Эффективный и сбалансированный двунаправленный промотор - RU2019101191A
Код документа: RU2019101191A
Формула
1. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая двунаправленный промотор (промотор hCMV-rhCMV), функционально связанный с первым трансгеном в одном направлении и со вторым трансгеном в противоположном направлении, где промотор hCMV-rhCMV содержит
(i) энхансер, фланкированный
(ii) основным немедленно-ранним промотором цитомегаловируса человека (промотором hCMV) на одной стороне энхансера и
(iii) основным немедленно-ранним промотором цитомегаловируса макака-резуса (промотором rhCMV) на другой стороне энхансера, где
(iv) первый трансген расположен ниже промотора hCMV, и
(v) второй трансген расположен ниже промотора rhCMV.
2. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п.1, где энхансер представляет собой основной немедленно-ранний энхансер цитомегаловируса человека (энхансер hCMV).
3. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из п.1 или 2, где первый и второй трансгены являются разными, и по меньшей мере один из них кодирует антиген.
4. Рекомбинантный вектор или рекомбинантный вирус, содержащий молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3.
5. Рекомбинантный вектор по п.4, где вектор представляет собой плазмидный вектор.
6. Рекомбинантный вирус по п.4, где вирус представляет собой аденовирус.
7. Рекомбинантный вирус по п.6, где аденовирус имеет делецию в участке E1.
8. Рекомбинантный вирус по п.6 или п 7, где аденовирус представляет собой аденовирус человека серотипа 35 или аденовирус человека серотипа 26.
9. Способ получения генетически стабильного рекомбинантного аденовируса, содержащего первый и второй трансгены, где каждый из них эффективно экспрессируется, в случае если аденовирус инфицирует целевую клетку, включающий
a) получение конструкции, содержащей двунаправленный промотор hCMV-rhCMV, определенный в п.1, функционально связанный с первым трансгеном в одном направлении и со вторым трансгеном в противоположном направлении; и
b) встраивание указанной конструкции в геном рекомбинантного аденовируса.
10. Способ по п.9, где энхансер представляет собой энхансер hCMV.
11. Способ по любому из п.9 или 10, где рекомбинантный аденовирус имеет делецию в участке E1 его генома.
12. Способ по любому из пп. 9-11, где первый и второй трансгены являются разными, и по меньшей мере один из них кодирует антиген.
13. Способ по любому из пп. 9-12, где рекомбинантный аденовирус представляет собой аденовирус человека серотипа 35 или аденовирус человека серотипа 26.
14. Способ экспрессии по меньшей мере двух трансгенов в клетке, включающий доставку в клетку рекомбинантного вектора или рекомбинантного вируса по любому из пп. 4-8.
15. Способ индукции иммунного ответа против по меньшей мере двух антигенов, включающий введение пациенту рекомбинантного вектора или рекомбинантного вируса по любому из пп. 4-8.
16. Молекула рекомбинантной ДНК, содержащая геном рекомбинантного вируса по любому из пп. 6-8.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантный вектор или рекомбинантный вирус по любому из пп. 4-8 и фармацевтически приемлемые носитель или эксципиент.
