Новая полноразмерная геномная рнк вируса японского энцефалита, полуяенная из нее инфекционная кднк jev и их применение - RU2005114015A

Реферат

1. Геномная РНК Корейского изолята JEV, состоящая из полноразмерного РНК-генома длиной 10968 нуклеотидов, причем геномная РНК состоит из 5'-нетранслируемой области (NTR) из 95 нуклеотидов, за которым следует область из 10299 нуклеотидов, кодирующий единственный полипептид, и терминируется 3'-NTR из 574 нуклеотидов.

2. Геномная РНК Корейского изолята JEV по п.1, где геномная РНК JEV представлена SEQ ID NO:15.

3. Геномная РНК JEV по п.2, где эта геномная РНК JEV имеет более, чем 98%-ную гомологию, с геномной РНК JEV, представленной SEQ ID NO:15.

4. Геномная РНК JEV по п.1, где 5'-концевой последовательностью является¹AGAAGT-.

5. Геномная РНК JEV по п.1, где 3'-концевой последовательностью является -GATCT¹⁰⁹⁶⁸.

6. Инфекционная кДНК JEV для полноразмерной геномной РНК JEV по п.1.

7. кДНК JEV по п. 6, где эта кДНК содержит промотор в начале 5'-конца геномной РНК JEV и последовательность узнавания рестрикционной эндонуклеазы на стороне 3'-конца в качестве runoff-сайта.

8. кДНК JEV по п.7, где промотором является промотор SP6 или промотор Т7.

9. кДНК JEV по п.7, где последовательность узнавания рестрикционной эндонуклеазы не существует в геномной РНК JEV.

10. кДНК JEV по п.7, где последовательность узнавания рестрикционной эндонуклеазы является последовательностью узнавания XhoI или XbaI.

11. кДНК JEV по п.7, где эта кДНК JEV выбрана из группы, состоящей из последовательностей, представленных SEQ ID NO:43, 44 и 45, все из которых имеют промотор SP6, и последовательностей, представленных SEQ ID NO:46, 47 и 48, все из которых имеют промотор Т7.

12. Вектор, включающий в себя кДНК JEV для полноразмерной РНК JEV по п.6.

13. Вектор по п.12, где этот вектор использовал бактериальную искусственную хромосому (ВАС) в качестве исходного вектора.

14. Вектор по п.12, где этот вектор выбран из группы, состоящей из плазмид pBAC^SP6/JVFL/XhoI, содержащей кДНК JEV, представленную SEQ ID NO:43, pBAC^SP6 /JVFLx/XhoI, содержащей кДНК JEV, представленную SEQ ID NO:44, pBAC^SP6/JVFLx/XbaI содержащей кДНК JEV, представленную SEQ ID NO:45, pBAC^Т7/JVFL/XhoI, содержащей кДНК JEV, представленную SEQ ID NO:46, pBAC^Т7/JVFLx/XhoI, содержащей кДНК JEV, представленную SEQ ID NO:47, и pBAC^Т7/JVFLx/XbaI, содержащей кДНК JEV, представленную SEQ ID NO:48.

15. Вектор по п.14, где этим вектором является pBAC^Т7/JVFLx/XbaI, имеющая промотор Т7 (номер доступа: КСТС 10346ВР).

16. Вектор по п.14, где этим вектором является pBAC^SP6/JVFLx/XbaI, имеющая промотор SP6 (номер доступа: КСТС 10347ВР).

17. Инфекционный РНК-транскрипт JEV, синтезированный вектором по п.12.

18. Инфекционный РНК-транскрипт JEV по п.17, где не относящиеся к вирусу нуклеотиды на его 3'-конце удалены.

19. Инфекционный РНК-транскрипт JEV по п.18, где не относящиеся к вирусу нуклеотиды удалены обработкой нуклеазой фасоли золотистой (маша) (MBN).

20. Клетка, трансфицированная РНК-транскриптом JEV по п.17.

21. Синтетический JEV, полученный культивированием клетки по п.20.

22. Синтетический JEV по п.21, где в кДНК JEV введена мутация.

23. Способ экспрессии гетерологичных генов, предусматривающий следующие стадии:

1) получение рекомбинантного экспрессирующего вектора кДНК JEV встраиванием гетерологичных генов в вектор кДНК JEV по п.12;

2) получение РНК-транскрипта JEV из вышеупомянутого рекомбинантного экспрессирующего вектора кДНК JEV;

3) получение клетки, трансфицированной вышеупомянутым РНК-транскриптом JEV;

4) экспрессию чужеродных белков культивированием вышеупомянутой клетки.

24. Способ по п.23, где чужеродные гены встроены в начале 3'-NTR JEV кДНК JEV.

25. Диагностический реагент, содержащий элементы, происходящие из геномной РНК JEV или кДНК JEV.

26. Вакцина против JEV, содержащая элементы, происходящие из геномной РНК JEV или кДНК JEV.

27. Терапевтический агент, содержащий кДНК JEV по п.6 в качестве эффективных ингредиентов.