Способ дифференциации плюрипотентных стволовых клеток в мультикомпетентные почечные клетки-предшественники - RU2016106953A
Код документа: RU2016106953A
Формула
1. Способ дифференциации плюрипотентных стволовых клеток в почечные клетки-предшественники, экспрессирующие SIX2, включающий стадии:
а) получения монослоя плюрипотентных стволовых клеток в плюрипотентной среде,
б) инкубирования клеток в примирующей среде, обогащенной низкомолекулярным ингибитором киназы 3 гликогенсинтазы (Gsk3a-b),
в) индукции дифференциации путем инкубирования примированных клеток в индуцирующей среде.
2. Способ по п. 1, в котором почечные клетки-предшественники экспрессируют дополнительные маркерные гены WT1 и/или SALL1.
3. Способ по п. 1 или п. 2, в котором низкомолекулярным ингибитором киназы 3 гликогенсинтазы (Gsk3a-b) является 3-(3-аминофенил)-4-(1-метил-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион.
4. Способ по пп. 1 и 2, в котором плюрипотентная среда на стадии а) является средой без сыворотки, обогащенной ингибитором Rho-ассоциированной формирующей суперспираль серин/треониновой протеинкиназы семейства протеинкиназ (ингибитором ROCK-киназы).
5. Способ по п. 4, в котором ингибитор ROCK-киназы выбран из группы, включающей 1-(5-изохинолинсульфонил)гомопиперазин), N-бензил-2-(пиримидин-4-иламино)тиазол-4-карбоксамид) и (+)-(R)-транс-4-(1-аминоэтил)-N-(4-пиридил)циклогексанкарбоксамиддигидрохлорид).
6. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором примирующая среда на стадии б) является средой без сыворотки, обогащенной инсулином, трансферрином и прогестероном.
7. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором примирующая среда на стадии б) дополнительно включает рекомбинантный костный морфогенетический белок 4 (ВМР4).
8. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором стадия а) включает инкубирование клеток в плюрипотентной среде в течение 18-30 ч.
9. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором стадия б) включает инкубирование клеток в примирующей среде в течение 2-4 суток.
10. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором стадия в) включает инкубирование клеток в индуцирующей среде в течение 18-48 ч.
11. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором индуцирующая среда является средой без сыворотки, обогащенной рекомбинантным костным морфогенетическим белком 7 (ВМР7).
12. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором индуцирующая среда является средой без сыворотки, обогащенной ретиноевой кислотой.
13. Способ по пп. 1, 2 и 5, дополнительно включающий стадию г) инкубирования продукта стадии в) в условиях, пригодных для пролиферации подоцитов.
14. Способ по пп. 1, 2 и 5, в котором плюрипотентные стволовые клетки являются индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками.
15. Способ по п. 14, в котором индуцированные плюрипотентные стволовые клетки являются клетками человека.
16. Способ по п. 14 или 15, в котором индуцированные плюрипотентные стволовые клетки получают от субъекта с заболеванием почек.
17. Почечные клетки-предшественники, экспрессирующие SIX2, или дифференцированные подоциты, полученные способом по одному из предшествующих пунктов.
18. Биобанк почечных клеток-предшественников, экспрессирующих SIX2, или дифференцированных подоцитов, полученных способом по пп. 1-16.
19. Применение клеток по п. 17 или биобанка по п. 18 в качестве модели почечных заболеваний in vitro.
20. Терапевтическая композиция, включающая клетки по п. 17 или биобанк по п. 18.
