Экстракт из надземных частей овса, выращенного до начала колошения - RU2517346C2

Описание

Настоящее изобретение относится к экстракту надземных частей овса, преимущественно выращенного до начала колошения, и к его применению для лечения воспалительных дерматозов.

Овес, или Avena sativa L., является однолетним растением, которое может достигать высоты 1 м 50 см. При проращивании молодое растение растет как газон, а затем дает несколько стеблей с особым характером роста. Стебель, или стерня, является полым, диаметром несколько миллиметров, прерванным в тех местах, где насажены листья, сплошными диафрагмами, называемыми узлами. Промежутки между узлами, сначала очень короткие в основании стебля, становятся все более длинными.

Листья являются очередными, двурядными, матового сине-зеленого цвета; они насажены на стебель в узлах посредством длинного разделенного спереди влагалища, которое покрывает почти все верхнее пространство междоузлия. Листовая пластинка отделена от него под прямыми углами. Она является широкой, имеет полосчатую структуру, покрыта множеством параллельных жилок (пряможилковатая); обычно она является опушенной. На листовой пластинке, где отделяется влагалище, наблюдают удлинение тонкой пленки влагалища, называемое язычком, которое является коротким и усеченным, между стеблем и листовой пластинкой.

Стебель заканчивается большим соцветием-метелкой, раскидистым во всех направлениях, очень рыхлой пирамидальной формы, все ветви которой заканчиваются элементарным соцветием постоянной структуры во всем семействе Роасеае и называются вторичным колоском. Вторичные колоски являются висячими, относительно большими и содержат только два цветка. Вторичный колосок закладывается не в пазухе маточного прицветника, а на коротком расстоянии от его насаживания, он несет два характерных противоположных прицветника, называемых колосковыми чешуями.

Колосковые чешуи овса имеют большой размер; они достигают длины 2 см и полностью заключают в себе вторичный колосок; они являются ланцетовидными, снабженными 7-9 жилками и опушенными. Цветковые чешуи являются маленькими; наружная цветковая чешуя несет изогнутую грань, насажена не на верхушку, а сзади и длиннее вторичного колоска более чем на один сантиметр.

Непосредственно над цветковыми чешуями ось цветка несет две маленькие почти не видимые части, пленочки и, наконец, настоящий цветок, который редуцирован до трех тычинок и до трех плодолистиков. Тычинки сначала являются по существу сидячими, затем видна их сеть, внезапно удлиняющаяся при цветении, так что пыльники становятся выступающими и свисают с вторичного колоска. Пыльники насажены на сеть исключительно через их срединную область, в связи с чем они называются средне-прикрепленными или качающимися пыльниками. Три плодолистика образуют одногнездную завязь с рыльцем пестика, которое разделено на очень раскидистые и перистые рыльцевые доли. Все эти признаки соответствуют опылению ветром. Имеется только одна семяпочка, которая является анатропной и расположена прямо на дне полости семяпочки.

Плод представляет собой односемянной плод определенного типа, где наружное основание непосредственно прикреплено против перикарпия. Этот плод называется зерновкой. Он представляет собой продолговатое, суженное, опушенное зерно, имеющее массивный крахмалистый протеин. Зародыш имеет очень развитую семядолю, окружающую подсемядольное колено почти полностью и отделяющую его от протеина. Весь зародыш отклонен набок.

Плод овса признан лекарственным растительным сырьем для перорального применения в качестве слабительного средства за счет его балластного эффекта, но также в случае холестеринемии или диабета типа 2 вследствие содержания в нем β-глюкана. Местным путем плод овса, в основном, применяют в виде муки, вид которой, называемый экстрактом коллоидов овса, имеет фармакопейную статью в США, Pharmacopoeia USP 22, 1990. Этот коллоидный экстракт обладает мягчительными и успокаивающими свойствами и определен как порошок, полученный в результате перемалывания и других обработок цельного зерна, где данный сорт, таким образом, соответствует овсяной муке. В фармакопейной статье изложены стандарты вязкости, микробиологической чистоты, потерь влаги при сушке, размера частиц и содержания золы, липидов и азота.

