Способы и продукты для получения и доставки нуклеиновых кислот - RU2714404C2

Чертежи

Показать все 9 чертежа(ей)

Описание

ЗАЯВЛЕНИЕ ПРИОРИТЕТА

Настоящая заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США № 61/934397, поданной 31 января 2014 г., предварительной заявке США № 62/038608, поданной 18 августа 2014 г. и предварительной заявке США № 62/069667, поданной 28 октября 2014 г., полное содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Настоящая заявка относится к заявке США № 13/465490, поданной 7 мая 2012 г., международной заявке № PCT/US2012/067966, поданной 5 декабря 2012 г., заявке США № 13/931251, поданной 28 июня 2013 г., и международной заявке № PCT/US2013/068118, поданной 1 ноября 2013 г., полное содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение, в частности, относится к способам, композициям и продуктам для получения и доставки нуклеиновых кислот в клетки, ткани, органы и организм пациентов, способам экспрессии белков в клетках, тканях, органах и в организме пациентов, и клеткам, терапевтическим и косметическим средствам, полученным с использованием этих способов, композиций и продуктов.

ОПИСАНИЕ ТЕКСТОВОГО ФАЙЛА, ПРЕДСТАВЛЕННОГО В ЭЛЕКТРОННОМ ВИДЕ

Содержание текстового файла, представленного в электронном виде вместе с данной заявкой, включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме: Копия перечня последовательностей в машиночитаемом формате (название файла: FAB-008PC SequenceListing.txt; дата записи: 30 января 2015 г.; размер файла: 929 КБ).

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Терапевтические средства на основе синтетических РНК и нуклеиновых кислот

Рибонуклеиновая кислота (РНК) повсеместно распространена как в прокариотических, так и в эукариотических клетках, где она в виде матричной РНК кодирует генетическую информацию, в виде транспортной РНК связывает и транспортирует аминокислоты, в виде рибосомальной РНК собирает аминокислоты в белки и выполняет многочисленные другие функции, включающие регуляцию генной экспрессии в виде микроРНК и длинной некодирующей РНК. РНК можно получать синтетически методами, включающими прямой химический синтез, и транскрипцией in vitro, и она может вводиться пациентам с целью терапевтического применения. Однако, ранее описанные молекулы синтетических РНК являются нестабильными и запускают в клетках человека сильный врожденный иммунный ответ. В дополнение к этому, ранее не были описаны способы эффективной невирусной доставки нуклеиновых кислот в организм пациентов, органы, ткани и клетки in vivo. Множество недостатков существующих технологий применения синтетических РНК и способов доставки нуклеиновых кислот делают их неприемлемыми для терапевтического или косметического применения.

Виды терапии на основе клеток и репрограммирования клеток

Клетки могут репрограммироваться воздействием на них специфических внеклеточных стимулов и/или эктопической экспрессией специфических белков, микроРНК и т.д. Хотя ранее было описано несколько способов репрограммирования, большинство из них основываются на эктотопической экспрессии, требующей введения экзогеной ДНК, которая может нести риски возникновения мутаций. Сообщалось о не использующих ДНК способах репрограммирования, основанных на прямой доставке репрограммирующих белков. Однако, эти способы также являются неэффективными и ненадежными в отношении коммерческого применения. В дополнение к этому были описаны способы репрограммирования на основе РНК (см., например, Angel. MIT Thesis. 2008. 1-56; Angel et al. PLoS ONE. 2010. 5,107; Warren et al. Cell Stem Cell. 2010. 7,618-630; Angel. MIT Thesis. 2011. 1-89 и Lee et al. Cell. 2012. 151,547-558; содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки). Однако, существующие способы репрограммирования на основе РНК являются медленными, ненадежными и неэффективными при осуществлении на зрелых клетках, требуют множество трансфекций (приводящих к значительным затратам и возможности возникновения ошибки), могут репрограммировать только ограниченное количество типов клеток, могут репрограммировать клетки только по отношению к ограниченному количеству типов клеток, требуют использования иммуносуппрессантов и требуют использования множества компонентов, полученных из организма человека, включая полученный из крови САЧ и фидерные фибробласты человека. Множество недостатков описанных ранее способов репрограммирования на основе РНК делают их неприменимыми для применения in vivo.

Редактирование генов

Несколько встречающихся в природе белков содержат ДНК-связывающие домены, которые могут распознавать специфические последовательности ДНК, к примеру, цинковые пальцы (ZF) и подобные активаторам транскрипции эффекторы (TALE). Гибридные белки, содержащие один или более из этих ДНК-связывающих доменов и домена расщепления эндонуклеазы FokI, могут использоваться для создания двухцепочечного разрыва в требуемом участке ДНК в клетке (см., например, опубликованную патентную заявку США № US 2012/0064620, опубликованная патентная заявка США № US 2011/0239315, патентная заявка США № 8470973, опубликованная патентная заявка США № US 2013/0217119, патентная заявка США № 8420782, опубликованная патентная заявка США № US 2011/0301073, опубликованная патентная заявка США № US 2011/0145940, патентная заявка США № 8450471, патентная заявка США № 8440431, патентная заявка США № 8440432, опубликованная патентная заявка США № 2013/0122581, содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки). Однако, существующие способы редактирования генов клеток являются неэффективными и несут риск неконтролированного мутагенеза, что делает их неприемлемыми как для исследования, так и для терапевтического применения. Ранее не были изучены способы редактирования генов соматических клеток без использования ДНК и не существует способов одновременного или последовательного редактирования генов и репрограммирования соматических клеток. В дополнение к этому, ранее не были изучены способы прямого редактирования генов клеток в организме пациентов (т.е.in vivo), и разработка таких способов ограничена отсутствием приемлемых мишеней, неэффективной доставкой, неэффективной экспрессией редактирующего гены белка/белков, неэффективным редактированием генов экспрессированным редактирующим гены белком/белками, в частности из-за слабого связывания ДНК-связывающих доменов, чрезмерные нецелевые эффекты, в частности из-за неуправляемой димеризации домена расщепления FokI и слабой специфичности ДНК-связывающих доменов и другими факторами. Наконец, ранее не было изучено применение редактирования генов при противобактериальном, противовирусном и противораковом видах лечения.

Соответственно, остается потребность в усовершенствовании способов и композиций для получения и доставки нуклеиновых кислот в клетки, ткани, органы и организм пациентов.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении, в частности, представлены композиции, способы, изделия и устройства для доставки нуклеиновых кислот в клетки, ткани, органы и организмы пациентов, способы индуцирования клеток для экспрессии белков, способы, изделия и устройства для получения этих композиций, способов, изделий и устройств, и композиции и изделия, включающие клетки, организмы, косметические и терапевтические средства, полученные с использованием этих композиций, способов, изделий и устройств. В отличии от ранее сообщавшихся способов, в некоторых вариантах реализации по данному изобретению не проводится воздействие на клетки экзогенной ДНК или аллогенных или полученных из организма животных материалов, что делает продукты, полученные в соответствии со способами по данному изобретению, пригодными для терапевтических и косметических применений.

