Вирусоподобные частицы, включающие гибридный белок белка оболочки бактериофага ар205 и антигенного полипептида - RU2409667C2
Код документа: RU2409667C2
Чертежи
Показать все 30 чертежа(ей)
Описание
Текст описания приведен в факсимильном виде.
Реферат
Изобретение относится к области биотехнологии. Модифицированная вирусоподобная частица (ВПЧ) включает гибридный белок, который состоит из белка бактериофага АР205 и какого-либо антигена. Описана также композиция, включающая ВПЧ, являющуюся производной РНК-содержащего бактериофага АР205. Изобретение также описывает способ получения указанной выше ВПЧ. Модифицированная ВПЧ настоящего изобретения применяется для получения композиций для индукции иммунных ответов для предупреждения или лечения заболеваний, расстройств, в том числе инфекционных заболеваний, аллергий, рака и наркомании. Изобретение может быть использовано в медицине, иммунологии, вирусологии и молекулярной биологии. 6 н. и 29 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.
Формула
1. Модифицированная вирусоподобная частица (ВПЧ) для индукции иммунного ответа, включающая по меньшей мере один гибридный белок, в которой указанный по меньшей мере один гибридный белок включает
(а) первый полипептид, где указанный первый полипептид является белком оболочки или его мутеином бактериофага АР205; и
(б) второй полипептид, где указанный второй полипептид является по меньшей мере одним антигеном или его фрагментом, где указанный фрагмент включает по меньшей мере 6 соседних аминокислот указанного антигена; причем указанный второй полипептид слит с указанным первым полипептидом либо с N-, либо с С-конца указанного первого полипептида.
(а) первый полипептид, где указанный первый полипептид является белком оболочки или его мутеином бактериофага АР205; и
(б) второй полипептид, где указанный второй полипептид является по меньшей мере одним антигеном или его фрагментом, где указанный фрагмент включает по меньшей мере 6 соседних аминокислот указанного антигена; причем указанный второй полипептид слит с указанным первым полипептидом либо с N-, либо с С-конца указанного первого полипептида.
2. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид состоит из 124-138 аминокислот.
3. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный белок оболочки бактериофага АР205 или его мутеин выбран из группы, включающей
(а)SEQ ID NO:1,
(б) SEQ ID NO:2,
(в) SEQ ID NO:42,
(г) SEQ ID NO:67;
(д) SEQ ID NO:68,
(e) SEQ ID NO:69 и
(ж) мутеин последовательностей SEQ ID NO:1 или 67.
(а)SEQ ID NO:1,
(б) SEQ ID NO:2,
(в) SEQ ID NO:42,
(г) SEQ ID NO:67;
(д) SEQ ID NO:68,
(e) SEQ ID NO:69 и
(ж) мутеин последовательностей SEQ ID NO:1 или 67.
4. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид является мутеином белка оболочки бактериофага АР205, где указанный мутеин имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:1 или 67, и где не более трех аминокислотных остатков SEQ ID NO:1 или 67 изъяты, добавлены вовнутрь или заменены.
5. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид является мутеином SEQ ID NO:1 или 67, и где один остаток SEQ ID NO:1 или 67 изъят, добавлен вовнутрь или заменен.
6. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид является белком оболочки SEQ ID NO:1.
7. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид является белком оболочки SEQ ID NO:67.
8. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид является белком оболочки SEQ ID NO:69.
9. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный гибридный белок дополнительно включает спейсер, причем указанный спейсер расположен между указанным первым полипептидом и указанным вторым полипептидом.
10. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген, выбранный из группы, включающей
(а) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении раковых клеток,
(б) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного микробного патогена,
(в) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного аллергена,
(г) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного аутоантигена,
(д) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа у сельскохозяйственных и комнатных животных, и
(е) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении полипептидного токсина или полипептидного гормона.
(а) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении раковых клеток,
(б) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного микробного патогена,
(в) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного аллергена,
(г) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного аутоантигена,
(д) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа у сельскохозяйственных и комнатных животных, и
(е) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении полипептидного токсина или полипептидного гормона.
11. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей
(а) полипептид ВИЧ,
(б) полипептид вируса гепатита В,
(в) полипептид вируса гриппа,
(г) полипептид вируса гепатита С,
(д) полипептид Toxoplasma,
(е) полипептид Plasmodium falciparum,
(ж) полипептид Plasmodium vivax,
(з) полипептид Plasmodium ovale,
(и) полипептид Plasmodium malariae,
(к) полипептид Chlamydia,
(л) полипептид клеток рака груди,
(м) полипептид клеток рака почки,
(н) полипептид клеток рака простаты,
(о) полипептид клеток рака кожи,
(п) полипептид клеток рака мозга,
(р) полипептид лейкозных клеток,
(с) рекомбинантный профиль,
(т) полипептид, вовлеченный в выработку аллергической реакции на пчелиный яд,
(у) полипептид, вовлеченный в выработку аллергической реакции на орехи,
(ф) полипептид, вовлеченный в выработку пищевой аллергической реакции,
(х) полипептид, вовлеченный в выработку астматической реакции,
(ц) Her2,
(ч) GD2,
(ш) EGF-R,
(щ) СЕА,
(э) CD52,
(ю) gp100 меланомы человека,
(я) меланА меланомы человека,
(аа) тирозиназу,
(бб) NA17-Ant,
(вв) MAGE3,
(гг) Р53,
(дд) СЭ21,
(ee) HPV16E7,
(жж) белок фосфолипазы А2,
(зз) пептид Der p I,
(ии) белок вируса гриппа М2,
(кк) фрагмент указанного по меньшей мере одного антигена (а) - (я) и (аа) - (ии), и
(лл) вариант указанного по меньшей мере одного антигена (а) - (я) и (аа) - (ии).
(а) полипептид ВИЧ,
(б) полипептид вируса гепатита В,
(в) полипептид вируса гриппа,
(г) полипептид вируса гепатита С,
(д) полипептид Toxoplasma,
(е) полипептид Plasmodium falciparum,
(ж) полипептид Plasmodium vivax,
(з) полипептид Plasmodium ovale,
(и) полипептид Plasmodium malariae,
(к) полипептид Chlamydia,
(л) полипептид клеток рака груди,
(м) полипептид клеток рака почки,
(н) полипептид клеток рака простаты,
(о) полипептид клеток рака кожи,
(п) полипептид клеток рака мозга,
(р) полипептид лейкозных клеток,
(с) рекомбинантный профиль,
(т) полипептид, вовлеченный в выработку аллергической реакции на пчелиный яд,
(у) полипептид, вовлеченный в выработку аллергической реакции на орехи,
(ф) полипептид, вовлеченный в выработку пищевой аллергической реакции,
(х) полипептид, вовлеченный в выработку астматической реакции,
(ц) Her2,
(ч) GD2,
(ш) EGF-R,
(щ) СЕА,
(э) CD52,
(ю) gp100 меланомы человека,
(я) меланА меланомы человека,
(аа) тирозиназу,
(бб) NA17-Ant,
(вв) MAGE3,
(гг) Р53,
(дд) СЭ21,
(ee) HPV16E7,
(жж) белок фосфолипазы А2,
(зз) пептид Der p I,
(ии) белок вируса гриппа М2,
(кк) фрагмент указанного по меньшей мере одного антигена (а) - (я) и (аа) - (ии), и
(лл) вариант указанного по меньшей мере одного антигена (а) - (я) и (аа) - (ии).
12. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный по меньшей мере один антиген включает внутриклеточный домен белка вируса гриппа М2.
13. Модифицированная ВПЧ по п.12, в которой указанный внутриклеточный домен белка вируса гриппа М2 является слитым с N-терминальным концом указанного белка оболочки бактериофага АР205 или его мутеином.
14. Модифицированная ВПЧ по п.3, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген, где указанный по меньшей мере один антиген включает внутриклеточный домен белка вируса гриппа М2.
15. Модифицированная ВПЧ по п.7, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген, где указанный по меньшей мере один антиген состоит из SEQ ID NO:43.
16. Модифицированная ВПЧ по п.15, в которой не более трех аминокислотных остатков SEQ ID NO:43 изъяты, добавлены вовнутрь или заменены.
17. Модифицированная ВПЧ по п.15, где слитый белок дополнительно включает спейсер и, где указанный спейсер расположен между указанным первым полипептидом и указанным вторым полипептидом, и где указанный спейсер является GSGG.
18. Модифицированная ВПЧ по п.4, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген, где указанный по меньшей мере один антиген включает внутриклеточный домен белка вируса гриппа М2.
19. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный по меньшей мере один антиген является аутоантигеном.