Из той же части овса можно также экстрагировать масло, применяемое в косметологии, и белки. Последние, которые являются нерастворимыми, нельзя использовать непосредственно, но только после ферментативного или химического гидролиза. Получают в большей или меньшей степени обработанный гидролизат, из которого можно получить либо пептиды овса с различными молекулярными массами, либо аминокислоты в зависимости от силы гидролиза. Гидролизованные белки овса были исследованы на их свойства в областях косметологии и дерматологии. Так, были продемонстрированы их свойства для волос, такие как способность, которой обладают эти белки, к образованию пленки на стержне волоса, к проникновению в кутикулу и, таким образом, за счет полученного в результате обволакивающего эффекта, к обеспечению кондиционирующего эффекта.

В работе, проведенной in vitro на клеточных культурах, можно было оценить противовоспалительную активность экстракта коллоидов овса. Так, этот экстракт показал ингибиторную активность на кожный метаболизм арахидоновой кислоты и эйкозаноидов, на экспрессию цитозольной фосфолипазы А₂ и циклооксигеназы на линии кератиноцитов человека, а также индукцию активности противовоспалительного цитокина TGFβ1. Цитокины Th1 и Th2 иммунных клеток, такие как IL₂, IL₄, IL₅, IL₁₃, также регулируются этим коллоидным экстрактом. Наконец, клиническое исследование показывает пользу экстракта коллоидов овса на модели кожного воспаления в двойной слепой модели раздражения кожи и на 12 здоровых волонтерах.

Наружная часть зерна обеспечивает глюканы, используемые в диететике в волокнах овса с целью снижения уровня холестерина и риска сердечно-сосудистых заболеваний.

Глюканы овса были также исследованы на их придающие вязкость и гелеобразующие свойства для использования в качестве пищевой добавки.

Глюканы, экстрагированные из овса, также обладают иммуностимулирующей активностью. Продемонстрированы другие активности, придающие ценность в области косметологии: защита против повреждающих эффектов УФ излучения, стимуляция клеточного метаболизма, стимуляция синтеза коллагена и улучшение прочности волос на растяжение.

Отдельно от зерна овес используют в качестве кормового растения. Срезанный молодым, он обеспечивает высокоценный зеленый корм. Соломой овса кормят лошадей, коров и овец, но не используют ее в питании человека. В традиционной медицине овсяную солому применяют для приготовления ванн для облегчения ревматических болей, ишиаса и поражений печени.

В Индии обычные отвары овса применяли для избавления от привыкания к порошку опиума. Спиртовой экстракт, приготовленный из свежих растений, применяли для избавления от табака со статистически значимыми результатами.

Ванны на основе овсяной соломы или коммерческие экстракты имеют в качестве показаний: ревматизмы, невралгию, хроническую экзему, нейродермит, периферические сосудистые расстройства и т.д.

«Галеновые препараты» овса являются предметом статьи ЕАЛС (Европейского агентства по оценке лекарственных средств) (Ссылка: ЕМЕА/НМРС/202966/2007), в которой упомянуто применение либо высушенных надземных частей растения, собранных до цветения, либо жидкого экстракта (1:5, 45% об./об. этанола), приготовленного из свежих надземных частей растения, собранного в период цветения.

Описано традиционное применение этих надземных частей в случае легкого эмоционального стресса и для стимуляции засыпания.

На основании библиографии надземные части овса содержат:

Флавоноиды:

- С-гликозилфлавоны апигенинового типа (витексин, изофитексин…) или лютеолин (ориентин, изоориентин, изоскопарин…),

- О-гликозилированные флавоны трицинового типа,

- Флавонолигнаны (салколины А и В)

- Бисдесмозидные стероидные сапонины: Авенакозиды А и В (агликон : нуатигенин)

- Белки

- Другое: Фенольные соединения (Авенаантрамиды, гидроксикоричные кислоты…), стерины, цереброзиды…

Атопический дерматит (или атопическая экзема) является частым дерматологическим заболеванием, поражающим 10-15% новорожденных во Франции, частота которого возрастает в последние десятилетия.

