Штаммы вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (prrs) с ослабленной жизнеспособностью - RU2003129068A

Реферат

1. Ослабленный европейский вирус PRRS, кодируемый нуклеиновой кислотой, включающей ОРС1, ОРС2, ОРС3, ОРС4, ОРС5, ОРС6 и ОРС7, отличающийся тем, что:

а) ОРС2 содержит в положениях 11915-11935 по меньшей мере один из нуклеотидов, перечисленных в таблице 1:

в положениях 12037-12057 по меньшей мере один из нуклеотидов, представленных в таблице 2:

и в положениях 12058-12078 по меньшей мере один из нуклеотидов, представленных в таблице 3:

и/или делеции в указанном(ых) положении(ях) и/или

б) ОРС3 содержит в положениях 12660-12680 по меньшей мере один из нуклеотидов, представленных в таблице 4:

и/или делецию в указанном(ых) положении(ях) и/или

в) ОРС5 содержит в положениях 13684-13704 по меньшей мере один из нуклеотидов, представленных в таблице 5:

и/или делецию в указанном(ых) положении(ях).

2. Ослабленный европейский вирус PRRS по п.1, отличающийся тем, что:

а) ОРС2 содержит С, А или G в положении 11925 и/или С, Т или А в положении 12047 и/или А, С или G в положении 12068 или имеет делецию(и) в указанном положении(ях) и/или

б) ОРС3 содержит А, С или G в положении 12670 или имеет делецию в указанном положении и/или

в) ОРС3 содержит G, А или Т в положении 13694 или имеет делецию в указанном положении.

3. Ослабленный европейский вирус PRRS по п.1 или 2, нуклеиновая кислота которого дополнительно отличается тем, что:

а) ОРС2 содержит С в положении 11925 и/или Т в положении 12047 и/или С в положении 12068 или имеет делецию в указанном(ых) положении(ях) и/или

б) ОРС3 содержит С в положении 12670 или имеет делецию в указанном положении и/или

в) ОРС5 содержит Т в положении 13694 или имеет делецию в указанном положении.

4. Ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.1-3, нуклеиновая кислота которого дополнительно отличается тем, что:

а) ОРС2 содержит нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.1 и/или

б) ОРС3 содержит нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.2 и/или

в) ОРС4 содержит нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.3 и/или

г) ОРС5 содержит нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.4. или

его фрагмент, аллельный вариант, функциональный вариант, вариант, полученный на основе вырожденности нуклеотидного кода, слитая молекула или химическое производное.

5. Ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.1-4, нуклеиновая кислота которого отличается тем, что:

а) ОРС2 представляет собой нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.1, и/или

б) ОРС3 представляет собой нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.2, и/или

в) ОРС4 представляет собой нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.3, и/или

г) ОРС5 представляет собой нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.4.

6. Ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.1-5, нуклеиновая кислота которого отличается тем, что она представляет собой нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.5, или его фрагмент, аллельный вариант, вариант, полученный на основе вырожденности нуклеотидного кода, слитая молекула или химическое производное.

7. Ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.1-6, нуклеиновая кислота которого отличается тем, что она представляет собой нуклеиновую кислоту, представленную в SEQ ID No.5

8. Ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.1-3, нуклеиновая кислота которого дополнительно отличается тем, что:

а) ОРС2 включает нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.6, и/или

б) ОРС3 включает нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.7, и/или

в) ОРС4 включает нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.8, и/или

г) ОРС5 включает собой нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.9, и/или

его фрагмент, аллельный вариант, функциональный вариант, вариант, созданный на основе вырожденности нуклеотидного кода, слитая молекула или химическое производное.

9. Ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.1-3 или 8, нуклеиновая кислота которого дополнительно отличается тем, что:

а) ОРС2 представляет собой нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.6, и/или

б) ОРС3 представляет собой нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.7, и/или

в) ОРС4 представляет собой нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.8, и/или

г) ОРС5 представляет собой нуклеиновую кислоту, указанную в SEQ ID No.9.

