные экстракты, растительные экстракты, экстракты для производства нектаров, регулятор pH и стабилизатор стойкости при хранении.

Объектом введения активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов, усилителя экспрессии инволюкрина, промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитора уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос согласно настоящему изобретению предпочтительно является теплокровное позвоночное животное, и более предпочтительно млекопитающее. При этом конкретные примеры млекопитающих включают человека и млекопитающее, не являющееся человеком, такое как обезьяна, мышь, крыса, кролик, собака, кошка, жвачное животное, лошадь и свинья. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос согласно настоящему изобретению предпочтительно вводят приматам, таким как человек и обезьяна, и особенно предпочтительно человеку.

Описанный выше активный ингредиент, применяемый в настоящем изобретении, и активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос согласно настоящему изобретения можно наносить субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении увлажнения кожи или барьерной функции кожи, увеличении уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибировании уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, предупреждении или уменьшении шероховатости кожи или формировании волнистых волос. Описанный выше активный ингредиент или средство предпочтительно наносят в необходимых условиях (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости). Кроме того, описанный выше активный ингредиент или средство предпочтительно наносят на кожу, скальп или волосы.

Наносимую дозу описанного выше активного ингредиента в активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов, усилителе экспрессии инволюкрина, промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибиторе уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средстве для формирования волнистых волос согласно настоящему изобретению можно определять соответствующим образом в зависимости от условий, массы тела, пола или возраста личности, активности сырьевого материала, способа введения или приема пищи, режима введения или приема пищи, формы препарата или других факторов.

Например, в первом и втором вариантах осуществления настоящего изобретения доза предпочтительно составляет 0,001 мг или более и 1 г или менее, или предпочтительно составляет от 0,001 до 1 мг в день на 1 кг массы тела, в расчете на массу описанного выше активного ингредиента. Кроме того, в третьем варианте осуществления настоящего изобретения доза предпочтительно составляет 1,0×10^-7 мг или более, более предпочтительно составляет 1,0×10^-6 мг или более и предпочтительно составляет 0,1 г или менее, более предпочтительно 0,001 мг или менее или предпочтительно от 1,0×10^-7 до 0,1 мг, и более предпочтительно от 1,0×10^-6 до 0,001 мг в день для взрослого человека (масса тела: 60 кг), в расчете на массу описанного выше активного ингредиента.

Кроме того, описанный выше активный ингредиент можно принимать внутрь или вводить один раз в день или дробно несколько раз в день или в течение произвольного периода времени или с интервалами.

Содержание описанного выше активного ингредиента в активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов, усилителе экспрессии инволюкрина, промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибиторе уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средстве для формирования волнистых волос согласно настоящему изобретению можно определять соответствующим образом для того, чтобы добиться описанной выше дозы.

Например, в активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов, усилителе экспрессии инволюкрина, промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибиторе уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средстве для формирования волнистых волос согласно первому и второму вариантам осуществления настоящего изобретения содержание активного ингредиента предпочтительно составляет 0,00001 масс. % или более, более предпочтительно 0,0001 масс. % или более, и еще более предпочтительно 0,0005 масс. % или более; предпочтительно 20 масс. % или менее, более предпочтительно 10 масс. % или менее, и еще более предпочтительно 5 масс. % или менее; и от 0,00001 до 20 масс. %, более предпочтительно от 0,0001 до 10 масс. %, и более предпочтительно от 0,0005 до 5 масс. %.

Кроме того, в активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов, усилителе экспрессии инволюкрина, промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средстве для формирования волнистых волос согласно третьему варианту осуществления настоящего изобретения содержание активного ингредиента предпочтительно составляет 1,0×10^-10 масс. % или более, более предпочтительно 1,0×10^-9 масс. % или более и более предпочтительно 1,0×10^-8 масс. % или более; предпочтительно 0,01 масс. % или менее, более предпочтительно 0,005 масс. % или менее, более предпочтительно 0,001 масс. % или менее и особенно предпочтительно 1,0×10^-4 масс. % или менее.

Что касается описанных выше вариантов осуществления изобретения, также раскрытых в настоящем изобретении, они включают в себя описанный ниже активатор трансглутаминазы, описанный ниже стимулятор продукции церамидов, описанный ниже усилитель экспрессии инволюкрина, описанный ниже промотор эпидермальной кератинизации, описанный ниже улучшитель функции увлажнения кожи, описанный ниже улучшитель барьерной функции кожи, описанное ниже средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, описанный ниже ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, описанное ниже средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, описанное ниже средство для формирования волнистых волос, описанный ниже способ производства, описанный ниже способ и описанное ниже применение.

1. Активатор трансглутаминазы, содержащий, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

2. Стимулятор продукции церамидов, содержащий, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3. Усилитель экспрессии инволюкрина, содержащий, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

4. Промотор эпидермальной кератинизации, содержащий, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

5. Улучшитель функции увлажнения кожи, содержащий, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

6. Улучшитель барьерной функции кожи, содержащий, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

7. Средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащее, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

8. Средство для формирования волнистых волос, содержащее, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

В формуле (1) каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода; R₃ представляет собой атом водорода или группу, образующую метилендиоксигруппу при соединении с R₂; каждый из R₄ и R₅ представляет собой атом водорода, или R₄ и R₅ при соединении друг с другом образуют метилендиоксигруппу; R₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, или сахарный остаток, выбранный из группы, состоящей из (D-апио-β-D-фуранозил)окси, (5-O-ацетил-D-апио-β-D-фуранозил)окси, (β-D-глюкопиранозил)окси, (3-O,4-O-диметил-D-ксилопиранозил)окси, (2-O,3-O,4-O-триметил-β-D-ксилопиранозил)окси и (3-O-метил-β-D-глюкопиранозил)окси; и гидроксильная группа сахарного остатка может образовывать сложный эфир с карбоновой кислотой (предпочтительно с карбоновой кислотой, содержащей от 2 до 4 атомов углерода).

9. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 1-8, в которых соединение, представленное формулой (1), представляет собой соединение, представленное формулой (11), или соединение, представленное любой из формул (2)-(4):

где в формуле (2) каждый из R₁₁ и R₁₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, и более предпочтительно - метоксигруппу); R₁₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, или ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно - атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, или ацетоксигруппу);

где в формуле (3) каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, и более предпочтительно метоксигруппу); R₂₆ представляет собой сахарный остаток, выбранный из группы, состоящей из (D-апио-β-D-фуранозил)окси, (5-O-ацетил-D-апио-β-D-фуранозил)окси, (β-D-глюкопиранозил)окси, (3-O,4-O-диметил-D-ксилопиранозил)окси, (2-O,3-O,4-O-триметил-β-D-ксилопиранозил)окси и (3-O-метил-β-D-глюкопиранозил)окси; и гидроксильная группа сахарного остатка может образовывать сложный эфир с карбоновой кислотой (предпочтительно с карбоновой кислотой, содержащей от 2 до 4 атомов углерода); и

где в формуле (4) R₃₆ представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, или ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно атом водорода или гидроксильную группу, и более предпочтительно - гидроксильную группу).

10. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активатора трансглутаминазы или стимулятора продукции церамидов.

11. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для производства активатора трансглутаминазы или стимулятора продукции церамидов.

12. Способ применения, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве активатора трансглутаминазы или стимулятора продукции церамидов.

13. Способ активации трансглутаминазы или способ повышения продукции церамидов путем применения, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1).

14. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве усилителя экспрессии инволюкрина.

15. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для производства усилителя экспрессии инволюкрина.

16. Способ применения, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве усилителя экспрессии инволюкрина.

17. Способ повышения экспрессии инволюкрина путем применения, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1).

18. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи или средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

19. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для производства промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи или средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

20. Способ применения, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи или средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

21. Способ повышения эпидермальной кератинизации, способ улучшения функции увлажнения кожи, способ улучшения барьерной функции кожи или способ предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, включающий введение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1).

22. По меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для применения в способе предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, способе улучшения функции увлажнения кожи, способе улучшения барьерной функции кожи или способе предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

23. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для производства лекарственного средства для предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, лекарственного средства для улучшения функции увлажнения кожи, лекарственного средства для улучшения барьерной функции кожи или лекарственного средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

24. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для нанесения при нетерапевтическом способе лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, функции увлажнения кожи, барьерной функции кожи или шероховатости кожи.

25. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве средства для формирования волнистых волос.

26. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для производства средства для формирования волнистых волос.

27. Способ применения, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), в качестве средства для формирования волнистых волос.

28. Способ формирования волнистых волос, включающий введение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1).

29. По меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для применения в способе формирования волнистых волос.

