Генная терапия критической ишемии конечностей с использованием эндотелиальной синтазы оксида азота (enos) дикого типа или мутантной - RU2005107414A

Реферат

1. Способ лечения критической ишемии конечности (КИК), заключающийся в том, что пациенту, который нуждается в таком лечении, вводят эффективное количество полинуклеотида, кодирующего полипептид eNOS млекопитающего.

2. Способ по п.1, в котором полипептид eNOS представляет собой человеческий полипептид eNOS.

3. Способ по п.2, в котором аминокислотная последовательность человеческого полипептида eNOS представлена в SEQ ID N0:1.

4. Способ по п.3, в котором полипептид eNOS несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку в человеческой eNOS, который является фосфорилированным в клетках млекопитающих.

5. Способ по п.4, в котором полипептид eNOS несет мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495 последовательности SEQ ID NO:1.

6. Способ по п.4, в котором полипептид eNOS несет мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177 последовательности SEQ ID NO:1.

7. Способ по п.4, в котором полипептид eNOS несет первую мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, и вторую мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177 последовательности SEQ ID NO:1.

8. Способ по п.4, в котором полипептид eNOS несет первую мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, вторую мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177, и третью мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 2 последовательности SEQ ID NO:1.

9. Способ по пп.6, 7 или 8, в котором мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на A1a, Va1, Leu или I1е.

10. Способ по пп.6, 7 или 8, в котором мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177, представляет собой аминокислотную замену на Asp.

11. Способ по п.8, в котором мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 2, представляет собой аминокислотную замену на A1a.

12. Способ по п.4, в котором фосфорилирование полипептида eNOS повышают или понижают по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

13. Способ по п.4, в котором полипептид eNOS обладает повышенной аффинностью к связыванию с калмодулином по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

14. Способ по п.4, в котором зависимость от Са++ понижается при опосредуемой Са++-калмодулином стимуляции полипептида eNOS по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

15. Способ по п.4, в котором полипептид eNOS обладает повышенной активностью eNOS по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

16. Способ по п.15, в котором активность представляет собой продуцирования NO.

17. Способ по п.15, в котором активность представляет собой редуктазную активность.

18. Способ по пп.12, 13, 14, 15, 16 или 17, в котором аминокислотная последовательность полипептида, с которым проводят сравнение, представляет собой аминокислотную последовательность человеческой eNOS или выведена из нее.

19. Способ по п.18, в котором аминокислотная последовательность полипептида, с которым проводят сравнение, представляет собой SEQ ID NO:1 или выведен из нее.

20. Способ по п.4, в котором аминокислотная последовательность полипептида eNOS практически гомологична аминокислотной последовательности человеческой eNOS.

21. Способ по п.20, в котором аминокислотная последовательность полипептида eNOS идентична на 95-99% аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1.

22. Способ по п.1 или 4, в котором полинуклеотид представляет собой рекомбинантный вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид eNOS, и эту последовательность функционально связывают по меньшей мере с одной регуляторной последовательностью таким образом, чтобы полипептид экспрессировался в клетках.

23. Способ по п.22, в котором нуклеотидную последовательность функционально связывают с промотором.

24. Способ по п.23, в котором рекомбинантный вектор представляет собой вирусный вектор.

25. Способ по п.24, в котором вирусный вектор представляет собой аденовирусный вектор.

26. Способ по п.1 или 4, в котором лечение предусматривает модуляцию активности eNOS в клетках пациента.

27. Способ по п.26, в котором клетки представляют собой эндотелиальные клетки.

28. Способ по п.26, в котором клетки представляют собой клетки, полученные из клеток костного мозга.

29. Способ по п.1 или 4, в котором пациенту вводят один или несколько ангиогенных факторов до, во время или после введения полинуклеотида.

30. Способ по п.29, в котором ангиогенные факторы выбирают из группы ангиогенных факторов, включающей HGF, VEGF, FGF, эндотелиальный фактор роста, эпидермальный фактор роста, тромбоцитарный фактор роста, TGF-альфа, TGF-бета, PDGF, TNA-альфа или IGF, De1-1.

31. Способ по п.1 или 4, в котором введение заключается в том, что интродуцируют полинуклеотид в клетки пациента ex vivo.

32. Способ по п.1 или 4, в котором введение заключается в том, что вводят полинуклеотид в пораженную заболеванием ткань пациента.

33. Способ по п.1 или 4, в котором введение заключается в том, что вводят полинуклеотид в периферическую сосудистую систему пациента.

34. Способ по п.33, в котором введение осуществляют путем внутримышечной инъекции или внутриартериальной инъекции в мышцу конечности пациента.

35. Способ лечения ангиогенеза, заключающийся в том, что пациенту, который нуждается в таком лечении, вводят эффективное количество полинуклеотида, кодирующего полипептид eNOS, где полипептид eNOS несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку eNOS млекопитающего, который является фосфорилированным в клетках млекопитающего.

36. Способ уменьшения интенсивности симптомов микрососудистой дисфункции, заключающийся в том, что пациенту, который нуждается в таком лечении, вводят эффективное количество полинуклеотида, кодирующего полипептид eNOS, где полипептид eNOS несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку eNOS млекопитающего, который является фосфорилированным в клетках млекопитающего.

37. Способ лечения критической ишемии конечностей (КИК), заключающийся в том, что пациенту, который нуждается в таком лечении, вводят эффективное количество полинуклеотида, кодирующего полипептид eNOS, где полипептид eNOS несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку eNOS млекопитающего, который является фосфорилированным в клетках млекопитающего.

38. Способ по пп.35, 36 или 37, в котором полипептид eNOS несет мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495 последовательности SEQ ID NO:1, и мутация представляет собой аминокислотную замену на A1a, Va1, Leu или I1е.

39. Способ по пп.35, 36 или 37, в котором полипептид eNOS несет мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177 последовательности SEQ ID NO:1, и мутация представляет собой аминокислотную замену на Asp.

40. Способ по пп.1, 35, 36 или 37, в котором полипептид eNOS несет

I) первую мутацию в положении, соответствующем аминокислоте 495, и первая мутация представляет собой аминокислотную замену на A1a, Va1, Leu или I1е; и

II) вторую мутацию в положении, соответствующем аминокислоте 1177 последовательности SEQ ID NO:1, и вторая мутация представляет собой аминокислотную замену на Asp.

41. Способ по пп.1, 35, 36 или 37, в котором полипептид eNOS несет

I) первую мутацию в положении, соответствующем аминокислоте 495, и первая мутация представляет собой аминокислотную замену на A1a, Va1, Leu или I1е;

II) вторую мутацию в положении, соответствующем аминокислоте 1177 последовательности SEQ ID NO:1, и вторая мутация представляет собой аминокислотную замену на Asp; и

III) третью мутацию в положении, соответствующем аминокислоте 2 последовательности SEQ ID NO:1, и третья мутация представляет собой аминокислотную замену на A1a.