Аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ррсс) и его возможное применение в средствах для иммунизации - RU2723040C2

Чертежи

Описание

Область техники

Настоящее изобретение относится к аттенуированному штамму вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и к его применению в качестве вакцины с целью индукции иммунного ответа.

Уровень техники

Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней, обычно обозначаемый сокращенно «вирус РРСС», впервые выделили в Голландии в 1990 во время вспышки инфекции, вызывающей развитие репродуктивной патологии, на свинофермах (19). Постепенно это клиническое проявление заболевания распространилось и на другие страны, не только в Европе, но также в США и в Азии (2, 6, 9, 15). Вирус классифицировали как относящийся к порядку Nidovirales, семейству Arteriviridae, роду Arterivirus (5, 12). Вышеупомянутый возбудитель болезни отличается наличием РНК (SS+, positive-sense single-stranded RNA, одноцепочечная (+)РНК) и геномом, состоящим из 9 открытых рамок считывания (ORF, open reading frame), кодирующих различные вирусные белки, как структурные, так и неструктурные (1, 3, 18). Несмотря на то, что вирус был выделен более 20 лет назад, он продолжает представлять проблему, связанную со здоровьем животных на свинофермах. В дополнение к патологиям репродуктивной системы он отвечает за инфекции дыхательных путей, часто осложненные вторичными инфекциями, вызванными другими возбудителями, что вызывает большие потери животных и влечет за собой огромные финансовые затраты. Сложность контроля данной инфекции связана с двумя основными факторами: 1) постоянной генетической и антигенной вариабельностью вируса (9, 10, 11, 13, 17); и 2) неспособностью организма хозяина активировать полный иммунный ответ (14).

Было показано, что вирус РРСС способен активировать переключение с врожденного ответа на адаптивный ответ с последующей задержкой синтеза антител, нейтрализующих инфекционность вируса, и цитокинов, таких как гамма-интерферон, что приводит к персистированию вируса в свободной форме в организме, к его удалению из зараженных животных по истечении длительного периода времени и последующей передаче инфекции другим восприимчивым животным. Все это приводит к персистированию инфекции на зараженных фермах.

Существует несколько вакцин, специфичных к вирусу РРСС, которые классифицируют по следующим типам: рекомбинантные, живые, аттенуированные и инактивированные (16).

Международная заявка на патент WO2012153160 относится к живой или инактивированной рекомбинантной вакцине, содержащей вирус и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант и/или эксципиент, характеризующейся тем, что вирусный вектор является вирусом, способным индуцировать иммунный ответ за счет повышения образования альфа- и/или гамма-интерферона и способным быстро реплицироваться, а также содержит вставки нуклеотидной последовательности ORF5 и ORF6 вируса РРСС.

Международная заявка на патент WO2013017570 относится к области аттенуированных живых вирусов, применяемых в качестве вакцин или лекарственных средств для предотвращения или лечения свиней с репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), и основана на открытии штамма вируса РРСС, способного индуцировать интерфероновый ответ (интерферон типа I) у природного хозяина, инфицированного указанным возбудителем. В одном варианте осуществления настоящего изобретения вирус РРСС является мутантным вирусом РРСС, содержащим по сравнению с геномом штамма дикого типа мутацию в гене, кодирующем неструктурный белок 1 (nsp1, not structural protein 1) указанного вируса.

Международная заявка на патент WO2013017568 относится к последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей геном инфекционного клона вируса РРСС с генотипом I (EU), применимого для исследования РРСС и для разработки вакцин, терапевтических агентов и для проведения диагностики с целью профилактики, лечения и диагностики РРСС. Заявка на патент раскрывает тот факт, что получение инфекционного клона было начато с вирусного штамма (EUX), выделенного из легких поросенка.

Заявка на патент США US2012189655 относится к аттенуированной живой вакцине, обеспечивающей выраженную иммунологическую защиту свиней от РРСС.

Международная заявка на патент WO9800165 относится к вакцинам против РРСС, полученным посредством аттенуации штаммов дикого типа вируса, выбранных из группы аттенуированных штаммов NADC-8, NADC-9 и NVSL-14. Штамм NADC-8 был выделен из единственного поросенка, оставшегося в живых из всего помета, где остальные поросята погибли в результате природной инфекции вирусом РРСС. Штамм NADC-9 был выделен из легких свиньи с очагами уплотнений в легких, возникших, предположительно, в результате природной инфекции РРСС. Штамм NVSL-14 был отобран из группы 20 полевых штаммов вируса РРСС, поскольку этот штамм реплицировался до образования высокого титра инфекционности в чувствительной клеточной линии (MARC-145). Каждый штамм очищали посредством 3 конечных разведений, а затем аттенуировали посредством уникального процесса быстрой серии пересевов (с суточным интервалом) в клетках MARC-145 при разведении инокулята (≤1:50000) при каждом посеве, а затем тестировали на предмет аттенуации после 84го и после 250го пересева в клеточной культуре, вводя вирус чувствительным молодым свиньям на поздней стадии беременности.

J. Hu et al., Transboundary and emerging diseases, vol.61, no.2, 2013 раскрывает разработку живых аттенуированных кандидатных вакцин против вируса РРСС с помощью серийных пересевов в стабильной клеточной линии со ссылкой на Tian et al. (2009) или с помощью генетической инженерии штаммов дикого типа.

Ограничения доступных в настоящее время вакцин связаны с их неспособностью формировать защитный иммунный ответ в отношении вирусных штаммов со значительно отличающимися геномными областями, которые в основном кодируют структурный гликопротеин 5 (GP5, glycoprotein 5), кодируемый ORF5, и реже - внутренний нуклеокапсидный белок (N, nucleocapsid), кодируемый ORF7. Более того, вакцины, содержащие субъединицы вирусных белков, или вакцины, полученные с применением рекомбинантных векторов, малоэффективны, поскольку не индуцируют полноценный ответ организма.

Описание изобретения

Авторы изобретения выбрали штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), характеризующийся высоким уровнем аттенуации вирулентности и способный индуцировать образование антител так, как это делает вирус РРСС.

Неожиданно авторы изобретения обнаружили, что при проведении серии заражений природных хозяев, т.е. свиней, вирусом РРСС in vivo наблюдалось существенное снижение вирулентности вируса РРСС в отношении хозяев. Действительно, у зараженных свиней клинические симптомы были менее тяжелыми, в то время как виремия продолжает обнаруживаться на пониженном уровне и в течение более короткого периода времени.

Авторы изобретения проанализировали характеристики инокулированного вируса в каждом инфекционном цикле в соответствии со следующими параметрами:

- клинические проявления и гипертермия

- наличие вируса в крови (виремия)

- стимуляция иммунной системы (гуморальный ответ)

- макроскопические наблюдения при вскрытии

- наличие вируса в целевых органах.

Сначала вирус был способен вызывать у зараженных животных тяжелые клинические проявления, характеризующиеся летаргией, тахипноэ, тремором, отеком век, кашлем, одышкой и персистирующей гиперплазией паховых лимфатических узлов длительностью до 20 дней. Некоторые особи погибали. У животных также наблюдалась гипертермия со значениями температуры выше 40°С на протяжении нескольких дней.

Вирус детектировался в сыворотке крови, начиная со второго дня инфицирования, и сохранялся на протяжении более чем 2 дней, в некоторых случаях до 30 дней.

Инфекция активировала классический гуморальный ответ, детектируемый через 7 дней, достигающий максимальных значений через 14 дней.

При вскрытии у животных обнаруживалась интерстициальная пневмония, спленомегалия и гиперплазия паховых лимфатических узлов. Вирус присутствовал в легких, на миндалинах и в медиастинальных и паховых лимфатических узлах.

Указанные условия подвергались постепенной модификации в последующих пассажах, и клинические симптомы у инфицированных свиней были менее выраженными, хотя виремия при этом сохранялась.

Начиная с 18го пассажа in vivo, клинические проявления продолжали постепенно уменьшаться, что привело также к отсутствию гипертермии.

Затем авторы изобретения повторили пересевы in vivo, чтобы добиться на протяжении по меньшей мере 4 последовательных пассажей отсутствия клинических симптомов у свиней, умеренной гипертермии (температуры тела не выше 39°С), отсутствия виремической стадии, отсутствия гистопатологических очагов в целевых органах (в легких, миндалинах, медиастинальных лимфатических узлах) и отсутствия интерстициальной пневмонии и гиперплазии лимфатических узлов. Авторы изобретения обнаружили, что вирус сохранялся в легких и на миндалинах, и спорадически присутствовал в лимфатических узлах, и сохранял способность стимулировать иммунную систему, индуцируя образование гуморальных антител. Затем авторы изобретения выделили вирусный штамм, адаптировали отобранный и очищенный вирусный штамм к клеточной культуре, и провели определение последовательности его генома.

Таким образом, целью изобретения является аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), характеризующийся содержанием полинуклеотида, колирующего по меньшей мере один белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, или его функциональные фрагменты или функциональные производные.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полинуклеотид кодирует по меньшей мере один белок, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10.

Предпочтительно, чтобы указанный полинуклеотид содержал молекулу РНК, соответствующую по меньшей мере одному полинуклеотиду, содержащему последовательность с по меньшей мере 85% идентичностью с нуклеотидами 218-7327 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 89% идентичностью с нуклеотидами 7309-11691 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью с нуклеотидами 11711-12460 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 85% идентичностью с нуклеотидами 11716-11928 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 89% идентичностью с нуклеотидами 12319-13086 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью с нуклеотидами 12861-13412 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 86% идентичностью с нуклеотидами 13409-14014 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 90% идентичностью с нуклеотидами 14002-14523 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 94% идентичностью с нуклеотидами 14513-14899 SEQ ID NO: 1.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один белок, как определено выше, содержит молекулу РНК, соответствующую по меньшей мере одному полинуклеотиду, содержащему основную последовательность с нуклеотидами 218-7327 SEQ ID NO: 1 или последовательность с нуклеотидами 7309-11691 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 11711-12460 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 11716-11928 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 12319-13086 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 12861-13412 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 13409-14014 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 14002-14523 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 14513-14899 SEQ ID NO: 1.

В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один белок, как определено выше, содержит молекулу РНК, соответствующую по меньшей мере одному полинуклеотиду, содержащему последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью SEQ ID NO: 1.

Предпочтительно, чтобы указанная молекула РНК соответствовала полинуклеотиду, имеющему основную последовательность SEQ ID NO: 1.

Предпочтительно, чтобы указанный полинуклеотид был кДНК.

Иными словами, предпочтительно, чтобы аттенуированный штамм настоящего изобретения содержал молекулу РНК, колирующую по меньшей мере один белок или его функциональные фрагменты или функциональные производные, как определено выше. Предпочтительно, чтобы аттенуированный штамм настоящего изобретения содержал молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду ДНК SEQ ID NO:1.

Таким образом, целью настоящего изобретения является аттенуированный штамм вируса РРСС, содержащий молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду ДНК, содержащему последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью SEQ ID NO:1.

Также целью настоящего изобретения является аттенуированный штамм вируса РРСС, содержащий молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду ДНК SEQ ID NO:1.

В настоящем штамме последовательность с нуклеотидами 218-7327 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF1a, последовательность с нуклеотидами 7309-11691 SEQ ID NO:1 соответствует ORF1b, последовательность с нуклеотидами 11711-12460 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF2a, последовательность с нуклеотидами 11716-11928 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 2b, последовательность с нуклеотидами 12319-13086 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 3, последовательность с нуклеотидами 12861-13412 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 4, последовательность с нуклеотидами 13409-14014 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 5, последовательность с нуклеотидами 14002-14523 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 6 и последовательность с нуклеотидами 14513-14899 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 7.

Последовательности с нуклеотидами 1-217 и с нуклеотидами 14900-15012 SEQ ID NO: 1 соответствуют 5ʹUTR (untranslated region, нетранслируемая область) и 3ʹUTR вирусного генома, соответственно.

Предпочтительно, чтобы штамм в соответствии с настоящим изобретением был помещен в Национальную коллекцию культур микроорганизмов в соответствии с Будапештским соглашением (Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes, CNCM) под номером CNCM I-4859 5 июня 2014 г. Информация о размещении:

Учетный номер микроорганизма: CNCM I-4859;

Таксономическое название: вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС);

Название депозитарного учреждения: Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes (CNCM);

Адрес депозитарного учреждения: Institut Pasteur, 25-28, rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, France.

Дата размещения: 5 июня 2014 г.

Таким образом, целью настоящего изобретения является аттенуированный штамм вируса РРСС с указанной выше информацией о размещении.

Авторы назвали штамм настоящего изобретения PRRS/IZSLER/2014.

Штамм в соответствии с настоящим изобретением характеризуется высокой степенью аттенуации вирулентности и способен индуцировать гуморальный ответ, типичный для вируса РРСС.

Другой целью настоящего изобретения является белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, или его функциональные фрагменты или функциональные производные.

Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является белок, имеющий основную аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10.

Другими целями настоящего изобретения являются выделенный полинуклеотид, содержащий по меньшей мере один из полинуклеотидов, определенных выше, или комплементарную последовательность; рекомбинантный экспрессионный вектор, содержащий указанный полинуклеотид; клетка-хозяин, трансформированная указанным рекомбинантным экспрессионным вектором или содержащая полинуклеотид, как определено выше, предпочтительно, чтобы указанная клетка-хозяин была выбрана из клеток животных, растений, дрожжей, бактерий или насекомых, более предпочтительно, чтобы указанная клетка-хозяин была выбрана из клеток поросят или свиней.

Предпочтительно, чтобы полинуклеотид в соответствии с настоящим изобретением содержал молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду SEQ ID NO:1, или полинуклеотид SEQ ID NO:1.

Другой целью изобретения является иммуногенная или вакцинальная композиция, содержащая штамм, как определено выше, или по меньшей мере один белок или его функциональные фрагменты или функциональные производные, как определено выше, или по меньшей мере один полинуклеотид, как определено выше, или по меньшей мере один вектор, как определено выше, или по меньшей мере одну клетку-хозяина, как определено выше, и по меньшей мере один носитель и/или адъювант, подходящий для применения в ветеринарии.

Другой целью настоящего изобретения является штамм, как определено выше, или белок, или его функциональные фрагменты или функциональные производные, как определено выше, или полинуклеотид, как определено выше, или вектор, как определено выше, или клетка-хозяин, как определено выше для применения в качестве лекарственного средства, в частности для применения в вакцинотерапии репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Предпочтительно, чтобы объектом терапии был поросенок или свинья.

Другой целью настоящего изобретения является способ предотвращения инфицирования свиньи вирусом РРСС или развития РРСС, включающий инокуляцию свиньи штаммом, как определено выше, или иммуногенной или вакцинальной композицией, как определено выше.

Иммуногенная или вакцинальная композиция, как определено выше, содержит эффективное количество вирусных частиц в дозе; предпочтительно, содержит приблизительно 10⁵ TCID₅₀/мл, где TCID₅₀ представляет собой медианную инфекционную дозу для культуры ткани (TCID₅₀, 50% tissue culture infective dose, доза заражения 50% культуры ткани). Предпочтительно, чтобы количество плазмиды, как определено выше, или полинуклеотида, как определено выше, в дозе вакцины настоящего изобретения варьировало от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 100 мг. Подходящий размер дозы варьирует от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 10 мл, и, предпочтительнее, от приблизительно 1 мл до приблизительно 5 мл.

В контексте настоящего изобретения «иммуногенная или вакцинальная композиция» относится к композиции, которая индуцирует защитный иммунный ответ, который может включать индукцию образования антител и/или Т-клеточный ответ, у животного, обработанного вакцинальной композицией.

В контексте настоящего изобретения «полинуклеотид» обозначает полинуклеотид ДНК, кДНК иди РНК и включает как одноцепочечные, так и двухцепочечные молекулы.

Любая комбинация описанных выше полинуклеотидов или белков может быть включена в настоящее изобретение.

В настоящем изобретении «молекула РНК, соответствующая по меньшей мере одному полинуклеотиду» обозначает молекулу РНК, идентичную указанному полинуклеотиду, за исключением того, что последовательность РНК содержит урацил вместо тимина, а остов молекулы РНК содержит рибозу вместо дезоксирибозы.

Например, SEQ ID NO:1 является последовательностью кДНК, соответствующей РНК-геному или кодирующей РНК-геном вирусного штамма настоящего изобретения. Таким образом, последовательность ДНК, комплементарная последовательности ДНК SEQ ID NO:1 является, например, матрицей, т.е. является комплементарной или кодирующей РНК-геном вирусного штамма настоящего изобретения.

В контексте настоящего изобретения ссылка на SEQ ID NO:1 включает SEQ ID NO:1, последовательность РНК, соответствующую SEQ ID NO:1, и последовательность ДНК или РНК, комплементарную SEQ ID NO:1.

Термин «комплементарная» последовательность относится к полинуклеотиду, который не является идентичным последовательности, но имеет последовательность оснований, комплементарную первой последовательности, или кодирует такую же аминокислотную последовательность, что и первая последовательность. Комплементарная последовательность может включать полинуклеотиды ДНК и РНК. Под термином «функциональный фрагмент» или «функциональное производное» понимают способность распознаваться молекулой антитела как эпитоп или способность индуцировать защитный иммунный ответ. Предпочтительно, чтобы длина «фрагментов» составляла по меньшей мере 10 аминокислот, 20 аминокислот, 30 аминокислот, 40 аминокислот, 50 аминокислот, 60 аминокислот, 70 аминокислот, 80 аминокислот, 90 аминокислот, 100 аминокислот, 150 аминокислот, 200 аминокислот, 300 аминокислот, 400 аминокислот, 500 аминокислот, 600 аминокислот, 700 аминокислот, 800 аминокислот, 900 аминокислот, 1000 аминокислот, 1200 аминокислот, 1400 аминокислот, 1600 аминокислот, 1800 аминокислот или 2000 аминокислот. «Производные» могут быть рекомбинантными или синтетическими. Термин «производное», как применяют в настоящей заявке в отношении белка, обозначает химически модифицированный белок или его аналог, в котором по меньшей мере один заместитель не содержится в немодифицированном белке или его аналоге, т.е. ковалентно модифицированный белок. Типичными модификациями являются амидные, углеводные, алкильные группы, ацильные группы, сложные эфиры и подобное. Как применяют в настоящей заявке, термин «производные» также относится к укороченным или удлиненным белкам или к белкам с идентичностью по меньшей мере 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, предпочтительнее, по меньшей мере 99% SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:10.

В контексте настоящего изобретения «аттенуированный» штамм обозначает вирусный штамм, способный инфицировать чувствительного хозяина и/или реплицироваться в чувствительном хозяине, но не патогенный или менее патогенный для чувствительного хозяина. Например, аттенуированный вирус может вызывать незаметные/недетектируемые проявления или умеренные клинические проявления или обладать пониженной эффективностью репликации и/или пониженной инфекционностью по сравнению с выделенными дикими штаммами. Выражение «чувствительный» хозяин, как применяют в настоящей заявке, обозначает животное, которое можно инфицировать вирусом РРСС. При введении чувствительному животному аттенуированный штамм вируса РРСС также может индуцировать иммунный ответ в отношении вируса РРСС, что вырабатывает у животного иммунитет к заражению вирусом РРСС.

В настоящем изобретении «по меньшей мере 87% идентичность» обозначает, что последовательность может быть по меньшей мере на 87% или на 90%, или на 95%, или на 100% идентична указанным последовательностям. Это применимо ко всем % идентичности. Предпочтительно, чтобы % идентичности относился ко всей длине указанной последовательности.

В контексте настоящего изобретения носитель может быть любым инертным носителем или композицией, участвующей в доставке вакцины субъекту или улучшающей хранение композиции.

В контексте настоящего изобретения «вектор» может обозначать носитель, способный доставлять целевой полинуклеотид в клетку-хозяина, такой как, например, плазмиды и вирусные векторы.

В контексте настоящего изобретения «клетка-хозяин», как определено выше, предпочтительно является клеткой, в которую можно ввести вектор, например, посредством трансдукции, трансфекции, электропорации, инфицирования или слияния клеток.

В иммуногенной или вакцинальной композиции, как определено выше, подходящие носители могут включать воду, буферы, солевой раствор, липосомы, полимерные материалы, консерванты, масла, эмульсии, стабилизаторы и/или частицы носителя. Специалист в данной области техники может выбрать подходящие носители. Ссылкой на составы вакцин является книга Remington (ʺRemington: The Science and Practice of Pharmacyʺ, Lippincott Williams & Wilkins, 2000). Введение вакцины может быть внутримышечным, интраназальным, подкожным, с помощью разбрызгивания или распыления или с питьевой водой.

Настоящее изобретение будет описано с помощью не ограничивающих его объем примеров со ссылками на следующие фигуры:

Фигура 1. Графическое представление степени идентичности последовательностей вируса 14D 4A 3A и европейского протопита, представленного вирусом Lelystad (GenBank M96262.2 (SEQ ID NO:20)). В верхней части фигуры представлена консенсусная последовательность, в нижней части фигуры представлено выравнивание последовательности клона 14D 4A 3A и последовательности вируса Lelystad, а в центре представлена гистограмма, иллюстрирующая степень идентичности двух последовательностей в разных участках.