Атопический дерматит является кожным симптомом атопии, которая представляет собой хронический воспалительный дерматит или экзему, встречается при генетически детерминированном состоянии, поражая 15-30% детей и 2-10% взрослых; его распространенность постоянно возрастает в индустриальных странах, она удвоилась и даже утроилась в течение трех последних десятилетий, и в настоящее время рассматривается как основная проблема здравоохранения. Атопический дерматит часто связан с другими атопическими расстройствами, такими как аллергический ринит и астма. Это поражение чаще всего возникает в детстве и характеризуется периодическими вспышками в течение нескольких лет. Он проявляется высыпаниями, чередующимися со спонтанными ремиссиями.

Качество жизни пациентов, пораженных атопическим дерматитом, глубоко нарушено. Утвержденные терапии включают кортикостероиды и местные иммуномодуляторы, системные агенты, частые вторичные эффекты которых ограничивают долгосрочное применение, мягчительные средства. Современная терапия является реактивной - лечение вспышек - но в настоящее время установлено, что раннее вмешательство, сфокусированное на борьбе с высыпаниями и с кожным воспалением, может быть полезно в отношении борьбы как с заболеванием, так и с возможным возникновением астмы и/или ринита (BIEBER, Т. 2008, Atopic dermatitis, The New England Journal of Medicine, Vol 358 (14) 1483-1494), причем атопический дерматит рассматривают как первоначальную фазу так называемого атопического развития. В большинстве случаев сопутствующее местное лечение обеспечивает дополнение к применяемым способам лечения и приносит облегчение пациенту. Существует значительная потребность в терапии, альтернативной терапии кортикостероидами.

Атопический дерматит является результатом комплексных взаимодействий между генетическими предрасположенностями, факторами окружающей среды, такими как аллергены и микроорганизмы, дисфункцией кожного барьера, нарушением регуляции иммунной системы (SPERGEL, JM. 2008, Immunology and treatment ofatopic dermatitis, Am J Clin Dermatol, Vol 9(4) 233-244).

Псориаз также представляет собой кожное воспалительное заболевание с хроническим развитием; он поражает 2% населения. Вместе с атопическим дерматитом он является наиболее частым хроническим воспалительным заболеванием кожи. Он характеризуется аномальным ростом эпидермальных клеток, ассоциированным с воспалительной реакцией. Центральный механизм этого воспалительного феномена связан с действием Т клеток иммунной системы, преимущественно клеток типа Th1 (WILSMANN-THEIS, D.; HAGEMANN, Т.; JORDAN, J.; BIEBER, Т.; NOVAK, N. 2008, Facing psoriasis and atopic dermatitis: are there more similarities or more differences? Eur J Dermatol, Vol 18 (2) 172-180), которые инициируют и поддерживают воспалительный процесс и стимулируют избыточную пролиферацию кератиноцитов, которые затем претерпевают ускоренную и неполную фазу дифференциации. Кератиноциты экспрессируют рецепторы, которые делают их чувствительными к воспалительным сигналам, и высвобождают провоспалительные медиаторы. Псориатическое воспаление, таким образом, поддерживается взаимной стимуляцией Т клеток и кератиноцитов.

Таким образом, это заболевание нужно лечить длительное время.

Следовательно, существует необходимость и сильная потребность в терапевтических альтернативах этим воспалительным дерматозам.

Неожиданно и удивительно авторы изобретения показали новые пути к дополнительной ценности экстрактов надземных частей овса в терапии и косметологии/дерматологии. Преимущество состоит в том, что этот экстракт обладает иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами, полезными при лечении атопического дерматита. Экстракт в соответствии с настоящим изобретением также проявляет хорошие способности к лечению угрей и старения кожи.

