Рекомбинантные клетки дрожжей, продуцирующие полимолочную кислоту, и их использования - RU2018126484A

1. Рекомбинантная клетка дрожжей, которая содержит ген, кодирующий белок, демонстрирующий активность лактил-КоА-синтазы, и ген, кодирующий белок, демонстрирующий активность лактил-КоА-полимеразы, указанная рекомбинантная клетка обладает способностью продуцировать полимолочную кислоту (PLA).

2. Рекомбинантная клетка дрожжей по п. 1, в которой белок, демонстрирующий активность лактил-КоА-синтазы, представляет собой КоА-трансферазу, предпочтительно пропионил-КоА-трансферазу (Pctp).

3. Рекомбинантная клетка дрожжей по п. 1 или 2, в которой белок, демонстрирующий активность лактил-КоА-полимеразы, представляет собой синтазу полигидроксиалканоата (PHA).

4. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-3, которая содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую Pctp, имеющую аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID № 1, SEQ ID № 2, SEQ ID № 3, SEQ ID № 4, SEQ ID № 16 или ее вариант, обладающие активностью лактил-КоА-синтазы.

5. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-4, которая содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PHA-синтазу, имеющую аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID № 5, SEQ ID № 6, SEQ ID № 7 или SEQ ID № 11, или ее вариант, имеющие активность лактил-КоА-полимеразы.

6. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-5, в которой инактивируют по меньшей мере одну активность оксидоредуктазы молочной кислоты, предпочтительно инактивируют ген, кодирующий дегидрогеназу молочной кислоты, более предпочтительно ген, кодирующий дегидрогеназу D-молочной кислоты.

7. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-6, в которой инактивируют путь синтеза TAG, предпочтительно в которой инактивируют по меньшей мере один ген, кодирующий эндогенную диацилглицерин-трансферазу.

8. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-7, в которой инактивируют по меньшей мере одну активность цитратсинтазы, предпочтительно в которой инактивируют по меньшей мере один ген, кодирующий цитратсинтазу

9. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-8, которая относится к роду Yarrowia, Saccharomyces, Kluyveromyces, Candida, Pichia, Schizosaccharomyces, Zygosaccharomyces, Hansenula, Trichosporon, Yamadazyma, Cryptococcus, Lipomyces, Rhodosporidium, Rhodotorula, Geotrichum, Kloeckera, Schwanniomyces, Brettanomyces, Debaryomyces или Issatchenkia.

10. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-9, которую выбирают из группы, состоящей из Yarrowia bubula, Yarrowia deformans, Yarrowia lipolytica, Yarrowia yakushimensis, Yarrowia galli, Yarrowia oslonensis, Yarrowia hollandica, Yarrowia phangngensis, Yarrowia alimentaria и Yarrowia porcina, предпочтительно Yarrowia lipolytica.

11. Рекомбинантная клетка дрожжей по любому одному из пп. 1-10, которая представляет собой Y. Lipolytica, которая сконструирована для экспрессии по меньшей мере одной Pctp, имеющей аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID № 1, SEQ ID № 2, SEQ ID № 3, SEQ ID № 4, SEQ ID № 16, или ее варианта, в цитозоле, по меньшей мере одной PhaCp, имеющей аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID № 5, SEQ ID № 6, SEQ ID № 7 или SEQ ID № 11, или ее варианта, и дополнительно содержащей на ее C-конце аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID № 8, или на ее N-конце аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID № 9, чтобы быть направленной в пероксисому, и которая дополнительно сконструирована для того, чтобы инактивировать лактатдегидрогеназу (YlDld1p и/или YlCyb21p).

12. Рекомбинантная клетка дрожжей по п. 11, которая дополнительно сконструирована для того, чтобы инактивировать ацил-КоА-оксидазы (YlPOX1, YlPOX2, YlPOX3, YlPOX4, YlPOX5, YlPOX6).

13. Способ получения полимолочной кислоты (PLA), который включает

- культивирование рекомбинантных клеток дрожжей по любому одному из пп. 1-12 в присутствии молочной кислоты; и необязательно

- извлечение PLA.

14. Способ по п. 13, в котором продуцируемая PLA представляет собой гомо-PLA, предпочтительно поли-D-молочную кислоту (PDLA), и/или продуцируемая PLA имеет молекулярную масса больше чем 40000 г/моль.

15. Ферментативный бульон, содержащий рекомбинантные клетки дрожжей по любому одному из пп. 1-12.

16. Применение рекомбинантных клеток дрожжей по любому одному из пп. 1-12 для получения PLA, предпочтительно PDLA.

17. Полимолочная кислота, которую можно получать из рекомбинантной клетки дрожжей по любому одному из пп. 1-12.