Вирус синдрома мультисистемного истощения свиньи у поросят-отъемышей - RU2000118777A

Реферат

1. Выделенный полинуклеотид, способный селективно гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью цирковируса свиньи типа II (PCVII), содержащий, до меньшей мере, около 8 смежных нуклеотидов последовательности, или комплементарных последовательности PCVII, изображенной на Фигурах 4А-4С (SEQ ID NO: I, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NOS: 12 и 24).

2. Полинуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что имеет, по меньшей мере, 10 нуклеотидов в длину.

3. Полинуклеотид по п. 1, отличающиеся тем, что имеет, по меньшей мере, 15 нуклеотидов в длину.

4. Полинуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что имеет, по меньшей мере, 20 нуклеотидов в длину.

5. Полинуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что содержит последовательность, по меньшей мере, на 85% идентичную последовательности PCVII, изображенной на Фигурах 4А-4С (SEQ ID NO: I, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NOS: 12 и 24), или ее фрагменту, содержащему, по меньшей мере, около 75 смежных нуклеотидов.

6. Полинуклеотид по п. 5, отличающийся тем, что содержит PCVII-последовательность, выбранную из группы, состоящей из PCVII 412 (SEQ Ю NO: 1), PCVII 9741 (SEQ ID NO: 11) и PCVII B9 (SEQ ID NOS: 12 и 24).

7. Полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид цирковируса свиньи Типа II (PCVII), по меньшей мере, на 85% идентичный полипептиду, выбранному из группы, состоящей из полипептида, образованного при использовании (а) открытой рамки считывания (ORF) 1 (SEQ ID NO: 3), (б) ORF 2 (SEQ ID NO: 9), (в) ORF (SEQ ID NO: 7), (г) ORF 4 (SEQ ID NO: 20), (д) ORF 5 (SEQ ГО NO: 21), (e) ORF 6 (SEQ ID NO: 5) и (ж) иммуногенных фрагментов (а)-(ж), - содержащих, по меньшей мере, около 5 аминокислот.

8. Полинуклеотид по п. 7, отличающийся тем, что кодирует иммуногенный пептид PCVII, по меньшей мере, примерно на 85% - идентичный полипептиду, образованному при использовании ORF 6 (SEQ ID NO: 5), или его иммуногенным фрагментам, содержащим, по меньшей мере, около 5 аминокислот.

9. Полинуклеотид по п. 8, отличающийся тем, что кодирует полипептид, образованный при использовании ORF 6 (SEQ Ю NO: 5).

10. Рекомбинантный вектор, содержащий (а) полинуклеотид по любому из пп. 1-9; и (б) контролирующие элементы, которые функционально связаны с указанным полинуклеотидом, при этом кодирующая последовательность указанного полинуклеотида может быть транскрибирована и транслирована в клетке-хозяине, и, по меньшей мере, один из указанных контролирующих элементов гетерологичен указанной кодирующей последовательности.

11. Клетка-хозяин, трансформированная рекомбинантным вектором по п. 10.

12. Способ продуцирования рекомбинантного полипептида PCVII, заключающийся в (а) предоставлении популяции клеток-хозяев, по п. 11; и (б) культивировании указанной популяции клеток в условиях, при которых экспрессирует PCVII-полипептид, кодируемый последовательностью, присутствующей в указанном рекомбинантном векторе.

13. Белок, продуцированный способом по п. 12.

14. Иммуногенный полипептид цирковируса свиньи Типа II (PCVII), по меньшей мере, примерно, на 85% идентичный полипептиду, выбранному из группы, состоящей из полипептида, образованного при использовании (а) открытой рамки считывания (ORF) 1 (SEQ ID NO: 3), (б) ORF 2 (SEQ ID NO: 9), (в) ORF 3 (SEQ ID NO: 7), (г) ORF 4 (SEQ ID NO: 20), (д) ORF 5 (SEQ ID NO: 21), (e) ORF 6 (SEQ ID NO: 5) и (ж) иммунных фрагментов (а)-(ж), - содержащих, по меньшей мере, около 5 аминокислот.