Объектом настоящего изобретения, таким образом, является экстракт надземной части/частей овса, исключая зерно, характеризующийся содержанием 2-15% флавоноидов и 0,2-2% авенакозидов А и В.

Под надземными частями овса, в смысле настоящего изобретения, подразумевается любая часть растения овса, расположенная над землей, за исключением зерна.

Предпочтительно надземные части овса включают листья, и/или стебли, и/или вторичные колоски, и/или цветки.

Полученный экстракт овса характеризуется содержанием представляющих интерес флавоноидов и сапонинов. Последние анализируют с помощью жидкостной хроматографии высокого давления двумя различными способами, пригодными для каждого типа соединений.

Содержание этих различных молекул варьирует в зависимости от условий экстракции. Основными флавоноидами являются изовитексин-2"-O-арабинопиранозид и изоориентин-2"-O-арабинопиранозид. Авенакозиды А и В являются основными сапонинами. Они представляют собой бисдесмозидные стероидные сапонины.

Предпочтительно экстракт в соответствии с изобретением содержит долю 5-10% основных флавоноидов: изовитексин-2"-O-арабинопиранозида и изоориентин-2"-O-арабинопиранозида.

Предпочтительно экстракт в соответствии с изобретением представляет собой экстракт, полученный в органическом растворителе.

Предпочтительно экстракт в соответствии с изобретением содержит менее 1 млн^-1 (ppm) белков, предпочтительно менее 0,5 млн^-1 и еще более предпочтительно менее 0,3 млн^-1 белков.

Предпочтительно экстракт в соответствии с изобретением представляет собой экстракт надземных частей овса, собранных до начала колошения.

В смысле настоящего изобретения «надземные части овса, собранные до колошения», означают надземные части овса, собранные после прорастания (примерно от 2 недель до 2 месяцев после прорастания) в течение стадии выхода в трубку непосредственно перед колошением, не включая его.

В смысле настоящего изобретения «выход в трубку» означает стадию роста, которая соответствует удлинению стебля и началу формирования колоса, перед цветением.

Другим объектом настоящего изобретения является способ получения экстракта надземной части/частей овса, где эта надземная часть/части не содержит никаких зерен, включающий приведенные ниже стадии:

- высушивание и перемалывание надземной части/частей овса,

- экстракция в органическом растворителе, выбранном из группы, состоящей из кетонов, сложных эфиров, C₁-C₄спиртов и смесей в любом смешиваемом соотношении этих растворителей, и

- центрифугирование или фильтрование.

Предпочтительно органический растворитель в соответствии с изобретением выбран из группы, состоящей из ацетона, метилэтилкетона, метилизобутилкетона, этилацетата, C₁-C₄спирта и смесь в любом смешиваемом соотношении этих растворителей.

Предпочтительно надземную часть собирают после 2 месяцев, в конце выхода в трубку, но до начала колошения, а затем высушивают и перемалывают.

Экстракцию осуществляют при перемешивании или статическим путем.

Экстракцию осуществляют при кипячении с обратным холодильником или при комнатной температуре.

Предпочтительно экстракцию осуществляют в соотношении растение/растворитель, которое может варьировать от 1/7 до 1/20, предпочтительно от 1/8 до 1/12.

Предпочтительно экстракцию осуществляют в течение периода от 30 минут до 48 часов, более предпочтительно от 60 до 120 минут.

Экстракцию можно возобновлять 2 или 3 раза.

Затем выжимки, полученные в результате стадии экстракции, отделяют от экстракта путем центрифугирования или фильтрования, и раствор можно в большей или меньшей степени концентрировать до получения сухого экстракта.

Обработку обесцвечиванием можно проводить либо с обезжириванием путем концентрирования, осаждения и фильтрования, либо путем добавления к концентрированному или неконцентрированному экстрагированному раствору абсорбирующего носителя, такого как активированный уголь или адсорбирующая смола.