20. Модифицированная ВПЧ по п.19, в которой указанный аутоантиген является полипептидом, выбранным из группы, включающей
(а) лимфотоксины (предпочтительно лимфотоксин α (LT α), лимфотоксин β (LT β)),
(б) рецепторы лимфотоксинов,
(в) лиганд рецепторного активатора ядерного фактора kB (РАЯФкВ-Л),
(г) фактор роста сосудистого эндотелия (ФРСЭ),
(д) рецептор фактора роста сосудистого эндотелия (ФРСЭ-Р),
(е) интерлейкин - 5,
(ж) интерлейкин - 17,
(з) интерлейкин - 13,
(и) 1L-23р19,
(к) грелин,
(л) CCL21,
(м) CXCL12,
(н) SDF-1,
(о) M-CSF,
(n) MCP-1,
(p) эндоглин,
(с) GnRH,
(т) TRH,
(у) эотаксин,
(ф) брадикинин,
(х) BLC,
(ц) фактор некроза опухоли α,
(ч) амилоидный бета-пептид (Aβ1-Aβ42),
(ш) Аβ1-Аβ6,
(щ) ангиотензин,
(э) внеклеточный домен CCR5,
(ю) внеклеточный домен CXCR4,
(я) гастрин,
(аа) СЕТР,
(бб) С5а,
(вв) брадикинин,
(гг) дез-Arg-брадикинин,
(дд) фрагмент (а) - (гг) и
(ее) вариант (а) - (гг).
(а) лимфотоксины (предпочтительно лимфотоксин α (LT α), лимфотоксин β (LT β)),
(б) рецепторы лимфотоксинов,
(в) лиганд рецепторного активатора ядерного фактора kB (РАЯФкВ-Л),
(г) фактор роста сосудистого эндотелия (ФРСЭ),
(д) рецептор фактора роста сосудистого эндотелия (ФРСЭ-Р),
(е) интерлейкин - 5,
(ж) интерлейкин - 17,
(з) интерлейкин - 13,
(и) 1L-23р19,
(к) грелин,
(л) CCL21,
(м) CXCL12,
(н) SDF-1,
(о) M-CSF,
(n) MCP-1,
(p) эндоглин,
(с) GnRH,
(т) TRH,
(у) эотаксин,
(ф) брадикинин,
(х) BLC,
(ц) фактор некроза опухоли α,
(ч) амилоидный бета-пептид (Aβ1-Aβ42),
(ш) Аβ1-Аβ6,
(щ) ангиотензин,
(э) внеклеточный домен CCR5,
(ю) внеклеточный домен CXCR4,
(я) гастрин,
(аа) СЕТР,
(бб) С5а,
(вв) брадикинин,
(гг) дез-Arg-брадикинин,
(дд) фрагмент (а) - (гг) и
(ее) вариант (а) - (гг).
21. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей
(а) пептид вируса гриппа М2 (SEQ ID NO:43),
(б) пептид Pre S1 вируса гепатита В (SEQ ID NO:62),
(в) полиэпитопы Nef ВИЧ (SEQ ID NO:23),
(г) GnRH (SEQ ID NO:20),
(д) гастрин G17 (SEQ ID NO:47),
(е) кошачий грелин (SEQ ID NO:59),
(ж) собачий грелин (SEQ ID NO:58),
(з) пептид 1 оболочки ВИЧ (SEQ ID NO:98),
(и) пептид 2 оболочки ВИЧ (SEQ ID NO:99),
(к) CCR5 PNt (SEQ ID NO:45) и
(л) CCR5 ECL2 (SEQ ID NO:91).
(а) пептид вируса гриппа М2 (SEQ ID NO:43),
(б) пептид Pre S1 вируса гепатита В (SEQ ID NO:62),
(в) полиэпитопы Nef ВИЧ (SEQ ID NO:23),
(г) GnRH (SEQ ID NO:20),
(д) гастрин G17 (SEQ ID NO:47),
(е) кошачий грелин (SEQ ID NO:59),
(ж) собачий грелин (SEQ ID NO:58),
(з) пептид 1 оболочки ВИЧ (SEQ ID NO:98),
(и) пептид 2 оболочки ВИЧ (SEQ ID NO:99),
(к) CCR5 PNt (SEQ ID NO:45) и
(л) CCR5 ECL2 (SEQ ID NO:91).
22. Модифицированная ВПЧ по п.1, дополнительно включающая по меньшей мере одну иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, причем указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота упакована внутрь указанной модифицированной ВПЧ.