30. По меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для производства лекарственного средства для формирования волнистых волос.

31. Применение, по меньшей мере, одного типа вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1), для нанесения при нетерапевтическом способе лечения при формировании волнистых волос.

32. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 10-31, в котором соединение, представленное формулой (1), представляет собой соединение, представленное формулой (11), или соединение, представленное любой из формул (2)-(4).

1-1. Активатор трансглутаминазы, содержащий экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-2. Стимулятор продукции церамидов, содержащий экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-3. Промотор эпидермальной кератинизации, содержащий экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-4. Улучшитель функции увлажнения кожи, содержащий экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-5. Улучшитель барьерной функции кожи, содержащий экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-6. Средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, содержащее экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-7. Ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, содержащий экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-8. Средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащее экстракт Justicia procumbens в качестве активного ингредиента.

1-9. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи по любому из описанных выше п.п. 1-1 - 1-8, в которых экстракт Justicia procumbens представляет собой экстракт взятого целиком растения Justicia procumbens.

1-10. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи по любому из описанных выше п.п. 1-1 - 1-9, в которых экстракт Justicia procumbens получают путем экстракции Justicia procumbens с применением в качестве растворителя для экстракции водного раствора этанола (предпочтительно водного раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более, более предпочтительно 40 об. % или более).

1-11. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитор уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи по любому из описанных выше п.п. 1-1 - 1-10, в которых содержание активного ингредиента составляет 0,00001 масс. % или более (предпочтительно 0,0001 масс. % или более и более предпочтительно 0,0005 масс. % или более) и 20 масс. % или менее (предпочтительно 10 масс. % или менее и более предпочтительно 5 масс. % или менее).

1-12. Применение экстракта Justicia procumbens в качестве активатора трансглутаминазы или стимулятора продукции церамидов.

1-13. Применение экстракта Justicia procumbens для производства активатора трансглутаминазы или стимулятора продукции церамидов.

1-14. Способ применения экстракта Justicia procumbens в качестве активатора трансглутаминазы или стимулятора продукции церамидов.

1-15. Способ активации трансглутаминазы или способ повышения продукции церамидов путем применения экстракта Justicia procumbens.

1-16. Способ по описанным выше п.п. 1-15, в котором экстракт наносится субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении увлажнения кожи или барьерной функции кожи или предупреждении или уменьшении шероховатости кожи.

1-17. Способ по описанному выше п. 1-15 или п. 1-16, в котором экстракт наносится в условиях, необходимых для нанесения экстракта (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости).

1-18. Способ по любому из описанных выше п.п. 1-15 - 1-17, в котором экстракт вводят в кожу.

1-19. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 1-12 - 1-18, в котором экстракт Justicia procumbens представляет собой экстракт взятого целиком растения Justicia procumbens.

1-20. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 1-12 - 1-19, в котором экстракт Justicia procumbens получают путем экстракции Justicia procumbens с применением в качестве растворителя для экстракции водного раствора этанола (предпочтительно водного раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более, более предпочтительно 40 об. % или более).

1-21. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 1-12 - 1-20, в котором содержание экстракта Justicia procumbens в активаторе трансглутаминазы или стимуляторе продукции церамидов составляет 0,00001 масс. % или более (предпочтительно 0,0001 масс. % или более и более предпочтительно 0,0005 масс. % или более) и 20 масс. % или менее (предпочтительно 10 масс. % или менее и более предпочтительно 5 масс. % или менее).

1-22. Применение экстракта Justicia procumbens в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитора уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

1-23. Применение экстракта Justicia procumbens для производства промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитора уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

1-24. Способ применения экстракта Justicia procumbens в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибитора уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

1-25. Способ повышения эпидермальной кератинизации, способ улучшения функции увлажнения кожи, способ улучшения барьерной функции кожи, способ повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, способ ингибирования уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или способ предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащий введение экстракта Justicia procumbens.

1-26. Способ по описанному выше п. 1-24 или п. 1-25, в котором экстракт наносится субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении увлажнения кожи или барьерной функции кожи, повышении уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибировании уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или предупреждении или уменьшении шероховатости кожи.

1-27. Способ по любому из описанных выше п.п. 1-24 - 1-26, в котором экстракт наносится в условиях, необходимых для нанесения экстракта (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости).

1-28. Способ по любому из описанных выше п.п. 1-24 - 1-27, в котором экстракт вводят в кожу.

1-29. Экстракт Justicia procumbens для применения в способе предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, способе улучшения функции увлажнения кожи, способе улучшения барьерной функции кожи, способе повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, способе ингибирования уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или способе предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

1-30. Применение экстракта Justicia procumbens для производства лекарственного средства для предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, лекарственного средства для улучшения функции увлажнения кожи, лекарственного средства для улучшения барьерной функции кожи, лекарственного средства для повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, лекарственного средства для ингибирования уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или лекарственного средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

1-31. Применение экстракта Justicia procumbens для нанесения при нетерапевтическом способе лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, функции увлажнения кожи, барьерной функции кожи, увлажненности рогового слоя эпидермиса или шероховатости кожи.

1-32. Применение по описанному выше п. 1-31, в котором экстракт Justicia procumbens наносится в форме медицинской композиции или косметической композиции.

1-33. Применение по описанному выше п. 1-32, при котором экстракт Justicia procumbens наносится в форме композиции для наружного применения.

1-34. Применение по описанному выше п. 1-31, при котором экстракт Justicia procumbens применяется в форме продукта питания или напитка.

1-35. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 1-22 - 1-34, в котором экстракт Justicia procumbens представляет собой экстракт взятого целиком растения Justicia procumbens.

1-36. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 1-22 - 1-35, в котором экстракт Justicia procumbens получают экстракцией Justicia procumbens с применением в качестве растворителя для экстракции водного раствора этанола (предпочтительно водного раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более, более предпочтительно 40 об. % или более).

1-37. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 1-22 - 1-36, в котором содержание экстракта Justicia procumbens в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибиторе уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса или средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи составляет 0,00001 масс. % или более (предпочтительно 0,0001 масс. % или более, и более предпочтительно 0,0005 масс. % или более) и 20 масс. % или менее (предпочтительно 10 масс. % или менее, и более предпочтительно 5 масс. % или менее).

2-1. Активатор трансглутаминазы, содержащий экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-2. Стимулятор продукции церамидов, содержащий экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-3. Усилитель экспрессии инволюкрина, содержащий экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-4. Промотор эпидермальной кератинизации, содержащий экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-5. Улучшитель функции увлажнения кожи, содержащий экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-6. Улучшитель барьерной функции кожи, содержащий экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-7. Средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащее экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-8. Средство для формирования волнистых волос, содержащее экстракт Peristrophe japonica в качестве активного ингредиента.

2-9. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 2-1 - 2-8, в которых экстракт Peristrophe japonica представляет собой экстракт взятого целиком растения Peristrophe japonica.

2-10. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 2-1 - 2-9, в которых экстракт Peristrophe japonica получают путем экстракции Peristrophe japonica с применением в качестве растворителя для экстракции водного раствора этанола (предпочтительно водного раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более, более предпочтительно 40 об. % или более).

2-11. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 2-1 - 2-10, в которых содержание активного ингредиента составляет 0,00001 масс. % или более (предпочтительно 0,0001 масс. % или более, и более предпочтительно 0,0005 масс. % или более) и 20 масс. % или менее (предпочтительно 10 масс. % или менее, и более предпочтительно 5 масс. % или менее).

2-12. Применение экстракта Peristrophe japonica в качестве активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов или усилителя экспрессии инволюкрина.

2-13. Применение экстракта Peristrophe japonica для производства активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов или усилителя экспрессии инволюкрина.

2-14. Способ применения экстракта Peristrophe japonica в качестве активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов или усилителя экспрессии инволюкрина.

2-15. Способ активации трансглутаминазы, способ повышения продукции церамидов или способ повышения экспрессии инволюкрина путем применения экстракта Peristrophe japonica.

2-16. Способ по описанному выше п. 2-15, в котором экстракт наносится субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении увлажнения кожи или барьерной функции кожи, предупреждении или уменьшении шероховатости кожи или формировании волнистых волос.

2-17. Способ по описанному выше п. 2-15 или п. 2-16, в котором экстракт наносится в условиях, необходимых для нанесения экстракта (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости).

2-18. Способ по любому из описанных выше п.п. 2-15 - 2-17, в котором экстракт вводят в кожу, скальп или волосы.

2-19. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 2-12 - 2-18, в котором экстракт Peristrophe japonica представляет собой экстракт из взятого целиком растения Peristrophe japonica.