Фигура 2. Графическое представление степени идентичности последовательностей вируса 14D 4A 3A и североамериканского прототипа VR 2332 (GenBank U87392.3 (SEQ ID NO:21)). В верхней части фигуры представлена консенсусная последовательность, в нижней части фигуры представлено выравнивание последовательности клона 14D 4A 3A и последовательности североамериканского прототипа VR 2332, а в центре представлена гистограмма, иллюстрирующая степень идентичности двух последовательностей в разных участках.

Примеры

Вирусный штамм, являющийся целью настоящего изобретения, отбирали из изолята (BS/114S/2000), выделенного из сыворотки крови свиньи с прерванной беременностью во время вспышки заражения вирусом РРСС на итальянской свиноферме. Указанный изолят характеризовался высокой вирулентностью не только в полевых условиях, но и в экспериментальных условиях. Экспериментально зараженные животные имели типичные симптомы патологии с гипертермией, угнетением и анорексией такой высокой степени тяжести, что вызывали летальный исход. Вирус сохранялся в кровотоке в течение длительного периода времени, как правило, до 28 дней (4, 7, 8).

Вирусный изолят применяли для инфицирования свободных от патогенной микрофлоры (СПФ) поросят в возрасте 20 дней из СПФ стада Института экспериментальной зоопрофилактики областей Ломбардии и Эмилии-Романии в Брешиа (Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Lombardia e dell'Emilia Romagna). Животных инфицировали интраназально (1 мл/ноздря) и внутримышечно (1 мл), и проводили клинические наблюдения инфицированных свиней, определяли виремию и гуморальный ответ. Животных умерщвляли на пике наблюдаемых клинических проявлений, проводили индивидуальную гомогенизацию целевых органов, представленных легкими, миндалинами и лимфатическими узлами, исследовали их на предмет наличия вируса РРСС и применяли для дальнейших исследований in vivo.

Процесс проводили 22 раза, применяя для каждого нового инфицирования вирус, полученный из одного из указанных выше органов с наибольшей концентрацией вируса. Животных инфицировали интраназально (1 мл/ноздря) и внутримышечно (1 мл).

Затем авторы изобретения повторяли пересевы in vivo, чтобы получить вирус в свиньях, который прошел по меньшей мере 4 последовательных пассажа. Авторы изобретения обнаружили, что вирус не вызывал развития клинических симптомов, а гипертермия наблюдалась на протяжении нескольких дней лишь у нескольких свиней, виремия наблюдалась у некоторых инфицированных свиней в течение короткого периода времени. При вскрытии было показано, что вирус сохранялся в легких и на миндалинах, спорадически присутствовал в лимфатических узлах и сохранял способность стимулировать иммунную систему, индуцируя образование гуморальных антител.

Последние эксперименты с вирусом 22 пассажа проводили на четырех поросятах в возрасте 30 дней, свободных от вируса РРСС, которых экспериментально заражали, применяя тканевой гомогенат, полученный в предыдущем исследовании. Животных инфицировали интраназально (1 мл/ноздря) и внутримышечно (1 мл) и проводили клинические наблюдения, вирусологические и серологические исследования. Результаты подтвердили отсутствие каких-либо проявлений клинических симптомов, спорадическую гипертермию (у 2 из 4 животных), ограниченную 2-4 днями после инфицирования, наличие вируса в целевых органах (паховых лимфатических узлах, легких, миндалинах), удаленных при вскрытии, и серологический ответ. При вскрытии не обнаружили никаких макроскопических очагов поражения, связанных с заражением вирусом РРСС. Вирус присутствовал в образцах сыворотки крови лишь у нескольких животных в течение короткого периода времени, не более 4 дней, в отличие от первых экспериментов, в которых вирус обнаруживался в кровотоке всех зараженных животных вплоть до 28 дней.

Вирусную нуклеиновую кислоту оценивали в молекулярно-биологическом исследовании. Общую РНК экстрагировали из 200 мкл цельной крови или сыворотки, применяя набор реактивов RNeasy™ Mini Kit (Qiagen, Milan, Italy) на приборе QIAcube platform (Qiagen, Milan, Italy) в соответствии с инструкциями производителя. Синтез первой цепи кДНК проводили в конечном объеме 20 мкл. Три микролитра экстрагированной общей РНК применяли в качестве матрицы для синтеза кДНК в присутствии обратной транскриптазы M-MLV и рандомных гексануклеотидных праймеров Random Hexamer, используя набор реактивов GeneAMP kit (AB, Monza, Italy) в соответствии с инструкциями производителя. Амплификацию с помощью ПЦР в реальном времени с зондом TaqMan® проводили на приборе CFX96™ Real-Time System (Bio-Rad, Milan, Italy). Амплификацию РРСС проводили с помощью одностадийной реакции, применяя набор праймеров и зонд, подобранный для гена ORF6 вируса РРСС. Каждая смесь для ПЦР объемом 20 мкл состояла из 1× смеси QuantiTect Virus Master Mix, 1× смеси для обратной транскрипции QuantiTect Virus RT Mix (Qiagen, Milan, Italy), 0,4 мкМ каждого праймера, 0,2 мкМ зонда и 3 мкл общей РНК. Условия амплификации были следующими: обратная транскрипция РНК при 50°С 20 мин, затем 95°С 5 мин, затем 40 циклов денатурации при 95°С 15 сек, отжига-элонгации при 60°С 45 сек и сбора данных (сбора данных флуоресценции). Пороговое значение флуоресценции в приборе CFX96™ Real-Time System выставлялось автоматически.

Несмотря на аттенуированное клиническое течение, у свиней развивался типичный для вируса РРСС гуморальный ответ, характеризующийся синтезом ненейтрализующих гуморальных антител класса IgG приблизительно через 7-10 дней после инфекции и позднее (приблизительно через 60 дней после инфекции) появление нейтрализующих антител.

В частности, серологический тест проводили с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA, enzyme linked immunoassay), применяя коммерческий набор реактивов (IDEXX PRRS X3 Ab Test, USA).

Штаммы вируса РРСС, выделенные из легких, миндалин и лимфатических узлов свиней в описанных выше последних экспериментах, в частности, вирус, обнаруженный в легких одной из этих свиней (№ 247), индивидуально адаптировали и проводили серийное культивирование в клеточной линии MARC-145 (почка плода мартышки; код каталога IZSBS: BS CL 127).

Адаптацию и культивирование в клеточной линии MARC-145 проводили только после решения нескольких проблем, связанных с условиями культивирования, и выработки новой стратегии сокультивирования, позволяющей получать инфицированные клеточные линии MARC-145. Ранее адаптацию вируса BS/114S/2000 к клеточной линии MARC-145 проводили с помощью серийных пассажей, и не было необходимости применять более сложные техники, такие как сокультивирование. Эта стратегия включает первую стадию инфицирования штаммами вируса РРСС, выделенными из описанного выше последнего пассажа первичных клеточных культур альвеолярных макрофагов свиньи (SAM, swine alveolar macrophages), считающихся наиболее восприимчивыми к первому вирусному изоляту клетками. После проверки положительной реакции инфицированные клетки MAS культивировали совместно (способ сокультивирования) с клетками линии MARC-145. Таким образом, вирус мог реплицироваться в макрофагах, а высвобождаясь из них, адсорбировался клетками MARC-145. Такая стратегия позволила перенести инфекцию в клеточную линию MARC-145, в которой вирус начал активно реплицироваться, индуцируя цитопатический эффект, типичный для вируса РРСС.

Вирус, адаптированный к указанной клеточной линии и способный активно реплицироваться, индуцируя тем самым цитопатический эффект, применяли для исследований in vitro в серологических и вирусологических тестах.

Затем получали исходную партию вируса с известной инфицирующей концентрацией (10^6,74 DCP₅₀/мл) на 10 пассаже в клеточной линии MARC-145 и очищали ее, выделяя из 5 бляшек и проводя последующую амплификацию. Для данного исследования в 6-луночных планшетах со средой, обогащенной 5% фетальной бычьей сывороткой, получали клеточную линию MARC-145 и инкубировали ее при 37°С в 5% CO₂. При достижении конфлуентности среду удаляли и инфицировали культуры серией 10-кратных разведений вируса. После 60-минутного периода адсорбции при 37°С в 5% CO₂ вирус удаляли, на культуры наносили слой 1% агара и оставляли застывать при комнатной температуре. Затем планшеты инкубировали при 37°С в 5% CO₂ и ежедневно проверяли на предмет появления изменений клеток, индуцированных вирусом, которые в присутствии агара выглядели как бляшки. При наибольшем разведении некоторые бляшки удаляли и аккуратно разводили в культуральной среде и инокулировали клетки линии MARC-145 в колбах 25 см². При появлении цитопатогенного эффекта и разрушении клеточного субстрата вирус далее очищали, как указано. Описанный процесс очистки проводили три раза и выделяли три бляшки, обозначенные следующими кодами: 14D2A1A; 14D4A3A; 16D5A2A.

Проводили полногеномное секвенирование клона, полученного при выделении из бляшек и обозначенный кодом 14D4A3A.

Исследования качества

Все клоны исследовали на предмет обнаружения бактериальной, грибковой, микоплазменной и вирусной контаминации.

В частности, их инокулировали в микробиологические среды, специально предназначенные для культивирования микробных и грибковых агентов.

Контаминацию бактериями, грибками и дрожжами исследовали после инокуляции 2 мл каждой клеточной суспензии в микробиологическую среду (агар Сабуро, триптический соевый агар и/или сердечно-мозговой экстракт), инкубировали при 30°С и 37°С, соответственно. Более того, возможную контаминацию микоплазмой исследовали с помощью ПЦР в реальном времени, применяя набор реактивов Mycosensor kit (Agilent Company, IT; M-Medical S.r.l., Milano, Italy). И наконец, вирусные контаминации исследовали с помощью молекулярно-биологических реакций, специфичных к следующим вирусам.

Вирус псевдобешенства (Pseudorabies, PRV)

Цирковирус

Вирус гепатита (Torque Teno Virus, TTV)

Пестивирус (вирус вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота, bovine viral diarrhea virus, BVD, и вирус классической чумы свиней, classical swine fever, CSF)

Парвовирус (Parvovirus, PPV)

Лимфотропный вирус герпеса свиней (Porcine lymphotropic herpes viruses, PLHV)

Эндогенные ретровирусы свиней (Porcine endogenous retroviruses, PERV)

Вирус гриппа А

Вирус гепатита Е (Hepatitis E virus, HEV)

Система контроля качества

Исследование проводили в соответствии с двумя системами контроля качества, применяемыми в лаборатории и представленными, соответственно:

ISO 9001 2008 (получение клеточной культуры и биобанк IZSLER);

ISO IEC 17025 (стандартные вирусы и способы анализа).

Получение партий

Как указано ранее, лишь один из трех клонов, полученный из бляшек и обозначенный кодом 14D4A3A, амплифицировали, титровали и секвенировали. Инфицирующая концентрация партии, полученной на 14 пассаже в клеточной линии MARC-145, составляла 10^5,74 цитопатических доз (cytopathic doses, CPD)₅₀/мл, при расчете в соответствии с формулой Рида и Мюнча (Reed and Muench).

Исследования качества

Проведенные исследования показали, что отобранные популяции вируса были свободны от бактериальной, грибковой, дрожжевой и микоплазменной контаминации и свободны от экзогенных вирусов. Контаминацию бактериями, грибками, дрожжами и микоплазмой исследовали, как описано выше.

Другие экспериментальные исследования in vivo

Другое экспериментальное исследование in vivo проводили, чтобы проверить, что применяемый процесс очистки не вызвал изменений биологических характеристик вируса, особенно характеристик аттенуации вирулентности.

Для этого проводили in vivo исследование на поросятах в возрасте 30 дней, свободных от вируса РРСС, полученных с фермы без вируса РРСС в провинции Брешиа, которых инфицировали клоном 14D4A3A.

Применяли те же способы, что и в предыдущих исследованиях, основанные на интраназальной инокуляции (1 мл/ноздря) и на внутримышечной инокуляции такой же дозы (1 мл). У животных не обнаруживалось клинических симптомов и не было гипертермии. Вирус детектировался в кровотоке до четвертого дня после инфекции. С 5-6 дня вирус детектировался в очень низкой концентрации (на пределе визуализации) и совсем не детектировался в последующие дни.

Серологические исследования показали, что при гуморальном ответе, наблюдаемом уже через 6 дней после инфицирования (1 свинья) через 14 дней у обеих свиней, детектировались специфичные антитела в соответствии с тем, что было обнаружено в предыдущих экспериментах.

В частности, проводили серологическое исследование, как описано выше.

Вскрытие, проведенное через 14 дней после инфицирования, не выявило никаких макроскопических очагов поражения, вызванных заражением вирусом РРСС.

Целевые органы (миндалины, селезенка, доли легкого, легочные лимфатические узлы, мезентериальные лимфатические узлы, паховые лимфатические узлы) двух зараженных свиней были положительными в отношении содержания вируса, а наибольшая концентрация вируса была в миндалинах и долях и верхушках легкого, как показано в следующей таблице.

Вирусную нуклеиновую кислоту исследовали с помощью молекулярно-биологических способов, описанных выше.

Микробиологические исследования целевых органов двух свиней, проведенные в соответствии с описанными выше способами, не выявили никаких бактериальных или микоплазменных инфекций.

В успешно выделенном вирусном клоне 14D4A3A не обнаруживалось никаких изменений характеристик аттенуации вирулентности. Авторы изобретения назвали его PRRS/IZSLER/2014.

Таблица 1. Результаты ПЦР в реальном времени, проведенной на органах 2 свиней, инфицированных клоном 14D4A3A вируса

Пороговые значения, отмеченные звездочкой, соответствуют наибольшей концентрации вирусной нуклеиновой кислоты.

Секвенирование генома - Аннотация и сравнение с референтными вирусами Lelystad (GenBank M96262.2) и VR-2332 (GenBank U87392.3)

Клон 14D4A3A центрифугировали при 55000 g/60 мин при 4°C; осадок разводили в 2 мл фосфатно-солевого буфера и проводили секвенирование генома, как указано ниже. Из клона 14D4A3A вируса РРСС экстрагировали общую РНК на колонках из набора реактивов (RNeasy mini kit, QIAGEN, Milan, Italy).

С экстрагированной общей РНК проводили обратную транскрипцию с праймером для обратной транскрипции PRRS-RT (Таблица 2), специфичным к вирусу РРСС, в соответствии со стандартными процедурами.

Полученную кДНК амплифицировали со специфичными праймерами для получения 4 перекрывающихся ампликонов, способных покрыть весь геном вируса РРСС от 5'UTR до 3'UTR (Таблица 2).

Затем полученные с помощью ПЦР ампликоны очищали, применяя NucleoSpin Gel и набор PCR Clean-up kit (MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG, Germany), проводили количественную оценку с помощью спектрофотометрии и получали библиотеку ДНК для секвенирования с помощью набора Nextera-XT kit (Illumina, Inc. - Worldwide Headquarters, San Diego, CA 92122 USA).

Реакцию секвенирования проводили на приборе Illumina MiSeq. Проводили сборку вирусного генома de novo с помощью программного обеспечения DNASTAR NGen (DNASTAR, Inc, WI, USA) и анализировали с помощью DNASTAR Seqman Pro. Получали единый контиг из 15012 нуклеотидов в результате сборки 30712 начальных последовательностей («прочтений») со средним покрытием 372 (SEQ ID NO: 1). Последовательность аннотировали с помощью программного пакета GeneQuest DNASTAR.

Таблица 2. Последовательность праймеров для реакции обратной транскрипции и для амплификации генома клона 14D4A3A вируса РРСС.

Исследуемую последовательность клона вируса РРСС выравнивали с последовательностью референтного штамма вируса РРСС Lelystad (GenBank M96262.2), применяемого в качестве прототипа европейских штаммов, и VR-2332 (GenBank U87392.3), применяемого в качестве прототипа американских штаммов.

Результат выравниваний показан в составной форме ниже (Таблица 3).

Таблица 3. Сходство нуклеотидной последовательности клона 14D4A3 A вируса РРСС и вируса Lelystad (GenBank M96262.2) и VR-2332 (GenBank U87392.3).

Клон 14D 4A 3A вируса РРСС выравнивали с вирусом Lelystad (GenBank M96262.2) (европейский прототип вируса РРСС) и с VR-2332 (GenBank U87392.3) (американский прототип вируса РРСС) с помощью программы ClustalW; анализ показал процент нуклеотидной идентичности, показанный в Таблице 3. Фигура 1 и Фигура 2 являются графическими представлениями выравнивания клона 14D 4A 3А вируса РРСС с вирусом Lelystad (GenBank M96262.2) и VR-2332 (GenBank U87392.3), соответственно, полученными с помощью Geneious.

Литература

1) Balasuriya and Snijder (2008). "Arteriviruses". Animal Viruses. Molecular Biology. Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-22-6.

2) Barboza, David. Chinese Pig Virus Causes Concern Around the Globe. The New York Times. August 15, 2007.

3) Benfield D, Collins J, Dee S, Halbur P, Joo H, Lager K, et al. Porcine reproductive and respiratory syndrome. In: Straw BE, D'Allaire S, Mengeling WL, Taylor DJ, editors. Diseases of the swine. 8° ed. Ames, Iowa: Iowa State University Press; 1999. pp. 201-32.

4) Candotti P, Dotti S, Amadori M, Villa R, Lombardi G, RotaNodari S, Ferrari M. Experimental infection of pure bred landrace pigs with porcine respiratory and reproductive virus (PRRSV): clinical and laboratory findings. 20th IPVS Internationl Pig Veterinary Science Congress: Durban, South Africa, 22-26 June 2008: proceedings.

5) Cavenagh D. Nidovirales: a new order comprising Coronaviridae and Arteriviridae. Arch Virol 1997; 142: 629-33.

6) Collins J, Benfield D, Christianson W, Harris L, Hennings J, Shaw D, et al. Isolation of swine infertility and respiratory syndrome virus (isolate ATCC VR-2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic pigs. J Vet Diagn Invest 1992; 4: 117-26.

7) Corradi A, Ferrari M, Cantoni Am, Robotti C, Alborali L, of Lecce R, Candotti P, Sandri Gp, Borghetti P.Study on the virulence, cell-mediated immune response and histolesivity of three field PRRSV strains with an ORF 5 genetic variation Vet Res Commun. - Vol. 29 suppl 2 (2005). pp. 241-243.

8) Ferrari M, Tosini A, Corradi A, Borghetti P, Scalvini A, Cantoni Am, Ferrando L, Alborali L. Experimental infection with a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) strain with relevant genomic mutations in the ORF5 region. PRRS PMWS swine influenza: 4th International Symposium on emerging and re-emerging pig disease: Rome, June 29th - July 2nd, 2003: proceedings

9) Song J, Shen D, Cui J, Zhao B (Oct 2010). "Accelerated evolution of PRRSV during recent outbreaks in China". Virus Genes 41 (2): 241-5. PMID 20652733.

10) Kapur V, Elam MR, Pawlovich TM, Murtaugh MP. Genetic variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in the midwestern United States. J Gen Virol. 1996 Jun; 77 (Pt 6): 1271-6.

11) Lee, C. and Yoo, D. Cysteine residues of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus small envelope protein are non-essential for virus infectivity. J Gen Virol. 2005 Nov; 86 (Pt 11): 3091-6.

12) Meulenberg, J. J.; Hulst, M. M.; de Meijer, E. J.; Moonen, P. L.; den Besten, A.; de Kluyver, E. P.; Wensvoort, G., and Moormann, R. J. Lelystad virus, the causative agent of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (PEARS), is related to LDV and EAV. Virology. 1993 Jan; 192 (1): 62-72.

13) Meng XJ, Paul PS, Halbur PG, Morozov I. Sequence comparison of open reading frames 2 to 5 of low and high virulence United States isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. J Gen Virol. 1995 Dec; 76 (Pt 12): 3181-8.

14) Murtaugh M.P, Xiao Z, Zuckermann F. Immunological responses of swine to porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection. Viral Immunol. 2002; 15: 533-547.

15) Nelsen C, Murtaugh M.P, Faaberg K. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus comparison: divergent evolution on two continents. J Virol 1999; 73: 270-80.

16) Petrini S, Ramadori G., Villa R, Borghetti P, De Angelis E, Cantoni AM, Amici A, and Ferrari. Evaluation of Different DNA Vaccines against Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRS) in Pigs. Vaccines 2013, 1(4), 463- 480; doi: 10.3390/vaccines 1040463.

17) Stadejek T, Stankevicius A, Murtaugh MP, Oleksiewicz MB. Molecular evolution of PRRSV in Europe: Current state of play. Vet Microbiol. 2013; 165: 21-8.

18) Thiel HJ, Meyers G, Stark R, Tautz N, Rumenapf T, Unger G, Conzelmann KK., Molecular characterization of positive-strand RNA viruses: pestiviruses and the porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV). Arch Virol Suppl. 1993; 7: 41-5.

