Среда для культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников и способы их применения - RU2005102061A

Реферат

1. Аутологическая среда культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников, содержащая

a) от 0,1 до 90 вес.% аутологической человеческой сыворотки;

b) от 0,1 до 10000 МЕ/мл гепарина;

c) от 0,1 до 10000 МЕ/мл протамина; и

d) среду культивирования с основными питательными веществами, включая или не включая глутамин, в количестве, необходимом до получения 100 вес.%.

2. Среда культивирования по п.1, при этом упомянутую аутологическую человеческую сыворотку подвергают обработке с целью инактивации комплемента.

3. Среда культивирования по п.1, при этом упомянутую аутологическую человеческую сыворотку получают из образцов крови пациента.

4. Среда культивирования по п.1, при этом упомянутую аутологическую человеческую сыворотку получают путем проведения плазмофереза у пациента-донора упомянутой сыворотки.

5. Среда культивирования по п.4, при этом упомянутый плазмоферез проводят с использованием гепарина в качестве антикоагулянта и протамина сульфата для реверсирования антикоагуляции.

6. Среда культивирования по любому из предыдущих пунктов, которая дополнительно содержит антибиотик.

7. Среда культивирования по п.6, в которой упомянутый антибиотик выбирают из пенициллина, стрептомицина, гентамицина и их смесей.

8. Среда культивирования по одному из пп.1-5, которая дополнительно содержит амфотерицин В и/или фактор роста фибробластов (FGF).

9. Среда культивирования по п.1, которая содержит 89% среды НАМ-F12; 10% аутологической человеческой сыворотки пациента гепарина 0,1-100 МЕ/мл; протамина 0,1-100 МЕ/мл; и 1% пенициллина/стрептомицина и, возможно, 0,25 мг/мл амфотерицина В и/или 0,1-250 пг/мл рекомбинантного bFGF.

10. Способ изготовления аутологической среды культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников по любому из из пп.1-9, включающий смешивание аутологической человеческой сыворотки, гепарина, протамина, основных питательных веществ, включая или не включая глутамин, возможно, вместе с антибиотиками, и/или амфотерицином В, и/или фактором роста фибробластов.

11. Способ по п.10, в котором упомянутая аутологическая человеческая сыворотка получена путем плазмофереза.

12. Применение аутологической среды культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 для культивирования in vitro, очистки и увеличения объема аутологических стволовых клеток-предшественников.

13. Способ приготовления композиции аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников, включающий инкубацию упомянутых аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников в аутологической среде культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 и очистку полученных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников.

14. Способ по п.13, в котором очистку полученных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников проводят путем использования специфических антител, обеспечивающих возможность идентификации внеклеточных антигенов, характерных для упомянутых аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников.

15. Способ по п.14, в котором упомянутые специфические и селективные антитела к упомянутым аутологическим человеческим стволовым клеткам-предшественникам соединены с магнитными микросферами.

16. Способ получения аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных, пригодных для использования в клеточной терапии, включающий инкубацию упомянутых аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных в аутологической среде культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 и очистку полученных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников.

17. Способ по п.16, в котором очистка аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных включает использование человеческих антител к CD56, возможно, соединенных с магнитными микросферами, и селекцию клеток, проявляющих фенотип CD56+/CD45-.

18. Способ по п.16, в котором очистка аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных включает проведение стадии предварительного посева клеточной культуры с целью осаждения всех или части фибробластов, присутствующих в упомянутой клеточной культуре, а затем идентификацию и выделение аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных путем использования антител к человеческому CD56, возможно, соединенных с магнитными микросферами, и селекцию клеток, которые проявляют фенотип CD56+/CD45-.

19. Способ получения аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных, на основе биопсии мышечной ткани, для изготовления фармацевтической композиции, который включает

a) проведение биопсии у пациента, являющегося объектом последующей имплантации аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных, для извлечения фрагмента ткани скелетных мышц, содержащей аутологические человеческие стволовые клетки-предшественники мышечных;

b) культивирование упомянутых аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных из ткани скелетных мышц в аутологической среде культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9, в условиях, обеспечивающих возможность развития упомянутой культуры аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных;

c) очистку упомянутых культивированных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных; и

d) сбор упомянутых очищенных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных; и, возможно,

e) замораживание упомянутых очищенных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных до изготовления упомянутой фармацевтической композиции.