2-20. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 2-12 - 2-19, в котором экстракт Peristrophe japonica получают путем экстракции Peristrophe japonica с применением в качестве растворителя для экстракции водного раствора этанола (предпочтительно водного раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более, более предпочтительно 40 об. % или более).

2-21. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 2-12 - 2-20, в котором содержание экстракта Peristrophe japonica в активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов или усилителе экспрессии инволюкрина составляет 0,00001 масс. % или более (предпочтительно 0,0001 масс. % или более, и более предпочтительно 0,0005 масс. % или более) и 20 масс. % или менее (предпочтительно 10 масс. % или менее, и более предпочтительно 5 масс. % или менее).

2-22. Применение экстракта Peristrophe japonica в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос.

2-23. Применение экстракта Peristrophe japonica для производства промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос.

2-24. Способ применения экстракта Peristrophe japonica в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос.

2-25. Способ повышения эпидермальной кератинизации, способ улучшения функции увлажнения кожи, способ улучшения барьерной функции кожи, способ предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или способ формирования волнистых волос, включающий введение экстракта Peristrophe japonica.

2-26. Способ по описанному выше п. 2-24 или п. 2-25, в котором экстракт наносится субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении увлажнения кожи или барьерной функции кожи, предупреждении или уменьшении шероховатости кожи или формировании волнистых волос.

2-27. Способ по любому из описанных выше п.п. 2-24 - 2-26, в котором экстракт наносится в условиях, необходимых для нанесения экстракта (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости).

2-28. Способ по любому из описанных выше п.п. 2-24 - 2-27, в котором экстракт вводят в кожу, скальп или волосы.

2-29. Экстракт Peristrophe japonica для применения в способе предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, способе улучшения функции увлажнения кожи, способе улучшения барьерной функции кожи, способе предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или способе формирования волнистых волос.

2-30. Применение экстракта Peristrophe japonica для производства лекарственного средства для предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, лекарственного средства для улучшения функции увлажнения кожи, лекарственного средства для улучшения барьерной функции кожи, лекарственного средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или лекарственного средства для формирования волнистых волос.

2-31. Применение экстракта Peristrophe japonica для нанесения при нетерапевтическом способе лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, функции увлажнения кожи, барьерной функции кожи, шероховатости кожи или для формирования волнистых волос.

2-32. Применение по описанному выше п. 2-31, в котором экстракт Peristrophe japonica наносится в форме медицинской композиции или косметической композиции.

2-33. Применение по описанному выше п. 2-32, в котором экстракт Peristrophe japonica наносится в форме композиции для наружного применения.

2-34. Применение по описанному выше п. 2-31, в котором экстракт Peristrophe japonica применяется в форме продукта питания или напитка.

2-35. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 2-22 - 2-34, в котором экстракт Peristrophe japonica представляет собой экстракт взятого целиком растения Peristrophe japonica.

2-36. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 2-22 - 2-35, в котором экстракт Peristrophe japonica получают путем экстракции Peristrophe japonica с применением в качестве растворителя для экстракции водного раствора этанола (предпочтительно водного раствора этанола с содержанием спирта 30 об. % или более, более предпочтительно 40 об. % или более).

2-37. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 2-22 - 2-36, в котором содержание экстракта Peristrophe japonica в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средстве для формирования волнистых волос составляет 0,00001 масс. % или более (предпочтительно 0,0001 масс. % или более, и более предпочтительно 0,0005 масс. % или более) и 20 масс. % или менее (предпочтительно 10 масс. % или менее, и более предпочтительно 5 масс. % или менее).

3-1. Активатор трансглутаминазы, содержащий, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-2. Стимулятор продукции церамидов, содержащий, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-3. Усилитель экспрессии инволюкрина, содержащий, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-4. Промотор эпидермальной кератинизации, содержащий, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-5. Улучшитель функции увлажнения кожи, содержащий, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-6. Улучшитель барьерной функции кожи, содержащий, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-7. Средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи, содержащее, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-8. Средство для формирования волнистых волос, содержащее, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), в качестве активного ингредиента.

3-9. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-8, где в формуле (1) каждый из R₁ и R₂ представляет собой атом водорода или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно атом водорода или алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, более предпочтительно атом водорода или метоксигруппу); и R₃ представляет собой атом водорода.

3-10. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-8, где в формуле (1) R₁ представляет собой атом водорода; и R₂ и R₃ связаны друг с другом с образованием метилендиоксигруппы.

3-11. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-10, где в формуле (1) R₄ и R₅ при соединении друг с другом образуют метилендиоксигруппу.

3-12. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-10, где в формуле (1) R₄, R₅ и R₆ представляют собой атом водорода.

3-13. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-12, в которых соединение, представленное формулой (1), представляет собой соединение, представленное формулой (11), или соединение, представленное любой из формул (2)-(4).

3-14. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-13, в которых соединение, представленное формулой (1), выбрано из группы, состоящей из следующих соединений (11)-(19):

3-15. Активатор трансглутаминазы, стимулятор продукции церамидов, усилитель экспрессии инволюкрина, промотор эпидермальной кератинизации, улучшитель функции увлажнения кожи, улучшитель барьерной функции кожи, средство для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средство для формирования волнистых волос по любому из описанных выше п.п. 3-1 - 3-14, в которых содержание активного ингредиента составляет 1,0×10^-10 масс. % или более (предпочтительно 1,0×10^-9 масс. % или более, и более предпочтительно 1,0×10^-8 масс. % или более) и 0,01 масс. % или менее (предпочтительно 0,005 масс. % или менее, более предпочтительно 0,001 масс. % или менее, и более предпочтительно 1,0×10^-4 масс. % или менее).

3-16. Применение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), в качестве активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов или усилителя экспрессии инволюкрина.

3-17. Применение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), для производства активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов или усилителя экспрессии инволюкрина.

3-18. Способ применения, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), в качестве активатора трансглутаминазы, стимулятора продукции церамидов или усилителя экспрессии инволюкрина.

3-19. Способ активации трансглутаминазы, способ повышения продукции церамидов или способ повышения экспрессии инволюкрина путем применения, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1).

3-20. Способ по описанному выше п. 3-19, в котором соединение наносится субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении увлажнения кожи или барьерной функции кожи, предупреждении или уменьшении шероховатости кожи или формировании волнистых волос.

3-21. Способ по любому из описанных выше п.п. 3-19 или 3-20, в котором соединение наносится в условиях, необходимых для нанесения соединения (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости).

3-22. Способ по любому из описанных выше п.п. 3-19 - 3-21, в котором соединение вводят в кожу, скальп или волосы.

3-23. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-22, где в формуле (1) каждый из R₁ и R₂ представляет собой атом водорода или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно атом водорода или алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, более предпочтительно атом водорода или метоксигруппу); и R₃ представляет собой атом водорода.

3-24. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-22, где в формуле (1) R₁ представляет собой атом водорода; и R₂ и R₃ связаны друг с другом с образованием метилендиоксигруппы.

3-25. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-24, где в формуле (1) R₄ и R₅ при соединении друг с другом образуют метилендиоксигруппу.

3-26. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-24, где в формуле (1) R₄, R₅ и R₆ представляют собой атом водорода.

3-27. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-26, где соединение, представленное формулой (1), представляет собой соединение, представленное формулой (11), или соединение, представленное любой из формул (2)-(4).

3-28. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-27, в которых соединение, представленное формулой (1), выбрано из группы, состоящей из соединений (11)-(19).

3-29. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-16 - 3-28, в которых содержание, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), в активаторе трансглутаминазы, стимуляторе продукции церамидов или усилителе экспрессии инволюкрина составляет 1,0×10^-10 масс. % или более (предпочтительно 1,0×10^-9 масс. % или более, и более предпочтительно 1,0×10^-8 масс. % или более) и 0,01 масс. % или менее (предпочтительно 0,005 масс. % или менее, более предпочтительно 0,001 масс. % или менее, и более предпочтительно 1,0×10^-4 масс. % или менее).

3-30. Применение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос.

3-31. Применение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), для производства промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос.

3-32. Способ применения, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), в качестве промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средства для формирования волнистых волос.

3-33. Способ повышения эпидермальной кератинизации, способ улучшения функции увлажнения кожи, способ улучшения барьерной функции кожи, способ предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или способ формирования волнистых волос, включающий введение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1).

3-34. Способ по описанному выше п. 3-32 или п. 3-33, в котором соединение наносится субъекту, который нуждается в предупреждении или лечении неполной эпидермальной кератинизации, улучшении функции увлажнения кожи или барьерной функции кожи, предупреждении или уменьшении шероховатости кожи или формировании волнистых волос.

