Способ культивирования клеток - RU2004119816A

Реферат

1. Способ получения представляющего интерес рекомбинантного полипептида, заключающийся в том, что

(а) получают трансформированную эукариотическую клетку-хозяина, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует представляющий интерес рекомбинантный полипептид и которая контролирует экспрессию представляющего интерес рекомбинантного полипептида в клетке-хозяине;

(б) готовят бессывороточную среду, которая содержит (I) воду, пептон растительного происхождения, регулятор осмотического давления, буфер, источник энергии, аминокислоты, источник или предшественник липидов, источник железа, ионов металла кроме железа и один или несколько витаминов и кофакторов; и (II) не содержит каких-либо полноразмерных полипептидов и

(в) культивируют трансформированную эукариотическую клетку-хозяина в культуральной среде в условиях, при которых может происходить экспрессия представляющего интерес рекомбинантного полипептида.

2. Способ по п.1, в котором культуральная среда совсем не содержит компоненты животного происхождения.

3. Способ по п.1, в котором представляющим интерес рекомбинантным полипептидом является человеческий эритропоэтин.

4. Способ по п.1, где нуклеотидную последовательность, которая кодирует представляющий интерес рекомбинантный полипептид, интегрируют в геном клетки-хозяина и функционально связывают с нуклеотидной последовательностью, которая кодирует дигидрофолат-редуктазу, и клетку-хозяина культивируют в отсутствии метотрексата.

5. Способ по п.4, в котором представляющим интерес рекомбинантным полипептидом является человеческий эритропоэтин.

6. Способ по п.1, в котором источником энергии является глюкоза.

7. Способ по п.6, в котором культуральная среда первоначально содержит по меньшей мере 5 г/л глюкозы, и в процессе стадии (в) культивирования концентрацию поддерживают на уровне выше 3 г/л.

8. Способ по п.1, в котором культуральная среда содержит более 0,3 г/л фосфата.

9. Способ по п.6, в котором культуральная среда содержит более 0,3 г/л фосфата.

10. Способ по п.1, в котором значение рН сначала составляет примерно 7,1 и его снижают примерно до 6,9 в процессе стадии культивирования (в).

11. Способ по п.10, в котором указанное снижение осуществляют в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 1 день.

12. Способ по п.1, в котором культуральная среда содержит также микроэлементы и один или несколько витаминов.

13. Способ по п.12, в котором источником энергии является глюкоза.

14. Способ по п.13, в котором культуральная среда содержит более 0,3 г/л фосфата.

15. Способ по п.1, в котором культуральную среду подпитывают в процессе стадии культивирования (в) обогащенным питательным концентратом, содержащим одну или несколько аминокислот, по меньшей мере один углевод и пептон растительного происхождения.

16. Способ по п.1, где он дополнительно предусматривает стадию выделения (г) представляющего интерес рекомбинантного полипептида из культуры.

17. Способ по п.16, в котором представляющий интерес рекомбинантный полипептид секретируется в культуральную среду и его выделяют из культуральной среды.

18. Способ по п.17, в котором представляющим интерес рекомбинантным полипептидом является человеческий эритропоэтин.

19. Бессывороточная среда для культуры клеток, которая содержит (I) воду, пептон растительного происхождения, регулятор осмотического давления, буфер, источник энергии, аминокислоты, источник или предшественник липидов, источник железа, ионов металла кроме железа и один или несколько витаминов и кофакторов; и (II) не содержит каких-либо полноразмерных полипептидов.

20. Среда для культуры клеток по п.19, которая совсем не содержит компоненты животного происхождения.

21. Среда для культуры клеток по п.19 или 20, в которой источником энергии является глюкоза.

22. Среда для культуры клеток по п.19 или 20, которая содержит более 0,3 г/л фосфата.

23. Среда для культуры клеток по п.19 или 20, которая содержит также микроэлементы и один или несколько витаминов.