Стабильное получение лентивирусных векторов - RU2013114444A

Реферат

1. Способ получения стабильной линии пакующих лентивирусы клеток, включающий в себя:i) получение гибридного вектора (A), содержащего бакуловирусный остов, содержащий кассету интеграции, фланкированную ITR AAV, включающую в себя две кассеты экспрессии, при этом первая кассета экспрессии кодирует лентивирусные гены gag и pol, а вторая кассета экспрессии кодирует лентивирусный rev и селектируемый маркер; иii) получение экспрессирующей плазмиды (B), содержащей открытую рамку считывания rep AAV под контролем промотора;iii) трансфекцию клеток экспрессирующей плазмидой B и затем инфекцию клеток гибридным вектором A;iv) культивирование клеток в присутствии антибиотика для селекции;v) получение клеток, стабильно экспрессирующих белки gag, pol и rev;vi) интеграцию гена env в клетки;vii) культивирование клеток для получения клеточной линии, стабильно экспрессирующей белки gag, pol rev и env.2. Способ получения стабильной линии пакующих лентивирусы клеток, включающий в себя:i) получение гибридного вектора (A), содержащего бакуловирусный остов, содержащий кассету интеграции, фланкированную инвертированными концевыми повторами (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV), содержащую две кассеты экспрессии, при этом первая кассета экспрессии кодирует лентивирусные гены gag и pol, а вторая кассета экспрессии кодирует лентивирусный rev и селектируемый маркер; иii) получение экспрессирующей плазмиды (B), содержащей ORF rep AAV под контролем промотора;iii) трансфекцию клеток экспрессирующей плазмидой B и затем инфекцию клеток гибридным вектором A;iv) культивирование клеток в присутствии антибиотика для селекции;v) получение клеток, стабильно экспрессирующих белки gag, pol и rev;vi) ин