Генная терапия офтальмологических нарушений - RU2018125468A
Код документа: RU2018125468A
Формула
1. Оптимизированная по кодону последовательность кДНК, кодирующая Rab-эскорт белок 1 (REP-1).
2. Экспрессионная кассета, содержащая последовательность кДНК по п. 1.
3. Экспрессионная кассета по п. 2, содержащая SEQ ID NO: 1.
4. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий капсид AAV и последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательности инвертированных концевых повторов AAV и последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует человеческий Rab-эскорт белок 1 (REP-1), и последовательности для контроля экспрессии, которые управляют экспрессией REP-1 в клетке-хозяине.
5. Вирусный вектор по п. 4, в котором последовательность REP-1 кодирует полноразмерный белок REP-1.
6. Вирусный вектор по п. 4 или п. 5, в котором последовательность REP-1 кодирует последовательность белка SEQ ID NO: 2.
7. Вирусный вектор по любому из пп. 4-6, причем последовательность REP-1 содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 3 или ее вариант.
8. Вирусный вектор по п. 7, причем вариант представляет собой оптимизированный по кодону вариант SEQ ID NO: 3, оптимизированный для экспрессии у людей.
9. Вирусный вектор по п. 8, причем оптимизированный по кодону вариант представляет собой SEQ ID NO: 1.
10. Оптимизированная по кодону последовательность кДНК, кодирующая управляемый циклическими нуклеотидами канал альфа 3 (CNGA3).
11. Экспрессионная кассета, содержащая последовательность кДНК по п. 10.
12. Экспрессионная кассета по п. 11, содержащая SEQ ID NO: 9 или 11.
13. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий капсид AAV и последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательности инвертированных концевых повторов AAV и последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует человеческий управляемый циклическими нуклеотидами канал альфа 3 (CNGA3), и последовательности для контроля экспрессии, которые управляют экспрессией CNGA3 в клетке-хозяине.
14. Вирусный вектор по п. 13, в котором последовательность CNGA3 кодирует полноразмерный белок.
15. Вирусный вектор по п. 13 или п. 14, в котором последовательность CNGA3 кодирует последовательность белка SEQ ID NO: 10.
16. Вирусный вектор по любому из пп. 13-15, причем последовательность CNGA3 содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 13 или ее вариант.
17. Вирусный вектор по п. 16, причем вариант представляет собой оптимизированный по кодону вариант SEQ ID NO: 13, оптимизированный для экспрессии у людей.
18. Вирусный вектор по п. 17, причем оптимизированный по кодону вариант представляет собой SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 11.
19. Вирусный вектор по любому из пп. 4-9 или 13-18, причем последовательности для контроля экспрессии содержат промотор.
20. Вирусный вектор по п. 19, причем промотор представляет собой промотор родопсина.
21. Вирусный вектор по п. 19, причем промотор представляет собой промотор родопсин-киназы.
22. Вирусный вектор по п. 19, причем промотор представляет собой промотор, специфический в отношении клеток глаза.
23. Вирусный вектор по п. 19, причем промотор является выбранным из промотора человеческого EF1α, промотора метаботропного глутаматного рецептора 6 (mGluR6), промотора родопсина, промоторов колбочкового опсина и промоторов транскрипционных факторов (нейроретинального белка с «лейциновой молнией» (Nrl) и фоторецептор-специфического ядерного рецептора Nr2e3, bZIP).
24. AAV по п. 19, причем промотор представляет собой индуцируемый промотор, конститутивный промотор или тканеспецифический промотор.
25. AAV по п. 24, причем промотор представляет собой индуцируемый промотор, выбранный из промотора рапамицина/рапалога, промотора экдизона, чувствительного к эстрогену промотора и чувствительного к тетрациклину промотора или гетеродимерного репрессорного переключателя.
26. Вирусный вектор по любому из пп. 4-9 или 13-25, дополнительно содержащий один или несколько из интрона, последовательности Козак, поли-А и посттранскрипционных регуляторных элементов.
27. Вирусный вектор по любому из пп. 4-9 или 13-26, причем вектор представляет собой rAAV, имеющий капсид, выбранный из AAV2, AAV5, AAV8, AAV9, AAV8bp, AAV7m8 и их вариантов.
28. Вирусный вектор по любому из пп. 4-9 или 13-27, в котором последовательности ITR происходят из AAV, отличного от того, который обеспечивает белок капсида.