В некоторых аспектах изобретения предложено способ экспрессии белка в популяции клеток пациента, включающий внедрение РНК в популяцию клеток, причем РНК, содержащая один или более неканонических нуклеотидов, не индуцирует значительный клеточный иммунный ответ и практически не снижает экспрессию белков. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере 50%, или по меньшей мере 75%, или по меньшей мере 90% неканонических нуклеотидов выбирают из одного или более из 5-гидроксицитидина, 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина, 5-формилцитидина, 5-гидроксиуридина, 5-гидроксиметилуридина, 5-карбоксиуридина и 5-формилуридина, или в некоторых вариантах реализации изобретения выбирают из одного или более из 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина и 5-формилцитидина. Дополнительные варианты реализации изобретения относятся к дополнительным элементам РНК, например, 5ʹ-кэп структура, 3ʹ-поли(A) хвост и 5ʹ-НТО и/или 3ʹ-НТО, которые необязательно содержат одну или более из консенсусной последовательности Козак, последовательности, которая увеличивает стабильность РНК in vivo (таким образом как, в качестве иллюстрации, 5ʹ-НТО альфа-глобина или бета-глобина).

В некоторых аспектах изобретения предложены пластыри для доставки нуклеиновых кислот. В одном аспекте изобретения предложены устройства для доставки нуклеиновых кислот с использованием электростатических полей. Другие аспекты изобретения принадлежат к способам и композициям для доставки нуклеиновых кислот в кожу. Дополнительные аспекты изобретения принадлежат к способам и композициям для экспрессии белков в коже.

В одном аспекте в изобретении представлены способы и композиции для лечения заболеваний и патологических состояний у людей, включающие, но не ограниченные, профилактическим лечением, лечением редких заболеваний, включающими, но не ограниченными, дерматологическими редкими заболеваниями, и лечением для применения в медицинской дерматологии и эстетической медицине. В другом аспекте в изобретении предложены косметические средства, содержащие нуклеиновые кислоты. Дополнительные аспекты изобретения относятся к способам и композициям для изменения пигментации, к примеру, для лечения нарушений пигментации. Дополнительные аспекты изобретения относятся к способам и композициям для усиления заживления, включая, но не ограничиваясь, заживлением в результате нанесения раны или хирургического вмешательства. Другие аспекты изобретения относятся к нуклеиновым кислотам, содержащим один или более неканонических нуклеотидов. В одном аспекте в изобретении представлены нуклеиновые кислоты, содержащие, к примеру, один или более из 5-гидроксицитидина, 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина, 5-формилцитидина, 5-гидроксиуридина, 5-гидроксиметилуридина, 5-карбоксиуридина и 5-формилуридина, или в некоторых вариантах реализации изобретения выбирают из одного или более из 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина и/или 5-формилцитидина.

Композиции по данному изобретению могут изменять, модифицировать и/или заменять внешний вид представителя системы покровов тела субъекта, такого как, но не ограничиваясь, кожа, волосы и ногти. Такое изменение, модификация и/или замена могут проходить в контексте способов лечения и/или терапевтических применений, как описано в данном документе, включая, в качестве неограничивающего примера, дерматологические способы лечения и процедуры с применением косметических средств.

В некоторых аспектах изобретения представлены молекулы синтетических РНК с низкой токсичностью и высокой эффективностью трансляции. В одном аспекте изобретения предложена среда для культивирования клеток для высокоэффективной трансфекции in vivo, репрограммирования и редактирования генов клеток. Другие аспекты принадлежат к способам получения молекул синтетических РНК, кодирующих репрограммирующие белки. Дополнительные аспекты принадлежат к способам получения молекул синтетических РНК, кодирующих редактирующие гены белки.

В одном аспекте в изобретении представлены высокоэффективные редактирующие гены белки, содержащие сконструированные домены расщепления нуклеаз. В другом аспекте в изобретении представлены высокоточные редактирующие гены белки, содержащие сконструированные домены расщепления нуклеаз. Другие аспекте изобретения относятся к высокоэффективным редактирующим гены белкам, содержащим сконструированные ДНК-связывающие домены. Дополнительные аспекты изобретения принадлежат к высокоточным редактирующим гены белкам, содержащим сконструированные ДНК-связывающие домены. Дополнительные аспекты изобретения относятся к редактирующим гены белкам, содержащим сконструированные повторы последовательностей. Некоторые аспекты изобретения относятся к способам изменения последовательности ДНК клетки трансфицированием клетки или индуцированием клетки для экспрессии редактирующего гены белка. Другие аспекты изобретения относятся к способам изменения последовательности ДНК клетки, которая представлена в культуре in vitro. Дополнительные аспекты изобретения относятся к способам изменения последовательности ДНК клетки, которая представлена in vivo.

В некоторых аспектах в изобретении предложены способы лечения рака, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества редактирующего гены белка или нуклеиновой кислоты, кодирующей редактирующий гены белок. В одном аспекте изобретения редактирующий гены белок способен изменять последовательность ДНК гена, связанного с возникновением рака. В другом аспекте изобретения ген, связанный с возникновением рака, представляет собой ген BIRC5. Другие аспекты изобретения относятся к терапевтическим средствам, содержащим нуклеиновые кислоты и/или клетки, и способам использования терапевтических средств, содержащих нуклеиновые кислоты и/или клетки, для лечения, к примеру, диабета 1 типа, сердечно-сосудистого заболевания, включающего ишемическую и дилатационную кардиомиопатию, макулярной дегенерации, болезни Паркинсона, муковисцидоза, серповидноклеточной анемии, талассемии, анемии Фанкони, тяжелого комбинированного иммунодефицита, наследственной сенсорной нейропатии, пигментной ксеродермы, болезни Хантингтона, мышечной дистрофии, латерального амиотрофического склероза, болезни Альцгеймера, рака и инфекционных заболеваний, включающих гепатит и ВИЧ/СПИД. В некоторых аспектах изобретения нуклеиновые кислоты содержат синтетическую РНК. В других аспектах изобретения нуклеиновые кислоты доставляются в клетки с использованием вируса. В некоторых аспектах изобретения вирус представляет собой репликационно-компетентный вирус. В других аспектах изобретения вирус представляет собой репликационно-некомпетентный вирус.

Подробности изобретения изложены ниже в прилагаемом описании. Хотя при практической реализации или тестировании настоящего изобретение могут быть использованы способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, сейчас будут описываться иллюстративные способы и материалы. Другие признаки, цели и преимущества изобретения будут очевидны из описания и из формулы изобретения. В описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают также множественное число, если из контекста явно не следует иное. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, что обычно понимается средним специалистом в данной области техники, к которой относится это изобретение.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На ФИГ. 1 изображена РНК, кодирующая белок эластин человека и содержащая аденозин, 50% гуанозина, 50% 7-дезазагуанозина, 60% уридина, 40% 5-метилуридина и 5-метилцитидина, проанализированная в агарозном геле при денатурации формальдегидом.