3-35. Способ по любому из описанных выше п.п. 3-32 - 3-34, в котором соединение наносится в условиях, необходимых для нанесения соединения (предпочтительно в условиях низкой относительной влажности и сухости).

3-36. Способ по любому из описанных выше п.п. 3-32 - 3-35, в котором соединение вводят в кожу, скальп или волосы.

3-37. По меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), для применения в способе предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, в способе улучшения функция увлажнения кожи, способе улучшения барьерной функции кожи, способе предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или способе формирования волнистых волос.

3-38. Применение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), для производства лекарственного средства для предупреждения или лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, лекарственного средства для улучшения функции увлажнения кожи, лекарственного средства для улучшения барьерной функции кожи, лекарственного средства для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или лекарственного средства для формирования волнистых волос.

3-39. Применение, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), для нанесения при нетерапевтическом способе лечения неполной эпидермальной кератинизации кожи, функции увлажнения кожи, барьерной функции кожи, шероховатости кожи или для формирования волнистых волос.

3-40. Применение по описанному выше п. 3-39, в котором, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), наносится в форме медицинской композиции или косметической композиции.

3-41. Применение по описанному выше п. 3-40, в котором, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), наносится в форме композиции для наружного применения.

3-42. Применение по описанному выше п. 3-39, в котором, по меньшей мере, один тип соединения, представленного формулой (1), применяется в форме продукта питания или напитка.

3-43. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-42, где в формуле (1) каждый из R₁ и R₂ представляет собой атом водорода или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода (предпочтительно атом водорода или алкоксигруппу, содержащую 1 или 2 атома углерода, более предпочтительно атом водорода или метоксигруппу); и R₃ представляет собой атом водорода.

3-44. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-42, где формуле (1) R₁ представляет собой атом водорода; и R₂ и R₃ связаны друг с другом с образованием метилендиоксигруппы.

3-45. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-44, где в формуле (1) R₄ и R₅при соединении друг с другом образуют метилендиоксигруппу.

3-46. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-44, в которых в формуле (1) R₄, R₅ и R₆ представляют собой атом водорода.

3-47. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-46, в которых соединение представленное формулой (1), представляет собой соединение, представленное формулой (11), или соединение, представленное любой из формул (2) - (4).

3-48. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-47, в которых соединение, представленное формулой (1), выбрано из группы, состоящей из соединений (11)-(19).

3-49. Применение или способ по любому из описанных выше п.п. 3-30 - 3-48, в которых содержание, по меньшей мере, одного типа соединения, представленного формулой (1), в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или средстве для формирования волнистых волос составляет 1,0×10^-10 масс. % или более (предпочтительно 1,0×10^-9 масс. % или более, и более предпочтительно 1,0×10^-8 масс. % или более) и 0,01 масс. % или менее (предпочтительно 0,005 масс. % или менее, более предпочтительно 0,001 масс. % или менее, и более предпочтительно 1,0×10^-4 масс. % или менее).

ПРИМЕРЫ

Ниже настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на примеры, однако настоящее изобретение не ограничивается приведенными примерами.

Пример 1-1 получения препарата

800 мл водного (50 об. %) раствора этанола добавляли к 80 г взятого целиком растения Justicia procumbens (полученного от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) и экстрагировали таким раствором при комнатной температуре в течение 7 дней. Затем полученный материал фильтровали, получая при этом неочищенный экстракт, и затем концентрировали неочищенный экстракт досуха, получая при этом 6,6 г экстрагированного твердого вещества. Полученное экстрагированное твердое вещество растворяли в водном (50 об. %) растворе этанола до концентрации 1,0% (масс./об.) остатка после выпаривания, получая при этом спиртовой (50 об. % этанола) экстракт Justicia procumbens.

Пример 1-2 получения препарата

500 мл водного (95 об. %) раствора этанола добавляли к 50 г взятого целиком растения Justicia procumbens (полученного от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) и экстрагировали таким раствором при комнатной температуре в течение 7 дней. Затем полученный материал фильтровали, получая при этом неочищенный экстракт, затем концентрировали неочищенный экстракт досуха, получая при этом 897 мг экстрагированного твердого вещества. Полученное экстрагированное твердое вещество растворяли в водном (95 об. %) растворе этанола до концентрации 1,0% (масс./об.) остатка после выпаривания, получая при этом спиртовой (95 об. % этанола) экстракт Justicia procumbens.

Пример 2-1 получения препарата

10 г взятого целиком растения Peristrophe japonica (полученного от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) тонко измельчали и добавляли к нему 100 мл водного (30 об. %) раствора этанола. Затем в течение 7 дней осуществляли экстракцию, выдерживая его при комнатной температуре. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 61 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 1,10% (масс./об.). Полученный остаток разбавляли водным раствором (30 об. %) этанола, получая при этом 1,0% (масс./об.) (в пересчете на содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт.

Расчет остатка после выпаривания

1 мл экстракта Peristrophe japonica сушили в течение 6 часов при 105°C с применением сушильного шкафа (торговая марка DRY Thermo Unit DTU-1C, производства TAITEC CORPORATION), получая при этом 11,0 мг сухого продукта. Остаток после выпаривания такого экстракта рассчитывали по формуле: 11,0/1000×100=1,10% (масс./об.). В препаратах, описанных ниже в примерах, остаток после выпаривания для каждого экстракта рассчитывали аналогичным образом.

Пример 2-2 получения препарата

Экстракцию осуществляли с применением водного раствора (50 об. %) этанола в условиях, аналогичных условиям по примеру 2-1. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 58 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,92% (масс./об.). Полученный экстракт концентрировали и затем готовили 1,0% (масс./об.) (содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт с применением водного раствора (50 об. %) этанола.

Пример 2-3 получения препарата

Экстракцию осуществляли с применением водного раствора (60 об. %) этанола в условиях, аналогичных условиям по примеру 2-1. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 58 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,79% (масс./об.). Полученный экстракт концентрировали и затем готовили 1,0% (масс./об., содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт с применением водного раствора (60 об. %) этанола.

Пример 2-4 получения препарата

Экстракцию осуществляли с применением водного раствора (70 об. %) этанола в условиях, аналогичных условиям по примеру 2-1. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 60 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,70% (масс./об.). Полученный экстракт концентрировали и затем готовили 1,0% (масс./об., содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт с применением водного раствора (70 об. %) этанола.

Пример 2-5 получения препарата

Экстракцию осуществляли с применением водного раствора (80 об. %) этанола в условиях, аналогичных условиям по примеру 2-1. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 55 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,60% (масс./об.). Полученный экстракт концентрировали и затем готовили 1,0% (масс./об., содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт с применением водного раствора (80 об. %) этанола.

Пример 2-6 получения препарата

Экстракцию осуществляли с применением водного раствора (90 об. %) этанола в условиях, аналогичных условиям по примеру 2-1. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 53 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,36% (масс./об.). Полученный экстракт концентрировали, сушили и затем готовили 1,0% (масс./об., содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт с применением водного раствора (90 об. %) этанола.

Пример 2-7 получения препарата

Экстракцию осуществляли с применением водного раствора (99,5 об. %) этанола в условиях, аналогичных условиям по примеру 2-1. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 52 мл экстракта Peristrophe japonica. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,17% (масс./об.). Полученный экстракт концентрировали, сушили и затем готовили 1,0% (масс./об., в пересчете на содержание сухих экстрагированных веществ) экстракт с применением водного раствора (99,5 об. %) этанола.

Пример 2-8 получения препарата

600 г взятого целиком растения Peristrophe japonica (полученного от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) тонко измельчали и добавляли к нему 6000 мл водного раствора (99,5 об. %) этанола. Затем в течение 7 дней осуществляли экстракцию, выдерживая его при комнатной температуре. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 4504 мл экстракта Peristrophe japonica. К 4000 мл полученного экстракта добавляли 2000 мл гексана и перемешивали полученную смесь, затем к ней дополнительно добавляли 6000 мл воды. Полученную смесь распределяли между несмешивающимися жидкостями и затем извлекали 8367 мл нижнего слоя. К 2500 мл полученного экстракта добавляли 1000 мл 1,3-бутиленгликоля и концентрировали с применением выпарного аппарата для удаления этанола и воды. Затем добавляли 1500 мл воды и осуществляли седиментацию при 5°C в течение 4 дней. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием, затем к 2403 мл полученного фильтрата добавляли водный раствор (40 об. %) 1,3-бутиленгликоля, получая при этом 3266 мл экстракта. Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 0,02% (масс./об.).

