Лентивирусные векторы для доставки pklr для лечения дефицита пируваткиназы - RU2020114948A
Код документа: RU2020114948A
Формула
1. Кассета экспрессии для дефицита пируваткиназы (PKD), содержащая полинуклеотидную последовательность, содержащую, в следующем порядке от 5’- к 3’-концу:
а) промоторную последовательность; и
b) оптимизированную по кодонам последовательность, кодирующую продукт гена PKLR человека;
где указанная промоторная последовательность функционально связана с оптимизированной по кодонам последовательностью, кодирующей продукт гена PKLR человека, и
где указанная оптимизированная по кодонам последовательность, кодирующая продукт гена PKLR человека, обладает по меньшей мере 95% идентичностью SEQ ID NO: 8.
2. Кассета экспрессии по п. 1, где промотор представляет собой промотор фосфоглицераткиназы (PGK).
3. Кассета экспрессии по п. 1 или 2, дополнительно содержащая мутированный посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков (wPRE).
4. Кассета экспрессии по п. 3, где мутированный wPRE представляет собой химерный wPRE, содержащий последовательность, обладающую по меньшей мере 99% идентичностью SEQ ID NO: 24.
5. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-4, дополнительно содержащая полипуриновый тракт (PPT).
6. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-5, дополнительно содержащая последовательность сигнала полиаденилирования (полиА).
7. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-6, обладающая по меньшей мере 95% идентичностью SEQ ID NO: 26.
8. Кассета экспрессии по п. 7, обладающая по меньшей мере 99% идентичностью SEQ ID NO: 26.
9. Вектор доставки рекомбинантного гена, содержащий кассету экспрессии по любому из пп. 1-8, где вектор доставки рекомбинантного гена представляет собой лентивирусный вектор.
10. Вектор доставки рекомбинантного гена по п. 9, содержащий следующие последовательности, в порядке от 5’- к 3’-концу:
a) 5’ LTR, необязательно модифицированный 5’ LTR;
b) последовательность ψ ВИЧ-1;
c) RRE;
d) последовательность cPPT/CTS;
e) последовательность промотора PGK, необязательно последовательность промотора PGK человека;
f) оптимизированную по кодонам последовательность, кодирующую продукт гена PKLR человека, обладающую по меньшей мере 99% идентичностью SEQ ID NO: 8;
g) последовательность мутированного wPRE, обладающую по меньшей мере 100% идентичностью SEQ ID NO: 24;
i) модифицированный 3’-LTR;
j) сигнал поли(А) SV40;
k) ориджин репликации (ori) SV40;
u) последовательность энхансера CMV; и
v) последовательность промотора CMV.
11. Вектор доставки рекомбинантного гена по п. 9, представляющий собой терапевтический вектор доставки гена.
12. Вектор доставки рекомбинантного гена по п. 11, способный обеспечивать долгосрочную стабильность и безопасность при клиническом применении.
13. Клетка, содержащая кассету экспрессии по любому из пп. 1-8 или вектор доставки рекомбинантного гена по любому из пп. 9-12.
14. Клетка по п. 13, представляющая собой гемопоэтическую стволовую клетку.
15. Клетка по п. 14, являющаяся коммитированным гемопоэтическим предшественником эритроидной клетки.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и вектор доставки рекомбинантного гена по любому из пп. 9-12 или клетку по любому из пп. 13-15.
17. Способ лечения или предотвращения дефицита пируваткиназы (PKD) у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции по п. 16.
18. Способ по п. 17, где фармацевтическая композиция содержит вектор доставки рекомбинантного гена.
19. Способ по п. 17, где фармацевтическая композиция содержит указанную клетку.
20. Способ по п. 19, где клетка является аутологичной для субъекта.
21. Способ экспрессии гена PKLR человека в эритроидных клетках, включающий приведение одной или более эритроидных клеток в контакт с эффективным количеством рекомбинантного вирусного вектора, где указанный вектор содержит промотор фосфоглицераткиназы человека, оптимизированный по кодонам трансген PKLR и мутированный посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков, где указанный оптимизированный по кодонам трансген PKLR обладает по меньшей мере 95% идентичностью SEQ ID NO: 8, и где после указанного приведения в контакт PKLR экспрессируется на обнаружимых уровнях в одной или более эритроидных клетках.