На ФИГ. 2 изображены первичные дермальные фибробласты взрослого человека, трансфицированые РНК из ФИГ. 1.

На ФИГ. 3 изображены результаты иммуногистохимического анализа первичных дермальных фибробластов взрослого человека из ФИГ. 2 с использованием антител, таргетирующих белок эластин человека.

На ФИГ. 4 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей цитидин, 5-метилцитидин (5mC), 5-гидроксиметилцитидин (5hmC), 5-карбоксицитидин (5cC) или 5-формилцитидин (5fC) и кодирующие белок Oct4. Через 24 часа после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали на наличие белка Oct4.

На ФИГ. 5 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей зеленый флуоресцентный белок (GFP). Через 24 часа после трансфекции получали изображения клеток.

На ФИГ. 6 изображен участок вентральной части предплечья субъекта здорового мужчины возрастом 33 года, которому применяли синтетическую РНК, содержащую 5-гидроксиметилцитидин (5hmC) и кодирующую GFP. Стрелки указывают флуоресцирующие клетки.

На ФИГ. 7 изображен участок вентральной части предплечья пациента здорового мужчины возрастом 33 года, которому применяли синтетическую РНК, содержащую 5-гидроксиметилцитидин (5hmC) и кодирующую GFP. На верхнем изображении показано необработанную область того же предплечья, тогда как на нижних изображениях показаны два поля с обработанной областью. На нижних изображениях четко видны флюоресцирующие клетки (указанные стрелками).

На ФИГ. 8 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-метилуридин и 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей указанный белок. Через 48 часов после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антител, таргетирующих указанный белок.

На ФИГ. 9 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-метилуридин и 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей тирозиназу человека. Через 24 часа после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела, таргетирующего тирозиназу человека.

На ФИГ. 10 изображены первичные эпидермальные меланоциты человека.

На ФИГ. 11 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей указанные белки.

На ФИГ. 12 изображены первичные дермальные фибробласты человека, ежедневно трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей тирозиназу человека. Над каждым образцом показано количество трансфекций. Через 48 часа после последней трансфекции получали изображения клеток.

На ФИГ. 13 изображены первичные дермальные фибробласты человека, ежедневно трансфицированные синтетической РНК, содержащей указанные нуклеотиды и кодирующей тирозиназу человека. Через 48 часа после трансфекции получали изображения клеток.

На ФИГ. 14 изображена экспрессия IFNB1 и продукция пигмента в первичных дермальных фибробластах человека, трансфицированных синтетической РНК, содержащей указанные нуклеотиды и кодирующей тирозиназу человека. Значения нормализованы по отношению к образцу, трансфицированному синтетической РНК, содержащей только канонические нуклеотиды (A,G,U,C). В качестве контроля нагрузки использовали GAPDH. Прямоугольники, изображающие величину ошибки, показывают среднеквадратическую ошибку (n=2).

На ФИГ. 15 изображена экспрессия указанных генов, измеренных как указано для ФИГ. 14.

На ФИГ. 16 изображен участок вентральной части предплечья субъекта здорового мужчины возрастом 33 года, которому применяли синтетическую РНК, содержащую 5-метилуридин и 5-гидроксиметилцитидин и кодирующую тирозиназу человека (верхнее изображение), и веснушка на вентральной части предплечья того же субъекта (нижнее изображение). Для обоих изображений использовано одинаковое увеличение.

На ФИГ. 17 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей коллаген I (A1) (+ COL1 РНК). Между 24 и 72 часами после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела, таргетирующего коллаген I. Для каждого объекта из: трансфицированных клеток и нетрансфицированных клеток (Отр.) показаны два репрезентативных поля. Стрелками указаны внеклеточные отложения коллагена I.

На ФИГ. 18 изображены первичные дермальные фибробласты человека, трансфицированные синтетической РНК, содержащей 5-гидроксиметилцитидин и кодирующей коллаген VII (A1) (+ COL7 РНК). Между 24 и 72 часами после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела, таргетирующего коллаген I. Для каждого объекта из: трансфицированных клеток и нетрансфицированных клеток (Отр.) показано репрезентативное поле.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения

Термином «молекула» обозначается химическое соединение (молекула, ион, комплекс и т.д.).

Термином «молекула РНК» обозначается молекула, которая содержит РНК.

Термином «молекула синтетической РНК» обозначается молекула РНК, которая продуцируется вне клетки или которая продуцируется внутри клетки с использованием биоинженерии, в качестве неограничивающего примера, молекула РНК, которая продуцируется в реакции транскрипции in vitro, молекула РНК, которая продуцируется прямым химическим синтезом, или молекула РНК, которая продуцируется в сконструированной методами генетической инженерии клетке E.coli.

Термином «трансфекция» обозначается приведение клетки в контакт с молекулой, причем молекула интернализируется клеткой.

Термином «при трансфекции» обозначается действие, происходящее во время или после трансфекции.

Термином «реагент для трансфекции» обозначается вещество или смесь веществ, которые ассоциируются с молекулами и облегчают доставку молекулы и/или интернализацию молекулы клеткой, в качестве неограничивающего примера, катионный липид, заряженный полимер или проникающий в клетки пептид.

Термином «трансфекция, обусловленная применением реагента» обозначается трансфекция с использованием реагента для трансфекции.

Термином «среда для культивирования клеток» обозначается среда, которая может использоваться для культивирования клеток, в качестве неограничивающего примера, модифицированная по Дульбекко среда Игла (DMEM) или DMEM+10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), независимо от того используется ли среда in vitro или in vivo.

Термином «среда для комплексообразования» обозначается среда, к которой добавляется реагент для трансфекции и подлежащая трансфекции молекула и в которой реагент для трансфекции ассоциирует с подлежащей трансфекции молекулой.

Термином «среда для трансфекции» обозначается среда, которая может использоваться для трансфекции, в качестве неограничивающего примера, модифицированная по Дульбекко среда Игла (DMEM), DMEM/F12, солевой раствор или вода, независимо от того используется ли среда in vitro или in vivo.

Термином «рекомбинантный белок» обозначается белок или пептид, который не продуцируется в организме животных или людей. Неограничивающие примеры включают трансферрин человека, который продуцируется в бактериях, фибронектин человека, который продуцируется in vitro в культуре клеток мыши, и сывороточный альбумин человека, который продуцируется в растении риса.

Термином «липидный переносчик» обозначается вещество, которое может увеличивать растворимость липидной или липидорастворимой молекулы в водном растворе, в качестве неограничивающего примера, сывороточный альбумин человека или метил-бета-циклодекстрин.

Термином «белок Oct4» обозначается белок, который кодируется геном POU5F1, или его природный или сконструированный вариант, представитель семейства, ортолог, фрагмент или гибридная конструкция, в качестве неограничивающего примера, белок Oct4 человека (SEQ ID №: 8), белок Oct4 мыши, белок Oct1, белок, кодированный псевдогеном 2 POU5F1, ДНК-связывающий домен белка Oct4 или гибридный белок Oct4-GFP. В некоторых вариантах реализации изобретения белок Oct4 содержит аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70% идентичности с SEQ ID №: 8, или в других вариантах реализации изобретения по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с SEQ ID №: 8. В некоторых вариантах реализации изобретения белок Oct4 содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 20 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 8. Или в других вариантах реализации изобретения белок Oct4 содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 15 или от 1 до 10 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 8.