Носитель можно добавлять во время стадии высушивания в массовых долях относительно экстрагированного сухого вещества, которые могут варьировать от 1 до 75%. Носитель может представлять собой сахар, такой как мальтодекстрин, лактоза, кремнезем или любой другой косметологически приемлемый носитель.

Другим объектом настоящего изобретения является экстракт надземных частей овса за исключением зерна, который может быть получен способом в соответствии с изобретением.

Предпочтительно этот экстракт получают путем экстракции ацетоном или смесью ацетон/вода, содержащей вплоть до 20% воды.

Экстракт ацетонового или ацетоно-водного типа с 20% воды включает интересующие молекулы, флавоноиды и сапонины и очень значительно обеднен белками. Действительно, способы дозирования белков, описанные в Европейской Фармакопее, не дают никакого результата, и миграция в геле ДСН-ПААГ с помощью электрофореза после осаждения из ацетона и выявление с помощью Кумасси синего или нитрата серебра показывает отсутствие какой-либо полосы, сигнализирующей о присутствии белка. Путем нанесения контроля на тот же электрофорез возможно количественно определить предел обнаружения белка до 1 нг, таким образом, данный экстракт имеет содержание белка менее 1 млн^-1(сниженное до количества экстракта, нанесенного на гель). Предпочтительно указанное содержание белка составляет менее 0,5 млн^-1 и даже более предпочтительно менее 0,3 млн^-1 белков.

Другой объект настоящего изобретения относится к дерматологической или косметической композиции, содержащей экстракт в соответствии с изобретением и один или более чем один либо дерматологически, либо косметологически приемлемый эксципиент соответственно.

Композиция в соответствии с изобретением может, в частности, содержать добавки и вспомогательные вещества композиций, такие как эмульгаторы, загустители, гелеобразующие агенты, закрепители воды, лиофилизирующие агенты, стабилизаторы, красители, ароматизаторы и консерванты.

Косметическая или дерматологическая композиция в соответствии с изобретением дополнительно содержит обычные дерматологически совместимые эксципиенты.

Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением содержит количество экстракта надземной части/частей овса в качестве активного ингредиента, включающее от 0,1 до 5 масс.% от общей массы композиции.

Предпочтительно указанное количество экстракта составляет от 0,1% до 0,5 масс.% от общей массы композиции.

Дерматологическую или косметическую композицию в соответствии с настоящим изобретением можно готовить в виде эмульсии вода-в-масле (В/М) или масло-в-воде (М/В) в виде многофазной эмульсии, такой как, например, эмульсия вода-в-масле-в-воде (В/М/В) или масло-в-воде-в-масле (М/В/М), микроэмульсии или даже гидродисперсии или липодисперсии, геля или аэрозоля.

Дерматологически или косметологически совместимые эксципиенты могут представлять собой любой эксципиент среди тех, которые известны специалистам в данной области техники, с целью получения композиции для местного применения в виде молочка, крема, бальзама, масла, лосьона, геля, вспенивающегося геля, мазей, спрея и т.д.

Другой объект настоящего изобретения относится к экстракту в соответствии с изобретением для применения в качестве лекарственного средства.

Другой объект настоящего изобретения относится к экстракту в соответствии с изобретением для применения при лечении воспалительных дерматозов.

Другой объект настоящего изобретения относится к экстракту в соответствии с изобретением для применения при лечении атопического дерматита, псориаза или экземы, которые представляют собой воспалительные дерматозы.

Другой объект настоящего изобретения относится к применению экстракта в соответствии с изобретением для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения воспалительных дерматозов.

Другой объект настоящего изобретения относится к применению экстракта в соответствии с изобретением для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения атопического дерматита, псориаза или экземы, которые представляют собой воспалительные дерматозы.

Другой объект настоящего изобретения относится к экстракту в соответствии с изобретением для применения при лечении угрей или старения кожи.