19) Wensvoort G. Lelystad virus and the porcine epidemic abortion and respiratory syndrome. Vet Res 1993; 24: 117-24.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Институт экспериментальной зоопрофилактики областей Ломбардии и Эмилии-Романии «Бруно Убертини» (IZSLER) (Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Lombardia e dell'Emilia Romagna "Bruno Ubertini" (IZSLER))

<120> Аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и его возможное применение в средствах для иммунизации

<130> 126779 PCT

<150> RM2014A000407

<151> 2014-07-21

<160> 21

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 15012

<212> ДНК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 1

tgtgtagggt attcccccta cgcgcgcaac acttctagtg tttgtgtgcc ttggaggcgt 60

gggtatagcc ccgccccacc tcttggcccc tgttctagcc caacaggaat ccttctccct 120

cggggcgagt gcgccgcctg ctgctccctt gcagtaggaa ggacctcccg agtatttccg 180

gagagcacct gctttacggg acctccaccc tttaaccatg tctgggacgt tttcccggtg 240

catgtgcacc ccggctgccc gggtattttg gaacgccggc caagtctttt gcacacggtg 300

tctcagtgca cggcctcttc tccctccgga gcttcaggac actgatcttg gtggaattgg 360

cttattttac aggcccaaag acaagcttcc ctggaaagtt cccattggca tcccccaagt 420

ggagtgcacg ccatccgggt gctgctggct gtcagccgtt ttccctttgg cgcgcatgac 480

ctccggcaac cacaatttcg tccaacgact tgtgaaagtt gctgatgtgt tgtaccgtga 540

cggttgcttg acccctcgac accttcgtga actccaagtt tacgagcgtg gttgcaactg 600

gtacccgatc acggggcccg tgcccgggat gggtttgttc gcgaactcca tgcacgtgtc 660

tgaccaaccg ttccctggtg ccacccatgt gttgacgaac tcgcctctgc ctcagcaggc 720

ttgtcgacag ccgttctgcc catttgagga ggcccattct gacgtgtata agtggaagga 780

agttgtggtt ttcatggact cctcccccaa cggtcgatct cgcatgatgt ggatgccgga 840

gtccggtgat tcagctgccc tggaggcatt accgcctgag ttagaacgtc aagtcgaaat 900

cctcattcgg agctttcctg cccaccatct tgttgacctt accgactggg agctcactga 960

gtcccctgag cacggttttt ccttcggcac gtcttatcct tgtggttacc ttgcccaaaa 1020

cccttatggt tttgatggca agtgttggct ctcctgcttc ttgggcctgc cgaccaaagt 1080

ttggcgtcat gaggagtatc tagctagcgc tttcggttat cagaccaagt ggggcgtaca 1140

tggcaaatac ctccagcgta ggcttcaaat taacggtgtc cgtgctgcgg tcgatcctga 1200

cggtcccatc cacgttgaag cgctgtcttg cccccagtct tggattaggc acctgacttt 1260

ggacgatgat gttaccccag gattcgttcg cctgatgtcc ctccgcattg taccgaacac 1320

agagcctact accctcccaa tcttccggtt tggggcgcat aaatggtatg gggcagctgg 1380

caaacgagct cgcgccaagc gtgctgccaa aggtaagggg gattcgaatt ccacccccga 1440

agttgcccga gtggctccca ctcacggggt tatcacctat tccccaccgg cagatgggtc 1500

ctgtggttgg catgttattg ccgccgtgat gaaccatatg atgaatggtg aactcacgtc 1560

ccctctgact ccgtacaaca gaccagagga cgactgggct tctgattatg atcttgtcaa 1620

gacaatccaa tatttgcaac tgcccgcaac cgtggttcgg gcccgcgcct gtcccaacgc 1680

taagtacctt gttaagctta atggggtcca ttgggaagta gagatgaggc cgggagtggc 1740

ccctcgctcc cttcctcgcg aatgtgtagt tggcgtctgc tctgaaggct gcgtcacgcc 1800

gcctctttca gagagggtgt tgcctgaccg tgcactcgag gccctggcat ctgcttacag 1860

attgccttcc gactgtgtct gtgacgctgt tgctgacttc ctctccaacc cgccctctca 1920

aggatcctgg actctcgaca gaatgctaac ctccccgtca ccagaacagt ctggtttttc 1980

tagcttgtac agactgctat tggaggttgt tccgcagaaa tgcggagcca cagagggggc 2040

tttcgtctat gccgttgaca ggatgttgaa ggattgtccg agccctaaac aagccatggc 2100

ccttttgggg aaaatcaaaa tcccatcctc gaaggcctcg tctgtgtcct tggacgagtg 2160

ctttcctaca gatgttttga ctgtccccgg gtcggtgttt caggaagagc cccaaagctt 2220

tgacaacgcc atcgccctgt gttcgctgga aaaacaaaag gaaactgagg gggcaagccc 2280

aggaaaagct caagaaagtg attgtaagac cttccgctct gtggttcctg ccgagaaacc 2340

taacatgcag caagtgccgt tggttgagga tgagcaattg aagctcggcg gttgtgactc 2400

agccgttgcg acggttgata gtgatcgggg aaatgaaccg ttagacctat cccgatcagc 2460

cccaactgca acaacaacct ccgtcggagg gcgagcaccc gacaacccgg gccccaacac 2520

tagcgtccgc tccactaccg ttcaagagtc ggttccgggg aggcccgtgc cccgccttgt 2580

tgagcgatgc ggcgtggagt cggacaacag caattcgccc ctggatttgt ctaaggcgca 2640

gaccccagac cggcccctgg acctatcttt agccgcttgg ccagtgaggg ctactgcgtc 2700

tgaccccggt tgggtcgacg gtaggcgcga acctgtcttc gttaagcctc gcggtgcctt 2760

ctctgacagc gagtcagtca ttcggtttgg gggggtttct gagactagct ctatcattga 2820

gtttgaccgg acagaagaaa ctccggtgac tgacgtcccc atcgacttaa caacttcaaa 2880

cgagactctt tccggggcag accccttcga acttgctgaa cctaagcgtc cgcgcctctc 2940

cgctcaagct ttgattgacc gaggtggccc acttgctgat gtccatgcaa aaataaaaaa 3000

tcgagtgtat gaacagtgcc tccaggcttg cgaacccggc agtcgtgcaa ccccagccac 3060

aaaggaatgg ctcgacaaaa tgtgggagag ggtcgatatg aagacctggc gttgtacctc 3120

gcagttccaa gcagcctaca tactcgggcc cctcaaattc cttccagata tgattcgtga 3180

cgcgccacct cctgtcccca ggaaggatcg ggcttgtgac agtgccagct tgaagcaatt 3240

agtggcacgg tgggagaaga gattgaatgc agtccctctt caaggaccgg ttgagccgga 3300

gcttggccgg accgctccct cgtccgtgaa tgcccagcca gaagaagcca tcccttccga 3360

tggaccacct caagcgccgg accctcctgg accaacaagt gctggtaggg gttttaaagg 3420

acttatatcc cccggcatcc gccttatagg gtccgctagc cagcgcttca tgacatgggt 3480

ttttgaaatt tactcccatc tcccagcttt tatgctcaca cttttctcgc cacggggctc 3540

tatggttaca agtgattggc tgtttgcagg tgttgtttta tttgctctcc tgttttgtcg 3600

ttcttgcccg atactcgggt gcctaccgct attgggtgtc ttttctggtt ctgtgcggtg 3660

tgttcgtctg ggcgtttttg gctcttggat ggcttttgct gtatttttat tctcgactcc 3720

aaccaatcca atcggttctt cttgtgacca cgattcgccg gagtgtcatg ctgagctttt 3780

ggctcttgag cagcgccaac tttgggaacc tgtgcgcagc cttgtggttg gcccctcagg 3840

cctctcatgc gtcattctgg gtaagctgct cggtgggtca cgttatctct ggcatgttgt 3900

cttacgttta tgcatgctcg cggacttggc cctttctctt atttatgtgg tgtcccaagg 3960

gcgttgttac aagtgttggg gaaagtgtat aaggacagct cctgcagagg tggccctcaa 4020

tgtgtttccc ttctcgcgcg ccactcgttc ttctcttgta tccttgtgcg atcggttcca 4080

ggcgccaaaa gaggttgacc ccgtgcactt ggcaacaggt tggcgcgggt gttggcgtgg 4140

tgagagtccc attcatcaag cgcaccagaa gcctatagct tacgccagcc tggatgaaaa 4200

gaagatatct gcccagacgg tggttgctgt gccgtacgat cctagtcagg ccgtcaaatg 4260

cttaaaggtt ttgcaggccg gtggagccat cgtggatcaa cctgttcctg aggtcatccg 4320

tgtgtccgaa gttcctttct cagccccatt ctttccaaag gttccagtca acccagattg 4380

tagggttgtg gtggattcgg acacctttgt ggccgcggtt cgctgcggtt actcgacggc 4440

acaactgatc ctaggtcgag gcaactttgc caagttaaac cagaccccac ccaagaactc 4500

catccccacc aagtcgaccg gtggggcctc ttacaccctt gccgtgaccc aagtgtctgt 4560

gtggactttg gtacacttca tcatcggcct ttggttgacg tcgcctcagg tgtgtggtcg 4620

gggaacctca gacccgtggt gttcaaatcc tttttcgtac cctacttatg gccctggagt 4680

tgtgtgctcc tctcgacttt gtgtgtctgc tgacggggtc accctaccgt tgttttcagc 4740

cgtggctcaa ctctctggca gagaggtggg ggtttttatt ttggtgctcg tctccttgat 4800

ctccttagcc catcgcctgg ctctcaaggc agatatgctg gtggtctttt cggcattttg 4860

tgcttacgcc tggcccatga gctcctggtt gatttgcttc tttcccatac tcctgaggtg 4920

ggtcaccctt caccctctca ctatgctttg ggtacattca tttctagtgt tttgcctgcc 4980

agctgccggc gtcctttcac tgggtatatc tggtttcctc tgggcagttg gccgtttcac 5040

tcaggttgcc ggaattataa caccttatga catccaccaa tatacttccg ggccgcgcgg 5100

cgcggccgct gtagcaacgg cccctgaagg cacctacatg gccgccgttc ggagagctgc 5160

cttgaccggt cggactttga ttttcacgcc atcagcagtt ggatccctcc ttgaaggtgc 5220

ttttaggact aataagccct gcctcaacac ggtgaatgtc gtaggttcct ctctcggctc 5280

cgggggtgtc ttcaccgtgg gtggcagtaa gataattatc acagccaccc acgtgctgaa 5340

cggtgatgca gctagggtca ccggcgactc ttacaatcgt atgcacactt ttaaaaccaa 5400

tggtgattat gcctggtccc gtgctgatga ctggcagggt gtcgctcctg ctgttaaagt 5460

cgcgaagagg taccgtggcc gtgcctactg gcaaacatca actggtgtcg agcccggcat 5520

cattggggag gggttcgcct tctgtttcac caactgtggc gactcaggat cacctgtcat 5580

ttcagagact ggtgacctca tcggggttca caccggctca aacaaacttg gttctggtct 5640

tgtaacgacc cctgaagggg agacctgctc catcaaagaa actaagctct ctgaactttc 5700

tagatacttt gcaggtccga gtgtccctct cggagacgtg aggttaagtc cggccattat 5760

ccctgatgtg gcgtttattc cgagtgattt agcatcgctc cttgcttctg tccctgtaat 5820

ggagggcggc ctctcaaccg tccaacttct atgtgttttc tttcttctct ggcgcatgat 5880

gggccatgct tggacaccca ttattgccgt aagcttcttt ttactgaatg aaattcttcc 5940

agcagttttg gtccgtgctg tattttcttt tgcacttttt gtgcttgcgt gggccacccc 6000

ttggtctgca caggtgttga tgataagact cctcactgcg gccctcaacc gtaacaggct 6060

ttctctagct ttttatgcac tcgggggtgt tgtcggctta gctgctgaga tcgggacttt 6120

tgctggtaaa ctgactgaat tgtcccaggt cttgtccaca tactgctttc tacccagggt 6180

cattgccatg actagttgtg tccccgtcat catcatcggt gggcttcacg ccctcggtgt 6240

aatcctatgg ctgttcaagc accgttgcct ccacaatatg ctggttggtg acgggagttt 6300

ctcaagcgcc ttcttcctgc ggtattttgc agaaggtaat cttaggaaag gcgtctcgca 6360

gtcttgtggc atgagtaacg aatccttaac ggctgctctg gcctgtaagt tgtcgcaggc 6420

tgaccttgat tttctatccg gcttgacgaa cttcaagtgc ttcgtgtccg cctcaaacat 6480

gaaaaatgct gctggccagt acatcgaagc agcgtacgcc aaagccctgc gtcaggagtt 6540

ggcctctcta gtccaagtcg acaaaatgaa aggggttctg tccaagctcg aagcttttgc 6600

tgagatggct actccatccc tggatacagg agatgtggtt gttctactcg ggcaacaccc 6660

tcacgggtcc attcttgaca tcaatgttgg gactgaaagg aagaccgtgt ctgtgcaaga 6720

aacccgaagc ctaggcgggt ccaaattcag tgtctgcacc gttgtgtcca acacgcccgt 6780

tgacgccctg accggcattc cacttcagac accgacccca ctctttgaga atggcccacg 6840

ccaccgcagc gaggatgatg atcttaaggt tgagaggatg aagaaacact gcgtctccct 6900

cggcttccat aatatcaatg gcaagattta ctgcaaggtc tgggacaagt caaccggtga 6960

caccttctac acggatgatt cccggtatac ccaagaccat gcctttcagg ataggtcagc 7020

tgattacaga gatagggact atgagggtgt gcaaatcgcc cctcaacaag gattcgaccc 7080

gatgtctgaa acccccgttg gcactgttgt aattggcggt atcacgtaca gtaggtacct 7140

agttaaaggc aaggaggtgt tgatccccaa acccgacaac cattttgaag ccgccaagct 7200

ttccctcgag caagccctcg ctgggatggg ccagacttgt gaccttacag ctgccgaggt 7260

ggagaagctg aagcgcatta tcagtcaact ccaaggccta accactgaac aggctttaaa 7320

ctgttagccg ccagcggttt gacccgctgt ggccgcggcg gcttggttgt gacagaaacg 7380

gcggtaaaaa ttgtgaaata ccacagtaga actttcactt taggccctct agacttaaaa 7440

gtcacttctg aggcggaagt aaagaaatca actgagcagg gccacgctgt tgtagcaaac 7500

ttatgctccg gtgtcgtctt aatgaggcct cacccgccat ctcttgttga tgttcttctg 7560

atacctggac ttgacacagc acccggcatt caaccagggc atggggccgg aaacatgggt 7620

gtgaacggtg ccatctggga tttcgaaact gcacccacta aggcagaact cgagttgtcc 7680

aagcaaataa ttcaggcctg tgaggttagg cgcggggacg ccccgaacct ccaactcccc 7740

tacaagctcc accctgttag gggagaccct gaacggcgca atggccgtct cattaacacc 7800

aggttcggag atttgcccta caagaccccc caggacacta ggtccgcgat tcacgcggct 7860

tgctgcctgc atcccaacgg ggtcccggtg tctgatggca aatctacatt aggcaccact 7920

ctccagcgtg gttttgagct ttacgttccc acagtacctt acagtgtctt agagtacctt 7980

gattcacgcc ctgatacccc cttcatgtgt actaaacatg gtacttctga ggctgctgca 8040

gaggacctcc aaaaatacaa cctgtccact caagggtttg tcctgcctgg agtcctccgc 8100

ctagttcgta gattcatctt tggccatatt ggaaaggcgc cgccattgta cctcccatca 8160

acttatcctg ccaaaaactc tatggcagga atcaatggcc aaaggttccc aacaaaggat 8220

gtccagagca tacctgaggt tgatgaaatg tgcgctcgcg ccgtcaaaga taattggcag 8280

actacgacgc cttgcaccct caagaaacag tactgttcca aacccaaaac taggactatc 8340

ctgggcacta ataacttcat tgccttggcc catagatcgg cactcagtgg tgtcacccag 8400

gcgttcatga agaaagcttg gaaatcccca attgccttgg ggaagaacaa attcaaggag 8460

ttgcactgcg ctgtcgctgg caggtgcctc gaggccgacc tggcctcctg tgatcgcagt 8520

accccagcca ttgtgaggtg gtttactgcc aatctcctgt atgaacttgc aggatgtgag 8580

gaatacttgc ctagctatgt gctcaactgc tgtcacgacc tcgtggcgac tcaggatggc 8640

gcttttacaa aacgcggtgg tctgtcgtct ggggaccccg tcaccagtgt gtctaacacc 8700

gtgtattcac tggtgattta tgcccagcac atggtgctgt cagccttgaa aatgggccac 8760

gaaattggcc ttaaattcct cgaggaacag cttagattcg aggacctcat tgaaatccag 8820

cccatgttgg tgtactccga tgaccttgtc ttgtatgctg agaagcccac ctttcccaat 8880

taccattggt gggtcgagca ccttgatttg atgctgggct tcaaaacgga cccgaaaaag 8940

accatcataa ctgataaacc cagcttcctc ggctgcagaa ttgaggcagg gcggcagtta 9000

gtccccaatc gcgaccgtat cctggccgct cttgcatacc acatgaaagc gcagaacgcc 9060

tcagagtatt acgcgtctgc tgccgcaatc ctcatggatt catgtgcttg cattgactat 9120

gaccctgagt ggtatgagga tctcatctgt ggtattgctc ggtgtgctcg tcaagatggc 9180

tatagttttc caggcccggc atttttcatg tccatgtggg agaagctgaa aagccacaat 9240

gaggggaaaa aattccgcca ctgcggcatc tgtgatgcta aggccgacca tgcgtccgcc 9300

tgtgggcttg acttgtgttt gttccactcg cattttcatc aacactgtcc cgttacactg 9360

agctgcggtc accatgctgg ttcaaaagag tgcccgcagt gtcagtcacc tgtcggggct 9420

ggcaagtccc ctcttgacac tgtgttgcag caaatcccgt ataaaccacc tcgcactgtc 9480

ataatgaagg tgaacaataa aacaacagcc cttgacccgg ggaggtacca gtcccgtcgg 9540

ggtcttgtcg cagtcaagag gggaattgca ggcaatgagg ttgatcttgc tgacggggac 9600

taccaggtgg tgcccctcct gccgacctgc aaagatataa acatggtaaa ggtggcttgc 9660

aatgtgttac tcagcaagtt catagtgggg ccgcccggct ccggaaaaac cacctggtta 9720

ctgaaccaag ttcaagagga tgttgtcatc tacacaccca cccatcaaac tatgttcgac 9780

atagtcagtg ccctcaaggt ttgcaggtat tcaatcccag gagcctcagg gctccccttc 9840

ccaccgcctg ccagatctgg accgtgggtc agacttgtcg ccagcgggca cattcctggc 9900

cgagtttcat accttgacga ggctgggtat tgcaaccatc tggacatcct cagactgctt 9960

tccaaaacac cccttgtgtg tttgggtgac cttcaacaac tccaccctgt tggctttgat 10020

tcctgctgtt atgtttttaa tcagatgcct cacaaacagc tgactaccat ttacaggttc 10080

ggccccaaca tctgtgctgc tatccagcct tgttacaagg agaaacttga atccaaggca 10140

aggaacacca gggtagtttt caccattcga cctgtggctt atggtcaagt gctgacacca 10200

tttcacaagg atcgcgttgg ctcagccata accatagatt catctcaggg ggctaccttt 10260

gatgttgtga cgctgcattt gccaacacca agatccctga ataaatcccg agcacttgta 10320

gccattactc gggcgaggca cgggttgttc atctacgatc cccacaacca actccaggag 10380

ttcttcaacc taacccctga gcgtactgat tgcaatctcg tgttcaaccg cgggggtgaa 10440

ctggtcgttc tgaattcaga taatgcagtc acaactgtag cgaaggtcct ggaggctggc 10500

ccgtctcaat ttcgggtatc ggacccgagg tgcaagtccc tcttggccgc ttgctcagtc 10560

agcctagaag ggagctgcat gccactaccg caagtggctc ataacttggg gttttacttt 10620

tccccagaca gtccggcgtt cgcacctctg ccaaaagaat tggcaccgca ttggccagtg 10680

gtcacctgcc agaacaacca agcatggcct gaccgactcg ttgccagcat gcgcccgatt 10740

