Мутанты enos, пригодные для генной терапии - RU2005107410A

Реферат

1. Выделенный мутантный полипептид eNOS, который несет одну или несколько мутаций в аминокислотной последовательности, соответствующей функциональному домену eNOS млекопитающего, где по меньшей мере одна мутация находится

I) в положении, соответствующем аминокислотному остатку в домене связывания калмодулина, который фосфорилируется в клетках млекопитающего;

и

II) не представляет собой аминокислотную замену на А1а или Asp, если мутантный полипептид eNOS имеет одну мутацию, и эта одна мутация находится в указанном положении.

2. Мутантный полипептид eNOS по п.1, где аминокислотный остаток представляет собой аминокислотный остаток 495 человеческой eNOS.

3. Мутантный полипептид eNOS по п.2, где аминокислотная последовательность человеческой eNOS представлена в SEQ ID N0:1.

4. Мутантный полипептид eNOS по п.3, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на G1y, Va1, Leu, He, Pro, Phe, Tyr, Trp, Met, Ser, Cys, G1u, Asn, Gin, Lys, Arg или His.

5. Мутантный полипептид eNOS по п.4, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на Va1, Leu или Ile.

6. Мутантный полипептид eNOS по п.5, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на Va1.

7. Мутантный полипептид eNOS по п.3, где мутантный полипептид дополнительно несет по меньшей мере одну мутацию в одном или нескольких функциональных доменах, отличных от домена связывания калмодулина.

8. Мутантный полипептид eNOS по п.7, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на A1a, Va1, Leu или Не.

9. Мутантный полипептид eNOS по п.8, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на A1a или Va1.

10. Мутантный полипептид eNOS по п.9, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 495, представляет собой аминокислотную замену на Va1.

11. Мутантный полипептид eNOS по п.8, где мутантный полипептид дополнительно несет по меньшей мере одну мутацию в аминокислотной последовательности, соответствующей сайту миристоилирования человеческой eNOS.

12. Мутантный полипептид eNOS по п.11, где мутантный полипептид несет мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 2 человеческой eNOS.

13. Мутантный полипептид eNOS по п.12, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 2, представляет собой аминокислотную замену на A1a.

14. Мутантный полипептид eNOS по п.8, где мутантный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию в аминокислотной последовательности, соответствующей редуктазному сайту человеческой eNOS.

15. Мутантный полипептид eNOS по п.14, где мутантный полипептид несет мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177 человеческой eNOS.

16. Мутантный полипептид eNOS по п.15, где мутация в положении, соответствующем аминокислотному остатку 1177 человеческой eNOS, представляет собой аминокислотную замену на Asp.

17. Мутантный полипептид eNOS по п.16, мутантный полипептид дополнительно содержит мутацию в положении, соответствующем аминокислотному остатку 2 человеческой eNOS, и эта мутация представляет собой аминокислотную замену на А1а.

18. Мутантный полипептид eNOS по п.1, где фосфорилирование мутантного полипептида повышают или понижают по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

19. Мутантный полипептид eNOS по п.1, где полипептид обладает повышенной аффинностью к связыванию с калмодулином по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

20. Мутантный полипептид eNOS по п.1, где зависимость от Са++ понижается при опосредуемой Са++-калмодулином стимуляции полипептида по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

21. Мутантный полипептид eNOS по п.1, где мутантный полипептид обладает повышенной активностью eNOS по сравнению с полипептидом eNOS, с которым проводят сравнение.

22. Мутантный полипептид eNOS по п.21, где активность представляет собой продуцирование N0.

23. Мутантный полипептид eNOS по п.21, где активность представляет собой редуктазную активность.

24. Мутантный полипептид eNOS по пп.18, 19, 20, 21, 22 или 23, где аминокислотная последовательность полипептида, с которым проводят сравнение, представляет собой или ее выводят из аминокислотной последовательности человеческой eNOS.

25. Мутантный полипептид eNOS по п.24, где аминокислотная последовательность полипептида, с которым проводят сравнение, представляет собой или ее выводят из SEQ ID N0:1.

26. Выделенный мутантный полипептид eNOS, где аминокислотная последовательность мутантного полипептида практически гомологична аминокислотной последовательности мутантного полипептида eNOS по п.1.

27. Выделенный мутантный полипептид eNOS, где аминокислотная последовательность мутантного полипептида идентична на 95-99% аминокислотной последовательности мутантного полипептида по п.26.

29. Выделенный полинуклеотид, кодирующий мутантный полипептид по п.1.

30. Рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотид по п.29, функционально связанный по меньшей мере с одной регуляторной последовательностью.

31. Фармацевтическая композиция, содержащая мутантный полипептид по п.1.

32. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по п.29.

33. Компонент, связывающийся с мутантным полипептидом по п.1.

34. Связывающийся компонент по п.33, где связывающийся компонент представляет собой полипептид.

35. Связывающийся компонент по п.34, где связывающийся компонент представляет собой антитело или антигенспецифический фрагмент антитела.

36. Способ модуляции активности eNOS в клетке, заключающийся в том, что в клетку вводят мутантный полипептид по п.1.

37. Способ модуляции активности eNOS в клетке, заключающийся в том, что в клетку вводят полинуклеотид по п.29, так, чтобы мутантный полипептид экспрессировался в клетке.

38. Способ диагностики состояния, связанного с аномальной активностью eNOS, заключающийся в том, что

I) приводят в контакт клетку пациента с полинуклеотидом по п.29; и

II) определяют уровень активности eNOS, свидетельствующей о наличии медицинского состояния.

39. Профилактический или терапевтический способ лечения состояния, связанного с аномальной активностью eNOS, заключающийся в том, что пациенту, который нуждается в лечении, вводят эффективное количество мутантного полипептида по п.1.

40. Профилактический или терапевтический способ лечения состояния, связанного с аномальной активностью eNOS, заключающийся в том, что пациенту, который нуждается в лечении, вводят эффективное количество полину клеотида, кодирующего мутантный полипептид по п.1, так, чтобы мутантный полипептид экспрессировался в организме пациента.

41. Способ по п.39, в котором пациенту дополнительно вводят один или несколько ангиогенных факторов до, в процессе или после введения мутантного полипептида.

42. Способ по п.40, в котором пациенту дополнительно вводят один или несколько ангиогенных факторов до, в процессе или после введения полинуклеотида.