Термином «белок Sox2» обозначается белок, который кодируется геном SOX2, или его природный или сконструированный вариант, представитель семейства, ортолог, фрагмент или гибридная конструкция, в качестве неограничивающего примера, белок Sox2 человека (SEQ ID №: 9), белок Sox2 мыши, ДНК-связывающий домен белка Sox2 или гибридный белок Sox2-GFP. В некоторых вариантах реализации изобретения белок Sox2 содержит аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70% идентичности с SEQ ID №: 9, или в других вариантах реализации изобретения по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с SEQ ID №: 9. В некоторых вариантах реализации изобретения белок Sox2 содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 20 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 9. Или в других вариантах реализации изобретения белок Sox2 содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 15 или от 1 до 10 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 9.

Термином «белок Klf4» обозначается белок, который кодируется геном KLF4, или его природный или сконструированный вариант, представитель семейства, ортолог, фрагмент или гибридная конструкция, в качестве неограничивающего примера, белок Klf4 человека (SEQ ID №: 10), белок Klf4 мыши, ДНК-связывающий домен белка Klf4 или гибридный белок Klf4-GFP. В некоторых вариантах реализации изобретения белок Klf4 содержит аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70% идентичности с SEQ ID №: 10, или в других вариантах реализации изобретения по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с SEQ ID №: 10. В некоторых вариантах реализации изобретения белок Klf4 содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 20 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 10. Или в других вариантах реализации изобретения белок Klf4 содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 15 или от 1 до 10 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 10.

Термином «белок c-Myc» обозначается белок, который кодируется геном MYC, или его природный или сконструированный вариант, представитель семейства, ортолог, фрагмент или гибридная конструкция, в качестве неограничивающего примера, белок c-Myc человека (SEQ ID №: 11), белок c-Myc мыши, белок l-Myc, белок c-Myc (T58A), ДНК-связывающий домен белка c-Myc или гибридный белок c-Myc-GFP. В некоторых вариантах реализации изобретения белок c-Myc содержит аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70% идентичности с SEQ ID №: 11, или в других вариантах реализации изобретения по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с SEQ ID №: 11. В некоторых вариантах реализации изобретения белок c-Myc содержит аминокислоты, содержащие от 1 до 20 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 11. Или в других вариантах реализации изобретения белок c-Myc содержит аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до 15 или от 1 до 10 аминокислотных инсерций, делеций или замен (в совокупности) в отношении SEQ ID №: 11.

Термином «репрограммирование» обозначается воздействие, вызывающее изменение фенотипа клетки, в качестве неограничивающего примера, вызывающее дифференцировку предшественника β-клеток в зрелую β-клетку, вызывающее дифференцировку фибробласта в плюрипотентную стволовую клетку, вызывающее трансдифференцировку кератиноцита в стволовой кардиомицит, вызывающее удлинение теломер клетки или вызывающее рост аксона нейрона.

Термином «репрограммирующий фактор» обозначается молекула, которая если клетка контактирует с молекулой и/или клетка экспрессирует молекулу, может самостоятельно или в комбинации с другой молекулой, вызывать репрограммирование, в качестве неограничивающего примера, белка Oct4.

Термином «фидер» обозначается клетка, которая может использоваться для кондиционирования среды или для поддержания иным образом роста других клеток в культуре.

Термином «кондиционирование» обозначается приведение в контакт одного или более фидеров со средой.

Термином «жирная кислота» обозначается молекула, которая содержит алифатическую цепь из по меньшей мере двух атомов углерода, в качестве неограничивающего примера, линолевая кислота, α-линоленовая кислота, октановая кислота, лейкотриен, простагландин, холестерин, глюкокортикоид, резолвин, протектин, тромбоксан, липоксин, марезин, сфинголипид, триптофан, N-ацетилтриптофан или их соль, метиловый эфир или производное.

Термином «короткоцепочечная жирная кислота» обозначается жирная кислота, которая содержит алифатическую цепь размером между двумя и 30 атомами углерода.

Термином «альбумин» обозначается белок, который хорошо растворяется в воде, в качестве неограничивающего примера, сывороточный альбумин человека.

Термином «ассоциированная молекула» обозначается молекула, которая нековалентно связана с другой молекулой.

Термином «компонент ассоциированной молекулы альбумина» обозначается одна или более молекул, которые связаны с полипептидом альбумина, в качестве неограничивающего примера, липиды, гормоны, холестерин, ионы кальция и т.п., которые связываются с полипептидом альбумина.

Термином «обработанный альбумин» обозначается альбумин, который обрабатывается для уменьшения, удаления, замены или инактивации иным образом компонента ассоциированной молекулы альбумина, в качестве неограничивающего примера, сывороточный альбумин человека, который инкубируется при повышенной температуре, сывороточный альбумин человека, который приводится в контакт с октаноатом натрия, или сывороточный альбумин человека, который приводится в контакт с пористым материалом.

Термином «ионообменная смола» обозначается материал, который при приведении в контакт с содержащим ионы раствором может замещать один или более из ионов одним или более другими ионами, в качестве неограничивающего примера, материал, который может замещать один или более ионов кальция одним или более ионами натрия.

Термином «половая клетка» обозначается сперматозоид или яйцеклетка.

Термином «плюрипотентная стволовая клетка» обозначается клетка, которая in vivo может дифференцироваться в клетки всех трех зародышевых листков (эндодерма, мезодерма и эктодерма).

Термином «соматическая клетка» обозначается клетка, которая не является плюрипотентной стволовой клеткой или половой клеткой, в качестве неограничивающего примера, клетка кожи.

Термином «инсулинпродуцирующая клетка, реагирующая на изменение уровня глюкозы» обозначается клетка, которая при воздействии определенной концентрации глюкозы может продуцировать и/или секретировать количество инсулина, которое отличается от (в меньшую или в большую сторону) количества инсулина, которое продуцирует и/или секретирует клетка, когда клетка подвергается воздействию другой концентрации глюкозы, в качестве неограничивающего примера, β-клетка.

Термином «гемопоэтическая клетка» обозначается клетка крови или клетка, которая может дифференцировать в клетку крови, в качестве неограничивающего примера, гемопоэтическая стволовая клетка или белая клетка крови.

Термином «кардиомицит» обозначается клетка сердца или клетка, которая может дифференцировать в клетку сердца, в качестве неограничивающего примера, стволовой кардиомицит или кардиомицит.

Термином «ретинальная клетка» обозначается клетка сетчатки или клетка, которая может дифференцировать в клетку сетчатки, в качестве неограничивающего примера, ретинальная пигментированная эпителиальная клетка.