Другой объект настоящего изобретения относится к применению экстракта в соответствии с изобретением в косметической и/или дерматологической композиции, предназначенной для лечения угрей или старения кожи.

Другой объект настоящего изобретения относится к экстракту в соответствии с изобретением для применения при лечении розовых угрей.

Другой объект настоящего изобретения относится к применению экстракта в соответствии с изобретением в косметической и/или дерматологической композиции, предназначенной для лечения розовых угрей.

Розовые угри представляют собой воспалительное и хроническое заболевание кожи лица. Оно является неизлечимым, чаще всего доброкачественным кожным заболеванием, которое проявляется хроническими красными бляшками на носу, на щеках, иногда также на подбородке и на лбу.

Другой объект настоящего изобретения относится к экстракту в соответствии с изобретением для применения при лечении чувствительной кожи.

Другой объект настоящего изобретения относится к применению экстракта в соответствии с изобретением в косметической и/или дерматологической композиции, предназначенной для лечения чувствительной кожи.

Под чувствительной кожей в смысле настоящего изобретения подразумевают кожу с повышенной чувствительностью. Чувствительная кожа, или реактивная кожа, представляет собой синдром, характеризующийся нейросенситивными признаками, такими как воспаление, зуд, болезненность. Среди клинических признаков, являющихся результатом клинической оценки дерматологами, обнаруживают: эритему, отек, сухость/шелушение, папулы/пузырьки, угревые поражения (L. Misery et al., JEADV 2009, 23, 376). Чувствительная кожа представляет собой кожу повышенной чувствительности, которая требует применения хорошо переносимых продуктов гигиены и ухода. Чувствительные индивидуумы являются людьми, которые, в частности, реагируют на агрессии быстрее, чем кожа большинства других людей.

Приведенные ниже примеры иллюстрируют изобретение без ограничения его объема.

Пример 1: Получение экстракта надземных частей овса, собранных до начала колошения, в соответствии с изобретением

а. путем экстракции ацетоном

400 кг высушенных надземных частей овса, собранных до начала колошения, перемалывают, а затем помещают в реактор с 10 объемами смеси ацетон/вода при перемешивании в течение одного часа при комнатной температуре.

Путем разделения твердой и жидкой фазы возможно получить первый экстракционный сок. Выжимки экстрагируют второй раз 10 объемами смеси ацетон/вода в течение одного часа при комнатной температуре при перемешивании. Путем разделения твердой и жидкой фазы возможно получить второй экстракционный сок, который объединяют с первым. Полученный раствор концентрируют по содержанию воды до 1,33 объема/кг, а затем фильтруют. Экстракт, полученный таким путем, высушивают с помощью микроволновых печей после добавления носителя мальтодекстрина (в количестве 25% от нативного экстракта).

Таким образом, получили 36 кг светло-коричневого порошка с титром 6% флавоноидов (изовитексин-2"-O-арабинопиранозида и изоориентин-2"-O-арабинопиранозида) и 0,6% авенакозида В, и содержание белка экстракта, полученного таким путем, составляет менее 0,3 млн^-1.

b. путем экстракции этанолом

Экстракция 100 г высушенных и перемолотых растений смесью этанол/вода 50:50 в течение одного часа при кипячении с обратным холодильником, разделение твердой и жидкой фазы и выпаривание в вакууме при 50°С. Таким образом, получили 26 г экстракта в виде коричневого порошка с титром, включающим от 1,5 до 3% флавоноидов (изовитексин-2"-O-арабинопиранозида и изоориентин-2"-O-арабинопиранозида).