gatgcccgtt acagcaagcc tatggttggt gcgggatacg ttgttggacc gtcaaccttt 10800

ctgggaactc ctggtgtggt gtcatactat ctcacactgt acattaaggg tgaaccccgg 10860

gccttgccag aaacactcgt ctcaacaggg cgcatagcca cagactgtcg ggagtacctt 10920

gatgcggcag aagaggaagc agccaaggaa ctcccccatg ctttcatagg tgatgtcaag 10980

ggtaccacag tgggggggtg tcatcacatc acatcaaagt atctacccag gtccctgccc 11040

aaggactctg ttgccgtggt tggggtaagt tcgcccggca aggctgctaa agccgtgtgc 11100

actctcactg atgtgtatct ccccgacctt cggccatatc tgcaaccaga gacagcatca 11160

aaatgctgga aactcaaatt ggacttcagg gacgtcagac tgatggtttg gaaaggggcc 11220

accgcctatt ttcagttgga agggcttaca tggtcggcac tacccgacta tgccaggttc 11280

attcagctgc ccaaagatgc tgttgtgtat attgacccgt gcataggacc ggcaacagcc 11340

aaccgcaagg tagtgcgaac cactgactgg cgagccgacc tggcagtaac gccatatgat 11400

tacggtgccc aaactatcct gacaacagct tggttcgagg acctcggacc gcaatggaaa 11460

atcctggggc tgcagccctt caagcgggca tttggcttcg aaaacactga ggactgggca 11520

atcctcgcgc gccgtatgaa tgacggcagg gattacaccg attataactg gacttgcgtc 11580

cgagaacgtc cgcacgctat ctacgggcgc gcccgtgacc acacttatca tttcgcccct 11640

ggtgcagaat tgcaggtaga gctgggcaaa ccccggctgc cgcctgagtg agtacagcgg 11700

ccctaaagca atgcaatggg gtcattgtgg agtaaaatca cccagctgtt tgtggatgcc 11760

tttactgagt tccttatcag tgtggttgac attatcatct ttcttgccat actgttcggg 11820

ttcaccgtcg caggatggtt actggtcttt ctactcagag tggtttgctc cgcgattctc 11880

cgttcgcgca ctgccgttca ctctcccgaa ttatcgaagg tcctatgaag gcttgctacc 11940

caattgcagg ccggatgtcc cacaattcgc aatcaaacac ccattgggca tactttggca 12000

tatgcgagtt tctcatctaa ttgatgagat ggtttctcgt cgtgtctacc aaaccatgga 12060

gcattctggc caagcggcct ggaagcaggt ggttgctgaa gccactctca caaagctatc 12120

gcagcttgac atagtcaccc acttccaaca tttagccgca gtggaggcgg attcttgccg 12180

cttcctcagc tcgcgactcg tgatgctgaa aaatcttgct gttggcaatg tgagtttgct 12240

gtacaacacc acgctggacc gtgttgaact catcttccct acaccaggta cgaggcccaa 12300

actgaccgat ttcagacaat ggctcatcag tgtgcacgcc tccatcttct cttctgtggc 12360

ctcgtcagtc actttgttcg tggtgctttg gcttcgggtc ccaattctac gctatgtttt 12420

tggtttccat tggcccacgg caacacgtcg tttgagttaa ctattaatta tactgtatgc 12480

aagccctgcc tcacccgcga tgcggctcga cagaggctcg aacccggtcg caacatgtgg 12540

tgcaagatag ggcatgatag gtgtgaggac cgtgaccatg atgagttgtc aatgaccatc 12600

ccacccgggt acgacaacct caaacttgag ggctattatg cttggctcgc tttcctgtcc 12660

ttttcctatg cagcccaatt ccatccggag ctgttcggga tagggaatgt gtcacgcgtc 12720

ttcgtggata aggtgcacca gtttgtttgt gccgtgcatg atggacagaa ttcaaccgtg 12780

tccaacgggc acaacatttc cgctttgtat gcggcatact atcatcacca aatagacggg 12840

ggcaattggt ttcatctaga atggttgcgg ccattctttt cctcctggct ggtgctcaac 12900

atttcatggt ttctgaggcg ttcgcctgca agccctgttt ctcgacacat ctatcagata 12960

ttaagaccaa cacgacagcg gctgccggtt tcatggtcct tcaagacatc agctgcctcc 13020

agcctcatgg gggttcagaa acgcaaggca ccagcattca tgggaagcca tctcaatgtc 13080

gtgtagctgt tggcatcccc cagtacatca cggtaactgc gaatgtgact gatgaatcat 13140

atttgtacaa tgctgacttg ctaatgcttt ctgcctgctt gttctacgcc tcagaaatga 13200

gcgaaaaagg cttcaaagtc atctttggga atgtctctgg cgttgtctct gcttgcgtta 13260

atttcacaga ttatgtggcc catgtgactc aacataccca acagcatcat ctggtaattg 13320

atcacgttcg gttgctgcac tttttgacac catccacgat gaggtgggct acaaccatcg 13380

cctgcttgtt cgccattctc ctggcgatat gagatgttct cacaaattgg ggtgtatctt 13440

gactccttat ccttgttgtt gctggctttt tttgttgtgt accggcttgt cttggtcctt 13500

tgccgatgga aacggcaaca gctcgacata ccaatacata tataacttga cgatatgcga 13560

gctgaatggg accgcctggc tgtccaatca ctttcaatgg gcagtcgaaa cctttgtgct 13620

ttacccggtg gtcactcata tcctctcact gggtttcctc acaacaagtc atttctttga 13680

cacgctcggc cttggagccg tgtccgtcac aggcttttgt cacacgcggt atgtgctcag 13740

cagtgtgtac ggcgtttgtg cattagcggc gttcatatgt tttaccatcc gtgccgctaa 13800

aaattgcatg gcatgccgct atgcccgcac ccggttcacc aatttcattg tggatgaccg 13860

ggggaggatc catcgatgga aatctccaat agttgtggag aagctgggca aagccgaaat 13920

cggcaatgat ctcatcacca tcaaacatgt tgtcctcgaa ggggtcaaag ctcaaccctt 13980

gacaaggacc tcggctgagc aatgggaggc atagatgatt tttgctatga ccctaccgcc 14040

acacagaaac ttgtgttagc tttcagcatc acatatacac ccatcatgat atacgccctt 14100

aaggtttcac gcggccgact tctggggctg ttgcacatcc tgatcttttt gaactgctcc 14160

ttcacgttcg ggtacatgac gtatgtgcat tttcagtcca ccaaccgcgt tgcacttacc 14220

atgggggccg ttgtcgccct cttgtggggc atttatagtt tcatagagtc atggaagttt 14280

atcacttcca gatgcagatt gtgttgccta ggccggcgat acattctggc ccctgcccac 14340

cacgtagaaa gtgctgcagg actccattca atcccagcgt ctggtaaccg agcatacgct 14400

gtgagaaagc ccggactaac ctcagtgaac ggcactctag taccagggct tcggagcctc 14460

gtgttgggcg gcaaaagagc tgttaagcga ggagtggtta acctcgtcaa gtatggccgg 14520

taataaccag agccaaagga agaagaaaaa tgcagctccc atggggaatg gccagtcagt 14580

caatcagctg tgtcagctgc tgggaacaat gatgaaatcc cagcgccagc ggtctagggg 14640

gggacaggcc aaaaggaaaa agcctgagaa gccacatttt cccctggctg ctgaagatga 14700

tgtccggcac cacctcactc aaaccgaacg ttccctttgc ttgcaatcga tccagacggc 14760

ttttaatcaa ggcgcaggaa ctgcgtcgct ttcacccagt gggaagatcg gttttcaggt 14820

cgagttcatg ctgccggtca ctcatacggt gcgtttgatt cgcgtgactt ctacatctgc 14880

tagtcaaggt gtgagttaat ttgatagtca ggtgaatggc cacgattggc gtgtggcctc 14940

tgagtcacct attcaattag ggcgatcaca tgggggttag acttaattgg cgagaaccat 15000

gtgaccgaaa tt 15012

<210> 2

<211> 2369

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 2

Met Ser Gly Thr Phe Ser Arg Cys Met Cys Thr Pro Ala Ala Arg Val

1 5 10 15

Phe Trp Asn Ala Gly Gln Val Phe Cys Thr Arg Cys Leu Ser Ala Arg

20 25 30

Pro Leu Leu Pro Pro Glu Leu Gln Asp Thr Asp Leu Gly Gly Ile Gly

35 40 45

Leu Phe Tyr Arg Pro Lys Asp Lys Leu Pro Trp Lys Val Pro Ile Gly

50 55 60

Ile Pro Gln Val Glu Cys Thr Pro Ser Gly Cys Cys Trp Leu Ser Ala

65 70 75 80

Val Phe Pro Leu Ala Arg Met Thr Ser Gly Asn His Asn Phe Val Gln

85 90 95

Arg Leu Val Lys Val Ala Asp Val Leu Tyr Arg Asp Gly Cys Leu Thr

100 105 110

Pro Arg His Leu Arg Glu Leu Gln Val Tyr Glu Arg Gly Cys Asn Trp

115 120 125

Tyr Pro Ile Thr Gly Pro Val Pro Gly Met Gly Leu Phe Ala Asn Ser

130 135 140

Met His Val Ser Asp Gln Pro Phe Pro Gly Ala Thr His Val Leu Thr

145 150 155 160

Asn Ser Pro Leu Pro Gln Gln Ala Cys Arg Gln Pro Phe Cys Pro Phe

165 170 175

Glu Glu Ala His Ser Asp Val Tyr Lys Trp Lys Glu Val Val Val Phe

180 185 190

Met Asp Ser Ser Pro Asn Gly Arg Ser Arg Met Met Trp Met Pro Glu

195 200 205

Ser Gly Asp Ser Ala Ala Leu Glu Ala Leu Pro Pro Glu Leu Glu Arg

210 215 220

Gln Val Glu Ile Leu Ile Arg Ser Phe Pro Ala His His Leu Val Asp

225 230 235 240

Leu Thr Asp Trp Glu Leu Thr Glu Ser Pro Glu His Gly Phe Ser Phe

245 250 255

Gly Thr Ser Tyr Pro Cys Gly Tyr Leu Ala Gln Asn Pro Tyr Gly Phe

260 265 270

Asp Gly Lys Cys Trp Leu Ser Cys Phe Leu Gly Leu Pro Thr Lys Val

275 280 285

Trp Arg His Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Ala Phe Gly Tyr Gln Thr Lys

290 295 300

Trp Gly Val His Gly Lys Tyr Leu Gln Arg Arg Leu Gln Ile Asn Gly

305 310 315 320

Val Arg Ala Ala Val Asp Pro Asp Gly Pro Ile His Val Glu Ala Leu

325 330 335

Ser Cys Pro Gln Ser Trp Ile Arg His Leu Thr Leu Asp Asp Asp Val

340 345 350

Thr Pro Gly Phe Val Arg Leu Met Ser Leu Arg Ile Val Pro Asn Thr

355 360 365

Glu Pro Thr Thr Leu Pro Ile Phe Arg Phe Gly Ala His Lys Trp Tyr

370 375 380

Gly Ala Ala Gly Lys Arg Ala Arg Ala Lys Arg Ala Ala Lys Gly Lys

385 390 395 400

Gly Asp Ser Asn Ser Thr Pro Glu Val Ala Arg Val Ala Pro Thr His

405 410 415

Gly Val Ile Thr Tyr Ser Pro Pro Ala Asp Gly Ser Cys Gly Trp His

420 425 430

Val Ile Ala Ala Val Met Asn His Met Met Asn Gly Glu Leu Thr Ser

435 440 445

Pro Leu Thr Pro Tyr Asn Arg Pro Glu Asp Asp Trp Ala Ser Asp Tyr

450 455 460

Asp Leu Val Lys Thr Ile Gln Tyr Leu Gln Leu Pro Ala Thr Val Val

465 470 475 480

Arg Ala Arg Ala Cys Pro Asn Ala Lys Tyr Leu Val Lys Leu Asn Gly

485 490 495

Val His Trp Glu Val Glu Met Arg Pro Gly Val Ala Pro Arg Ser Leu

500 505 510

Pro Arg Glu Cys Val Val Gly Val Cys Ser Glu Gly Cys Val Thr Pro

515 520 525

Pro Leu Ser Glu Arg Val Leu Pro Asp Arg Ala Leu Glu Ala Leu Ala

530 535 540

Ser Ala Tyr Arg Leu Pro Ser Asp Cys Val Cys Asp Ala Val Ala Asp

545 550 555 560

Phe Leu Ser Asn Pro Pro Ser Gln Gly Ser Trp Thr Leu Asp Arg Met

565 570 575

Leu Thr Ser Pro Ser Pro Glu Gln Ser Gly Phe Ser Ser Leu Tyr Arg

580 585 590

Leu Leu Leu Glu Val Val Pro Gln Lys Cys Gly Ala Thr Glu Gly Ala

595 600 605

Phe Val Tyr Ala Val Asp Arg Met Leu Lys Asp Cys Pro Ser Pro Lys

610 615 620

Gln Ala Met Ala Leu Leu Gly Lys Ile Lys Ile Pro Ser Ser Lys Ala

625 630 635 640

Ser Ser Val Ser Leu Asp Glu Cys Phe Pro Thr Asp Val Leu Thr Val

645 650 655

Pro Gly Ser Val Phe Gln Glu Glu Pro Gln Ser Phe Asp Asn Ala Ile

660 665 670

Ala Leu Cys Ser Leu Glu Lys Gln Lys Glu Thr Glu Gly Ala Ser Pro

675 680 685

Gly Lys Ala Gln Glu Ser Asp Cys Lys Thr Phe Arg Ser Val Val Pro

690 695 700

Ala Glu Lys Pro Asn Met Gln Gln Val Pro Leu Val Glu Asp Glu Gln

705 710 715 720

Leu Lys Leu Gly Gly Cys Asp Ser Ala Val Ala Thr Val Asp Ser Asp

725 730 735

Arg Gly Asn Glu Pro Leu Asp Leu Ser Arg Ser Ala Pro Thr Ala Thr

740 745 750

Thr Thr Ser Val Gly Gly Arg Ala Pro Asp Asn Pro Gly Pro Asn Thr

755 760 765

Ser Val Arg Ser Thr Thr Val Gln Glu Ser Val Pro Gly Arg Pro Val

770 775 780

Pro Arg Leu Val Glu Arg Cys Gly Val Glu Ser Asp Asn Ser Asn Ser

785 790 795 800

Pro Leu Asp Leu Ser Lys Ala Gln Thr Pro Asp Arg Pro Leu Asp Leu

805 810 815

Ser Leu Ala Ala Trp Pro Val Arg Ala Thr Ala Ser Asp Pro Gly Trp

820 825 830

Val Asp Gly Arg Arg Glu Pro Val Phe Val Lys Pro Arg Gly Ala Phe

835 840 845

Ser Asp Ser Glu Ser Val Ile Arg Phe Gly Gly Val Ser Glu Thr Ser

850 855 860

Ser Ile Ile Glu Phe Asp Arg Thr Glu Glu Thr Pro Val Thr Asp Val

865 870 875 880

Pro Ile Asp Leu Thr Thr Ser Asn Glu Thr Leu Ser Gly Ala Asp Pro

885 890 895

Phe Glu Leu Ala Glu Pro Lys Arg Pro Arg Leu Ser Ala Gln Ala Leu

900 905 910

Ile Asp Arg Gly Gly Pro Leu Ala Asp Val His Ala Lys Ile Lys Asn

915 920 925

Arg Val Tyr Glu Gln Cys Leu Gln Ala Cys Glu Pro Gly Ser Arg Ala

930 935 940

Thr Pro Ala Thr Lys Glu Trp Leu Asp Lys Met Trp Glu Arg Val Asp

945 950 955 960

Met Lys Thr Trp Arg Cys Thr Ser Gln Phe Gln Ala Ala Tyr Ile Leu

965 970 975

Gly Pro Leu Lys Phe Leu Pro Asp Met Ile Arg Asp Ala Pro Pro Pro

980 985 990

Val Pro Arg Lys Asp Arg Ala Cys Asp Ser Ala Ser Leu Lys Gln Leu

995 1000 1005

Val Ala Arg Trp Glu Lys Arg Leu Asn Ala Val Pro Leu Gln Gly

1010 1015 1020

Pro Val Glu Pro Glu Leu Gly Arg Thr Ala Pro Ser Ser Val Asn

1025 1030 1035

Ala Gln Pro Glu Glu Ala Ile Pro Ser Asp Gly Pro Pro Gln Ala

1040 1045 1050

Pro Asp Pro Pro Gly Pro Thr Ser Ala Gly Arg Gly Phe Lys Gly

1055 1060 1065

Leu Ile Ser Pro Gly Ile Arg Leu Ile Gly Ser Ala Ser Gln Arg

1070 1075 1080

Phe Met Thr Trp Val Phe Glu Ile Tyr Ser His Leu Pro Ala Phe

1085 1090 1095

Met Leu Thr Leu Phe Ser Pro Arg Gly Ser Met Val Thr Ser Asp

1100 1105 1110

Trp Leu Phe Ala Gly Val Val Leu Phe Ala Leu Leu Phe Cys Arg

1115 1120 1125

Ser Cys Pro Ile Leu Gly Cys Leu Pro Leu Leu Gly Val Phe Ser

1130 1135 1140

Gly Ser Val Arg Cys Val Arg Leu Gly Val Phe Gly Ser Trp Met

1145 1150 1155

Ala Phe Ala Val Phe Leu Phe Ser Thr Pro Thr Asn Pro Ile Gly

1160 1165 1170

Ser Ser Cys Asp His Asp Ser Pro Glu Cys His Ala Glu Leu Leu

1175 1180 1185

Ala Leu Glu Gln Arg Gln Leu Trp Glu Pro Val Arg Ser Leu Val

1190 1195 1200

Val Gly Pro Ser Gly Leu Ser Cys Val Ile Leu Gly Lys Leu Leu

1205 1210 1215

Gly Gly Ser Arg Tyr Leu Trp His Val Val Leu Arg Leu Cys Met

1220 1225 1230

Leu Ala Asp Leu Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Val Val Ser Gln Gly

1235 1240 1245

Arg Cys Tyr Lys Cys Trp Gly Lys Cys Ile Arg Thr Ala Pro Ala

1250 1255 1260

Glu Val Ala Leu Asn Val Phe Pro Phe Ser Arg Ala Thr Arg Ser

1265 1270 1275

Ser Leu Val Ser Leu Cys Asp Arg Phe Gln Ala Pro Lys Glu Val

1280 1285 1290

Asp Pro Val His Leu Ala Thr Gly Trp Arg Gly Cys Trp Arg Gly

1295 1300 1305

Glu Ser Pro Ile His Gln Ala His Gln Lys Pro Ile Ala Tyr Ala

1310 1315 1320

Ser Leu Asp Glu Lys Lys Ile Ser Ala Gln Thr Val Val Ala Val

1325 1330 1335

Pro Tyr Asp Pro Ser Gln Ala Val Lys Cys Leu Lys Val Leu Gln

1340 1345 1350

Ala Gly Gly Ala Ile Val Asp Gln Pro Val Pro Glu Val Ile Arg

1355 1360 1365

Val Ser Glu Val Pro Phe Ser Ala Pro Phe Phe Pro Lys Val Pro

1370 1375 1380

Val Asn Pro Asp Cys Arg Val Val Val Asp Ser Asp Thr Phe Val

1385 1390 1395

Ala Ala Val Arg Cys Gly Tyr Ser Thr Ala Gln Leu Ile Leu Gly

1400 1405 1410

Arg Gly Asn Phe Ala Lys Leu Asn Gln Thr Pro Pro Lys Asn Ser

1415 1420 1425

Ile Pro Thr Lys Ser Thr Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Leu Ala Val

1430 1435 1440

Thr Gln Val Ser Val Trp Thr Leu Val His Phe Ile Ile Gly Leu

1445 1450 1455

Trp Leu Thr Ser Pro Gln Val Cys Gly Arg Gly Thr Ser Asp Pro

1460 1465 1470

Trp Cys Ser Asn Pro Phe Ser Tyr Pro Thr Tyr Gly Pro Gly Val

1475 1480 1485

Val Cys Ser Ser Arg Leu Cys Val Ser Ala Asp Gly Val Thr Leu

1490 1495 1500

Pro Leu Phe Ser Ala Val Ala Gln Leu Ser Gly Arg Glu Val Gly

1505 1510 1515

Val Phe Ile Leu Val Leu Val Ser Leu Ile Ser Leu Ala His Arg

1520 1525 1530

Leu Ala Leu Lys Ala Asp Met Leu Val Val Phe Ser Ala Phe Cys

1535 1540 1545

Ala Tyr Ala Trp Pro Met Ser Ser Trp Leu Ile Cys Phe Phe Pro

1550 1555 1560

Ile Leu Leu Arg Trp Val Thr Leu His Pro Leu Thr Met Leu Trp

1565 1570 1575

Val His Ser Phe Leu Val Phe Cys Leu Pro Ala Ala Gly Val Leu

1580 1585 1590

Ser Leu Gly Ile Ser Gly Phe Leu Trp Ala Val Gly Arg Phe Thr

1595 1600 1605

Gln Val Ala Gly Ile Ile Thr Pro Tyr Asp Ile His Gln Tyr Thr

1610 1615 1620

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Ala Ala Val Ala Thr Ala Pro Glu Gly

