Рекомбинантные гликопротеины с сиалированными о-гликанами и линии клеток для их продукции - RU2017127276A
Код документа: RU2017127276A
Формула
1. Линия клеток, которая генетически модифицирована для сверхэкспрессии β-галактозид-α-2,3-сиалилтрансферазы 1 (ST3Gal1), которая дополнительно генетически модифицирована для сверхэкспрессии β-галактозид-α-2,3-сиалилтрансферазы 4 (ST3Gal4).
2. Линия клеток по п. 1, которая дополнительно генетически модифицирована для сверхэкспрессии β-галактозид-α-2,6-сиалилтрансферазы 1 (ST6Gal1).
3. Линия клеток по п. 1 или 2, причем линия клеток содержит эндогенные гены, кодирующие ST3Gal1 и ST3Gal4, и необязательно эндогенный ген, кодирующий ST6Gal1, и, кроме того, содержит по крайней мере один генетический элемент, выбираемый из группы, состоящей из промотора, энхансера и стабилизирующего элемента, вставленный в геном в одном или более положений, подходящих для вызова сверхэкспрессии ST3Gal1 и ST3Gal4, и необязательно ST6Gal1.
4. Линия клеток по любому из пп. 1-3, причем линия клеток содержит экзогенные нуклеиновые кислоты, кодирующие ST3Gal1 и ST3Gal4, и необязательно экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую ST6Gal1.
5. Линия клеток по любому из пп. 1-4, причем линией клеток является линия клеток млекопитающих, предпочтительно линия клеток человека.
6. Линия клеток по любому из пп. 1-4, причем линия клеток является производной линии клеток, выбираемой из группы, состоящей из клеток AGE.CR®, клеток Vero, клеток MDCK, клеток ВНК, клеток СНО, клеток НЕК293, клеток HepG2, клеток Huh7, клеток AGE1.HN®, клеток NC5T11, клеток Per.C6, клеток HMCL, клеток MM.1, клеток U266, клеток RPMI18226, клеток HKB11, клеток NM, клеток NM-F9 и клеток САР.
7. Линия клеток по любому из пп. 1-4, причем линия клеток является производной первичных амниоцитов человека, содержащих по крайней мере одну нуклеиновую кислоту, кодирующую продукты генов районов Е1 и pIX аденовируса.
8. Рекомбинантный гликопротеин, содержащий GalNac-O-гликаны, которые сиалированы до степени, составляющей по крайней мере 80%, причем указанный гликопротеин продуцируется в линии клеток по любому из пп. 1-7.
9. Рекомбинантный гликопротеин по п. 8, содержащий GalNac-O-гликаны, которые сиалированы до степени, составляющей по крайней мере 95%.
10. Рекомбинантный гликопротеин по п. 8 или 9, причем по крайней мере 80% GalNac-O-гликанов представляют собой имеющие остов 1 GalNac-O-гликаны.
11. Рекомбинантный гликопротеин по п. 10, причем имеющие остов 1 GalNac-O-гликаны сиалированы до степени, составляющей по крайней мере 25%.
12. Рекомбинантный гликопротеин по любому из пп. 8-11, причем гликопротеин выбирают из группы, состоящей из факторов роста, пептидных гормонов, цитокинов, ферментов, антител, фрагментов антител, факторов свертывания крови и ингибиторов протеаз.
13. Рекомбинантный гликопротеин по любому из пп. 8-12, причем гликопротеин выбирают из группы, состоящей из фактора роста гепатоцитов (HGF), эритропоэтина (ЕРО), фактора VIII (FVIII), фактора IX (FIX), фактора фон Виллебранда (vWF) и ингибитора C1-эстеразы (С1-ингибитора; C1-Inh).
14. Рекомбинантный гликопротеин по любому из пп. 8-13, причем гликопротеином является гликопротеин человека.
15. Способ экспрессии рекомбинантных гликопротеинов, содержащих GalNac-O-гликаны, которые сиалированы до степени, составляющей по крайней мере 80%, включающий стадию сверхэкспрессии вместе с рекомбинантными гликопротеинами β-галактозид-α-2,3-сиалилтрансферазы 1 (ST3Gal1) и β-галактозид-α-2,3-сиалилтрансферазы 4 (ST3Gal4).
16. Способ по п. 15, включающий, кроме того, стадию сверхэкспрессии вместе с рекомбинантными гликопротеинами β-галактозид-α-2,6-сиалилтрансферазы 1 (ST6Gal1).