Пример 2: Биологическое исследование экстракта надземных частей овса, собранных до начала колошения, из примера 1.а

Фармакологическое исследование экстракта надземных частей овса относится к иммунно-воспалительной компоненте атопического дерматита. Изменение эпидермального барьера (а именно мутация в гене филагрина) способствует проникновению аллергенов высокой молекулярной массы (из клещиков, пыльцы, …), их захвату дендритными клетками и их презентирование Т клеткам; это взаимодействие приводит к Т-клеточному ответу на коже - сначала Th2 с продуцированием группы провоспалительных цитокинов и хемокинов, способных к поддержанию воспаления: IL-4, IL-5, IL-13, связанных с атопическим дерматитом, при значительном появлении на поверхности IL-17 и IL-31 - но со значительной задержкой Th1 (INCORVAIA, С.; FRATI, F; VERNA N.; D'ALO, S.; MOTOLESE, А.; PUCCI, S. 2008, Allergy and the skin, Clin Exp Immunol, Vol 153 (1) 27-29); (BIEBER, Т. 2008, Atopic dermatitis, The New England Journal of Medicine, Vol 358 (14) 1483-1494). За активацией Т лимфоцитов следует активация других типов клеток, в основном кератиноцитов и эндотелиальных клеток, что приводит в результате к продуцированию воспалительных медиаторов (цитокинов, простагландинов) и к продуцированию хемокинов, дающих возможность рекрутмента воспалительных клеток.

а. Получение фракций:

Экстракт надземных частей овса можно фракционировать с целью идентификации класса молекул или молекул, ответственных за активность.

Для этого экстракт можно нанести на колонку силикагеля среднего давления и последовательно элюировать растворителями возрастающей полярности, например возрастающей концентрацией метанола в воде. Действительно, фракционирование, полученное после нанесения экстракта, приготовленного в соответствии с примером 1, на колонку силикагеля и его первого элюирования смесью метанол/вода от 25:75 до 50:50, а затем до 100% метанола, дало возможность разделить фракцию, обогащенную флавоноидами (фракция 50:50 метанол/вода, 19% флавоноидов изовитексин-2-О-арабинопиранозида и изоориентин-2-О-арабинопиранозида, выраженного как витексин-2-арабиноза) и фракцию, обогащенную сапонинами (фракция 100% метанола, 15% авенакозида В). С помощью полупрепаративной ВЭЖХ, используя колонку силикагеля с обращенной фазой С-18, из первой фракции были выделены флавоноиды изовитексин-2-O-арабинопиранозид и изоориентин-2-О-арабинопиранозид, включающие структуры, которые были подтверждены с помощью масс-спектрометрии и ядерного магнитного резонанса.

С помощью полупрепаративной ВЭЖХ из фракции, обогащенной сапонинами, были выделены авенакозид А и авенакозид В, включающие структуры, которые были идентифицированы с помощью масс-спектрометрии и ядерного магнитного резонанса.

b. Иммуномодулирующая активность

Цитокины, которые представляют собой обширную группу регуляторных белков иммунной системы, продуцируются резидентными или инфильтрированными клетками кожи, активированными в течение воспалительных и иммунных процессов.

Интерлейкины, включающие II₂, II₄, II₅ и II₁₃, продуцируемые лимфоцитами, разделяют на две группы: цитокины типа Th1, включающие II₂, и цитокины типа Th2, включающие II₄, II₅ и II₁₃. Все эти интерлейкины избыточно продуцируются во время воспалительных патологий, таких как атопия, контактная экзема или псориаз.

Среди них интерлейкин 2 (IL-2) человека, имеющий происхождение из Т клеток, способен к поддержанию пролиферации активированных Т лимфоцитов и индуцирует процессы дифференциации и активации В и NK (естественный киллер, Natural Killer) клеток.

In vitro мононуклеарные клетки человека могут быть стимулированы, и продуцируют цитокины. Принцип данного теста состоит в исследовании влияния экстрактов на продуцирование II₂, II₄, II₅, II₁₃, индуцированное двойной стимуляцией форболмиристацетатом/иономицином.

Результаты: ацетоновый экстракт надземных частей овса, собранных до начала колошения, в соответствии с примером 1.а ингибирует на 52% число CD4 лимфоцитов, экспрессирующих интерлейкин 2, и на 21% внутриклеточный уровень II-2 при концентрации 30 мкг/мл. Тот же экстракт при концентрации 30 мкг/мл ингибирует продуцирование лимфоцитами интерлейкина 4 на 51%, интерлейкина 5 на 31% и интерлейкина 13 на 78%.

