Генотерапевтический днк-вектор на основе генотерапевтического днк-вектора vtvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов ang, angpt1, vegfa, fgf1, hif1α, hgf, sdf1, klk4, pdgfc, prok1, prok2 для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, спо - RU2018147085A
Код документа: RU2018147085A
Формула
1. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов ANG, ANGPT1, VEGFA, FGF1, HIF1Α, HGF, SDF1, KLK4, PDGFC, PROK1, PROK2 , для повышения уровня экспрессии этого целевого гена в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17- ANG или VTvaf17- ANGPT1 или VTvaf17- VEGFA или VTvaf17- FGF1 или VTvaf17- HIF1α или VTvaf17- HGF или VTvaf17- SDF1 или VTvaf17- KLK4 или VTvaf17- PDGFC или VTvaf17- PROK1, или VTvaf17- PROK2 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2 или SEQ ID №3 или SEQ ID №4 или SEQ ID №5 или SEQ ID №6 или SEQ ID №7 или SEQ ID №8 или SEQ ID №9 или SEQ ID №10 или SEQ ID №11 соответственно.
2. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: ANG, ANGPT1, VEGFA, FGF1, HIF1α, HGF, SDF1, KLK4, PDGFC, PROK1, PROK2 по п.1, отличающийся тем, что каждый из созданных генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17- ANG или VTvaf17- ANGPT1 или VTvaf17- VEGFA или VTvaf17- FGF1 или VTvaf17- HIF1α или VTvaf17- HGF или VTvaf17- SDF1 или VTvaf17- KLK4 или VTvaf17- PDGFC или VTvaf17- PROK1, или VTvaf17- PROK2 по п. 1 за счет ограниченного размера векторной части VTvaf17, не превышающего 3200 п.н, обладает способностью эффективно проникать в клетки человека и животных и экспрессировать клонированный в него целевой ген, выбранный из группы генов: ANG, ANGPT1, VEGFA, FGF1, HIF1α, HGF, SDF1, KLK4, PDGFC, PROK1, PROK2 .
3. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: ANG, ANGPT1, VEGFA, FGF1, HIF1α, HGF, SDF1, KLK4, PDGFC, PROK1, PROK2 по п.1, отличающийся тем, что в составе генотерапевтического ДНК-вектора отсутствуют нуклеотидные последовательности вирусного происхождения и отсутствуют гены антибиотикорезистентности, обеспечивая возможность его безопасного применения для генетической терапии человека и животных.
4. Способ получения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: ANG, ANGPT1, VEGFA, FGF1, HIF1α, HGF, SDF1, KLK4, PDGFC, PROK1, PROK2 по п.1, заключающийся в том, что каждый из генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17- ANG или VTvaf17- ANGPT1 или VTvaf17- VEGFA или VTvaf17- FGF1 или VTvaf17- HIF1α или VTvaf17- HGF или VTvaf17- SDF1 или VTvaf17- KLK4 или VTvaf17- PDGFC или VTvaf17- PROK1, или VTvaf17- PROK2 по п.1 получают следующим образом: кодирующую часть целевого гена из группы ANG или ANGPT1 или VEGFA или FGF1 или HIF1α или HGF или SDF1 или KLK4 или PDGFC или PROK1 или PROK2 клонируют в ДНК-вектор VTvaf17 и получают генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17- ANG, SEQ ID №1, или VTvaf17- ANGPT1, SEQ ID №2 или VTvaf17- VEGFA, SEQ ID №3, или VTvaf17- FGF1, SEQ ID №4 или VTvaf17- HIF1α, SEQ ID №5 или VTvaf17- HGF, SEQ ID №6 или VTvaf17- SDF1, SEQ ID №7 или VTvaf17- KLK4, SEQ ID №8 или VTvaf17- PDGFC, SEQ ID №9, или VTvaf17- PROK1, SEQ ID №10 или VTvaf17- PROK2, SEQ ID №11 соответственно.
5. Способ применения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: ANG, ANGPT1, VEGFA, FGF1, HIF1α, HGF, SDF1, KLK4, PDGFC, PROK1, PROK2 по п.1. для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, заключающийся во введении выбранного генотерапевтического ДНК-вектора по п.1 или несколькими выбранными генотерапевтическими ДНК-векторами по п.1 в клетки, органы и ткани человека или животного, и/или во введении в органы и ткани человека или животного аутологичных клеток человека или животного, трансфицированных выбранным генотерапевтическим ДНК-вектором по п.1 или несколькими выбранными генотерапевтическими ДНК-векторами по п.1, или в сочетании обозначенных способов.
6. Способ получения штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- ANG или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- ANGPT1 или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- VEGFA или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- FGF1, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- HIF1α или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- HGF или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- SDF1, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- KLK4 или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- PDGFC, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- PROK1 или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- PROK2, который заключается в электропорации компетентных клеток штамма Escherichia coli SCS110-AF генотерапевтическим ДНК-вектором по п.1 и последующей селекцией стабильных клонов штамма с использованием селективной среды.
7. Штамм, полученный по п.6, Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- ANG или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- ANGPT1 или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- VEGFA или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- FGF1, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- HIF1α или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- HGF или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- SDF1, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- KLK4 или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- PDGFC, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- PROK1 или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- PROK2, несущий генотерапевтический ДНК-вектор по п.1 для его наработки с возможностью культивирования штамма без использования антибиотиков.
8. Способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора по п.1, заключающийся в масштабировании бактериальной культуры штамма по п.7 до количеств, необходимых для наращивания бактериальной биомассы в промышленном ферментере, после чего биомассу используют для выделения фракции, содержащей целевой ДНК-продукт - генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17- ANG или VTvaf17- ANGPT1 или VTvaf17- VEGFA или VTvaf17- FGF1 или VTvaf17- HIF1α или VTvaf17- HGF или VTvaf17- SDF1 или VTvaf17- KLK4 или VTvaf17- PDGFC или VTvaf17- PROK1 или VTvaf17- PROK2 по п.1, многостадийно фильтруют и очищают хроматографическими методами.