23. Модифицированная ВПЧ по п.22, где указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота является олигонуклеотидом, содержащим неметилированный мотив CpG.
24. Модифицированная ВПЧ по п.23, в которой указанный олигонуклеотид, содержащий неметилированный мотив CpG, включает последовательность GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID NO:71).
25. Модифицированная ВПЧ по п.23, в которой указанный олигонуклеотид, содержащий неметилированный мотив CpG, который состоит из последовательности GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID NO:71).
26. Модифицированная ВИЧ по п.22, где указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота недосягаема для ДНК гидролиза.
27. Модифицированная ВИЧ по п.22, где связь между нуклеотидами указанной иммуностимулирующей нуклеиновой кислоты является фосфодиэфирной связью.
28. Модифицированная ВИЧ по п.12, дополнительно включающая по меньшей мере одну иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, где указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота упакована вовнутрь модифицированной ВИЧ, и где указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота является олигонуклеотидом, содержащим неметилированный мотив CpG.
29. Модифицированная ВИЧ по п.15, дополнительно включающая по меньшей мере одну иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, где указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота упакована вовнутрь модифицированной ВИЧ, и где указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота состоит из последовательности GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID NO:71).
30. Фармацевтическая композиция для индукции иммунного ответа, включающая
(а) эффективное количество модифицированной ВПЧ по одному из предшествующих пунктов, и
(б) приемлемый фармацевтический носитель.
(а) эффективное количество модифицированной ВПЧ по одному из предшествующих пунктов, и
(б) приемлемый фармацевтический носитель.
31. Композиция вакцины для индукции иммунного ответа, включающая иммунологически эффективное количество модифицированной ВПЧ по одному из пп.1-29.
32. Композиция вакцины по п.31, дополнительно включающая адъювант.
33. Способ иммунизации, предусматривающий введение эффективного количества композиции вакцины по п.31 в организм животного или человека.
34. Способ получения модифицированной ВПЧ по одному из пп.1-29, предусматривающий стадии:
(а) необязательного лигирования в составе рамки считывания нуклеотидной последовательности, кодирующей спейсер, либо с первой нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый полипептид, либо со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй полипептид,
(б) лигирования в составе рамки считывания второй нуклеотидной последовательности с указанной первой нуклеотидной последовательностью с образованием третьей нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный гибридный белок,
(в) необязательного внедрения с 3'-конца первой нуклеотидной последовательности стоп-кодона для супрессии,
(г) экспрессии указанной третьей нуклеотидной последовательности в организме хозяина, предпочтительно при условии, что образующиеся экспрессируемые белки способны формировать указанные модифицированные ВПЧ,
(д) очистки указанных модифицированных ВПЧ, полученных на стадии (г),
где указанный первый полипептид является белком оболочки или его мутеином бактериофага АР205, а второй полипептид является по меньшей мере одним антигеном или его фрагментом, где указанный фрагмент включает по меньшей мере 6 смежных аминокислот указанного антигена;
причем указанный второй полипептид слит с указанным первым полипептидом либо с N-, либо с С-конца указанного первого полипептида.
(а) необязательного лигирования в составе рамки считывания нуклеотидной последовательности, кодирующей спейсер, либо с первой нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый полипептид, либо со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй полипептид,
(б) лигирования в составе рамки считывания второй нуклеотидной последовательности с указанной первой нуклеотидной последовательностью с образованием третьей нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный гибридный белок,
(в) необязательного внедрения с 3'-конца первой нуклеотидной последовательности стоп-кодона для супрессии,
(г) экспрессии указанной третьей нуклеотидной последовательности в организме хозяина, предпочтительно при условии, что образующиеся экспрессируемые белки способны формировать указанные модифицированные ВПЧ,
(д) очистки указанных модифицированных ВПЧ, полученных на стадии (г),
где указанный первый полипептид является белком оболочки или его мутеином бактериофага АР205, а второй полипептид является по меньшей мере одним антигеном или его фрагментом, где указанный фрагмент включает по меньшей мере 6 смежных аминокислот указанного антигена;
причем указанный второй полипептид слит с указанным первым полипептидом либо с N-, либо с С-конца указанного первого полипептида.
35. Способ лечения или предупреждения заболевания, расстройства или физиологических состояний индивидуума посредством индукции иммунного ответа, предусматривающий введение в организм животного или человека эффективного количества модифицированных ВПЧ по пп.1-29.