1625 1630 1635

Thr Tyr Met Ala Ala Val Arg Arg Ala Ala Leu Thr Gly Arg Thr

1640 1645 1650

Leu Ile Phe Thr Pro Ser Ala Val Gly Ser Leu Leu Glu Gly Ala

1655 1660 1665

Phe Arg Thr Asn Lys Pro Cys Leu Asn Thr Val Asn Val Val Gly

1670 1675 1680

Ser Ser Leu Gly Ser Gly Gly Val Phe Thr Val Gly Gly Ser Lys

1685 1690 1695

Ile Ile Ile Thr Ala Thr His Val Leu Asn Gly Asp Ala Ala Arg

1700 1705 1710

Val Thr Gly Asp Ser Tyr Asn Arg Met His Thr Phe Lys Thr Asn

1715 1720 1725

Gly Asp Tyr Ala Trp Ser Arg Ala Asp Asp Trp Gln Gly Val Ala

1730 1735 1740

Pro Ala Val Lys Val Ala Lys Arg Tyr Arg Gly Arg Ala Tyr Trp

1745 1750 1755

Gln Thr Ser Thr Gly Val Glu Pro Gly Ile Ile Gly Glu Gly Phe

1760 1765 1770

Ala Phe Cys Phe Thr Asn Cys Gly Asp Ser Gly Ser Pro Val Ile

1775 1780 1785

Ser Glu Thr Gly Asp Leu Ile Gly Val His Thr Gly Ser Asn Lys

1790 1795 1800

Leu Gly Ser Gly Leu Val Thr Thr Pro Glu Gly Glu Thr Cys Ser

1805 1810 1815

Ile Lys Glu Thr Lys Leu Ser Glu Leu Ser Arg Tyr Phe Ala Gly

1820 1825 1830

Pro Ser Val Pro Leu Gly Asp Val Arg Leu Ser Pro Ala Ile Ile

1835 1840 1845

Pro Asp Val Ala Phe Ile Pro Ser Asp Leu Ala Ser Leu Leu Ala

1850 1855 1860

Ser Val Pro Val Met Glu Gly Gly Leu Ser Thr Val Gln Leu Leu

1865 1870 1875

Cys Val Phe Phe Leu Leu Trp Arg Met Met Gly His Ala Trp Thr

1880 1885 1890

Pro Ile Ile Ala Val Ser Phe Phe Leu Leu Asn Glu Ile Leu Pro

1895 1900 1905

Ala Val Leu Val Arg Ala Val Phe Ser Phe Ala Leu Phe Val Leu

1910 1915 1920

Ala Trp Ala Thr Pro Trp Ser Ala Gln Val Leu Met Ile Arg Leu

1925 1930 1935

Leu Thr Ala Ala Leu Asn Arg Asn Arg Leu Ser Leu Ala Phe Tyr

1940 1945 1950

Ala Leu Gly Gly Val Val Gly Leu Ala Ala Glu Ile Gly Thr Phe

1955 1960 1965

Ala Gly Lys Leu Thr Glu Leu Ser Gln Val Leu Ser Thr Tyr Cys

1970 1975 1980

Phe Leu Pro Arg Val Ile Ala Met Thr Ser Cys Val Pro Val Ile

1985 1990 1995

Ile Ile Gly Gly Leu His Ala Leu Gly Val Ile Leu Trp Leu Phe

2000 2005 2010

Lys His Arg Cys Leu His Asn Met Leu Val Gly Asp Gly Ser Phe

2015 2020 2025

Ser Ser Ala Phe Phe Leu Arg Tyr Phe Ala Glu Gly Asn Leu Arg

2030 2035 2040

Lys Gly Val Ser Gln Ser Cys Gly Met Ser Asn Glu Ser Leu Thr

2045 2050 2055

Ala Ala Leu Ala Cys Lys Leu Ser Gln Ala Asp Leu Asp Phe Leu

2060 2065 2070

Ser Gly Leu Thr Asn Phe Lys Cys Phe Val Ser Ala Ser Asn Met

2075 2080 2085

Lys Asn Ala Ala Gly Gln Tyr Ile Glu Ala Ala Tyr Ala Lys Ala

2090 2095 2100

Leu Arg Gln Glu Leu Ala Ser Leu Val Gln Val Asp Lys Met Lys

2105 2110 2115

Gly Val Leu Ser Lys Leu Glu Ala Phe Ala Glu Met Ala Thr Pro

2120 2125 2130

Ser Leu Asp Thr Gly Asp Val Val Val Leu Leu Gly Gln His Pro

2135 2140 2145

His Gly Ser Ile Leu Asp Ile Asn Val Gly Thr Glu Arg Lys Thr

2150 2155 2160

Val Ser Val Gln Glu Thr Arg Ser Leu Gly Gly Ser Lys Phe Ser

2165 2170 2175

Val Cys Thr Val Val Ser Asn Thr Pro Val Asp Ala Leu Thr Gly

2180 2185 2190

Ile Pro Leu Gln Thr Pro Thr Pro Leu Phe Glu Asn Gly Pro Arg

2195 2200 2205

His Arg Ser Glu Asp Asp Asp Leu Lys Val Glu Arg Met Lys Lys

2210 2215 2220

His Cys Val Ser Leu Gly Phe His Asn Ile Asn Gly Lys Ile Tyr

2225 2230 2235

Cys Lys Val Trp Asp Lys Ser Thr Gly Asp Thr Phe Tyr Thr Asp

2240 2245 2250

Asp Ser Arg Tyr Thr Gln Asp His Ala Phe Gln Asp Arg Ser Ala

2255 2260 2265

Asp Tyr Arg Asp Arg Asp Tyr Glu Gly Val Gln Ile Ala Pro Gln

2270 2275 2280

Gln Gly Phe Asp Pro Met Ser Glu Thr Pro Val Gly Thr Val Val

2285 2290 2295

Ile Gly Gly Ile Thr Tyr Ser Arg Tyr Leu Val Lys Gly Lys Glu

2300 2305 2310

Val Leu Ile Pro Lys Pro Asp Asn His Phe Glu Ala Ala Lys Leu

2315 2320 2325

Ser Leu Glu Gln Ala Leu Ala Gly Met Gly Gln Thr Cys Asp Leu

2330 2335 2340

Thr Ala Ala Glu Val Glu Lys Leu Lys Arg Ile Ile Ser Gln Leu

2345 2350 2355

Gln Gly Leu Thr Thr Glu Gln Ala Leu Asn Cys

2360 2365

<210> 3

<211> 1460

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 3

Thr Gly Phe Lys Leu Leu Ala Ala Ser Gly Leu Thr Arg Cys Gly Arg

1 5 10 15

Gly Gly Leu Val Val Thr Glu Thr Ala Val Lys Ile Val Lys Tyr His

20 25 30

Ser Arg Thr Phe Thr Leu Gly Pro Leu Asp Leu Lys Val Thr Ser Glu

35 40 45

Ala Glu Val Lys Lys Ser Thr Glu Gln Gly His Ala Val Val Ala Asn

50 55 60

Leu Cys Ser Gly Val Val Leu Met Arg Pro His Pro Pro Ser Leu Val

65 70 75 80

Asp Val Leu Leu Ile Pro Gly Leu Asp Thr Ala Pro Gly Ile Gln Pro

85 90 95

Gly His Gly Ala Gly Asn Met Gly Val Asn Gly Ala Ile Trp Asp Phe

100 105 110

Glu Thr Ala Pro Thr Lys Ala Glu Leu Glu Leu Ser Lys Gln Ile Ile

115 120 125

Gln Ala Cys Glu Val Arg Arg Gly Asp Ala Pro Asn Leu Gln Leu Pro

130 135 140

Tyr Lys Leu His Pro Val Arg Gly Asp Pro Glu Arg Arg Asn Gly Arg

145 150 155 160

Leu Ile Asn Thr Arg Phe Gly Asp Leu Pro Tyr Lys Thr Pro Gln Asp

165 170 175

Thr Arg Ser Ala Ile His Ala Ala Cys Cys Leu His Pro Asn Gly Val

180 185 190

Pro Val Ser Asp Gly Lys Ser Thr Leu Gly Thr Thr Leu Gln Arg Gly

195 200 205

Phe Glu Leu Tyr Val Pro Thr Val Pro Tyr Ser Val Leu Glu Tyr Leu

210 215 220

Asp Ser Arg Pro Asp Thr Pro Phe Met Cys Thr Lys His Gly Thr Ser

225 230 235 240

Glu Ala Ala Ala Glu Asp Leu Gln Lys Tyr Asn Leu Ser Thr Gln Gly

245 250 255

Phe Val Leu Pro Gly Val Leu Arg Leu Val Arg Arg Phe Ile Phe Gly

260 265 270

His Ile Gly Lys Ala Pro Pro Leu Tyr Leu Pro Ser Thr Tyr Pro Ala

275 280 285

Lys Asn Ser Met Ala Gly Ile Asn Gly Gln Arg Phe Pro Thr Lys Asp

290 295 300

Val Gln Ser Ile Pro Glu Val Asp Glu Met Cys Ala Arg Ala Val Lys

305 310 315 320

Asp Asn Trp Gln Thr Thr Thr Pro Cys Thr Leu Lys Lys Gln Tyr Cys

325 330 335

Ser Lys Pro Lys Thr Arg Thr Ile Leu Gly Thr Asn Asn Phe Ile Ala

340 345 350

Leu Ala His Arg Ser Ala Leu Ser Gly Val Thr Gln Ala Phe Met Lys

355 360 365

Lys Ala Trp Lys Ser Pro Ile Ala Leu Gly Lys Asn Lys Phe Lys Glu

370 375 380

Leu His Cys Ala Val Ala Gly Arg Cys Leu Glu Ala Asp Leu Ala Ser

385 390 395 400

Cys Asp Arg Ser Thr Pro Ala Ile Val Arg Trp Phe Thr Ala Asn Leu

405 410 415

Leu Tyr Glu Leu Ala Gly Cys Glu Glu Tyr Leu Pro Ser Tyr Val Leu

420 425 430

Asn Cys Cys His Asp Leu Val Ala Thr Gln Asp Gly Ala Phe Thr Lys

435 440 445

Arg Gly Gly Leu Ser Ser Gly Asp Pro Val Thr Ser Val Ser Asn Thr

450 455 460

Val Tyr Ser Leu Val Ile Tyr Ala Gln His Met Val Leu Ser Ala Leu

465 470 475 480

Lys Met Gly His Glu Ile Gly Leu Lys Phe Leu Glu Glu Gln Leu Arg

485 490 495

Phe Glu Asp Leu Ile Glu Ile Gln Pro Met Leu Val Tyr Ser Asp Asp

500 505 510

Leu Val Leu Tyr Ala Glu Lys Pro Thr Phe Pro Asn Tyr His Trp Trp

515 520 525

Val Glu His Leu Asp Leu Met Leu Gly Phe Lys Thr Asp Pro Lys Lys

530 535 540

Thr Ile Ile Thr Asp Lys Pro Ser Phe Leu Gly Cys Arg Ile Glu Ala

545 550 555 560

Gly Arg Gln Leu Val Pro Asn Arg Asp Arg Ile Leu Ala Ala Leu Ala

565 570 575

Tyr His Met Lys Ala Gln Asn Ala Ser Glu Tyr Tyr Ala Ser Ala Ala

580 585 590

Ala Ile Leu Met Asp Ser Cys Ala Cys Ile Asp Tyr Asp Pro Glu Trp

595 600 605

Tyr Glu Asp Leu Ile Cys Gly Ile Ala Arg Cys Ala Arg Gln Asp Gly

610 615 620

Tyr Ser Phe Pro Gly Pro Ala Phe Phe Met Ser Met Trp Glu Lys Leu

625 630 635 640

Lys Ser His Asn Glu Gly Lys Lys Phe Arg His Cys Gly Ile Cys Asp

645 650 655

Ala Lys Ala Asp His Ala Ser Ala Cys Gly Leu Asp Leu Cys Leu Phe

660 665 670

His Ser His Phe His Gln His Cys Pro Val Thr Leu Ser Cys Gly His

675 680 685

His Ala Gly Ser Lys Glu Cys Pro Gln Cys Gln Ser Pro Val Gly Ala

690 695 700

Gly Lys Ser Pro Leu Asp Thr Val Leu Gln Gln Ile Pro Tyr Lys Pro

705 710 715 720

Pro Arg Thr Val Ile Met Lys Val Asn Asn Lys Thr Thr Ala Leu Asp

725 730 735

Pro Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Arg Gly Leu Val Ala Val Lys Arg Gly

740 745 750

Ile Ala Gly Asn Glu Val Asp Leu Ala Asp Gly Asp Tyr Gln Val Val

755 760 765

Pro Leu Leu Pro Thr Cys Lys Asp Ile Asn Met Val Lys Val Ala Cys

770 775 780

Asn Val Leu Leu Ser Lys Phe Ile Val Gly Pro Pro Gly Ser Gly Lys

785 790 795 800

Thr Thr Trp Leu Leu Asn Gln Val Gln Glu Asp Val Val Ile Tyr Thr

805 810 815

Pro Thr His Gln Thr Met Phe Asp Ile Val Ser Ala Leu Lys Val Cys

820 825 830

Arg Tyr Ser Ile Pro Gly Ala Ser Gly Leu Pro Phe Pro Pro Pro Ala

835 840 845

Arg Ser Gly Pro Trp Val Arg Leu Val Ala Ser Gly His Ile Pro Gly

850 855 860

Arg Val Ser Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Tyr Cys Asn His Leu Asp Ile

865 870 875 880

Leu Arg Leu Leu Ser Lys Thr Pro Leu Val Cys Leu Gly Asp Leu Gln

885 890 895

Gln Leu His Pro Val Gly Phe Asp Ser Cys Cys Tyr Val Phe Asn Gln

900 905 910

Met Pro His Lys Gln Leu Thr Thr Ile Tyr Arg Phe Gly Pro Asn Ile

915 920 925

Cys Ala Ala Ile Gln Pro Cys Tyr Lys Glu Lys Leu Glu Ser Lys Ala

930 935 940

Arg Asn Thr Arg Val Val Phe Thr Ile Arg Pro Val Ala Tyr Gly Gln

945 950 955 960

Val Leu Thr Pro Phe His Lys Asp Arg Val Gly Ser Ala Ile Thr Ile

965 970 975

Asp Ser Ser Gln Gly Ala Thr Phe Asp Val Val Thr Leu His Leu Pro

980 985 990

Thr Pro Arg Ser Leu Asn Lys Ser Arg Ala Leu Val Ala Ile Thr Arg

995 1000 1005

Ala Arg His Gly Leu Phe Ile Tyr Asp Pro His Asn Gln Leu Gln

1010 1015 1020

Glu Phe Phe Asn Leu Thr Pro Glu Arg Thr Asp Cys Asn Leu Val

1025 1030 1035

Phe Asn Arg Gly Gly Glu Leu Val Val Leu Asn Ser Asp Asn Ala

1040 1045 1050

Val Thr Thr Val Ala Lys Val Leu Glu Ala Gly Pro Ser Gln Phe

1055 1060 1065

Arg Val Ser Asp Pro Arg Cys Lys Ser Leu Leu Ala Ala Cys Ser

1070 1075 1080

Val Ser Leu Glu Gly Ser Cys Met Pro Leu Pro Gln Val Ala His

1085 1090 1095

Asn Leu Gly Phe Tyr Phe Ser Pro Asp Ser Pro Ala Phe Ala Pro

1100 1105 1110

Leu Pro Lys Glu Leu Ala Pro His Trp Pro Val Val Thr Cys Gln

1115 1120 1125

Asn Asn Gln Ala Trp Pro Asp Arg Leu Val Ala Ser Met Arg Pro

1130 1135 1140

Ile Asp Ala Arg Tyr Ser Lys Pro Met Val Gly Ala Gly Tyr Val

1145 1150 1155

Val Gly Pro Ser Thr Phe Leu Gly Thr Pro Gly Val Val Ser Tyr

1160 1165 1170

Tyr Leu Thr Leu Tyr Ile Lys Gly Glu Pro Arg Ala Leu Pro Glu

1175 1180 1185

Thr Leu Val Ser Thr Gly Arg Ile Ala Thr Asp Cys Arg Glu Tyr

1190 1195 1200

Leu Asp Ala Ala Glu Glu Glu Ala Ala Lys Glu Leu Pro His Ala

1205 1210 1215

Phe Ile Gly Asp Val Lys Gly Thr Thr Val Gly Gly Cys His His

1220 1225 1230

Ile Thr Ser Lys Tyr Leu Pro Arg Ser Leu Pro Lys Asp Ser Val

1235 1240 1245

Ala Val Val Gly Val Ser Ser Pro Gly Lys Ala Ala Lys Ala Val

1250 1255 1260

Cys Thr Leu Thr Asp Val Tyr Leu Pro Asp Leu Arg Pro Tyr Leu

1265 1270 1275

Gln Pro Glu Thr Ala Ser Lys Cys Trp Lys Leu Lys Leu Asp Phe

1280 1285 1290

Arg Asp Val Arg Leu Met Val Trp Lys Gly Ala Thr Ala Tyr Phe

1295 1300 1305

Gln Leu Glu Gly Leu Thr Trp Ser Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Arg

1310 1315 1320

Phe Ile Gln Leu Pro Lys Asp Ala Val Val Tyr Ile Asp Pro Cys

1325 1330 1335

Ile Gly Pro Ala Thr Ala Asn Arg Lys Val Val Arg Thr Thr Asp

1340 1345 1350

Trp Arg Ala Asp Leu Ala Val Thr Pro Tyr Asp Tyr Gly Ala Gln

1355 1360 1365

Thr Ile Leu Thr Thr Ala Trp Phe Glu Asp Leu Gly Pro Gln Trp

1370 1375 1380

Lys Ile Leu Gly Leu Gln Pro Phe Lys Arg Ala Phe Gly Phe Glu

1385 1390 1395

Asn Thr Glu Asp Trp Ala Ile Leu Ala Arg Arg Met Asn Asp Gly

1400 1405 1410

Arg Asp Tyr Thr Asp Tyr Asn Trp Thr Cys Val Arg Glu Arg Pro

1415 1420 1425

His Ala Ile Tyr Gly Arg Ala Arg Asp His Thr Tyr His Phe Ala

1430 1435 1440

Pro Gly Ala Glu Leu Gln Val Glu Leu Gly Lys Pro Arg Leu Pro

1445 1450 1455

Pro Glu

1460

<210> 4

<211> 249

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 4

Met Gln Trp Gly His Cys Gly Val Lys Ser Pro Ser Cys Leu Trp Met

1 5 10 15

Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Val Trp Leu Thr Leu Ser Ser Phe Leu