29. Вирусный вектор по любому из пп. 4-9 или 13-28, в котором последовательности ITR происходят из AAV2.
30. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий капсид AAV8 и рекомбинантный геном (rAAV), причем указанный геном rAAV содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие REP-1, последовательности инвертированных концевых повторов и последовательности для контроля экспрессии, которые управляют экспрессией REP-1 в клетке-хозяине.
31. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий капсид AAV8 и экспрессионную кассету, причем указанная экспрессионная кассета содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие CNGA3, последовательности инвертированных концевых повторов и последовательности для контроля экспрессии, которые управляют экспрессией CNGA3 в клетке-хозяине.
32. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей вирусный вектор по любому из пп. 4-9 или 13-31.
33. Способ лечения хороидеремии, причем указанный способ включает введение композиции по п. 32 субъекту, нуждающемуся в этом.
34. Способ лечения ахроматопсии, причем указанный способ включает введение композиции по п. 32 субъекту, нуждающемуся в этом.
35. Способ по п. 33 или 34, причем указанную композицию вводят субретинально.
36. Способ по п. 33 или 34, причем указанную композицию вводят интравитреально, внутривенно или в сосудистую оболочку глаза.
37. Способ по любому из пп. 33-36, причем указанный субъект представляет собой млекопитающее.
38. Способ по п. 37, причем указанный субъект представляет собой человека.
39. Способ по любому из пп. 33-38, причем указанную композицию вводят в комбинации с другой терапией.
40. Способ по любому из пп. 33-39, причем указанную композицию вводят в дозе, составляющей от приблизительно 109 до приблизительно 1013 геномов вектора (VG).
41. Способ по любому из пп. 33-40, причем указанную композицию вводят в объеме, составляющем от приблизительно 100 мкл до приблизительно 500 мкл.
42. Способ по любому из пп. 33-41, причем указанную композицию вводят более одного раза.
43. Плазмида для получения вектора на основе AAV, причем плазмида содержит SEQ ID NO: 1, или SEQ ID NO: 9, или SEQ ID NO: 25, или SEQ ID NO: 26, или SEQ ID NO: 27, или SEQ ID NO: 28, или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную им.
44. Способ получения вируса rAAV, включающий культивирование упаковывающей клетки, несущей плазмиду по п. 43, в присутствии достаточных вирусных последовательностей для того, чтобы позволить упаковку вирусного генома с экспрессионной кассетой гена в оболочку или капсид инфекционного AAV.
45. Рекомбинантный AAV, полученный в соответствии со способом по п. 44.
46. Вирусный вектор, содержащий геном вектора, который содержит нуклеотиды с 1 по 4233 в SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 или SEQ ID NO: 28.
47. Вирусный вектор, содержащий геном вектора, который содержит 5' ITR, энхансер CMV, промотор куриного бета-актина, экзон 1 и интрон СВА, последовательность Козак, оптимизированный по кодону СНМ, поли-А bGH и 3' ITR.
48. Композиция для применения в способе лечения хороидеремии, причем указанная композиция содержит вирусный вектор по любому из пп. 4-9, 13-32 или 46-47.
49. Композиция для применения в способе лечения ахроматопсии, причем указанная композиция содержит вирусный вектор по любому из пп. 4-9, 13-32 или 46-47.
50. Композиция по п. 48 или 49, причем указанная композиция вводится субретинально.
51. Композиция по п. 48 или 49, причем указанная композиция вводится интравитреально, внутривенно или в сосудистую оболочку глаза.
52. Композиция по любому из пп. 48-51, причем указанный субъект представляет собой млекопитающее.
53. Композиция по п. 52, причем указанный субъект представляет собой человека.
54. Композиция по любому из пп. 48-53, причем указанная композиция вводится в комбинации с другой терапией.
55. Композиция по любому из пп. 48-54, причем указанная композиция водится в дозе, составляющей от приблизительно 109 до приблизительно 1013 геномов вектора (VG).
56. Композиция по любому из пп. 48-55, причем указанная композиция вводится в объеме, составляющем от приблизительно 100 мкл до приблизительно 500 мкл.
57. Композиция по любому из пп. 48-56, причем указанная композиция вводится более одного раза.
58. Применение вирусного вектора по любому из пп. 4-9, 13-32 или 46-47 в производстве лекарственного препарата для лечения хороидеремии.
59. Применение вирусного вектора по любому из пп. 4-9, 13-32 или 46-47 в производстве лекарственного препарата для лечения ахроматопсии.