Данная активность, представляющая интерес для лечения атопических дерматитов, придана сапонинами экстракта, включающими авенакозиды А и В.

с. Противовоспалительная активность

Принцип: Кератиноцит, наиболее представленная клетка в эпидермисе, играет значительную роль в инициации и модулировании воспалительных реакций кожи. С помощью этой модели возможно определить in vitro способности различных молекул к модулированию продуцирования медиаторов, происходящих от метаболизма арахидоновой кислоты. Простагландин PG6KF1a является стабильным метаболитом простациклина PGI2, основным метаболитом, продуцируемым стимулированным кератиноцитом человека. Ацетоновый экстракт надземных частей овса, собранных до начала колошения, и его фракции оценивали на продуцирование данного простагландина, индуцированное в кератиноците кальциевым ионофором А23187 (стимулирующим каскад арахидоновой кислоты).

Результаты: Ацетоновый экстракт в соответствии с примером 1.а обладает значительной активностью (40% ингибирования при 0,1 мкг/мл), и фракция, обогащенная флавоноидами, обладает значительной активностью при максимуме 49% ингибирования при 10 мкг/мл.

Эта противовоспалительная активность придана флавоноидами, присутствующими в экстракте, и, в частности, изоориентин-2"-O-арабинозилом (55% ингибирования при 10 мкг/мл).

Механизм действия данного ингибирования высвобождения простациклина был частично выяснен: наблюдали прямое ингибирование in vitro циклооксигеназы 2 ацетоновым экстрактом (68% ингибирования при 100 мкг/мл) и не наблюдали ингибирования фосфолипазы А2.

d. Антиоксидантная активность

Антирадикальную активность экстракта надземных частей овса, полученного в соответствии с примером 1.а, оценивают с помощью теста DPPH^• (2,2'-дифенил-1-пикрилгидразил). Этот быстрый тест, легкий в применении, основан на измерении способности к улавливанию стабильного свободного радикала DPPH^•. Свободный радикал DPPH^•, который поглощает при 517 нм, восстанавливается до соответствующего гидразина, когда он взаимодействует с донорами протона:

R-OH+DPPH^• R-O^•+DPPH₂

IC₅₀ соответствует концентрации экстракта, вызывающей 50% снижение поглощения метанольного раствора DPPH^• (С=25 мкг/мл).

В этих условиях витамин Е имеет IC₅₀ 6-10 мкг/мл, а ацетоновый экстракт надземных частей овса, собранных до начала колошения, имеет IC₅₀ 70 мкг/мл.

Таким образом, данный экстракт обладает антиоксидантной активностью, и, следовательно, его можно применять в композиции лечебно-косметического средства для кожи в качестве агента, препятствующего старению.

е. Антимикробная активность

Ацетоновый экстракт, полученный в соответствии с примером 1.а, обладает избирательным действием на патогенный микроорганизм, вовлеченный в образование угрей, Propionibacterium acnes (см. таблицу 1).

Пример 3: Композиции в соответствии с настоящим изобретением

смягчающий КРЕМ ДЛЯ АТОПИЧЕСКОЙ КОЖИ

увлажняющее МОЛОЧКО ДЛЯ АТОПИЧЕСКОЙ КОЖИ

Реферат

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к композиции, обладающей иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами. Дерматологическая композиция, обладающая иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами, содержит в качестве активного ингредиента экстракт надземной части/частей овса, собранных до начала колошения. Косметическая композиция, обладающая иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами. Применение экстракта надземной части/частей овса, собранных до начала колошения, обладающего иммуномодулирущими и противовоспалительными свойствами, в качестве лекарственного средства. Вышеописанная композиция и экстракт обладают выраженными иммуномодулирущими и противовоспалительными свойствами. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

Формула