20 25 30

Pro Tyr Cys Ser Gly Ser Pro Ser Gln Asp Gly Tyr Trp Ser Phe Tyr

35 40 45

Ser Glu Trp Phe Ala Pro Arg Phe Ser Val Arg Ala Leu Pro Phe Thr

50 55 60

Leu Pro Asn Tyr Arg Arg Ser Tyr Glu Gly Leu Leu Pro Asn Cys Arg

65 70 75 80

Pro Asp Val Pro Gln Phe Ala Ile Lys His Pro Leu Gly Ile Leu Trp

85 90 95

His Met Arg Val Ser His Leu Ile Asp Glu Met Val Ser Arg Arg Val

100 105 110

Tyr Gln Thr Met Glu His Ser Gly Gln Ala Ala Trp Lys Gln Val Val

115 120 125

Ala Glu Ala Thr Leu Thr Lys Leu Ser Gln Leu Asp Ile Val Thr His

130 135 140

Phe Gln His Leu Ala Ala Val Glu Ala Asp Ser Cys Arg Phe Leu Ser

145 150 155 160

Ser Arg Leu Val Met Leu Lys Asn Leu Ala Val Gly Asn Val Ser Leu

165 170 175

Leu Tyr Asn Thr Thr Leu Asp Arg Val Glu Leu Ile Phe Pro Thr Pro

180 185 190

Gly Thr Arg Pro Lys Leu Thr Asp Phe Arg Gln Trp Leu Ile Ser Val

195 200 205

His Ala Ser Ile Phe Ser Ser Val Ala Ser Ser Val Thr Leu Phe Val

210 215 220

Val Leu Trp Leu Arg Val Pro Ile Leu Arg Tyr Val Phe Gly Phe His

225 230 235 240

Trp Pro Thr Ala Thr Arg Arg Leu Ser

245

<210> 5

<211> 70

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 5

Met Gly Ser Leu Trp Ser Lys Ile Thr Gln Leu Phe Val Asp Ala Phe

1 5 10 15

Thr Glu Phe Leu Ile Ser Val Val Asp Ile Ile Ile Phe Leu Ala Ile

20 25 30

Leu Phe Gly Phe Thr Val Ala Gly Trp Leu Leu Val Phe Leu Leu Arg

35 40 45

Val Val Cys Ser Ala Ile Leu Arg Ser Arg Thr Ala Val His Ser Pro

50 55 60

Glu Leu Ser Lys Val Leu

65 70

<210> 6

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 6

Met Ala His Gln Cys Ala Arg Leu His Leu Leu Phe Cys Gly Leu Val

1 5 10 15

Ser His Phe Val Arg Gly Ala Leu Ala Ser Gly Pro Asn Ser Thr Leu

20 25 30

Cys Phe Trp Phe Pro Leu Ala His Gly Asn Thr Ser Phe Glu Leu Thr

35 40 45

Ile Asn Tyr Thr Val Cys Lys Pro Cys Leu Thr Arg Asp Ala Ala Arg

50 55 60

Gln Arg Leu Glu Pro Gly Arg Asn Met Trp Cys Lys Ile Gly His Asp

65 70 75 80

Arg Cys Glu Asp Arg Asp His Asp Glu Leu Ser Met Thr Ile Pro Pro

85 90 95

Gly Tyr Asp Asn Leu Lys Leu Glu Gly Tyr Tyr Ala Trp Leu Ala Phe

100 105 110

Leu Ser Phe Ser Tyr Ala Ala Gln Phe His Pro Glu Leu Phe Gly Ile

115 120 125

Gly Asn Val Ser Arg Val Phe Val Asp Lys Val His Gln Phe Val Cys

130 135 140

Ala Val His Asp Gly Gln Asn Ser Thr Val Ser Asn Gly His Asn Ile

145 150 155 160

Ser Ala Leu Tyr Ala Ala Tyr Tyr His His Gln Ile Asp Gly Gly Asn

165 170 175

Trp Phe His Leu Glu Trp Leu Arg Pro Phe Phe Ser Ser Trp Leu Val

180 185 190

Leu Asn Ile Ser Trp Phe Leu Arg Arg Ser Pro Ala Ser Pro Val Ser

195 200 205

Arg His Ile Tyr Gln Ile Leu Arg Pro Thr Arg Gln Arg Leu Pro Val

210 215 220

Ser Trp Ser Phe Lys Thr Ser Ala Ala Ser Ser Leu Met Gly Val Gln

225 230 235 240

Lys Arg Lys Ala Pro Ala Phe Met Gly Ser His Leu Asn Val Val

245 250 255

<210> 7

<211> 183

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 7

Met Val Ala Ala Ile Leu Phe Leu Leu Ala Gly Ala Gln His Phe Met

1 5 10 15

Val Ser Glu Ala Phe Ala Cys Lys Pro Cys Phe Ser Thr His Leu Ser

20 25 30

Asp Ile Lys Thr Asn Thr Thr Ala Ala Ala Gly Phe Met Val Leu Gln

35 40 45

Asp Ile Ser Cys Leu Gln Pro His Gly Gly Ser Glu Thr Gln Gly Thr

50 55 60

Ser Ile His Gly Lys Pro Ser Gln Cys Arg Val Ala Val Gly Ile Pro

65 70 75 80

Gln Tyr Ile Thr Val Thr Ala Asn Val Thr Asp Glu Ser Tyr Leu Tyr

85 90 95

Asn Ala Asp Leu Leu Met Leu Ser Ala Cys Leu Phe Tyr Ala Ser Glu

100 105 110

Met Ser Glu Lys Gly Phe Lys Val Ile Phe Gly Asn Val Ser Gly Val

115 120 125

Val Ser Ala Cys Val Asn Phe Thr Asp Tyr Val Ala His Val Thr Gln

130 135 140

His Thr Gln Gln His His Leu Val Ile Asp His Val Arg Leu Leu His

145 150 155 160

Phe Leu Thr Pro Ser Thr Met Arg Trp Ala Thr Thr Ile Ala Cys Leu

165 170 175

Phe Ala Ile Leu Leu Ala Ile

180

<210> 8

<211> 201

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 8

Met Arg Cys Ser His Lys Leu Gly Cys Ile Leu Thr Pro Tyr Pro Cys

1 5 10 15

Cys Cys Trp Leu Phe Leu Leu Cys Thr Gly Leu Ser Trp Ser Phe Ala

20 25 30

Asp Gly Asn Gly Asn Ser Ser Thr Tyr Gln Tyr Ile Tyr Asn Leu Thr

35 40 45

Ile Cys Glu Leu Asn Gly Thr Ala Trp Leu Ser Asn His Phe Gln Trp

50 55 60

Ala Val Glu Thr Phe Val Leu Tyr Pro Val Val Thr His Ile Leu Ser

65 70 75 80

Leu Gly Phe Leu Thr Thr Ser His Phe Phe Asp Thr Leu Gly Leu Gly

85 90 95

Ala Val Ser Val Thr Gly Phe Cys His Thr Arg Tyr Val Leu Ser Ser

100 105 110

Val Tyr Gly Val Cys Ala Leu Ala Ala Phe Ile Cys Phe Thr Ile Arg

115 120 125

Ala Ala Lys Asn Cys Met Ala Cys Arg Tyr Ala Arg Thr Arg Phe Thr

130 135 140

Asn Phe Ile Val Asp Asp Arg Gly Arg Ile His Arg Trp Lys Ser Pro

145 150 155 160

Ile Val Val Glu Lys Leu Gly Lys Ala Glu Ile Gly Asn Asp Leu Ile

165 170 175

Thr Ile Lys His Val Val Leu Glu Gly Val Lys Ala Gln Pro Leu Thr

180 185 190

Arg Thr Ser Ala Glu Gln Trp Glu Ala

195 200

<210> 9

<211> 173

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 9

Met Gly Gly Ile Asp Asp Phe Cys Tyr Asp Pro Thr Ala Thr Gln Lys

1 5 10 15

Leu Val Leu Ala Phe Ser Ile Thr Tyr Thr Pro Ile Met Ile Tyr Ala

20 25 30

Leu Lys Val Ser Arg Gly Arg Leu Leu Gly Leu Leu His Ile Leu Ile

35 40 45

Phe Leu Asn Cys Ser Phe Thr Phe Gly Tyr Met Thr Tyr Val His Phe

50 55 60

Gln Ser Thr Asn Arg Val Ala Leu Thr Met Gly Ala Val Val Ala Leu

65 70 75 80

Leu Trp Gly Ile Tyr Ser Phe Ile Glu Ser Trp Lys Phe Ile Thr Ser

85 90 95

Arg Cys Arg Leu Cys Cys Leu Gly Arg Arg Tyr Ile Leu Ala Pro Ala

100 105 110

His His Val Glu Ser Ala Ala Gly Leu His Ser Ile Pro Ala Ser Gly

115 120 125

Asn Arg Ala Tyr Ala Val Arg Lys Pro Gly Leu Thr Ser Val Asn Gly

130 135 140

Thr Leu Val Pro Gly Leu Arg Ser Leu Val Leu Gly Gly Lys Arg Ala

145 150 155 160

Val Lys Arg Gly Val Val Asn Leu Val Lys Tyr Gly Arg

165 170

<210> 10

<211> 128

<212> БЕЛОК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 10

Met Ala Gly Asn Asn Gln Ser Gln Arg Lys Lys Lys Asn Ala Ala Pro

1 5 10 15

Met Gly Asn Gly Gln Ser Val Asn Gln Leu Cys Gln Leu Leu Gly Thr

20 25 30

Met Met Lys Ser Gln Arg Gln Arg Ser Arg Gly Gly Gln Ala Lys Arg

35 40 45

Lys Lys Pro Glu Lys Pro His Phe Pro Leu Ala Ala Glu Asp Asp Val

50 55 60

Arg His His Leu Thr Gln Thr Glu Arg Ser Leu Cys Leu Gln Ser Ile

65 70 75 80

Gln Thr Ala Phe Asn Gln Gly Ala Gly Thr Ala Ser Leu Ser Pro Ser

85 90 95

Gly Lys Ile Gly Phe Gln Val Glu Phe Met Leu Pro Val Thr His Thr

100 105 110

Val Arg Leu Ile Arg Val Thr Ser Thr Ser Ala Ser Gln Gly Val Ser

115 120 125

<210> 11

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 11

caggaaacag ctatgacacc tgatctctag aaacgttttt tttttttttt tttttt 56

<210> 12

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 12

tgatgtgtag ggtattcccc c 21

<210> 13

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 13

cgtgacccac cgagtaactt 20

<210> 14

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 14

tcttgagcag cgccaacttt 20

<210> 15

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 15

tcataccact cagggtcat 19

<210> 16

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 16

ccaggcgtty atgaagaaag c 21

<210> 17

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 17

aacaagcctt cataggacct tcg 23

<210> 18

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 18

tactgttcgg gttcaccgtc gc 22

<210> 19

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический праймер

<400> 19

aatttcggtc acatggttc 19

<210> 20

<211> 15111

<212> ДНК

<213> Вирус Lelystad

<400> 20

atgatgtgta gggtattccc cctacataca cgacacttct agtgtttgtg taccttggag 60

gcgtgggtac agccccgccc caccccttgg cccctgttct agcccaacag gtatccttct 120

ctctcggggc gagtgcgccg cctgctgctc ccttgcagcg ggaaggacct cccgagtatt 180

tccggagagc acctgcttta cgggatctcc accctttaac catgtctggg acgttctccc 240

ggtgcatgtg caccccggct gcccgggtat tttggaacgc cggccaagtc ttttgcacac 300

ggtgtctcag tgcgcggtct cttctctctc cagagcttca ggacactgac ctcggtgcag 360

ttggcttgtt ttacaagcct agggacaagc ttcactggaa agtccctatc ggcatccctc 420

aggtggaatg tactccatcc gggtgctgtt ggctctcagc tgttttccct ttggcgcgta 480

tgacctccgg caatcacaac ttcctccaac gacttgtgaa ggttgctgat gttttgtacc 540

gtgacggttg cttggcacct cgacaccttc gtgaactcca agtttacgag cgcggctgca 600

actggtaccc gatcacgggg cccgtgcccg ggatgggttt gtttgcgaac tccatgcacg 660

tatccgacca gccgttccct ggtgccaccc atgtgttgac taactcgcct ttgcctcaac 720

aggcttgtcg gcagccgttc tgtccatttg aggaggctca ttctagcgtg tacaggtgga 780

agaaatttgt ggttttcacg gactcctccc tcaacggtcg atctcgcatg atgtggacgc 840

cggaatccga tgattcagcc gccctggagg tactaccgcc tgagttagaa cgtcaggtcg 900

aaatcctcat tcggagtttt cctgctcatc accctgtcga cctggccgac tgggagctca 960

ctgagtcccc tgagaacggt ttttccttca acacgtctca ttcttgcggt caccttgtcc 1020

agaaccccga cgtgtttgat ggcaagtgct ggctctcctg ctttttgggc cagtcggtcg 1080

aagtgcgctg ccatgaggaa catctagctg acgccttcgg ttaccaaacc aagtggggcg 1140

tgcatggtaa gtacctccag cgcaggcttc aagttcgcgg cattcgtgct gtagtcgatc 1200

ctgatggtcc cattcacgtt gaagcgctgt cttgccccca gtcttggatc aggcacctga 1260

ctctggatga tgatgtcacc ccaggattcg ttcgcctgac atcccttcgc attgtgccga 1320

acacagagcc taccacttcc cggatctttc ggtttggagc gcataagtgg tatggcgctg 1380

ccggcaaacg ggctcgtgct aagcgtgccg ctaaaagtga gaaggattcg gctcccaccc 1440

ccaaggttgc cctgccggtc cccacctgtg gaattaccac ctactctcca ccgacagacg 1500

ggtcttgtgg ttggcatgtc cttgccgcca taatgaaccg gatgataaat ggtgacttca 1560

cgtcccctct gactcagtac aacagaccag aggatgattg ggcttctgat tatgatcttg 1620

ttcaggcgat tcaatgtcta cgactgcctg ctaccgtggt tcggaatcgc gcctgtccta 1680

acgccaagta ccttataaaa cttaacggag ttcactggga ggtagaggtg aggtctggaa 1740

tggctcctcg ctccctttct cgtgaatgtg tggttggcgt ttgctctgaa ggctgtgtcg 1800

caccgcctta tccagcagac gggctaccta aacgtgcact cgaggccttg gcgtctgctt 1860

acagactacc ctccgattgt gttagctctg gtattgctga ctttcttgct aatccacctc 1920

ctcaggaatt ctggaccctc gacaaaatgt tgacctcccc gtcaccagag cggtccggct 1980

tctctagttt gtataaatta ctattagagg ttgttccgca aaaatgcggt gccacggaag 2040

gggctttcat ctatgctgtt gagaggatgt tgaaggattg tccgagctcc aaacaggcca 2100

tggcccttct ggcaaaaatt aaagttccat cctcaaaggc cccgtctgtg tccctggacg 2160

agtgtttccc tacggatgtt ttagccgact tcgagccagc atctcaggaa aggccccaaa 2220

gttccggcgc tgctgttgtc ctgtgttcac cggatgcaaa agagttcgag gaagcagccc 2280

cggaagaagt tcaagagagt ggccacaagg ccgtccactc tgcactcctt gccgagggtc 2340

ctaacaatga gcaggtacag gtggttgccg gtgagcaact gaagctcggc ggttgtggtt 2400

tggcagtcgg gaatgctcat gaaggtgctc tggtctcagc tggtctaatt aacctggtag 2460

gcgggaattt gtccccctca gaccccatga aagaaaacat gctcaatagc cgggaagacg 2520

aaccactgga tttgtcccaa ccagcaccag cttccacaac gacccttgtg agagagcaaa 2580

cacccgacaa cccaggttct gatgccggtg ccctccccgt caccgttcga gaatttgtcc 2640

cgacggggcc tatactctgt catgttgagc actgcggcac ggagtcgggc gacagcagtt 2700

cgcctttgga tctatctgat gcgcaaaccc tggaccagcc tttaaatcta tccctggccg 2760

cttggccagt gagggccacc gcgtctgacc ctggctgggt ccacggtagg cgcgagcctg 2820

tctttgtaaa gcctcgaaat gctttctctg atggcgattc agcccttcag ttcggggagc 2880

tttctgaatc cagctctgtc atcgagtttg accggacaaa agatgctccg gtggttgacg 2940

cccctgtcga cttgacgact tcgaacgagg ccctctctgt agtcgatcct ttcgaatttg 3000

ccgaactcaa gcgcccgcgt ttctccgcac aagccttaat tgaccgaggc ggtccacttg 3060

ccgatgtcca tgcaaaaata aagaaccggg tatatgaaca gtgcctccaa gcttgtgagc 3120

ccggtagtcg tgcaacccca gccaccaggg agtggctcga caaaatgtgg gatagggtgg 3180

acatgaaaac ttggcgctgc acctcgcagt tccaagctgg tcgcattctt gcgtccctca 3240

aattcctccc tgacatgatt caagacacac cgcctcctgt tcccaggaag aaccgagcta 3300

gtgacaatgc cggcctgaag caactggtgg cacagtggga taggaaattg agtgtgaccc 3360

cccccccaaa accggttggg ccagtgcttg accagatcgt ccctccgcct acggatatcc 3420

agcaagaaga tgtcaccccc tccgatgggc caccccatgc gccggatttt cctagtcgag 3480

tgagcacggg cgggagttgg aaaggcctta tgctttccgg cacccgtctc gcggggtcta 3540

tcagccagcg ccttatgaca tgggtttttg aagttttctc ccacctccca gcttttatgc 3600

tcacactttt ctcgccgcgg ggctctatgg ctccaggtga ttggttgttt gcaggtgtcg 3660

ttttacttgc tctcttgctc tgtcgttctt acccgatact cggatgcctt cccttattgg 3720

gtgtcttttc tggttctttg cggcgtgttc gtctgggtgt ttttggttct tggatggctt 3780

ttgctgtatt tttattctcg actccatcca acccagtcgg ttcttcttgt gaccacgatt 3840

cgccggagtg tcatgctgag cttttggctc ttgagcagcg ccaactttgg gaacctgtgc 3900

gcggccttgt ggtcggcccc tcaggcctct tatgtgtcat tcttggcaag ttactcggtg 3960

ggtcacgtta tctctggcat gttctcctac gtttatgcat gcttgcagat ttggcccttt 4020

ctcttgttta tgtggtgtcc caggggcgtt gtcacaagtg ttggggaaag tgtataagga 4080

cagctcctgc ggaggtggct cttaatgtat ttcctttctc gcgcgccacc cgtgtctctc 4140

ttgtatcctt gtgtgatcga ttccaaacgc caaaaggggt tgatcctgtg cacttggcaa 4200

cgggttggcg cgggtgctgg cgtggtgaga gccccatcca tcaaccacac caaaagccca 4260

tagcttatgc caatttggat gaaaagaaaa tgtctgccca aacggtggtt gctgtcccat 4320

acgatcccag tcaggctatc aaatgcctga aagttctgca ggcgggaggg gccatcgtgg 4380

accagcctac acctgaggtc gttcgtgtgt ccgagatccc cttctcagcc ccatttttcc 4440

caaaagttcc agtcaaccca gattgcaggg ttgtggtaga ttcggacact tttgtggctg 4500

cggttcgctg cggttactcg acagcacaac tggttctggg ccggggcaac tttgccaagt 4560

taaatcagac cccccccagg aactctatct ccaccaaaac gactggtggg gcctcttaca 4620

cccttgctgt ggctcaagtg tctgcgtgga ctcttgttca tttcatcctc ggtctttggt 4680

tcacatcacc tcaagtgtgt ggccgaggaa ccgctgaccc atggtgttca aatccttttt 4740

catatcctac ctatggcccc ggagttgtgt gctcctctcg actttgtgtg tctgccgacg 4800

gggtcaccct gccattgttc tcagccgtgg cacaactctc cggtagagag gtggggattt 4860

ttattttggt gctcgtctcc ttgactgctt tggcccaccg catggctctt aaggcagaca 4920

tgttagtggt cttttcggct ttttgtgctt acgcctggcc catgagctcc tggttaatct 4980

gcttctttcc tatactcttg aagtgggtta cccttcaccc tcttactatg ctttgggtgc 5040

actcattctt ggtgttttgt ctgccagcag ccggcatcct ctcactaggg ataactggcc 5100

ttctttgggc aattggccgc tttacccagg ttgccggaat tattacacct tatgacatcc 5160

accagtacac ctctgggcca cgtggtgcag ctgctgtggc cacagcccca gaaggcactt 5220

atatggccgc cgtccggaga gctgctttaa ctgggcgaac tttaatcttc accccgtctg 5280

cagttggatc ccttctcgaa ggtgctttca ggactcataa accctgcctt aacaccgtga 5340

atgttgtagg ctcttccctt ggttccggag gggttttcac cattgatggc agaagaactg 5400

tcgtcactgc tgcccatgtg ttgaacggcg acacagctag agtcaccggc gactcctaca 5460

accgcatgca cactttcaag accaatggtg attatgcctg gtcccatgct gatgactggc 5520

agggcgttgc ccctgtggtc aaggttgcga aggggtaccg cggtcgtgcc tactggcaaa 5580

catcaactgg tgtcgaaccc ggtatcattg gggaagggtt cgccttctgt tttactaact 5640

gcggcgattc ggggtcaccc gtcatctcag aatctggtga tcttattgga atccacaccg 5700

gttcaaacaa acttggttct ggtcttgtga caacccctga aggggagacc tgcaccatca 5760

aagaaaccaa gctctctgac ctttccagac attttgcagg cccaagcgtt cctcttgggg 5820

acattaaatt gagtccggcc atcatccctg atgtaacatc cattccgagt gacttggcat 5880

cgctcctagc ctccgtccct gtagtggaag gcggcctctc gaccgttcaa cttttgtgtg 5940

tctttttcct tctctggcgc atgatgggcc atgcctggac acccattgtt gccgtgggct 6000

tctttttgct gaatgaaatt cttccagcag ttttggtccg agccgtgttt tcttttgcac 6060

tctttgtgct tgcatgggcc accccctggt ctgcacaggt gttgatgatt agactcctca 6120

cggcatctct caaccgcaac aagctttctc tggcgttcta cgcactcggg ggtgtcgtcg 6180

gtttggcagc tgaaatcggg acttttgctg gcagattgtc tgaattgtct caagctcttt 6240

cgacatactg cttcttacct agggtccttg ctatgaccag ttgtgttccc accatcatca 6300

ttggtggact ccataccctc ggtgtgattc tgtggttatt caaataccgg tgcctccaca 6360

acatgctggt tggtgatggg agtttttcaa gcgccttctt cctacggtat tttgcagagg 6420

gtaatctcag aaaaggtgtt tcacagtcct gtggcatgaa taacgagtcc ctaacggctg 6480

ctttagcttg caagttgtca caggctgacc ttgatttttt gtccagctta acgaacttca 6540