20. Способ по п.19, включающий местное введение пациенту, в области биопсии, перед ее проведением, фармацевтической композиции, которая содержит фармакологическое средство, стимулирующее пролиферацию аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных.

21. Способ по п.19, в котором упомянутое фармакологическое средство включает местный анестетик, выбранный из лидокаина и бупивакаина.

22. Способ по п.19, в котором очистка аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных включает проведение стадии предварительного посева клеточной культуры с целью осаждения всех или части фибробластов, присутствующих в упомянутой клеточной культуре, а затем идентификацию и выделение аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных путем использования антител к человеческому CD56, возможно, соединенных с магнитными микросферами, и селекцию клеток, которые проявляют фенотип CD56+/CD45-.

23. Композиция, обогащенная аутологическими человеческими стволовыми клетками-предшественниками мышечных, которая включает, по меньшей мере, 70% упомянутых аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных в аутологической среде культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников мышечных по любому из пп.1-8.

24. Фармацевтическая композиция, которая включает, по меньшей мере, 20 млн клеток, при плотности клеток, по меньшей мере, 50 млн клеток/мл, и, по меньшей мере, 40% аутологических стволовых клеток-предшественников CD56+/CD45-, аутологическую среду культивирования аутологических стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 и, по меньшей мере, один наполнитель, приемлемый с фармацевтической точки зрения.

25. Фармацевтическая композиция по п.24, которая включает от 20 до 200 млн клеток, при плотности клеток от 50 до 70 млн клеток/мл, и, по меньшей мере, 70% аутологических стволовых клеток-предшественников CD56+/CD45-, аутологическую среду культивирования аутологических стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 и человеческий альбумин в количестве от 0,1 до 20 вес.% от общего количества.

26. Терапевтический способ аутологической клеточной кардиомиопластики для образования, регенерации и восстановления дисфункциональной ткани миокарда путем имплантации фармацевтической композиции, включающей аутологические человеческие стволовые клетки-предшественники мышечных, регенераторы сердечной ткани, выращенные ex vivo в аутологической среде культивирования, включающий упомянутую процедуру извлечения образца материала из тела пациента, являющегося объектом последующей имплантации, который содержит аутологические человеческие стволовые клетки-предшественники мышечных, выращивание упомянутых клеток путем культивирования в аутологической среде культивирования аутологических стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 и имплантацию собранных аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников пациенту, у которого был предварительно извлечен такой материал, содержащий аутологические человеческие стволовые клетки-предшественники мышечных.

27. Терапевтический способ аутологической клеточной кардиомиопластики для образования, регенерации и восстановления дисфункциональной ткани миокарда путем имплантации фармацевтической композиции, включающей аутологические человеческие стволовые клетки-предшественники мышечных, регенераторы сердечной ткани, выращенные ех vivo в аутологической среде культивирования; при этом упомянутый способ включает следующие этапы:

a) биопсию скелетной мышцы у пациента, предпочтительно, с предварительной обработкой мышцы путем внутримышечной инъекции местного анестетика;

b) приготовление среды культивирования аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников по любому из пп.1-9 на основе аутологической сыворотки пациента;

c) приготовление композиции, обогащенной аутологическими человеческими стволовыми клетками-предшественниками мышечных на основе биопсии а) и среды культивирования b);

d) приготовление фармацевтической композиции на основе композиции с); и

е) имплантацию фармацевтической композиции аутологических стволовых клеток-предшественников d) в пораженные участки миокарда.

28. Способ по п.27, в котором имплантацию упомянутой композиции аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников осуществляют путем прямой инъекции в периферическую область инфарктного рубца или путем инъекции в интракоронарные пространства обоих желудочков.

29. Способ по п.27, в котором имплантацию упомянутой композиции аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников осуществляют путем системного или интракоронарного введения через подкожный венозный доступ.

30. Способ по п.27, в котором имплантацию упомянутой композиции аутологических человеческих стволовых клеток-предшественников осуществляют при помощи роботизированной и компьютеризованной системы.