Термином «клетка кожи» обозначается клетка, которая обычно обнаруживается в коже, в качестве неограничивающего примера, фибробласт, кератиноцит, меланоцит, адипоцит, мезенхимальная стволовая клетка, адипозная стволовая клетка или клетка крови.

Термином «агонист передачи сигнала Wnt» обозначается молекула, которая может выполнять одну или более биологических функций одного или более представителей семейства белков Wnt, в качестве неограничивающего примера, Wnt1, Wnt2, Wnt3, Wnt3a или 2-амино-4-[3,4-(метилендиокси)бензиламино]-6-(3-метоксифенил)пиримидин.

Термином «агонист передачи сигнала ИЛ-6» обозначается молекула, которая может выполнять одну или более биологических функций белка ИЛ-6, в качестве неограничивающего примера, белка ИЛ-6 или рецептора ИЛ-6 (также известного как растворимый рецептор ИЛ-6, IL-6R, IL-6R альфа и т.п.).

Термином «агонист передачи сигнала ТФР-β» обозначается молекула, которая может выполнять одну или более биологических функций одного или более представителей суперсемейства белков ТФР-β, в качестве неограничивающего примера, ТФР-β1, ТФР-β3, активин A, BMP-4 или белок Nodal.

Термином «иммуносуппрессант» обозначается вещество, которое может суппрессировать один или более аспектов иммунной системы и которое обычно отсутствует в организме млекопитающего, в качестве неограничивающего примера, B18R или дексаметазон.

Термином «одноцепочечный разрыв» обозначается участок одноцепочечной или двухцепочечной ДНК, в котором одна или более ковалентных связей, связывающих нуклеотиды, разрушены на одной из одной или двух цепей.

Термином «двухцепочечный разрыв» обозначается участок двухцепочечной ДНК, в котором одна или более ковалентных связей, связывающих нуклеотиды, разрушены на каждой из двух цепей.

Термином «нуклеотид» обозначается нуклеотид или его фрагмент или производное, в качестве неограничивающего примера, нуклеотидное основание, нуклеозид, нуклеотидтрифосфат и т.п.

Термином «нуклеозид» обозначается нуклеотид или его фрагмент или производное, в качестве неограничивающего примера, нуклеотидное основание, нуклеозид, нуклеотидтрифосфат и т.п.

Термином «редактирование генов» обозначается изменение последовательности ДНК клетки, в качестве неограничивающего примера, трансфицированием клетки белком, который вызывает образование в ДНК клетки мутации.

Термином «редактирующий гены белок» обозначается белок, который может самостоятельно или в комбинации с одной или более других молекул, изменять последовательность ДНК клетки, в качестве неограничивающего примера, нуклеаза, подобная активатору транскрипции эффекторная нуклеаза (TALEN), цинк-пальцевая нуклеаза, мегануклеаза, никаза, белок, ассоциированный с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR) или их природный или сконструированный вариант, представитель семейства, ортолог, фрагмент или гибридная конструкция.

Термином «матрица для репарации» обозначается нуклеиновая кислота, содержащая участок с по меньшей мере около 70% гомологии с последовательностью, которая находится в пределах 10 т.п.н. сайта-мишени редактирующего гены белка.

Термином «повтор последовательности» обозначается аминокислотная последовательность, которая присутствует в белке в более чем одной копии, составляющая до по меньшей мере около 10% гомологии, в качестве неограничивающего примера, мономерный повтор подобного активатору транскрипции эффектора.

Термином «ДНК-связывающий домен» обозначается участок молекулы, которая способна связываться с молекулой ДНК, в качестве неограничивающего примера, белковый домен, содержащий один или более цинковых пальцев, белковый домен, содержащий один или более повторов последовательностей подобного активатору транскрипции эффектора (TAL), или связывающий карман малой молекулы, который способен связывать молекулу ДНК.

Термином «сайт связывания» обозначается последовательность нуклеиновой кислоты, которая способна распознаваться редактирующим гены белком, ДНК-связывающим белок, ДНК-связывающим доменом или их биологически активным фрагментом или вариантом, или последовательностью нуклеиновой кислоты, к которой редактирующий гены белок, ДНК-связывающий белок, ДНК-связывающий домен или их биологически активный фрагмент или вариант обладает высокой аффинностью, в качестве неограничивающего примера, последовательность ДНК размером около 20 пар оснований в экзоне 1 гена BIRC5 человека.

Термином «мишень» обозначается нуклеиновая кислота, которая содержит сайт связывания.

Другие определения изложены в заявке США № 13/465490, предварительной заявке США № 61/664494, предварительной заявке США № 61/721302, международной заявке № PCT/US12/67966, предварительной заявке США № 61/785404, предварительной заявке США № 61/842874, международной заявке № PCT/US13/68118, предварительной заявке США № 61/934397, заявке США № 14/296220, предварительной заявке США № 62/038608 и предварительной заявке США № 62/069667, содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Гликация и гликозилирование представляют собой процессы, посредством которых одна или более молекул сахаридов связываются с белком. В настоящее время установлено, что изменение количества или локализации сайтов гликации или гликозилирования может увеличить или уменьшить стабильность белка. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к белку с одним или более сайтами гликации или гликозилирования. В одном варианте реализации изобретения белок сконструирован таким образом, чтобы содержать больше сайтов гликации или гликозилирования, чем природный вариант белка. В другом варианте реализации изобретения белок сконструирован таким образом, чтобы содержать меньше сайтов гликации или гликозилирования, чем природный вариант белка. В еще одном варианте реализации изобретения белок имеет увеличенную стабильность. В еще одном варианте реализации изобретения белок имеет уменьшенную стабильность.

Дополнительно было обнаружено, что при определенных обстоятельствах, включающих присутствие одного или более стероидов и/или одного или более антиоксидантов в среде для трансфекции может увеличить эффективность трансфекции in vivo, эффективность репрограммирования in vivo и эффективность редактирования генов in vivo. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к приведению клетки или организма пациента в контакт с глюкокортикоидом, таким как гидрокортизон, преднизон, преднизолон, метилпреднизолон, дексаметазон или бетаметазон. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки для экспрессии представляющего интерес белка приведением клетки в контакт со средой, содержащей стероид, и приведение клетки в контакт с одной или более молекул нуклеиновых кислот. В одном варианте реализации изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит синтетическую РНК. В другом варианте реализации изобретения стероид представляет собой гидрокортизон. В еще одном варианте реализации изобретения гидрокортизон присутствует в среде в концентрации между около 0,1 мкМ и около 10 мкМ, или около 1 мкМ. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии представляющего интерес белка приведением в клетки контакт со средой, содержащей антиоксидант, и приведением клетки в контакт с одной или более молекул нуклеиновых кислот. В одном варианте реализации изобретения антиоксидант представляет собой аскорбиновую кислоту или 2-фосфат аскорбиновой кислоты. В другом варианте реализации изобретения аскорбиновая кислота или 2-фосфат аскорбиновой кислоты присутствует в среде в концентрации между около 0,5 мг/л и около 500 мг/л, включая около 50 мг/л. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования и/или редактирования генов клетки in vivo приведением клетки в контакт со средой, содержащей стероид и/или антиоксидант, и приведением клетки в контакт с одной или более молекул нуклеиновых кислот, причем одна или более молекул нуклеиновых кислот кодируют один или более репрограммирующих или редактирующих гены белков. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка присутствует в организме, а стероид и/или антиоксидант доставляются в организм.