15. Полипептид по п. 14, отличающийся тем, что имеет, по меньшей мере, 85%-ную идентичность с последовательностью, образованной при использовании ORF 6 (SEQ ID NO: 5), или с ее иммуногенными фрагментами, содержащими, по меньшей мере, около 5 аминокислот.

16. Полипептид по п. 15, отличающийся тем, что имеет последовательность полипептида, кодируемого ORF 6 (SEQ ID NO: 5).

17. Антитела, полученные при использовании полипептида по любому из пп. 14-16.

18. Композиция, содержащая иммуногенный PCVII-полипептид по любому из пп. 14-16 и фармацевтически приемлемый носитель.

19. Композиция по п. 18, дополнительно содержащая адъювант.

20. Способ получения композиции, заключающийся в предоставлении иммуногенного PCVII-полипептида по любому из пп. 14-16 и объединении указанного полипептида с фармацевтически приемлемьм наполнителем.

21. Применение иммуногенного PCVII-полипептида по любому из пп. 14-16 для приготовления композиции для лечения или предотвращения PCVII-инфекции у позвоночного животного.

22. Применение иммуногенного PCVII-полипептида по любому из пп. 14-16 для приготовления композиции для обнаружения присутствия антител к PCVII в биологическом образце.

23. Иммунодиагностический тест-набор для обнаружения PCVII-инфекции у позвоночного животного, причем указанный тест-набор содержит иммуногенный PCVII-полипептид по любому из пп. 14-16 и инструкции по проведению иммунодиагностического теста.

24. Применение полинуклеотида по любому из пп. 1-6 для приготовления композиции для обнаружения присутствия гомологичных последовательностей PCVII в биологическом образце.

25. Иммунодиагностический тест-набор для обнаружения PCVII-инфекции у позвоночного, причем указанный тест-набор содержит полинуклеотид по п. 1 и инструкции по проведению иммунодиагностического теста.

26. Способ лечения или предотвращения PCVII-инфекции у позвоночного животного, заключающийся во введении указанному животному терапевтически эффективного количества композиции по пп. 18 или 19.

27. Способ обнаружения антител к цирковирусу свиньи Тип II (PCVII) в биологическом образце, заключающийся в (а) предоставлении биологического образца; (б) взаимодействии указанного биологического образца с иммуногенным PCVII-полипептидом по любому из пп. 14-16 в условиях, которые позволяют антителам к PCVII, при наличии их в биологическом образце, связываться с указанным PCVII-полипептидом, образуя комплекс антитело/антиген; и (в) обнаружении присутствия или отсутствия указанного комплекса, и тем самым наличия или отсутствия антител к PCVII в указанном образце.

28. Способ анализа, основанный на гибридизации нуклеотидов для обнаружения гомологичных последовательностей PCVII в биологическом образце, заключающийся в (а) термостатировании биологического образца с полинуклеотидом по любому из пп. 1-6 в условиях, которые стимулируют образование нуклеотидных комплексов между полинуклеотидом и нуклеиновой кислотой PCV II, имеющейся в биологическом образце; и (б) обнаружении комплексов, содержащих полинуклеотид.

29. Способ анализа по п. 28, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид является меченным и комплексы обнаруживают, определяя присутствие метки.

30. Способ анализа по п. 28, отличающийся тем, что указанное обнаружение включает применение двух зондов, специфичных к нуклеиновой кислоте PCVII, причем два зонда соответствуют внутренней области нуклеиновой кислоты PCVII и каждый зонд имеет одну цепь, содержащую 3'-конец, внутренний по отношению к участку, обеспечивающему превращение гибридизационных комплексов нуклеиновая кислота/зонд в двухцепочечные зонд-содержание фрагменты с помощью реакций удлинения праймеров; амплификацию ряда зонд-содержащих фрагментов последовательным повторением стадий: (i) денатурации двухцепочечных фрагментов с образованием одноцепочечных фрагментов; (ii) гибридизации одиночных цепей с зондами с образованием комплексов нить/зонд; (iii) образования двухцепочечных фрагментов из комплексов нить/зонд в присутствии ДНК-полимеразы и всех четырех дезоксирибонуклеотидов; и (iv) повторения стадий с (i) по (iii) до достижения заданной степени амплификации; идентификацию продуктов амплификации.