Пример 3-1 получения препарата

Получение соединения, представленного формулой (1)

500 г растения Justicia procumbens (полученного от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) экстрагировали с применением 5 л раствора (50 об. %) этанола и концентрировали растворитель. При этом получали 44 г фракции с экстрагированным сухим веществом. Полученную экстрагированную фракцию в виде сухого вещества распределяли между несмешивающимися жидкостями с применение воды и этилацетата, получая при этом 4,7 г этилацетатного слоя (выход 11%).

Этилацетатный слой дополнительно разделяли на фракции с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. В качестве колонки с силикагелем применяли колонку Hi-Flush (4 л, производства компании Yamazen Corporation). Элюирование осуществляли, промывая сначала в течение 10 минут 100% гексаном с последующим применением смеси гексан/этилацетат с градиентом от 0% до 100% этилацетата на протяжении 60 минут, и затем на протяжении 30 минут применяли смесь этилацетат/метанол с градиентом от 0% до 10% метанола, и в заключение в течение 30 минут применяли 100% метанол. После промывания, которое осуществляли со скоростью потока 30 мл/мин, и отбора фракций каждые 2 минуты собирали фракции с близкими значениями R_f, полученными при ТСХ-анализе каждой фракции, соответственно, получая при этом семь фракций.

Что касается фракции 4 (0,8 г, выход: 1,8%), осадок, образование которого было вызвано добавлением метанола, дополнительно фракционировали с применением ВЭЖХ. Когда в качестве колонки применяли колонку Inertsil ODS-3 (14×250 мм, производства компании GL Sciences Inc.) и осуществляли элюирование при скорости потока 15 мл/мин с применением в течение 20 минут смеси 0,1% водный раствор муравьиной кислоты/ацетонитрил при 50% ацетонитрила, и детектирование осуществляли при длине волны 254 нм, получали два основных пика. Фракцию, соответствующую каждому пику, выделяли и принимали за фракцию 8 и фракцию 9. Констатировали, что активность трансглутаминазы присутствует как во фракции 8 (48 мг, выход: 0,38%), так и во фракции 9 (58 мг, выход: 0,46%).

Что касается фракции 7 (1,91 г, выход: 4,3%), использовали 470 мг фракции 7 и дополнительно фракционировали с применением ВЭЖХ. В качестве колонки применяли колонку Inertsil ODS-3 (10×250 мм, производства компании GL Sciences Inc.), элюирование осуществляли при скорости потока 7,5 мл/мин с применением смеси 0,1% водный раствор муравьиной кислоты-ацетонитрил при 35% ацетонитрила в течение 20 минут, детектирование осуществляли при длине волны 254 нм. Фракцию дополнительно разделяли на фракцию 10, фракцию 11 и фракцию 12 согласно пикам, и констатировали, что активность трансглутаминазы присутствует во фракции 11 (14,1 мг, выход: 0,13%).

Для каждой из фракций 8, 9 и 11 проводили анализ структуры с применением ЯМР-анализа. В результате, как показано в таблицах, фракцию 8 идентифицировали как иллюстративное соединение (12), фракцию 9 идентифицировали как иллюстративное соединение (14), и фракцию 11 идентифицировали как иллюстративное соединение (17).

Значение, описанное в литературе: Tetrahedron, 2002, т. 58, стр. 5989-6001

Значение, описанное в литературе:

Journal of Natural Products, 1999, т. 62, стр. 1056-1058

Journal of Natural Products, 1986, т. 49, стр. 348-350

Примечание^*) В данной таблице значения ЯМР для¹³C в 9-положении и 10-положении в случае выделенных компонентов приведены в обратном порядке по сравнению со значениями, описанными в литературе. Однако для выделенных компонентов значения были подтверждены с помощью измерения INADEQUATE структурного анализа и, следовательно, предполагается, что приводимые значения для выделенных компонентов должны быть более вероятными.

Значение, описанное в литературе: Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 2002, т. 50, стр. 844-846

Пример 3-2 получения препарата

Получение соединения, представленного формулой (1)

500 г растения Justicia procumbens (полученного от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) экстрагировали в 5 л 99,5 об. % этанола, и концентрировали растворитель. Полученную таким образом фракцию с экстрагированным сухим веществом распределяли между несмешивающимися жидкостями с применением воды и этилацетата, получая при этом 3,8 г этилацетатного слоя (выход 75,4%).

Этилацетатный слой в количестве 2,5 г дополнительно фракционировали с применением колоночной хроматографии на силикагеле. В качестве колонки с силикагелем применяли колонку Hi-Flush (2 л, производства компании Yamazen Corporation). Элюирование осуществляли, промывая сначала в течение 10 минут 100% гексаном с последующим применением смеси гексан/этилацетат с градиентом от 0% до 100% этилацетата на протяжении 60 минут, и затем на протяжении 30 минут применяли смесь этилацетат/метанол с градиентом от 0% до 10% метанола, и в заключение в течение 30 минут применяли 100% метанол. После промывания, которое осуществляли со скоростью потока 6 мл/мин, и отбора фракций каждые 2 минуты собирали фракции с близкими значениями R_f, полученными при ТСХ-анализе каждой фракции, соответственно, получая при этом фракции 13, 14 и 15.

Что касается фракции 14 (325,3 мг, выход: 9,8%), использовали 300 мг полученной фракции и подвергали ее дополнительному фракционированию с применением ВЭЖХ. В качестве колонки применяли колонку Inertsil ODS-3 (10×250 мм, производства компании GL Sciences Inc.), элюирование осуществляли при скорости потока 7,5 мл/мин, детектирование осуществляли при длине волны 254 нм, применяя смесь 0,1% водный раствор муравьиной кислоты/ацетонитрил при 30%-ом содержании ацетонитрила в течение 30 минут, при 38%-ом содержании ацетонитрила в течение 20 минут и при 100%-ом содержании ацетонитрила в течение 20 минут. Фракцию подвергали дополнительному фракционированию на фракцию 16, фракцию 17 и фракцию 18 согласно полученным пикам.

Фракцию 17 (13,10 мг, выход: 0,4%) подвергали дополнительному фракционированию с применением ВЭЖХ. В качестве колонки применяли колонку Inertsil ODS-3 (10×250 мм, производства компании GL Sciences Inc.), элюирование осуществляли при скорости потока 7,5 мл/мин, детектирование осуществляли при длине волны 254 нм, применяя смесь 0,1% водный раствор муравьиной кислоты/метанол при 55% метанола в течение 45 минут. Фракцию подвергали дополнительному фракционированию на фракцию 19, фракцию 20 и фракцию 21 согласно полученным пикам, и констатировали, что активность трансглутаминазы присутствует во фракции 20 (10,3 мг, выход: 0,3%).

С применением ЯМР-анализа анализировали структуру фракции 20. В результате, как показано в таблице, фракцию 20 идентифицировали как иллюстративное соединение 18.

Пример 3-3 получения препарата соединений для сравнения

Следующие соединения (1) и (2) для сравнения были приготовлены из экстракта Thujopsis dolabrata согласно способу, описанному в патенте Японии № 4167733.

Пример 1 испытаний

Измерение активности трансглутаминазы

В 12-луночный планшет высевали клеточные линии эпидермальных кератиноцитов человека HEKn (полученные от компании Kurabo Industries Ltd.) в количестве 4×10⁴ клеток/лунку и культивировали. В качестве культуральной среды применяли имеющуюся в продаже среду EpiLife-KG2 производства компании Kurabo Industries Ltd. Культивирование клеток осуществляли в течение 1 дня при 37°C в атмосфере 5% CO₂, затем осуществляли замену культуральной среды на культуральную среду, не содержащую фактор роста (например, BPE, EGH), и добавляли экстракты, полученные по примерам 1-1 и 1-2 получения препаратов и примерам 2-1 и 2-8 получения препаратов, соответственно, в таком количестве, чтобы конечные концентрации достигали значений, приведенных в таблице 5; или добавляли растворы различных типов соединений в ДМСО, соответственно, в таком количестве, чтобы конечные концентрации достигали значений, приведенных в таблице 6. Кроме того, в качестве контроля вместо различных видов экстрактов или различных видов соединений добавляли 50 об. % водный раствор этанола, 95 об. % водный раствор этанола или ДМСО, каждый из которых является растворителем для экстракции, при конечной концентрации 0,1% (по объему), соответственно; или в качестве положительного контроля добавляли CaCl₂ при конечной концентрации 1,5 мМ, соответственно. Кроме того, эффект повышения кератинизации известен для CaCl₂, поэтому CaCl₂ применяли в качестве положительного контроля. Все это дополнительно культивировали при 37°C в течение 3 дней.