10. Ослабленный европейский вирус PRRS, где вирус PRRS отличается тем, что:

а) OPC1a (включает) кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.10, и/или

б) OPC1b кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.11, и/или

в) ОРС2 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.12, и/или

г) ОРС3 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.13, и/или

д) ОРС4 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.14, и/или

е) ОРС5 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.15, и/или

ж) ОРС6 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.16, и/или

з) ОРС7 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.17,

или его фрагмент, аллельный вариант, функциональный вариант, гликозилированный вариант, слитая молекула или химическое производное.

11. Ослабленный европейский вирус PRRS по п.10, где вирус PRRS отличается тем, что:

а) OPC1a (включает) кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.10, и/или

б) OPC1b кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.11, и/или

в) ОРС2 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.12, и/или

г) ОРС3 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.13, и/или

д) ОРС4 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.14, и/или

е) ОРС3 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.15 и/или

ж) ОРС6 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.16, и/или

з) ОРС7 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.17.

12. Ослабленный европейский вирус PRRS, где вирус PRRS отличается тем, что:

а) ОРС2 (включает) кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.18, и/или

б) ОРС3 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.19, и/или

в) ОРС4 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.20, и/или

г) OPCS кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.21

или его фрагмент, аллельный вариант, функциональный вариант, гликозилированный вариант, слитая молекула или химическое производное.

13. Ослабленный европейский вирус PRRS по п.14, где вирус PRRS отличается тем, что:

а) ОРС2 (включает) кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.18, и/или

б) ОРС3 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.19, и/или

в) ОРС4 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.20 и/или

г) ОРС5 кодирует аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID No.21.

14. Нуклеотидная последовательность, кодирующая вирус по любому из пп.1-13.

15. Нуклеотидная последовательность по п.14, где нуклеотидная последовательность модифицирована таким образом, чтобы она кодировала маркер вирулентности и/или серологический маркер.

16. Нуклеотидная последовательность по п.14 или 15, где нуклеиновая кислота, кодирующая маркер, локализована в любой из открытых рамок считывания, кодирующих структурные вирусные протеины.

17. Способ получения инфекционного живого ослабленного вируса PRRS, заключающийся в получении рекомбинантной нуклеиновой кислоты, которая содержит по меньшей мере одну полноразмерную копию ДНК или транскрибированную in vitro копию РНК или производное любой из указанных ДНК или РНК, где указанная нуклеотидная последовательность представляет собой нуклеотидную последовательность по любому из пп.14-16.

18. Способ получения инфекционного живого ослабленного вируса PRRS, предусматривающий осуществление следующих стадий:

а) вирус PRRS по любому из пп.1-13 применяют для инфицирования пригодной линии клеток,

б) указанный вирус PRRS ослабляют путем пассажей клеточной культуры.

19. Способ по п.18, где линия клеток представляет собой клетки линии Marc или ее производное.

20. Способ по любому из п.18 или 19, где вирус PRRS представляет собой вирус по любому из пп.1-13.

21. Способ по любому из пп.18-20, где вирус PRRS представляет собой вирус по любому из пп.5, 9, 11 или 13.

22. Линия клеток, содержащая вирус PRRS, по любому из пп.1-13.

23. Линия клеток по п.22, где линия клеток представляет собой линию клеток Маге или ее производное.

24. Фармацевтическая композиция, содержащая вирус PRRS по любому из пп.1-13 и фармацевтически приемлемый носитель.

25. Применение вируса PRRS по любому из пп. 1-13 для приготовления вакцины, предназначенной для профилактики и лечения PRRS-инфекций.

26. Способ ослабления европейского вируса PRRS, отличающийся тем, что

а) нуклеотидную последовательность вируса модифицируют путем сайтнаправленного мутагенеза по меньшей мере в одном из положений ОРС2, соответствующих положениям 130-150 и/или положениям 252-272 и/или положениям 273-293 SEQ ID NO:22;

б) осуществляют тестирование, определяя, является ли полученный вирус PRRS ослабленным.