Сообщалось, что при определенных обстоятельствах добавление трансферрина в среду для комплексообразования увеличивает эффективность трансфекции плазмид. В настоящее время установлено, что добавление трансферрина в среду для комплексообразования также может увеличить эффективность трансфекции in vivo молекулами синтетических РНК. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии представляющего интерес белка добавлением в содержащий трансферрин раствор одной или более молекул синтетических РНК и реагента для трансфекции. В одном варианте реализации изобретения трансферрин присутствует в растворе в концентрации между около 1 мг/л и около 100 мг/л, такой как 5 мг/л. В другом варианте реализации изобретения трансферрин является рекомбинантным.

Клетки, ткани, органы и организмы, включающие, но не ограниченные, человеческими, обладают несколькими свойствами, которые могут ингибировать или предотвращать доставку нуклеиновых кислот, включая, к примеру, роговой слой, который может служить барьером для чужеродных организмов и нуклеиновых кислот. Таким образом, эти свойства могут ингибировать воздействие терапевтических и косметических средств, содержащих нуклеиновой кислоты. В настоящее время установлено, что многие из этих свойств можно обойти или преодолеть использованием пластыря, содержащего эластичную мембрану и множество игл, и такой пластырь может служить как эффективное и безопасное изделие для доставки нуклеиновых кислот. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к пластырю для доставки нуклеиновых кислот. В одном варианте реализации изобретения пластырь для доставки нуклеиновых кислот содержит эластичную мембрану. В другом варианте реализации изобретения пластырь для доставки нуклеиновых кислот содержит множество игл. В еще одном варианте реализации изобретения множество игл присоединены к эластичной мембране. В некоторых вариантах реализации изобретения пластырь содержит нуклеиновую кислоту. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота находится в растворе. В одном варианте реализации изобретения множество игл включает одну или более игл, имеющих просвет. В другом варианте реализации изобретения пластырь дополнительно содержит вторую эластичную мембрану. В еще одном варианте реализации изобретения эластичная мембрана и вторая эластичная мембрана расположены с образованием полости. В дополнительном варианте реализации изобретения полость содержит нуклеиновую кислоту. В другом дополнительном варианте реализации изобретения мембрана содержит одно или более отверстий, через которые может проходить нуклеиновая кислота. В другом дополнительном варианте реализации изобретения одно или более отверстий и одна или более игл, имеющих просвет, расположены чтобы допускать прохождение раствора, содержащего нуклеиновую кислоту, через по меньшей мере одно из одного или более отверстий и через по меньшей мере одну из одной или более игл, имеющих просвет. В некоторых вариантах реализации изобретения пластырь выполнен с возможностью доставки раствора в кожу. В одном варианте реализации изобретения раствор содержит нуклеиновую кислоту. В другом варианте реализации изобретения раствор содержит носитель. В еще одном варианте реализации изобретения носитель представляет собой липид или липидоид. В другом дополнительном варианте реализации изобретения носитель представляет реагент для трансфекции на основе липида.

Клеточная мембрана может служить защитным барьером для чужеродных нуклеиновых кислот. В настоящее время установлено, что сочетание пластыря по данному изобретению с электрическим полем может увеличивать эффективность доставки нуклеиновых кислот. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к пластырю для доставки нуклеиновых кислот, содержащему множество игл, причем по меньшей мере две иглы образуют часть высоковольтного контура. В одном варианте реализации изобретения высоковольтный контур генерирует напряжение более чем около 10 В. В другом варианте реализации изобретения высоковольтный контур генерирует напряжение более чем около 20 В. В еще одном варианте реализации изобретения между двумя иглами создается электрическое поле. В дополнительном варианте реализации изобретения величина электрического поля составляет по меньшей мере около 100 В/см. В другом дополнительном варианте реализации изобретения величина электрического поля составляет по меньшей мере около 200 В/см. В некоторых вариантах реализации изобретения пластырь выполнен с возможностью доставки нуклеиновой кислоты в эпидермис. В других вариантах реализации изобретения пластырь выполнен с возможностью доставки нуклеиновой кислоты в дерму. В еще одних вариантах реализации изобретения пластырь выполнен с возможностью доставки нуклеиновой кислоты в субдермальную ткань. В еще одних вариантах реализации изобретения пластырь выполнен с возможностью доставки нуклеиновой кислоты в мышцу. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к пластырю для доставки нуклеиновых кислот, содержащему множество электродов. В одном варианте реализации изобретения множество электродов присоединено к эластичной мембране. Другие варианты реализации изобретения относятся к пластырю для доставки нуклеиновых кислот, содержащему жесткую структуру. В одном варианте реализации изобретения множество электродов присоединены к жесткой структуре.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу доставки нуклеиновой кислоты в клетку in vivo, включающему нанесение нуклеиновой кислоты на ткань, содержащую клетки in vivo. В одном варианте реализации изобретения способ дополнительно включает наложение нестационарного электрического поля вблизи клетки. В другом варианте реализации изобретения способ приводит к интернализации клеткой нуклеиновой кислоты in vivo. В еще одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит синтетическую РНК. В дополнительном варианте реализации изобретения способ дополнительно приводит к интернализации клеткой терапевтически или косметически эффективного количества нуклеиновой кислоты. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку кожи. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой мышечную клетку. В еще одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой дермальный фибробласт. В дополнительном варианте реализации изобретения клетка представляет собой кератиноцит. В другом дополнительном варианте реализации изобретения клетка представляет собой миобласт. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит представляющий интерес белок. В одном варианте реализации изобретения представляющий интерес белок является флуоресцентным белком. В другом варианте реализации изобретения представляющий интерес белок является белком внеклеточного матрикса. В еще одном варианте реализации изобретения представляющий интерес белок является представителем из группы: эластина, коллагена, ламинина, фибронектина, витронектина, лизилоксидазы, эластинсвязывающего белка, фактора роста, фактора роста фибробластов, трансформирующего фактора роста бета, колониестимулирующего фактора гранулоцитов, матриксной металлопротеазы, актина, фибриллина, ассоциированного с микрофибриллами гликопротеина, подобного лизилоксидазе белка, фактора роста тромбоцитов, липазы, разобщающего белка, термогенина и белка, вовлеченного в продукцию пигмента. В некоторых вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает доставку нуклеиновой кислоты в эпидермис. В других вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает доставку нуклеиновой кислоты в дерму. В других вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает доставку нуклеиновой кислоты ниже дермы. В одном варианте реализации изобретения доставка осуществляется инъекцией. В другом варианте реализации изобретения доставка осуществляется инъекцией с использованием микроигольчатой матрицы. В еще одном варианте реализации изобретения доставка осуществляется местным введением. В дополнительном варианте реализации изобретения доставка включает разрушение или удаление части ткани. В дополнительном варианте реализации изобретения доставка включает разрушение или удаление части рогового слоя. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновая кислота находится в растворе. В одном варианте реализации изобретения раствор содержит фактор роста. В другом варианте реализации изобретения фактор роста является представителем из группы: фактора роста фибробластов и трансформирующего фактора роста. В еще одном варианте реализации изобретения фактор роста является представителем из группы: основного фактора роста фибробластов и трансформирующего фактора роста бета. В других вариантах реализации изобретения раствор содержит холестерин.