После завершения культивирования культуральную жидкость удаляли, клетки дважды промывали в ФБС(-) и собирали с помощью скребка для клеток с применением 150 мкл буферного раствора для экстракции (10 мМ буфер Tris-HCl, содержащий 0,5 мМ ЭДТА, 1% Triton X-100 и ингибиторы протеазы, pH: 7,4), получая при этом жидкость с разрушенными при обработке ультразвуком клетками. Надосадочную жидкость, полученную при центрифугировании (15000 об./мин., 10 минут), применяли в качестве лизата для проведения оценки. Активность фермента измеряли с применением набора реактивов для колориметрического микроанализа трансглутаминазы (торговая марка Transglutaminase Colorimetric Microassay Kit) согласно инструкциям производителя по применению. Концентрацию белка количественно определяли с применением набора реактивов для BCA-анализа (торговая марка BCA Protein Assay Kit, производство компании Thermo Fisher Scientific, Inc.) согласно инструкциям производителя по применению.

Результаты оценки приведены в таблице 5 и таблице 6. Для экстракта, полученного по примеру 1-1 получения препарата, активность трансглутаминазы для каждого образца экстракта выражали в относительных величинах, при этом активность трансглутаминазы в контрольном образце, к которому добавляли 50 об. % водный раствор этанола, была принята за 1. Для экстракта, полученного по примеру 1-2 получения препарата, активность выражали в относительных величинах, при этом активность трансглутаминазы в контрольном образце, к которому добавляли 95 об. % водный раствор этанола, была принята за 1. Для экстрактов, полученных по примерам 2-1 - 2-8 получения препарата, активность выражали в относительных величинах, при этом активность трансглутаминазы в контрольном образце, к которому добавляли 50 об. % раствор этанола, была принята за 1. Для различных видов соединений активность выражали в относительных величинах, при этом активность трансглутаминазы в контрольном образце, к которому добавляли ДМСО, была принята за 1.

Как показано в таблице 5, в системах, к которым добавляли экстракт Justicia procumbens или экстракт Peristrophe japonica, активность трансглутаминазы была на уровне, сопоставимом или более высоком, чем в положительном контрольном образце.

Кроме того, как показано в таблице 6, в случае соединений для сравнения (1)-(4) эффекта активации трансглутаминазы не обнаружили. Напротив, в системах, к которым добавляли соединение, представленное формулой (1), наблюдалась активация трансглутаминазы.

Кроме того, активность трансглутаминазы имеет отношение к поддержанию барьерной функции кожи, поддержанию или улучшению функции увлажнения кожи и предупреждению или уменьшению шероховатости кожи. Поэтому путем активации трансглутаминазы можно добиться предупреждения неполной эпидермальной кератинизации, улучшения функции увлажнения кожи и предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или т.п. Соответственно, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Justicia procumbens, экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1) и обладающего эффектом активации трансглутаминазы, может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи и средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Пример 2-1 испытания

Подтверждение эффекта стимулирования продукции церамидов

Нормальные эпидермальные кератиноциты человека (торговая марка: NHEK(F), производства компании Kurabo Industries, Ltd.) культивировали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в культуральной среде (торговая марка: EpiLife-KG2, производства компании Kurabo Industries, Ltd.) с применением культурального планшета.

Затем культуральную среду заменяли на EpiLife-KG2 без факторов роста, таких как эпидермальный фактор роста, разбавляли экстракт Justicia procumbens, полученный по примеру 1-2 получения препарата, доводя концентрацию до 1% (масс./об.) в расчете на содержание сухих веществ, и добавляли его к культуральной жидкости в количестве 0,01%, 0,05% или 0,1%. Альтернативно, культуральную среду заменяли на EpiLife-KG2 без факторов роста, таких как эпидермальный фактор роста, разбавляли экстракт Peristrophe japonica, полученный по примеру 2-2 получения препарата, доводя концентрацию до 1% (масс./об.) в расчете на содержание сухих веществ, и добавляли к культуральной жидкости в количестве 0,1%. Вместо экстракта Justicia procumbens или экстракта Peristrophe japonica в качестве контроля добавляли 50 об. % этанол, представляющий собой растворитель для экстракции, при конечной концентрации 0,1% (об./об.), и в качестве положительного контроля добавляли экстракт эвкалипта шаровидного (Eucalyptus globulus), приготовленный, как описано ниже, до получения конечной концентрации, приведенной в таблице 7. Влияние экстракта эвкалипта шаровидного (Eucalyptus globulus) на повышение продукции церамидов известно, поэтому такой экстракт применяли в качестве положительного контроля.

Клетки культивировали в течение 3 дней, и затем из каждой лунки собирали соответствующие клетки.

Органическую фазу, содержащую липиды, экстрагированные из собранных клеток по методу Блайя и Дайера, переносили в стеклянную пробирку и сушили досуха в токе азота. Затем сухой продукт повторно растворяли в смеси хлороформа и метанола и применяли в качестве образца липидов.

Кроме того, к клеткам, из которых были экстрагированы липиды, добавляли 0,1 н раствор NaOH и 1% водный раствор SDS и нагревали смесь при 60°C в течение 2 часов, чтобы тем самым солюбилизировать белки. Смесь охлаждали до комнатной температуры и затем добавляли 2 н раствор HCl для нейтрализации. Количество белков определяли по методу BCA.

Приготовленный таким образом образец липидов разделяли два раза с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) в горизонтальном положении с применением смеси хлороформ:метанол:уксусная кислота=190:9:1. Распыляли раствор сульфата меди с последующим нагреванием на горячей плите, чтобы тем самым детектировать церамиды. Полученную величину принимали за уровень церамидов. Здесь уровень церамидов является относительной величиной, при этом уровень церамидов при добавления 50 об. % этанола был принят за 1.

Результаты приведены в таблице 7.

Справочный материал

40 г листьев эвкалипта шаровидного (Eucalyptus globulus Labillardiere, получен от компании SHINWA BUSSAN CO., LTD.) тонко измельчали и добавляли к этому 400 мл 50 об. % этанола. Затем в течение 7 дней осуществляли экстракцию путем выдерживания при комнатной температуре. Затем экстракт фильтровали, получая при этом 291 мл экстракта эвкалипта шаровидного (Eucalyptus globulus Labillardiere). Для полученного таким образом экстракта рассчитывали количество остатка после выпаривания, и количество остатка после выпаривания составляло 3,16% (масс./об.). Полученный остаток разбавляли 50 об. % водным раствором этанола, получая при этом 1,0% (масс./об.) экстракт.

Как показано в таблице 7, в системах, к которым добавляли экстракт Justicia procumbens или экстракт Peristrophe japonica, подтверждено количественное увеличение продукции церамидов по сравнению с контрольной системой. Таким образом, стало понятно, что стимулятор продукции церамидов согласно настоящему изобретению, содержащий в качестве активного ингредиента экстракт Justicia procumbens или Peristrophe japonica, может стимулировать продукцию церамидов.

Кроме того, церамид имеет отношение к поддержанию барьерной функции кожи, поддержанию или улучшению функции увлажнения кожи и предупреждению или уменьшению шероховатости кожи. Поэтому предупреждения неполной эпидермальной кератинизации, улучшения функции увлажнения кожи и предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или т.п. можно добиться путем стимулирования продукции церамидов. Соответственно, экстракт Justicia procumbens и/или экстракт Peristrophe japonica, обладающие стимулирующим действием на продукцию церамидов, могут содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи и средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Пример 2-2 испытания

Подтверждение эффекта стимулирования продукции церамидов

Нормальные эпидермальные кератиноциты человека (торговая марка: NHEK(F), производства компании Kurabo Industries, Ltd.) культивировали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в культуральной среде (торговая марка: EpiLife-KG2, производства компании Kurabo Industries, Ltd.) с применением культурального планшета.

Затем культуральную среду заменяли на EpiLife-KG2 без факторов роста, таких как эпидермальный фактор роста, и добавляли к культуральной жидкости иллюстративное соединение (12) в количестве 0,1 мкМ. В качестве контроля вместо иллюстративного соединения (12) добавляли 50 об. % раствор этанола при конечной концентрации 0,01%.

Клетки культивировали в течение 3 дней, и затем из каждой лунки собирали соответствующие клетки.

Уровень церамидов измеряли путем применения клеток, обработанных согласно примеру 2-1 испытаний. Здесь уровень церамидов представляет собой относительную величину, при этом уровень церамидов при добавлении 50 об. % раствора этанола был принят за 1.

Результаты приведены в таблице 8.

Как показано в таблице 8, в системе к которой добавляли соединение, представленное формулой (1), подтверждено количественное увеличение продукции церамидов по сравнению с контрольной системой. Таким образом, стало понятно, что стимулятор продукции церамидов согласно настоящему изобретению, содержащий в качестве активного ингредиента соединение, представленное формулой (1), может стимулировать продукцию церамидов.

