Полустабильное получение лентивирусных векторов - RU2013114445A

Реферат

1. Система стабильной экспрессии лентивирусных структурных и регуляторных белков, состоящая из:i) гибридного вектора, содержащего бакуловирусный остов, содержащий кассету интеграции, фланкированную ITR AAV, включающую в себя две кассеты экспрессии, при этом первая кассета экспрессии кодирует лентивирусные гены gag и pol, а вторая кассета экспрессии кодирует лентивирусный rev и селектируемый маркер; иii) экспрессирующей плазмиды, содержащей открытую рамку считывания (ORF) Rep AAV под контролем промотора.2. Система по п. 1, в которой две кассеты экспрессии гибридного вектора находятся в ориентации хвост-к-хвосту, и каждая кассета экспрессии управляется конститутивным промотором и поли-A.3. Система по п. 1 или 2, в которой промотор выбран из CMV, CMV IE, PGK, SV40, eF1α, SFFV и RSV.4. Система по п. 3, в которой промотором является промотор CMV IE.5. Система по любому из пп. 1, 2 или 4, в которой селектируемый маркер выбран из гена резистентности к гигромицину, канамицину, неомицину, зеомицину.6. Система по п. 5, в которой селектируемым маркером является ген резистентности к гигромицину.7. Система по любому из пп. 1, 2, 4 или 6, в которой селектируемый маркер клонирован ниже участка внутренней посадки рибосомы (IRES).8. Система по пп. 1, 2, 4 или 6, в которой белком rep является белок rep78.9. Полустабильная линия клеток, пакующих лентивирусы, состоящая из клеток, стабильно экспрессирующих лентивирусные gag pol и rev, отличающаяся тем, что такие клетки содержат стабильно интегрированную в их геном, по меньшей мере, одну копию кассеты интеграции, фланкированную ITR AAV, включающую в себя две кассеты экспрессии, при этом первая кассета экспрессии кодирует лентивирусные гены gag и pol, а вторая