В другом варианте реализации изобретения способ дополнительно включает приведение клетки в контакт с одной или более молекул нуклеиновых кислот. В еще одном варианте реализации изобретения по меньшей мере одна из одной или более молекул нуклеиновых кислот кодирует представляющий интерес белок. В дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии клеткой представляющего интерес белка. В другом дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии клеткой терапевтически или косметически эффективного количества представляющего интерес белка.

В другом варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт с молекулой нуклеиновой кислоты. В еще одном варианте реализации изобретения способ приводит к интернализации клеткой молекулы нуклеиновой кислоты. В дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к интернализации клеткой терапевтически или косметически эффективного количества молекулы нуклеиновой кислоты. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота кодирует представляющий интерес белок. В одном варианте реализации изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит представителя из группы: молекулы дцДНК, молекулы оцДНК, молекулы дцРНК, молекулы оцРНК, плазмиды, олигонуклеотида, молекулы синтетической РНК, молекулы миРНК, молекулы мРНК и молекулы киРНК.

Синтетическая РНК, содержащая только канонические нуклеотиды, может связываться с рецепторами паттерна распознавания, может распознаваться с патоген-ассоциированным молекулярным паттерном и может запускать сильный иммунный ответ в клетках, который может приводить к блокированию трансляции, секреции воспалительных цитокинов и гибели клеток. В настоящее время установлено, что синтетическая РНК, содержащая определенные неканонические нуклеотиды, может избегать выявления врожденной иммунной системой и с высокой эффективностью может транслироваться в белок. Дополнительно установлено, что синтетическая РНК, содержащая по меньшей мере одного представителя из группы: 5-гидроксицитидина, 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина, 5-формилцитидина, 5-гидроксиуридина, 5-гидроксиметилуридина, 5-карбоксиуридина и 5-формилуридина может избегать выявления врожденной иммунной системой и с высокой эффективностью может транслироваться в белок. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки для экспрессии представляющего интерес белка, включающему приведение клетки в контакт с синтетической РНК. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки синтетической РНК, включающему приведение клетки в контакт с раствором, содержащим одну или более молекул синтетических РНК. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему введение пациенту синтетической РНК. В одном варианте реализации изобретения синтетическая РНК содержит по меньшей мере одного представителя из группы: 5-гидроксицитидина, 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина, 5-формилцитидина, 5-гидроксиуридина, 5-гидроксиметилуридина, 5-карбоксиуридина и 5-формилуридина. В другом варианте реализации изобретения синтетическая РНК кодирует представляющий интерес белок. Типичные РНК могут содержать комбинации и уровни содержания неканонических и неканонических нуклеотидов, как описано в другом месте данного документа, включая отношение к экспрессии любого представляющего интерес белка, описанного в данном документе. В еще одном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии представляющего интерес белка. В дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии представляющего интерес белка в коже пациента.

В настоящее время дополнительно установлено, что приведение клетки в контакт со стероидом может подавлять врожденный иммунный ответ к чужеродным нуклеиновым кислотам и может увеличивать эффективность доставки и трансляции нуклеиновых кислот. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к приведению клетки в контакт со стероидом. Другие варианты реализации изобретения относятся к введению стероида пациенту. В одном варианте реализации изобретения стероид представляет собой гидрокортизон. В другом варианте реализации изобретения стероид представляет собой дексаметазон. Другие варианты реализации изобретения относятся к введению пациенту представителя из группы: антибиотиков, противогрибковых средств и ингибиторов РНКаз.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу доставки в клетку нуклеиновой кислоты in vivo. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии представляющего интерес белка. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента. В одном варианте реализации изобретения способ включает разрушение рогового слоя. В другом варианте реализации изобретения способ включает приведение клетки в контакт с нуклеиновой кислотой. В еще одном варианте реализации изобретения способ приводит к интернализации клеткой нуклеиновой кислоты. В дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии клеткой представляющего интерес белка. В другом дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии в организме пациента представляющего интерес белка. В другом дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к облегчению одного или более симптомов пациента. В другом дополнительном варианте реализации изобретения пациент нуждается в представляющем интерес белке. В другом дополнительном варианте реализации изобретения у пациента наблюдается недостаток представляющего интерес белка.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему доставку композиции в организм пациента. В одном варианте реализации изобретения композиция содержит альбумин, который обработан ионообменной смолой или активированным углем. В другом варианте реализации изобретения способ включает одну или более молекул нуклеиновых кислот. В еще одном варианте реализации изобретения по меньшей мере одна из одной или более молекул нуклеиновых кислот кодирует представляющий интерес белок. В одном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии белка в коже пациента. В другом варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии терапевтически или косметически эффективного количества представляющего интерес белка в организме пациента. В еще одном варианте реализации изобретения способ включает введение стероида. В дополнительном варианте реализации изобретения стероид является представителем из группы: гидрокортизона и дексаметазона.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к молекуле синтетической РНК. В одном варианте реализации изобретения молекула синтетической РНК кодирует представляющий интерес белок. В другом варианте реализации изобретения молекула синтетической РНК содержит по меньшей мере одного представителя из группы: 5-гидроксицитидина, 5-гидроксиметилцитидина, 5-карбоксицитидина, 5-формилцитидина, 5-гидроксиуридина, 5-гидроксиметилуридина, 5-карбоксиуридина и 5-формилуридина. Другие варианты реализации изобретения относятся к косметической композиции. В одном варианте реализации изобретения косметическая композиция содержит альбумин. В другом варианте реализации изобретения альбумин обрабатывается ионообменной смолой или активированным углем. В еще одном варианте реализации изобретения косметическая композиция содержит молекулу нуклеиновой кислоты. В дополнительном варианте реализации изобретения косметическая композиция содержит как молекулу альбумина, так и нуклеиновой кислоты. Другие варианты реализации изобретения относятся к изделию для косметического лечения, содержащему косметическую композицию, помещенную в устройство, выполненное с возможностью доставки в организм пациента композиции. Другие варианты реализации изобретения относятся к устройству, выполненному с возможностью доставки косметической композиции в организм пациента. В одном варианте реализации изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует представителя из группы: эластина, коллагена, тирозиназы, рецептора меланокортина 1 и гиалуронансинтазы.