Кроме того, подобно экстракту Justicia procumbens и экстракту Peristrophe japonica соединение, представленное формулой (1) и обладающее стимулирующим влиянием на продукцию церамидов, может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи и средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Пример 3-1 испытания

Количественная оценка экспрессии инволюкрина

1. Клеточная культура

Клеточную линию эпидермальных кератиноцитов человека HaCaT выращивали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в культуральной среде, к которой добавляли 10% инактивированной плодной телячьей сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицина (производства Gibco Laboratories) в среде DMEM (производства Gibco Laboratories).

2. Оценка уровня экспрессии IVL

При первоначальном скрининге применяли набор реактивов для твердофазного иммуноферментного анализа инволюкрина (Involucrin ELISA Assay Kit BT-650, торговая марка, производство BTI) с модификацией части протокола анализа. Подробный протокол представлен ниже.

В 24-луночный планшет HaCaT высевали клетки в количестве 5×10⁴ клеток/лунку и культивировали. На следующий день проводили замену культуральной среды на культуральную среду, содержащую экстракт Peristrophe japonica, полученный по примеру 2-2 получения препарата и содержащий 1,0% (масс./об.) сухих веществ, при конечной концентрации, приведенной в таблице 9, и дополнительно культивировали в течение 24 часов. В качестве контроля вместо экстракта Peristrophe japonica для замены применяли культуральную среду, содержащую раствор этанола (50 об. %) при конечной концентрации 0,5 об. % этанола, представляющего собой растворитель для экстракции, проводили дополнительное культивирование в течение 24 часов и применяли полученный в результате культивирования продукт. Спустя 24 часа после добавления экстракта, клетки дважды промывали с помощью ФБС(-), и добавляли к клеткам 400 мкл буферного раствора для экстракции, содержащего коктейль ингибиторов протеаз (торговая марка Complete Mini Protease Inhibitor Cocktail производства Roche) в 20 мМ буфера Tris-HCl (pH: 7,5)-2 мМ ЭДТА. При этом одну крупицу коктейля ингибиторов протеаз добавляли на 10 мл буферного раствора для экстракции. В присутствии такого буферного раствора для экстракции клетки отслаивали, собирали с помощью скребка для клеток и затем подвергали обработке ультразвуком на соникаторе. Надосадочную жидкость, собранную при центрифугировании полученного раствора, применяли в качестве лизата для оценки.

Общую концентрацию белка в лизате количественно определяли с применением набора реактивов для BCA-анализа (торговая марка BCA Protein Assay Kit, производства Thermo Scientific, Inc.) согласно инструкциям производителя по применению. Лизат разбавляли буфером B (2 мМ ЭДТА, 5 г/л Tween 20, 2,5 г/л желатина в ФБС) до общего количества белка 3 мкг на лунку 96-луночного планшета и добавляли в 96-луночный планшет. Затем к этому добавляли анти-IVL-антитело (приложение к набору реактивов, степень разбавления: 1/300) и оставляли при 4°C в течение ночи для развития первичного антительного ответа. Кроме того, в еще один 96-луночный планшет (469078, производства Nalge Nunc Corporation) добавляли человеческий белок IVL (приложение к набору реактивов) при 1 нг/лунку и адсорбировали антиген при 4°C в течение ночи вместе с 10 мкл/лунку EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, производства Kanto Chemical Co., Inc.) в качестве конденсирующего средства. На следующий день раствор в планшете, на котором адсорбировали антиген, отсасывали, удаляли и добавляли к этому 100 мкл 0,1 M NH₄Cl, чтобы развить реакцию при комнатной температуре в течение 30 минут. После реакции полученный в результате реакции продукт промывали 4 раза дистиллированной H₂O (производства Gibco Laboratories) и один раз буфером B, и затем к нему добавляли 100 мкл жидкости с первичным антительным ответом, полученным в предыдущий день, чтобы осуществить взаимодействие при комнатной температуре в течение 30 минут. После такой реакции полученный при взаимодействии продукт промывали 5 раз буфером B, и добавляли к этому АР-конъюгированное противокроличье антитело (степень разбавления: 1/2000), приложенное к набору, для взаимодействия при комнатной температуре в течение 1 часа. После взаимодействия полученный при взаимодействии продукт промывали 4 раза буфером B и один раз буфером D (1 мМ MgCl₂⋅6H₂O в 0,05 М растворе карбоната/бикарбоната (торговая марка: C3041-50CAP, производства Sigma-Aldrich Corporation)), и затем добавляли 100 мкл раствора п-нитрофенилфосфата (1 мг/мл в буфере D, производства Sigma-Aldrich Corporation) для получения окрашивания. После подтверждения окрашивания измеряли коэффициент поглощения при 405 нм для количественного определения IVL.

Результаты оценки приведены в таблице 9. Уровень IVL в образце с экстрактом выражали в относительных величинах, при этом уровень IVL в контрольном образце, к которому добавляли 50% раствор этанола, был принят за 1.

Как показано в таблице 9, количество экспрессированного инволюкрина увеличивалось в системе, к которой добавляли экстракт Peristrophe japonica.

Пример 3-2 испытания

Количественная оценка экспрессии инволюкрина

1. Клеточная культура

Клеточную линию эпидермальных кератиноцитов человека HaCaT выращивали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в культуральной среде, к которой добавляли 10% инактивированной плодной телячьей сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицина (производства Gibco Laboratories) в среде DMEM (производства Gibco Laboratories).

2. Оценка уровня экспрессии IVL

При первоначальном скрининге применяли набор реактивов для твердофазного иммуноферментного анализа инволюкрина (Involucrin ELISA Assay Kit BT-650, торговая марка, производство BTI) с модификацией части протокола анализа. Подробный протокол представлен ниже.

В 6-луночный планшет HaCaT высевали клетки в количестве 5×10⁴ клеток/лунку и культивировали. На следующий день осуществляли замену на культуральную среду, содержащую иллюстративное соединение (18) в конечной концентрации, приведенной в таблице 10, и осуществляли дополнительное культивирование в течение 24 часов. В качестве контроля вместо иллюстративного соединения (18) использовали для замены культуральную среду с конечной концентрацией 0,1 об. % ДМСО, представляющего собой растворитель, осуществляли дополнительное культивирование в течение 24 часов и применяли полученный таким образом культивируемый продукт. Спустя 24 часа после добавления иллюстративного соединения (18) клетки дважды промывали ФБС(-) и экстрагировали суммарную РНК с помощью набора реактивов RNeasy (зарегистрированная торговая марка производства QIAGEN). Измеряли концентрацию суммарной РНК, и фиксированное количество суммарной РНК использовали в качестве матрицы, и проводили реакцию обратной транскрипции с использованием набора High capacity RNA-to-cDNA Kit (торговое название, компания-производитель Applied Biosystems, Inc.).

Экспрессию гена IVL количественно определяли из полученной в результате кДНК путем ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Экспрессию гена проводили в 20-мкл реакционной системе в условиях амплификации при денатурации при 95°C в течение 15 секунд, отжиге при 60°C в течение 1 минуты, и реакции удлинения. Уровень экспрессии каждого гена соотносили с количеством экспрессии RPLP0 и выражали в относительных величинах, при этом уровень экспрессии гена IVL при добавлении ДМСО был принят за 1.

Результаты приведены в таблице 10.

Как показано в таблице 10, количество экспрессированного инволюкрина повышалось в системе, к которой добавляли соединение, представленное формулой (1).

Кроме того, экспрессия инволюкрина имеет отношение к поддержанию барьерной функции кожи, поддержанию или улучшению функции увлажнения кожи и предупреждению или уменьшению шероховатости кожи. Поэтому предупреждения неполной эпидермальной кератинизации, улучшения функции увлажнения кожи и предупреждения или уменьшения шероховатости кожи или т.п. можно добиться путем увеличения экспрессии инволюкрина. Кроме того, вещество, которое увеличивает количество экспрессированного гена инволюкрина, может представлять собой промотор волнистых волос или вьющихся волос или усилитель образования волнистости. Соответственно, по меньшей мере, один тип вещества, выбранного из группы, состоящей из экстракта Peristrophe japonica и соединения, представленного формулой (1) и обладающего эффектом усиления экспрессии инволюкрина, может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи и средстве для формирования волнистых волос.

Пример 4 испытания

Около 5 г Peristrophe japonica (Lot. SB-3436), полученного от компании SHINWA BUSSAN KAISHA LTD., погружали в теплую воду, и специалист проводил идентификацию растения методом микроскопии. В результате было подтверждено, что растение содержит колос и имеет заостренный чашелистик и прозрачное белое окаймление с наличием длинных щетинок. По таким признакам растение, полученное в качестве Lot. SB-3436, идентифицировано как Justicia procumbens, а не как Peristrophe japonica.

