Генотерапевтический днк-вектор на основе генотерапевтического днк-вектора vtvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов nos2, nos3, vip, kcnma1, cgrp, для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и применения, штамм e - RU2018145694A

1. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов NOS2, NOS3, VIP, KCNMA1, CGRP, для повышения уровня экспрессии этого целевого гена в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-NOS2, или VTvaf17-NOS3, или VTvaf17-VIP, или VTvaf17-KCNMA1, или VTvaf17-CGRP имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2 или SEQ ID №3 или SEQ ID №4 или SEQ ID №5 соответственно.

2. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: ген NOS2, ген NOS3, ген VIP, ген KCNMA1, ген CGRP по п. 1, отличающийся тем, что каждый из созданных генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17-NOS2, или VTvaf17-NOS3, или VTvaf17-VIP, или VTvaf17-KCNMA1, или VTvaf17-CGRP по п. 1 за счет ограниченного размера векторной части VTvaf17, не превышающей 3200 п.н., обладает способностью эффективно проникать в клетки человека и животных и экспрессировать клонированный в него целевой ген, выбранный из группы генов: ген NOS2, ген NOS3, ген VIP, ген KCNMA1, ген CGRP .

3. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: ген NOS2, ген NOS3, ген VIP, ген KCNMA1, ген CGRP по п. 1, отличающийся тем, что в составе генотерапевтического ДНК-вектора отсутствуют нуклеотидные последовательности вирусного происхождения и отсутствуют гены антибиотикорезистентности, обеспечивая возможность его безопасного применения для генетической терапии человека и животных.

4. Способ получения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: ген NOS2, ген NOS3, ген VIP, ген KCNMA1, ген CGRP по п. 1, заключающийся в том, что каждый из генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17-NOS2, или VTvaf17-NOS3, или VTvaf17-VIP, или VTvaf17-KCNMA1, или VTvaf17-CGRP по п. 1 получают следующим образом: кодирующую часть целевого гена из группы NOS2, или NOS3, или VIP, или KCNMA1, или CGRP клонируют в ДНК-вектор VTvaf17 и получают генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-NOS2, SEQ ID №1, или VTvaf17-NOS3, SEQ ID №2 или VTvaf17-VIP, SEQ ID №3, или VTvaf17-KCNMA1, SEQ ID №4, или VTvaf17-CGRP, SEQ ID №5 соответственно.

5. Способ применения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: ген NOS2, ген NOS3, ген VIP, ген KCNMA1, ген CGRP по п. 1. для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, заключающийся во введении выбранного генотерапевтического ДНК-вектора по п. 1 или нескольких выбранных генотерапевтических ДНК-векторов по п. 1 в клетки, органы и ткани человека или животного, и/или во введении в органы и ткани человека или животного аутологичных клеток человека или животного, трансфицированных выбранным генотерапевтическим ДНК-вектором по п. 1 или несколькими выбранными генотерапевтическими ДНК-векторами по п. 1, или в сочетании обозначенных способов.

6. Способ получения штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NOS2, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NOS3, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-VIP, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-KCNMA1 или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-CGRP, который заключается в электропорации компетентных клеток штамма Escherichia coli SCS110-AF генотерапевтическим ДНК-вектором по п. 1 и последующей селекцией стабильных клонов штамма с использованием селективной среды.

7. Штамм, полученный по п. 6, Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NOS2, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NOS3, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-VIP, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-KCNMA1, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-CGRP, несущий генотерапевтический ДНК-вектор по п. 1 для его наработки с возможностью культивирования штамма без использования антибиотиков.

8. Способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора по п. 1, заключающийся в масштабировании бактериальной культуры штамма по п. 7 до количеств, необходимых для наращивания бактериальной биомассы в промышленном ферментере, после чего биомассу используют для выделения фракции, содержащей целевой ДНК-продукт - генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-NOS2 или VTvaf17-NOS3 или VTvaf17-VIP или VTvaf17-KCNMA1 или VTvaf17-CGRP по п. 1, многостадийно фильтруют и очищают хроматографическими методами.