agtgctttgt atctgcttca aacatgaaaa atgctgccgg ccagtacatt gaagcagcgt 6600

atgccaaggc cctgcgccaa gagttggcct ctctagttca gattgacaaa atgaaaggag 6660

ttttgtccaa gctcgaggcc tttgctgaaa cagccacccc gtcccttgac ataggtgacg 6720

tgattgttct gcttgggcaa catcctcacg gatccatcct cgatattaat gtggggactg 6780

aaaggaaaac tgtgtccgtg caagagaccc ggagcctagg cggctccaaa ttcagtgttt 6840

gtactgtcgt gtccaacaca cccgtggacg ccttgaccgg catcccactc cagacaccaa 6900

cccctctttt tgagaatggt ccgcgtcatc gcagcgagga agacgatctt aaagtcgaga 6960

ggatgaagaa acactgtgta tccctcggct tccacaacat caatggcaaa gtttactgca 7020

aaatttggga caagtctacc ggtgacacct tttacacgga tgattcccgg tacacccaag 7080

accatgcttt tcaggacagg tcagccgact acagagacag ggactatgag ggtgtgcaaa 7140

ccacccccca acagggattt gatccaaagt ctgaaacccc tgttggcact gttgtgatcg 7200

gcggtattac gtataacagg tatctgatca aaggtaagga ggttctggtc cccaagcctg 7260

acaactgcct tgaagctgcc aagctgtccc ttgagcaagc tctcgctggg atgggccaaa 7320

cttgcgacct tacagctgcc gaggtggaaa agctaaagcg catcattagt caactccaag 7380

gtttgaccac tgaacaggct ttaaactgtt agccgccagc ggcttgaccc gctgtggccg 7440

cggcggccta gttgtgactg aaacggcggt aaaaattata aaataccaca gcagaacttt 7500

caccttaggc cctttagacc taaaagtcac ttccgaggtg gaggtaaaga aatcaactga 7560

gcagggccac gctgttgtgg caaacttatg ttccggtgtc atcttgatga gacctcaccc 7620

accgtccctt gtcgacgttc ttctgaaacc cggacttgac acaatacccg gcattcaacc 7680

agggcatggg gccgggaata tgggcgtgga cggttctatt tgggattttg aaaccgcacc 7740

cacaaaggca gaactcgagt tatccaagca aataatccaa gcatgtgaag ttaggcgcgg 7800

ggacgccccg aacctccaac tcccttacaa gctctatcct gttagggggg atcctgagcg 7860

gcataaaggc cgccttatca ataccaggtt tggagattta ccttacaaaa ctcctcaaga 7920

caccaagtcc gcaatccacg cggcttgttg cctgcacccc aacggggccc ccgtgtctga 7980

tggtaaatcc acactaggta ccactcttca acatggtttc gagctttatg tccctactgt 8040

gccctatagt gtcatggagt accttgattc acgccctgac acccctttta tgtgtactaa 8100

acatggcact tccaaggctg ctgcagagga cctccaaaaa tacgacctat ccacccaagg 8160

atttgtcctg cctggggtcc tacgcctagt acgcagattc atctttggcc atattggtaa 8220

ggcgccgcca ttgttcctcc catcaaccta tcccgccaag aactctatgg cagggatcaa 8280

tggccagagg ttcccaacaa aggacgttca gagcatacct gaaattgatg aaatgtgtgc 8340

ccgcgctgtc aaggagaatt ggcaaactgt gacaccttgc accctcaaga aacagtactg 8400

ttccaagccc aaaaccagga ccatcctggg caccaacaac tttattgcct tggctcacag 8460

atcggcgctc agtggtgtca cccaggcatt catgaagaag gcttggaagt ccccaattgc 8520

cttggggaaa aacaaattca aggagctgca ttgcactgtc gccggcaggt gtcttgaggc 8580

cgacttggcc tcctgtgacc gcagcacccc cgccattgta agatggtttg ttgccaacct 8640

cctgtatgaa cttgcaggat gtgaagagta cttgcctagc tatgtgctta attgctgcca 8700

tgacctcgtg gcaacacagg atggtgcctt cacaaaacgc ggtggcctgt cgtccgggga 8760

ccccgtcacc agtgtgtcca acaccgtata ttcactggta atttatgccc agcacatggt 8820

attgtcggcc ttgaaaatgg gtcatgaaat tggtcttaag ttcctcgagg aacagctcaa 8880

gttcgaggac ctccttgaaa ttcagcctat gttggtatac tctgatgatc ttgtcttgta 8940

cgctgaaaga cccacatttc ccaattacca ctggtgggtc gagcaccttg acctgatgct 9000

gggtttcaga acggacccaa agaaaaccgt cataactgat aaacccagct tcctcggctg 9060

cagaattgag gcagggcgac agctagtccc caatcgcgac cgcatcctgg ctgctcttgc 9120

atatcacatg aaggcgcaga acgcctcaga gtattatgcg tctgctgccg caatcctgat 9180

ggattcatgt gcttgcattg accatgaccc tgagtggtat gaggacctca tctgcggtat 9240

tgcccggtgc gcccgccagg atggttatag cttcccaggt ccggcatttt tcatgtccat 9300

gtgggagaag ctgagaagtc ataatgaagg gaagaaattc cgccactgcg gcatctgcga 9360

cgccaaagcc gactatgcgt ccgcctgtgg gcttgatttg tgtttgttcc attcgcactt 9420

tcatcaacac tgccctgtca ctctgagctg cggtcaccat gccggttcaa aggaatgttc 9480

gcagtgtcag tcacctgttg gggctggcag atcccctctt gatgccgtgc taaaacaaat 9540

tccatacaaa cctcctcgta ctgtcatcat gaaggtgggt aataaaacaa cggccctcga 9600

tccggggagg taccagtccc gtcgaggtct cgttgcagtc aagaggggta ttgcaggcaa 9660

tgaagttgat ctttctgatg gggactacca agtggtgcct cttttgccga cttgcaaaga 9720

cataaacatg gtgaaggtgg cttgcaatgt actactcagc aagttcatag tagggccacc 9780

aggttccgga aagaccacct ggctactgag tcaagtccag gacgatgatg tcatttacac 9840

acccacccat cagactatgt ttgatatagt cagtgctctc aaagtttgca ggtattccat 9900

tccaggagcc tcaggactcc ctttcccacc acctgccagg tccgggccgt gggttaggct 9960

tattgccagc gggcacgtcc ctggccgagt atcatacctc gatgaggctg gatattgtaa 10020

tcatctggac attcttagac tgctttccaa aacacccctt gtgtgtttgg gtgaccttca 10080

gcaacttcac cctgtcggct ttgattccta ctgttatgtg ttcgatcaga tgcctcagaa 10140

gcagctgacc actatttaca gatttggccc taacatctgc gcagccatcc agccttgtta 10200

cagggagaaa cttgaatcta aggctaggaa cactagggtg gtttttacca cccggcctgt 10260

ggcctttggt caggtgctga caccatacca taaagatcgc atcggctctg cgataaccat 10320

agattcatcc cagggggcca cctttgatat tgtgacattg catctaccat cgccaaagtc 10380

cctaaataaa tcccgagcac ttgtagccat cactcgggca agacacgggt tgttcattta 10440

tgaccctcat aaccagctcc aggagttttt caacttaacc cctgagcgca ctgattgtaa 10500

ccttgtgttc agccgtgggg atgagctggt agttctgaat gcggataatg cagtcacaac 10560

tgtagcgaag gcccttgaga caggtccatc tcgatttcga gtatcagacc cgaggtgcaa 10620

gtctctctta gccgcttgtt cggccagtct ggaagggagc tgtatgccac taccgcaagt 10680

ggcacataac ctggggtttt acttttcccc ggacagtcca acatttgcac ctctgccaaa 10740

agagttggcg ccacattggc cagtggttac ccaccagaat aatcgggcgt ggcctgatcg 10800

acttgtcgct agtatgcgcc caattgatgc ccgctacagc aagccaatgg tcggtgcagg 10860

gtatgtggtc gggccgtcca cctttcttgg tactcctggt gtggtgtcat actatctcac 10920

actatacatc aggggtgagc cccaggcctt gccagaaaca ctcgtttcaa cagggcgtat 10980

agccacagat tgtcgggagt atctcgacgc ggctgaggaa gaggcagcaa aagaactccc 11040

ccacgcattc attggcgatg tcaaaggtac cacggttggg gggtgtcatc acattacatc 11100

aaaataccta cctaggtccc tgcctaagga ctctgttgcc gtagttggag taagttcgcc 11160

cggcagggct gctaaagccg tgtgcactct caccgatgtg tacctccccg aactccggcc 11220

atatctgcaa cctgagacgg catcaaaatg ctggaaactc aaattagact tcagggacgt 11280

ccgactaatg gtctggaaag gagccaccgc ctatttccag ttggaagggc ttacatggtc 11340

ggcgctgccc gactatgcca ggtttattca gctgcccaag gatgccgttg tatacattga 11400

tccgtgtata ggaccggcaa cagccaaccg taaggtcgtg cgaaccacag actggcgggc 11460

cgacctggca gtgacaccgt atgattacgg tgcccagaac attttgacaa cagcctggtt 11520

cgaggacctc gggccgcagt ggaagatttt ggggttgcag ccctttaggc gagcatttgg 11580

ctttgaaaac actgaggatt gggcaatcct tgcacgccgt atgaatgacg gcaaggacta 11640

cactgactat aactggaact gtgttcgaga acgcccacac gccatctacg ggcgtgctcg 11700

tgaccatacg tatcattttg cccctggcac agaattgcag gtagagctag gtaaaccccg 11760

gctgccgcct gggcaagtgc cgtgaattcg gggtgatgca atggggtcac tgtggagtaa 11820

aatcagccag ctgttcgtgg acgccttcac tgagttcctt gttagtgtgg ttgatattgc 11880

cattttcctt gccatactgt ttgggttcac cgtcgcagga tggttactgg tctttcttct 11940

cagagtggtt tgctccgcgc ttctccgttc gcgctctgcc attcactctc ccgaactatc 12000

gaaggtccta tgaaggcttg ttgcccaact gcagaccgga tgtcccacaa tttgcagtca 12060

agcacccatt gggtatgttt tggcacatgc gagtttccca cttgattgat gagatggtct 12120

ctcgtcgcat ttaccagacc atggaacatt caggtcaagc ggcctggaag caggtggttg 12180

gtgaggccac tctcacgaag ctgtcagggc tcgatatagt tactcatttc caacacctgg 12240

ccgcagtgga ggcggattct tgccgctttc tcagctcacg actcgtgatg ctaaaaaatc 12300

ttgccgttgg caatgtgagc ctacagtaca acaccacgtt ggaccgcgtt gagctcatct 12360

tccccacgcc aggtacgagg cccaagttga ccgatttcag acaatggctc atcagtgtgc 12420

acgcttccat tttttcctct gtggcttcat ctgttacctt gttcatagtg ctttggcttc 12480

gaattccagc tctacgctat gtttttggtt tccattggcc cacggcaaca catcattcga 12540

gctgaccatc aactacacca tatgcatgcc ctgttctacc agtcaagcgg ctcgccaaag 12600

gctcgagccc ggtcgtaaca tgtggtgcaa aatagggcat gacaggtgtg aggagcgtga 12660

ccatgatgag ttgttaatgt ccatcccgtc cgggtacgac aacctcaaac ttgagggtta 12720

ttatgcttgg ctggcttttt tgtccttttc ctacgcggcc caattccatc cggagttgtt 12780

cgggataggg aatgtgtcgc gcgtcttcgt ggacaagcga caccagttca tttgtgccga 12840

gcatgatgga cacaattcaa ccgtatctac cggacacaac atctccgcat tatatgcggc 12900

atattaccac caccaaatag acgggggcaa ttggttccat ttggaatggc tgcggccact 12960

cttttcttcc tggctggtgc tcaacatatc atggtttctg aggcgttcgc ctgtaagccc 13020

tgtttctcga cgcatctatc agatattgag accaacacga ccgcggctgc cggtttcatg 13080

gtccttcagg acatcaattg tttccgacct cacggggtct cagcagcgca agagaaaatt 13140

tccttcggaa agtcgtccca atgtcgtgaa gccgtcggta ctccccagta catcacgata 13200

acggctaacg tgaccgacga atcatacttg tacaacgcgg acctgctgat gctttctgcg 13260

tgccttttct acgcctcaga aatgagcgag aaaggcttca aagtcatctt tgggaatgtc 13320

tctggcgttg tttctgcttg tgtcaatttc acagattatg tggcccatgt gacccaacat 13380

acccagcagc atcatctggt aattgatcac attcggttgc tgcatttcct gacaccatct 13440

gcaatgaggt gggctacaac cattgcttgt ttgttcgcca ttctcttggc aatatgagat 13500

gttctcacaa attggggcgt ttcttgactc cgcactcttg cttctggtgg ctttttttgc 13560

tgtgtaccgg cttgtcctgg tcctttgccg atggcaacgg cgacagctcg acataccaat 13620

acatatataa cttgacgata tgcgagctga atgggaccga ctggttgtcc agccattttg 13680

gttgggcagt cgagaccttt gtgctttacc cggttgccac tcatatcctc tcactgggtt 13740

ttctcacaac aagccatttt tttgacgcgc tcggtctcgg cgctgtatcc actgcaggat 13800

ttgttggcgg gcggtacgta ctctgcagcg tctacggcgc ttgtgctttc gcagcgttcg 13860

tatgttttgt catccgtgct gctaaaaatt gcatggcctg ccgctatgcc cgtacccggt 13920

ttaccaactt cattgtggac gaccggggga gagttcatcg atggaagtct ccaatagtgg 13980

tagaaaaatt gggcaaagcc gaagtcgatg gcaacctcgt caccatcaaa catgtcgtcc 14040

tcgaaggggt taaagctcaa cccttgacga ggacttcggc tgagcaatgg gaggcctaga 14100

cgatttttgc aacgatccta tcgccgcaca aaagctcgtg ctagccttta gcatcacata 14160

cacacctata atgatatacg cccttaaggt gtcacgcggc cgactcctgg ggctgttgca 14220

catcctaata tttctgaact gttcctttac attcggatac atgacatatg tgcattttca 14280

atccaccaac cgtgtcgcac ttaccctggg ggctgttgtc gcccttctgt ggggtgttta 14340

cagcttcaca gagtcatgga agtttatcac ttccagatgc agattgtgtt gccttggccg 14400

gcgatacatt ctggcccctg cccatcacgt agaaagtgct gcaggtctcc attcaatctc 14460

agcgtctggt aaccgagcat acgctgtgag aaagcccgga ctaacatcag tgaacggcac 14520

tctagtacca ggacttcgga gcctcgtgct gggcggcaaa cgagctgtta aacgaggagt 14580

ggttaacctc gtcaagtatg gccggtaaaa accagagcca gaagaaaaag aaaagtacag 14640

ctccgatggg gaatggccag ccagtcaatc aactgtgcca gttgctgggt gcaatgataa 14700

agtcccagcg ccagcaacct aggggaggac aggccaaaaa gaaaaagcct gagaagccac 14760

attttcccct ggctgctgaa gatgacatcc ggcaccacct cacccagact gaacgctccc 14820

tctgcttgca atcgatccag acggctttca atcaaggcgc aggaactgcg tcgctttcat 14880

ccagcgggaa ggtcagtttt caggttgagt ttatgctgcc ggttgctcat acagtgcgcc 14940

tgattcgcgt gacttctaca tccgccagtc agggtgcaag ttaatttgac agtcaggtga 15000

atggccgcga ttggcgtgtg gcctctgagt cacctattca attagggcga tcacatgggg 15060

gtcatactta atcaggcagg aaccatgtga ccgaaattaa aaaaaaaaaa a 15111

<210> 21

<211> 15411

<212> ДНК

<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 21

atgacgtata ggtgttggct ctatgccttg gcatttgtat tgtcaggagc tgtgaccatt 60

ggcacagccc aaaacttgct gcacagaaac acccttctgt gatagcctcc ttcaggggag 120

cttagggttt gtccctagca ccttgcttcc ggagttgcac tgctttacgg tctctccacc 180

cctttaacca tgtctgggat acttgatcgg tgcacgtgta cccccaatgc cagggtgttt 240

atggcggagg gccaagtcta ctgcacacga tgcctcagtg cacggtctct ccttcccctg 300

aacctccaag tttctgagct cggggtgcta ggcctattct acaggcccga agagccactc 360

cggtggacgt tgccacgtgc attccccact gttgagtgct cccccgccgg ggcctgctgg 420

ctttctgcaa tctttccaat cgcacgaatg accagtggaa acctgaactt ccaacaaaga 480

atggtacggg tcgcagctga gctttacaga gccggccagc tcacccctgc agtcttgaag 540

gctctacaag tttatgaacg gggttgccgc tggtacccca ttgttggacc tgtccctgga 600

gtggccgttt tcgccaattc cctacatgtg agtgataaac ctttcccggg agcaactcac 660

gtgttgacca acctgccgct cccgcagaga cccaagcctg aagacttttg cccctttgag 720

tgtgctatgg ctactgtcta tgacattggt catgacgccg tcatgtatgt ggccgaaagg 780

aaagtctcct gggcccctcg tggcggggat gaagtgaaat ttgaagctgt ccccggggag 840

ttgaagttga ttgcgaaccg gctccgcacc tccttcccgc cccaccacac agtggacatg 900

tctaagttcg ccttcacagc ccctgggtgt ggtgtttcta tgcgggtcga acgccaacac 960

ggctgccttc ccgctgacac tgtccctgaa ggcaactgct ggtggagctt gtttgacttg 1020

cttccactgg aagttcagaa caaagaaatt cgccatgcta accaatttgg ctaccagacc 1080

aagcatggtg tctctggcaa gtacctacag cggaggctgc aagttaatgg tctccgagca 1140

gtaactgacc taaacggacc tatcgtcgta cagtacttct ccgttaagga gagttggatc 1200

cgccatttga aactggcggg agaacccagc tactctgggt ttgaggacct cctcagaata 1260

agggttgagc ctaacacgtc gccattggct gacaaggaag aaaaaatttt ccggtttggc 1320

agtcacaagt ggtacggcgc tggaaagaga gcaagaaaag cacgctcttg tgcgactgct 1380

acagtcgctg gccgcgcttt gtccgttcgt gaaacccggc aggccaagga gcacgaggtt 1440

gccggcgcca acaaggctga gcacctcaaa cactactccc cgcctgccga agggaattgt 1500

ggttggcact gcatttccgc catcgccaac cggatggtga attccaaatt tgaaaccacc 1560

cttcccgaaa gagtgagacc tccagatgac tgggctactg acgaggatct tgtgaatgcc 1620

atccaaatcc tcagactccc tgcggcctta gacaggaacg gtgcttgtac tagcgccaag 1680

tacgtactta agctggaagg tgagcattgg actgtcactg tgacccctgg gatgtcccct 1740

tctttgctcc ctcttgaatg tgttcagggc tgttgtgggc acaagggcgg tcttggttcc 1800

ccagatgcag tcgaggtctc cggatttgac cctgcctgcc ttgaccggct ggctgaggtg 1860

atgcacctgc ctagcagtgc tatcccagcc gctctggccg aaatgtctgg cgattccgat 1920

cgttcggctt ctccggtcac caccgtgtgg actgtttcgc agttctttgc ccgtcacagc 1980

ggagggaatc accctgacca agtgcgctta gggaaaatta tcagcctttg tcaggtgatt 2040

gaggactgct gctgttccca gaacaaaacc aaccgggtca ccccggagga ggtcgcagca 2100

aagattgacc tgtacctccg tggtgcaaca aatcttgaag aatgcttggc caggcttgag 2160

aaagcgcgcc cgccacgcgt aatcgacacc tcctttgatt gggatgttgt gctccctggg 2220

gttgaggcgg caacccagac gatcaagctg ccccaggtca accagtgtcg tgctctggtc 2280

cctgttgtga ctcaaaagtc cttggacaac aactcggtcc ccctgaccgc cttttcactg 2340

gctaactact actaccgtgc gcaaggtgac gaagttcgtc accgtgaaag actaaccgcc 2400

gtgctctcca agttggaaaa ggttgttcga gaagaatatg ggctcatgcc aaccgagcct 2460

ggtccacggc ccacactgcc acgcgggctc gacgaactca aagaccagat ggaggaggac 2520

ttgctgaaac tggctaacgc ccagacgact tcggacatga tggcctgggc agtcgagcag 2580

gttgacctaa aaacttgggt caagaactac ccgcggtgga caccaccacc ccctccgcca 2640

aaagttcagc ctcgaaaaac gaagcctgtc aagagcttgc cggagagaaa gcctgtcccc 2700

gccccgcgca ggaaggttgg gtccgattgt ggcagcccgg tttcattagg cggcgatgtc 2760

cctaacagtt gggaagattt ggctgttagt agcccctttg atctcccgac cccacctgag 2820

ccggcaacac cttcaagtga gctggtgatt gtgtcctcac cgcaatgcat cttcaggccg 2880

gcgacaccct tgagtgagcc ggctccaatt cccgcacctc gcggaactgt gtctcgaccg 2940

gtgacaccct tgagtgagcc gatccctgtg cccgcaccgc ggcgtaagtt tcagcaggtg 3000

aaaagattga gttcggcggc ggcaatccca ccgtaccagg acgagcccct ggatttgtct 3060

gcttcctcac agactgaata tgaggcctct cccccagcac cgccgcagag cgggggcgtt 3120

ctgggagtag aggggcatga agctgaggaa accctgagtg aaatctcgga catgtcgggt 3180

aacattaaac ctgcgtccgt gtcatcaagc agctccttgt ccagcgtgag aatcacacgc 3240

ccaaaatact cagctcaagc catcatcgac tcgggcgggc cctgcagtgg gcatctccaa 3300

gaggtaaagg aaacatgcct tagtgtcatg cgcgaggcat gtgatgcgac taagcttgat 3360

gaccctgcta cgcaggaatg gctttctcgc atgtgggatc gggtggacat gctgacttgg 3420

cgcaacacgt ctgtttacca ggcgatttgc accttagatg gcaggttaaa gttcctccca 3480

aaaatgatac tcgagacacc gccgccctat ccgtgtgagt ttgtgatgat gcctcacacg 3540

cctgcacctt ccgtaggtgc ggagagcgac cttaccattg gctcagttgc tactgaagat 3600

gttccacgca tcctcgagaa aatagaaaat gtcggcgaga tggccaacca gggacccttg 3660

gccttctccg aggataaacc ggtagatgac caacttgtca acgacccccg gatatcgtcg 3720

cggaggcctg acgagagcac atcagctccg tccgcaggca caggtggcgc cggctctttt 3780

accgatttgc cgccttcaga tggcgcggat gcggacgggg gggggccgtt tcggacggta 3840

aaaagaaaag ctgaaaggct ctttgaccaa ctgagccgtc aggtttttga cctcgtctcc 3900

catctccctg ttttcttctc acgccttttc taccctggcg gtggttattc tccgggtgat 3960