Затем 600 г Justicia procumbens, полученной как Lot. SB-3436, тонко измельчали, добавляли к ней 6000 мл 99,5 об. % водного раствора этанола и полученную смесь подвергали экстракции при комнатной температуре в условиях спокойного выдерживания в течение 7 дней. Затем полученный экстракт фильтровали, получая при этом 4504 мл экстракта Justicia procumbens. К 4000 мл полученного экстракта добавляли 2000 мл гексана, перемешивали полученную смесь и затем дополнительно добавляли к ней 6000 мл воды. После полученную смесь подвергали распределению между несмешивающимися растворителями, и затем извлекали 8367 мл нижнего слоя. К 2500 мл полученного экстракта добавляли 1000 мл 1,3-бутиленгликоля и концентрировали полученную смесь с помощью выпарного аппарата для удаления этанола и воды. К полученной смеси добавляли 1500 мл воды и затем подвергали ее седиментации при 5°C в течение 4 дней. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием, а к 2403 л полученного фильтрата затем добавляли 40 об. % водный раствор 1,3-бутиленгликоля, получая при этом 3266 мл экстракта. Когда рассчитывали остаток после выпаривания для полученного экстракта, остаток после выпаривания составлял 0,02% (масс./об.).

На участки каждой правой-левой щеки и с наружной стороны голеней 10 здоровых мужчин и женщин постоянно в течение 4 недель дважды в день наносили лосьоны для кожи, полученные с использованием экстракта Justicia procumbens и имеющие композицию, состав которой приведен в таблице 11, или лосьоны для кожи с плацебо. После нанесения лосьонов для кожи в течение 4 недель, нанесение таких лосьонов для кожи прекращали.

Чтобы оценить характеристики кожи, уровень увлажненности рогового слоя эпидермиса и уровень шероховатости поверхности кожи в области каждой из щек и с наружной стороны голеней перед началом нанесения лосьона для кожи (0W), после постоянного нанесения лосьона для кожи в течение 4 недель (4W) и спустя 1 неделю после прекращения нанесения лосьона для кожи (5W) измеряли с помощью следующих способов.

Измерение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса

В день измерения измеряемую область очищали и затем выдерживали в условиях окружающей среды при температуре 20°C и относительной влажности 40%.

Для оценки уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса применяли корнеометр CM825MP (торговая марка, производства Courage + Khazaka Electronic GmbH) для измерения электрической емкости по 5 раз в одной области, и за значение электрической емкости описанной выше области измерения для каждого субъекта принимали среднее значение по 5 измерениям. Результаты приведены в таблице 12 (область щек) и таблице 13 (участки с наружной стороны голеней). Кроме того, рассчитывали среднее значение (по 10 субъектам) изменения значений электрической емкости после постоянного нанесения лосьона для кожи в течение 4 недель (4W) и спустя 1 неделю после прекращения нанесения лосьона для кожи (5W), при этом значение электрической емкости перед нанесением лосьона для кожи было принято за 1; Δ (величина изменения электрической емкости) была принята за величину изменения в данной области.

Измерение уровня шероховатости поверхности кожи

В день измерения измеряемую область очищали и затем выдерживали в условиях окружающей среды при температуре 20°C и относительной влажности 40%.

Чтобы оценить уровень шероховатости поверхности кожи, применяли визиосканирование с помощью видеокамеры Visioscan VC98 (торговая марка, производства Courage + Khazaka Electronic GmbH) для получения двух изображений одной области и для расчета параметра SELS (SEr) на единицу фиксированной площади с применением прилагаемого программного обеспечения, при этом среднее значение, полученное по двум изображениям, принимали за величину SEr для описанной выше области измерения для каждого субъекта. Результаты приведены в таблице 14 (для области щек) и в таблице 15 (для наружной стороны голеней). Кроме того, рассчитывали среднее значение (по 10 субъектам) величины изменения параметров SELS после постоянного нанесения лосьона для кожи в течение 4 недель (4W) и спустя 1 неделю после прекращения нанесения лосьона для кожи (5W), при этом значение параметра SELS перед нанесением лосьона для кожи было принято за 0, и ΔSEr было принято за величину изменения в данной области.

Как показано в таблице 12, в области щек величина изменения относительно исходного значения (0W), представленная как Δ (значение электрической емкости), уровень увлажненности рогового слоя эпидермиса через 5 недель (5W) были больше на участке, на который наносили лосьон для кожи, содержащий экстракт Justicia procumbens, по сравнению с участком, на который наносили лосьон для кожи с плацебо. Более конкретно, результаты таблицы 12 показывают, что экстракт Justicia procumbens обладает эффектом увеличения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса.

Как показано в таблице 13, для внешней стороны голени было обнаружено, что величина изменения уровней увлажненности рогового слоя эпидермиса относительно исходного значения (0W) через 4 недели (4W) и 5 недель (5W) и величина уменьшения уровня увлажненности были меньше на участке, на который наносили лосьон для кожи, содержащий экстракт Justicia procumbens, по сравнению с участком, на который наносили лосьон для кожи с плацебо. Более конкретно, результаты в таблице 13 показывают, что экстракт Justicia procumbens обладает ингибирующим действием на уменьшение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса.

Как показано в таблице 14, для области щек было обнаружено, что величины изменений уровней шероховатости поверхности кожи относительно исходного значения (0W), представленные как ΔSEr, через 4 недели (4W) и 5 недель (5W) повышались на участке, на который наносился лосьон для кожи с плацебо, в то время как уровень шероховатости поверхности кожи уменьшался на участке, на который наносили лосьон для кожи, содержащий экстракт Justicia procumbens. Более конкретно, результаты, приведенные в таблице 14, показывают, что экстракт Justicia procumbens обладает эффектом предупреждения или уменьшения шероховатости кожи в области щек.

Как показано в таблице 15, для внешней стороны голени было обнаружено, что величины изменений уровней шероховатости поверхности кожи относительно исходного значения (0W), представленные как ΔSEr, через 4 недели (4W) и 5 недель (5W) повышались на участке, на который наносился лосьон для кожи с плацебо, в то время как уровень шероховатости поверхности кожи уменьшался на участке, на который наносили лосьон для кожи, содержащий экстракт Justicia procumbens. Более конкретно, результаты, приведенные в таблице 15, показывают, что экстракт Justicia procumbens обладает эффектом предупреждения или уменьшения шероховатости кожи с внешней стороны голени.

Как описано выше, экстракт Justicia procumbens обладает эффектом повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибирующим действием на уменьшение уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и эффектом предупреждения или уменьшения шероховатости кожи. Соответственно, экстракт Justicia procumbens может содержаться в качестве активного ингредиента в промоторе эпидермальной кератинизации, улучшителе функции увлажнения кожи, улучшителе барьерной функции кожи, средстве для повышения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса, ингибиторе уменьшения уровня увлажненности рогового слоя эпидермиса и средстве для предупреждения или уменьшения шероховатости кожи.

Хотя настоящее изобретение описано относительно представленных вариантов осуществления, по мнению авторов, изобретение не ограничивается какими-либо подробностями описания, если не указано иначе, но наоборот должно толковаться расширительно в пределах его сущности и объема согласно прилагаемой формуле изобретения.

Данная заявка имеет приоритет патентной заявки № 2012-188767, поданной в Японии 29 августа 2012 г., патентной заявки № 2012-188768, поданной в Японии 29 августа 2012 г., и патентной заявки № 2012-278068, поданной в Японии 20 декабря 2012 г., каждая из которых включена в настоящее описание в полном объеме путем ссылки.

Реферат

Изобретение относится к косметической промышленности, а именно к применению соединения в качестве активного ингредиента промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения и уменьшения шероховатости кожи. Применение соединения, представленного формулой (1):в которой каждый из Rи Rнезависимо представляет собой атом водорода или алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода; Rпредставляет собой атом водорода или группу, образующую метилендиоксигруппу при соединении с R; каждый из Rи Rпредставляет собой атом водорода, или при соединении друг с другом Rи Rобразуют метилендиоксигруппу; Rпредставляет собой атом водорода, гидроксильную группу, алкоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, ацилоксигруппу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, или сахарный остаток, представляющий собой (D-апио-β-D-фуранозил)окси; и гидроксильная группа сахарного остатка может образовывать сложный эфир с карбоновой кислотой, в качестве активного ингредиента промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения и уменьшения шероховатости кожи. Вышеописанное соединение формулы 1 эффективно в качестве активного ингредиента промотора эпидермальной кератинизации, улучшителя функции увлажнения кожи, улучшителя барьерной функции кожи, средства для предупреждения и уменьшения шероховатости кожи. 4 з.п. ф-лы, 15 табл.

Формула