27. Способ ослабления европейского вируса PRRS, отличающийся тем, что

а) нуклеотидную последовательность вируса модифицируют путем сайтнаправленного мутагенеза по меньшей мере в одном из положений ОРС3, соответствующих положениям 267-287 SEQ ID NO:23;

б) осуществляют тестирование, определяя, является ли полученный вирус PRRS ослабленным.

28. Способ ослабления европейского вируса PRRS, отличающийся тем, что

а) нуклеотидную последовательность вируса модифицируют путем сайтнаправленного мутагенеза по меньшей мере в одном из положений ОРС5, соответствующих положениям 201-221 SEQ ID NO:24;

б) осуществляют тестирование, определяя, является ли полученный вирус PRRS ослабленным.

29. Способ по любому из пп.26-28, где модификация приводит к изменению аминокислотной последовательности кодируемого протеина.

30. Способ по любому из пп.26-29, где модификация представляет собой делецию или замену.

31. Способ по любому из пп.26-30, где модифицируют последовательность каждой из ОРС2, ОРС3 и ОРС5.

32. Способ по п.31, где последовательность ОРС2 модифицируют по меньшей мере в двух, предпочтительно по меньшей мере в трех положениях.

33. Способ по любому из пп.26-32, где модификация приводит к одному или нескольким из следующих результатов: созданию ОРС2, кодирующей протеин, в котором заменены или удалены одна или несколько аминокислот в положениях аминокислотной последовательности, соответствующих положениям 47, 88 и/или 95 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:22; ОРС3, кодирующей протеин, в котором заменена или удалена аминокислота в положении аминокислотной последовательности, соответствующей положению 93 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:23; и/или ОРС5, кодирующей протеин, в котором заменена или удалена аминокислота в положении аминокислотной последовательности, соответствующей положению 71 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:24.

34. Способ по п.33, где модификация приводит к одному или нескольким, предпочтительно всем перечисленным ниже результатам: к созданию ОРС2, кодирующей протеин, который содержит серин в положении, соответствующем положению 47 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:22, ОРС2, кодирующей протеин, который содержит фенилаланин в положении, соответствующем положению 88 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:22, ОРС2, кодирующей протеин, который содержит лейцин в положении 95 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:22, ОРС3, содержащей пролин в положении, соответствующем положению 93 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:23, и/или ОРС5, содержащей фенилаланин в положении, соответствующем положению 71 аминокислотной последовательности, кодируемой SEQ ID NO:24.

35. Способ по п.34, где модификация приводит к одному или нескольким, предпочтительно всем перечисленным ниже результатам: созданию ОРС2, имеющей С в положении, соответствующем положению 140 SEQ ID NO:22, ОРС2, имеющей Т в положении, соответствующем положению 262 SEQ ID NO:22, ОРС2, имеющей С в положении, соответствующем положению 283 SEQ ID NO:22, ОРС3, имеющей С в положении, соответствующем положению 277 SEQ ID NO:23, и/или ОРС5, имеющей Т в положении, соответствующем положению 211 SEQ ID NO:24.

36. Ослабленный европейский вирус PRRS, который можно получать способом по любому из пп.26-35.

37. Ослабленный европейский вирус PRRS, имеющий ОРС2, которая отличается от SEQ ID NO:22 в одном или нескольких положениях от 130 до 150, и/или в одном или нескольких положениях от 252 до 272, и/или в одном или нескольких положениях от 273 до 293.

38. Ослабленный европейский вирус PRRS, имеющий ОРС3, которая отличается от SEQ ID NO:23 в одном или нескольких положениях от 267 до 287.

39. Ослабленный европейский вирус PRRS, имеющий ОРС5, которая отличается от SEQ ID NO:24 в одном или нескольких положениях от 201 до 221.

40. Вакцина, содержащая ослабленный европейский вирус PRRS по любому из пп.36-39, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.

41. Способ вакцинации свиньи против PRRS, отличающийся тем, что указанной свинье вводят эффективное количество вакцины по п.40.

42. Применение ослабленного европейского вируса PRRS по любому из пунктов для приготовления вакцины против PRRS.