tggggttttg cagcttttac tctattgtgc ctctttttat gttacagtta cccagccttt 4020

ggtattgctc ccctcttggg tgtgttttct gggtcttctc ggcgcgttcg aatgggggtt 4080

tttggctgct ggttggcttt tgctgttggt ctgttcaagc ctgtgtccga cccagtcggc 4140

gctgcttgtg agtttgactc gccagagtgt agaaacatcc ttcattcttt tgagcttctc 4200

aaaccttggg accctgttcg cagccttgtt gtgggccccg tcggtctcgg tcttgccatt 4260

cttggcaggt tactgggcgg ggcacgctgc atctggcact ttttgcttag gcttggcatt 4320

gttgcagact gtatcttggc tggagcttac gtgctttctc aaggtaggtg taaaaagtgc 4380

tggggatctt gtataagaac tgctcctaat gaggtcgctt ttaacgtgtt tcctttcaca 4440

cgtgcgacca ggtcgtcact tatcgacctg tgcgatcggt tttgtgcgcc aaaaggaatg 4500

gaccccattt ttctcgccac tgggtggcgc gggtgctggg ccggccgaag ccccattgag 4560

caaccctctg aaaaacccat cgcgtttgcc caattggatg aaaagaagat tacggctagg 4620

actgtggtcg cccagcctta tgaccccaac caagccgtaa agtgcttgcg ggtattgcag 4680

tcgggtgggg cgatggtggc taaggcggtc ccaaaagtgg tcaaggtttc cgctgttcca 4740

ttccgagccc ccttctttcc cactggagtg aaagttgacc ctgattgcag ggtcgtggtt 4800

gaccctgaca ctttcactgc agctctccgg tctggctact ccaccacaaa cctcgtcctt 4860

ggtgtagggg actttgccca gctgaatgga ttaaaaatca ggcaaatttc caagccttca 4920

gggggaggcc cacatctcat ggctgccctg catgttgcct gctcgatggc tctgcacatg 4980

cttgctggga tttatgtgac tgcggtgggt tcttgcggca ccggcaccaa cgacccgtgg 5040

tgcgctaacc cgtttgccgt ccctggctac ggacctggct ctctctgcac gtccaggttg 5100

tgcatttccc aacacggcct taccctgccc ttgacagcac ttgtggcggg attcggtatt 5160

caagaaattg ccttggtcgt tttgattttt gtttccatcg gaggcatggc tcataggttg 5220

agctgtaagg ctgacatgct gtgtgttttg cttgcaattg ccagctatgt ttgggtacct 5280

cttacctggt tgctttgtgt gtttccttgc tggttgcgct gtttttcttt gcaccccctc 5340

accatcctat ggttggtgtt tttcttgatt tctgtgaata tgccttcagg aatcttggcc 5400

atggtgttgt tggtttctct ttggcttctt ggtcgttata ctaatgttgc tggccttgtc 5460

accccctacg acattcatca ttacaccagt ggcccccgcg gtgttgccgc cttggctacc 5520

gcaccagatg ggacctactt ggccgctgtc cgccgcgctg cgttgactgg ccgcaccatg 5580

ctgtttaccc cgtcccagct tgggtctctt cttgagggtg ctttcagaac tcgaaagccc 5640

tcactgaaca ccgtcaatgt gatcgggtcc tccatgggct ctggcggggt gtttaccatc 5700

gacgggaaag tcaagtgcgt aactgccgca catgtcctta cgggcaattc agctcgggtt 5760

tccggggtcg gcttcaatca aatgcttgac tttgacgtaa agggagattt cgctatagct 5820

gattgcccga attggcaagg ggctgccccc aagacccaat tctgcacgga tggatggact 5880

ggccgtgcct attggctaac atcctctggc gtcgaacccg gcgtcattgg aaaaggattc 5940

gccttctgct tcaccgcatg tggcgattcc gggtccccag tgatcaccga ggccggtgag 6000

cttgtcggcg ttcacacggg atcgaataaa caaggggggg gcattgttac gcgcccctca 6060

ggccagtttt gtaatgtggc acccatcaag ctaagcgaat taagtgaatt ctttgctggg 6120

cctaaggtcc cgctcggtga tgtgaaggtc ggcagccaca taattaaaga cataagcgag 6180

gtgccttcag atctttgtgc cttgcttgct gccaaacctg aactggaagg aggcctctcc 6240

accgtccaac ttctttgtgt gttttttctc ctgtggagaa tgatgggaca tgcctggacg 6300

cccttggttg ctgtgagttt ctttattttg aatgaggttc tcccagccgt cctggtccgg 6360

agtgttttct cctttggaat gtttgtgcta tcctggctca cgccatggtc tgcgcaagtt 6420

ctgatgatca ggcttctgac agcagctctt aacaggaaca gatggtcact tgcctttttc 6480

agcctcggtg cagtgaccgg ttttgtcgca gatcttgcgg ccactcaggg gcatccgttg 6540

caggcagtga tgaatttgag cacctatgca ttcctgcctc ggatgatggt tgtgacctca 6600

ccagtcccag tgatcacgtg tggtgtcgtg cacctacttg ccatcatttt gtacttgttt 6660

aagtaccgtg gcccgcacca tatccttgtt ggcgatggag tgttctctgc ggctttcttc 6720

ttgagatact ttgccgaggg aaagttgagg gaaggggtgt cgcaatcctg cggaatgaat 6780

catgagtctc tgactggtgc cctcgctatg agactcaatg acgaggactt ggatttcctt 6840

atgaaatgga ctgattttaa gtgctttgtt tctgcgtcca acatgaggaa tgcagcgggt 6900

caatttatcg aggctgccta tgctaaagca cttagagtag aactggccca gttggtgcag 6960

gttgataaag ttcgaggtac tttggccaaa cttgaagctt ttgctgatac cgtggcacct 7020

caactctcgc ccggtgacat tgttgtcgct ctcggccaca cgcctgttgg cagtatcttc 7080

gacctaaagg ttggtagcac caagcatacc ctccaagcca ttgagaccag agtccttgct 7140

gggtccaaaa tgaccgtggc gcgcgtcgtc gacccgaccc ccacgccccc acccgcaccc 7200

gtgcccatcc ccctcccacc gaaagttctg gagaatggcc ccaacgcttg gggggatgag 7260

gaccgtttga ataagaagaa gaggcgcagg atggaagccc tcggcatcta tgttatgggc 7320

gggaaaaagt accagaaatt ttgggacaag aattccggtg atgtgtttta tgaggaggtc 7380

cataataaca cagatgagtg ggagtgtctc agagttggcg accctgccga ctttgaccct 7440

gagaagggaa ctctgtgtgg acatgtcacc attgaaaaca aggcttacca tgtttacacc 7500

tccccatctg gtaagaagtt cttggtcccc gtcaacccag agaatggaag agttcaatgg 7560

gaagctgcaa agctttccgt ggagcaggcc ctaggtatga tgaatgtcga cggcgaactg 7620

actgccaaag aactggagaa actgaaaaga ataattgaca aactccaggg cctgactaag 7680

gagcagtgtt taaactgcta gccgccagcg acttgacccg ctgtggtcgc ggcggcttgg 7740

ttgttactga aacagcggta aaaatagtca aatttcacaa ccggaccttc accctgggac 7800

ctgtgaattt aaaagtggcc agtgaggttg agctaaaaga cgcggttgag cacaaccaac 7860

acccggttgc gagaccgatc gatggtggag ttgtgctcct gcgttccgcg gttccttcgc 7920

ttatagacgt cttgatctcc ggtgctgatg catctcccaa gttacttgcc catcacgggc 7980

cgggaaacac tgggatcgat ggcacgctct gggattttga gtccgaagcc actaaagagg 8040

aagtcgcact cagtgcgcaa ataatacagg cttgtgacat taggcgcggc gacgctcctg 8100

aaattggtct cccttacaag ctgtaccctg ttaggggtaa ccctgagcgg gtgaaaggag 8160

ttctgcagaa tacaaggttt ggagacatac cttacaaaac ccccagtgac actggaagcc 8220

cagtgcacgc ggctgcctgc cttacgccca acgccactcc ggtgactgat gggcgctccg 8280

tcttggccac gaccatgccc cccgggtttg agttatatgt accgaccata ccagcgtctg 8340

tccttgatta ccttgactct aggcctgact gccctaaaca gctgacagag cacggctgcg 8400

aagatgccgc actgaaagac ctctctaaat atgacttgtc cacccaaggc tttgttttac 8460

ctggagttct tcgccttgtg cggaaatacc tgtttgccca tgtaggtaag tgcccacccg 8520

ttcatcggcc ttctacttac cctgctaaga attctatggc tggaataaat gggaacaggt 8580

tcccaaccaa ggacattcag agcgtccctg aaatcgacgt tctgtgcgca caggctgtgc 8640

gagaaaactg gcaaactgtc accccttgta ctcttaagaa acagtattgc gggaagaaga 8700

agactaggac catactcggc accaataact tcatcgcact agcccaccga gcagtgttga 8760

gtggtgttac ccagggcttc atgaaaaagg cgtttaactc gcccatcgcc ctcggaaaga 8820

acaagtttaa ggagctacag actccggtcc tgggcaggtg ccttgaagct gatctcgcat 8880

cctgcgatcg atccacgcct gcaattgtcc gctggtttgc cgccaacctt ctttatgaac 8940

ttgcctgtgc tgaagagcat ctaccgtcgt acgtgctgaa ctgctgccac gacttactgg 9000

tcacgcagtc cggcgcagtg actaagagag gtggcctgtc gtctggcgac ccgatcacct 9060

ctgtgtctaa caccatttat agtttggtga tctatgcaca gcatatggtg cttagttact 9120

tcaaaagtgg tcacccccat ggccttctgt tcttacaaga ccagctaaag tttgaggaca 9180

tgctcaaggt tcaacccctg atcgtctatt cggacgacct cgtgctgtat gccgagtctc 9240

ccaccatgcc aaactatcac tggtgggttg aacatctgaa tttgatgctg gggtttcaga 9300

cggacccaaa gaagacagca ataacagact cgccatcatt tctaggctgt agaataataa 9360

atgggcgcca gctagtcccc aaccgtgaca ggatcctcgc ggccctcgcc tatcacatga 9420

aggcgagtaa tgtttctgaa tactatgcct cagcggctgc aatactcatg gacagctgtg 9480

cttgtttgga gtatgatcct gaatggtttg aagaacttgt agttggaata gcgcagtgcg 9540

cccgcaagga cggctacagc tttcccggca cgccgttctt catgtccatg tgggaaaaac 9600

tcaggtccaa ttatgagggg aagaagtcga gagtgtgcgg gtactgcggg gccccggccc 9660

cgtacgctac tgcctgtggc ctcgacgtct gcatttacca cacccacttc caccagcatt 9720

gtccagtcac aatctggtgt ggccatccag cgggttctgg ttcttgtagt gagtgcaaat 9780

cccctgtagg gaaaggcaca agccctttag acgaggtgct ggaacaagtc ccgtataagc 9840

ccccacggac cgttatcatg catgtggagc agggtctcac cccccttgat ccaggtagat 9900

accaaactcg ccgcggatta gtctctgtca ggcgtggaat taggggaaat gaagttggac 9960

taccagacgg tgattatgct agcaccgcct tgctccctac ctgcaaagag atcaacatgg 10020

tcgctgtcgc ttccaatgta ttgcgcagca ggttcatcat cggcccaccc ggtgctggga 10080

aaacatactg gctccttcaa caggtccagg atggtgatgt tatttacaca ccaactcacc 10140

agaccatgct tgacatgatt agggctttgg ggacgtgccg gttcaacgtc ccggcaggca 10200

caacgctgca attccccgtc ccctcccgca ccggtccgtg ggttcgcatc ctagccggcg 10260

gttggtgtcc tggcaagaat tccttcctag atgaagcagc gtattgcaat caccttgatg 10320

ttttgaggct tcttagtaaa actaccctca cctgtctagg agacttcaag caactccacc 10380

cagtgggttt tgattctcat tgctatgttt ttgacatcat gcctcaaact caactgaaga 10440

ccatctggag gtttggacag aatatctgtg atgccattca gccagattac agggacaaac 10500

tcatgtccat ggtcaacaca acccgtgtga cctacgtgga aaaacctgtc aggtatgggc 10560

aggtcctcac cccctaccac agggaccgag aggacgacgc catcactatt gactccagtc 10620

aaggcgccac attcgatgtg gttacattgc atttgcccac taaagattca ctcaacaggc 10680

aaagagccct tgttgctatc accagggcaa gacacgctat ctttgtgtat gacccacaca 10740

ggcagctgca gggcttgttt gatcttcctg caaaaggcac gcccgtcaac ctcgcagtgc 10800

actgcgacgg gcagctgatc gtgctggata gaaataacaa agaatgcacg gttgctcagg 10860

ctctaggcaa cggggataaa tttagggcca cagacaagcg tgttgtagat tctctccgcg 10920

ccatttgtgc tgatctagaa gggtcgagct ctccgctccc caaggtcgca cacaacttgg 10980

gattttattt ctcacctgat ttaacacagt ttgctaaact cccagtagaa cttgcacctc 11040

actggcccgt ggtgtcaacc cagaacaatg aaaagtggcc ggatcggctg gttgccagcc 11100

ttcgccctat ccataaatac agccgcgcgt gcatcggtgc cggctatatg gtgggccctt 11160

cggtgtttct aggcactcct ggggtcgtgt catactatct cacaaaattt gttaagggcg 11220

gggctcaagt gcttccggag acggttttca gcaccggccg aattgaggta gactgccggg 11280

aatatcttga tgatcgggag cgagaagttg ctgcgtccct cccacacggt ttcattggcg 11340

acgtcaaagg cactaccgtt ggaggatgtc atcatgtcac ctccagatac ctcccgcgcg 11400

tccttcccaa ggaatcagtt gcggtagtcg gggtttcaag ccccggaaaa gccgcgaaag 11460

cattgtgcac actgacagat gtgtacctcc cagatcttga agcctatctc cacccggaga 11520

cccagtccaa gtgctggaaa atgatgttgg acttcaaaga agttcgacta atggtctgga 11580

aagacaaaac agcctatttc caacttgaag gtcgctattt cacctggtat cagcttgcca 11640

gctatgcctc gtacatccgt gttcccgtca actctacggt gtacttggac ccctgcatgg 11700

gccccgccct ttgcaacagg agagtcgtcg ggtccaccca ctggggggct gacctcgcgg 11760

tcacccctta tgattacggc gctaaaatta tcctgtctag cgcgtaccat ggtgaaatgc 11820

cccccggata caaaattctg gcgtgcgcgg agttctcgtt ggatgaccca gttaagtaca 11880

aacatacctg ggggtttgaa tcggatacag cgtatctgta tgagttcacc ggaaacggtg 11940

aggactggga ggattacaat gatgcgtttc gtgcgcgcca ggaagggaaa atttataagg 12000

ccactgccac cagcttgaag ttttattttc ccccgggccc tgtcattgaa ccaactttag 12060

gcctgaattg aaatgaaatg gggtccatgc aaagcctttt tgacaaaatt ggccaacttt 12120

ttgtggatgc tttcacggag ttcttggtgt ccattgttga tatcattata tttttggcca 12180

ttttgtttgg cttcaccatc gccggttggc tggtggtctt ttgcatcaga ttggtttgct 12240

ccgcgatact ccgtacgcgc cctgccattc actctgagca attacagaag atcttatgag 12300

gcctttcttt cccagtgcca agtggacatt cccacctggg gaactaaaca tcctttgggg 12360

atgctttggc accataaggt gtcaaccctg attgatgaaa tggtgtcgcg tcgaatgtac 12420

cgcatcatgg aaaaagcagg gcaggctgcc tggaaacagg tggtgagcga ggctacgctg 12480

tctcgcatta gtagtttgga tgtggtggct cattttcagc atctagccgc cattgaagcc 12540

gagacctgta aatatttggc ctcccggctg cccatgctac acaacctgcg catgacaggg 12600

tcaaatgtaa ccatagtgta taatagcact ttgaatcagg tgtttgctat ttttccaacc 12660

cctggttccc ggccaaagct tcatgatttt cagcaatggt taatagctgt acattcctcc 12720

atattttcct ctgttgcagc ttcttgtact ctttttgttg tgctgtggtt gcgggttcca 12780

atactacgta ctgtttttgg tttccgctgg ttaggggcaa tttttctttc gaactcacag 12840

tgaattacac ggtgtgtcca ccttgcctca cccggcaagc agccacagag atctacgaac 12900

ccggtaggtc tctttggtgc aggatagggt atgaccgatg tggggaggac gatcatgacg 12960

agctagggtt tatgataccg cctggcctct ccagcgaagg ccacttgact ggtgtttacg 13020

cctggttggc gttcttgtcc ttcagctaca cggcccagtt ccatcccgag atattcggga 13080

tagggaatgt gagtcgagtt tatgttgaca tcaaacatca actcatctgc gccgaacatg 13140

acgggcagaa caccaccttg cctcgtcatg acaacatttc agccgtgttt cagacctatt 13200

accaacatca agtcgacggc ggcaattggt ttcacctaga atggcttcgt cccttctttt 13260

cctcgtggtt ggttttaaat gtctcttggt ttctcaggcg ttcgcctgca aaccatgttt 13320

cagttcgagt cttgcagata ttaagaccaa caccaccgca gcggcaagct ttgctgtcct 13380

ccaagacatc agttgcctta ggcatcgcga ctcggcctct gaggcgattc gcaaaatccc 13440

tcagtgccgt acggcgatag ggacacccgt gtatgttacc atcacagcca atgtgacaga 13500

tgagaattat ttacattctt ctgatctcct catgctttct tcttgccttt tctatgcttc 13560

tgagatgagt gaaaagggat ttaaggtggt atttggcaat gtgtcaggca tcgtggctgt 13620

gtgtgtcaat tttaccagct acgtccaaca tgtcaaggag tttacccaac gctccctggt 13680

ggtcgaccat gtgcggttgc tccatttcat gacacctgag accatgaggt gggcaactgt 13740

tttagcctgt ctttttgcca ttctgttggc aatttgaatg tttaagtatg ttggagaaat 13800

gcttgaccgc gggctgttgc tcgcgattgc tttctttgtg gtgtatcgtg ccgttctgtt 13860

ttgctgtgct cgccaacgcc agcaacgaca gcagctccca tctacagctg atttacaact 13920

tgacgctatg tgagctgaat ggcacagatt ggctagctaa caaatttgat tgggcagtgg 13980

agagttttgt catctttccc gttttgactc acattgtctc ctatggtgcc ctcactacca 14040

gccatttcct tgacacagtc gctttagtca ctgtgtctac cgccgggttt gttcacgggc 14100

ggtatgtcct aagtagcatc tacgcggtct gtgccctggc tgcgttgact tgcttcgtca 14160

ttaggtttgc aaagaattgc atgtcctggc gctacgcgtg taccagatat accaactttc 14220

ttctggacac taagggcaga ctctatcgtt ggcggtcgcc tgtcatcata gagaaaaggg 14280

gcaaagttga ggtcgaaggt catctgatcg acctcaaaag agttgtgctt gatggttccg 14340

tggcaacccc tataaccaga gtttcagcgg aacaatgggg tcgtccttag atgacttctg 14400

tcatgatagc acggctccac aaaaggtgct tttggcgttt tctattacct acacgccagt 14460

gatgatatat gccctaaagg tgagtcgcgg ccgactgcta gggcttctgc accttttgat 14520

cttcctgaat tgtgctttca ccttcgggta catgactttc gcgcactttc agagtacaaa 14580

taaggtcgcg ctcactatgg gagcagtagt tgcactcctt tggggggtgt actcagccat 14640

agaaacctgg aaattcatca cctccagatg ccgtttgtgc ttgctaggcc gcaagtacat 14700

tctggcccct gcccaccacg ttgaaagtgc cgcacggttt catccgattg cggcaaatga 14760

taaccacgca tttgtcgtcc ggcgtcccgg ctccactacg gtcaacggca cattggtgcc 14820

cgggttaaaa agcctcgtgt tgggtggcag aaaagctgtt aaacagggag tggtaaacct 14880

tgtcaaatat gccaaataac aacggcaagc agcagaagag aaagaagggg gatggccagc 14940

cagtcaatca gctgtgccag atgctgggta agatcatcgc tcagcaaaac cagtccagag 15000

gcaagggacc gggaaagaaa aataagaaga aaaacccgga gaagccccat tttcctctag 15060

cgactgaaga tgatgtcaga catcacttta cccctagtga gcggcaattg tgtctgtcgt 15120

caatccagac cgcctttaat caaggcgctg ggacttgcac cctgtcagat tcagggagga 15180

taagttacac tgtggagttt agtttgccta cgcatcatac tgtgcgcctg atccgcgtca 15240

cagcatcacc ctcagcatga tgggctggca ttcttgaggc atctcagtgt ttgaattgga 15300

agaatgtgtg gtgaatggca ctgattgaca ttgtgcctct aagtcaccta ttcaattagg 15360

gcgaccgtgt gggggtgaga tttaattggc gagaaccatg cggccgaaat t 15411

<---

Реферат

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение относится к Аттенуированному штамму вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), к выделенному полинуклеотиду, содержащему молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду, имеющему последовательность SEQ ID NO: 1, или полинуклеотиду с SEQ ID NO: 1, к рекомбинантному экспрессионному вектору, содержащему полинуклеотид, к Клетке-хозяину для экспрессии полинуклеотида по п.2, содержащей рекомбинантный экспрессионный вектор по п.3 или содержащей полинуклеотид, к иммуногенной или вакцинальной композиции, содержащей эффективное количество штамма, или по меньшей мере одного полинуклеотида, или по меньшей мере одного вектора, или по меньшей мере одной клетки-хозяина и по меньшей мере один носитель и/или адъювант, подходящий для применения в ветеринарии, к применению штамма по п.1 или полинуклеотида, или вектора, или клетки-хозяина в качестве лекарственного средства, предпочтительно, в вакцинотерапии репродуктивно-респираторного синдрома свиней, к способу предотвращения заражения свиней вирусом РРСС или развития РРСС, включающему инокуляцию свиней штаммом или иммуногенной или вакцинальной композицией. Изобретение позволяет предотвратить заражение свиней вирусом РРСС или развитие РРСС. 8 н.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.

Формула