Некоторые белки обладают длительными периодами полувыведения и могут сохранять присутствие в тканях в течение нескольких часов, суток, недель, месяцев и лет. В настоящее время установлено, что некоторые способы лечения пациента могут приводить к накоплению одного или более белков, включая, к примеру, один или более полезных белков. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему доставку в организм пациента сериями доз нуклеиновой кислоты, кодирующей один или более белков. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит синтетическую РНК. В другом варианте реализации изобретения первая доза дается в первой временной точке. В еще одном варианте реализации изобретения вторая доза дается во второй временной точке. В дополнительном варианте реализации изобретения количество по меньшей мере одного из одного или более белков, вводимое пациенту во второй временной точке, больше количества указанного белка в первой временной точке. В дополнительном варианте реализации изобретения способ приводит к накоплению указанного белка в организме пациента.

Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтической композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую один или более белков, причем по меньшей мере один из одного или более белков представляет собой белок внеклеточного матрикса. Другие варианты реализации изобретения относятся к косметической композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую один или более белков, причем по меньшей мере один из одного или более белков представляет собой белок внеклеточного матрикса.

Нарушения пигментации могут приводить к появлению у пациента тяжелых симптомов. В настоящее время установлено, что нарушения пигментации можно лечить доставкой в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей тирозиназу. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу лечения нарушения пигментации. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу изменения у пациента пигментации. В одном варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей тирозиназу. Другие варианты реализации изобретения относятся к косметической композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую тирозиназу. Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтической композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую тирозиназу. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу увеличения поглощения ультрафиолетового света кожей пациента. В одном варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей тирозиназу. В другом варианте реализации изобретения способ приводит к увеличению поглощения ультрафиолетового света кожей пациента. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу уменьшения фотоповреждения кожи человека под воздействием ультрафиолетового света. В одном варианте реализации изобретения способ приводит к снижению фотоповреждения кожи человека под воздействием ультрафиолетового света. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пигментной ксеродермы. В одном варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей тирозиназу. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения буллезного эпидермолиза. В одном варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей коллаген VII типа. В другом варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей рецептор меланокортина 1. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения ксероза. В одном варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронансинтазу. В другом варианте реализации изобретения у пациента диагностирован атопический дерматит. В еще одном варианте реализации изобретения у пациента диагностирован ихтиоз. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу лечения косметического патологического состояния. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования заживления тканей. В одном варианте реализации изобретения способ включает доставку в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронансинтазу. В другом варианте реализации изобретения косметическое патологическое состояние является представителем из группы: морщин, обвисшей кожи, тонкой кожи, обесцвечивания и сухости кожи. В еще одном варианте реализации изобретения пациенту проведено хирургическое вмешательство по лечению катаракты. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновая кислота представляет собой синтетическую РНК. В других вариантах реализации изобретения способ приводит к облегчению одного или более симптомов пациента. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения показания доставкой в клетку или организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей белок или пептид. Другие варианты реализации изобретения относятся к композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или пептид. Показания, которые могут проходить лечение с использованием способов и композиций по данному изобретению и белки и пептиды, которые могут кодироваться композициями по данному изобретению, изложены в табл. 1, даются в качестве примера и не являются ограничивающими. В одном варианте реализации изобретения показание выбирается из табл. 1. В другом варианте реализации изобретения белок или пептид выбирается из табл. 1. В еще одном варианте реализации изобретения показание и белок или пептид выбираются из одного и того же ряда табл. 1. В дополнительном варианте реализации изобретения представляющий интерес белок является представителем из группы: UCP1, UCP2 и UCP3. Другие варианты реализации изобретения относятся к способам индуцирования клетки для экспрессии множества представляющих интерес белков. В одном варианте реализации изобретения представляющие интерес белки включают по меньшей мере два представителя из группы: липазы, UCP1, UCP2 и UCP3. В другом варианте реализации изобретения представляющие интерес белки включают липазу и представителя из группы: UCP1, UCP2 и UCP3. В другом варианте реализации изобретения белок представляет собой редактирующий гены белок. В еще одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок таргетирует ген, который по меньшей мере частично отвечает за фенотип заболевания. В еще одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок таргетирует ген, который кодирует белок, выбранный из табл. 1. В еще одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок корректирует или удаляет, самостоятельно или в комбинации с одной или более молекулами или редактирующими гены белками, мутацию, которая по меньшей мере частично отвечает за фенотип заболевания.

Таблица 1

Иллюстративные показания

Дополнительные иллюстративные цели настоящего изобретения включают косметические цели, перечисленные в табл. 6 международной патентной публикации № WO 2013/151671, содержание которой тем самым включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Дополнительно настоящие композиции и способы могут использоваться для изменения биологического и/или физиологического процесса, к примеру, уменьшения обвисания кожи, увеличения толщины кожи, увеличения объема кожи, уменьшения количества морщин, длины морщин и/или глубины морщин, увеличения тургора, плотности, тонуса и/или эластичности кожи, увеличения гидратации кожи и способности удерживать влагу, приток воды и осмотический баланс, увеличения уровня липидов кожи; увеличения полипептидов внеклеточного матрикса и/или адгезии и коммуникации; увеличение в коже образования; использования и сохранения энергии; улучшения использования кислорода; улучшения иммунной защиты клеток кожи, ответа на стресс от теплового шока, антиокислительной защитной способности в отношении нейтрализации свободных радикалов и/или защиты от токсинов; улучшения защиты и восстановления от ультрафиолетовых лучей; улучшения коммуникации клеток кожи и иннервации клеток кожи; улучшения коадгезии/адгезии клеток; улучшения минерального кальциевого метаболизма и другого минерального метаболизма; улучшения скорости обновления клеточной популяции и улучшения циркадных ритмов клеток.

Дополнительно в некоторых вариантах реализации изобретения настоящие композиции могут использоваться для лечения заболевания, нарушения и/или патологического состояния и/или могут изменять, модифицировать или заменять внешний вид представителя покровной системы субъекта, страдающего от заболевания, нарушения и/или патологического состояния такого как, но не ограничиваясь ими, обыкновенные угри, солнечные акне, шаровидные угри, косметические угри, молниеносные угри, келоидный фолликулит затылка, механические акне, вызванные медикаментами угри, милиарные некротические акне, некротические акне, розовые угри, актинический кератоз, обыкновенные угри, солнечные акне, шаровидные угри, косметические угри, молниеносные угри, келоидный фолликулит затылка, механические акне, вызванные медикаментами угри, милиарные некротические акне, некротические акне, розовые угри, острая крапивница, аллергический контактный дерматит, гнездная алопеция, ангиоэдема, эпидермофития стопы, атопический дерматит, аутоэкзематизация, акне новорожденных, облысение, бластомикоз, черные точки на лице, родинки и другие проблемы пигментации кожи, чирьи, синяки, укусы и ужаления насекомых, ожоги, целлюлит, укусы клещей, хлоракне, холинэргическая или стрессогенная крапивница, хроническая крапивница, крапивница простудного типа, сливающийся папулезный папилломатоз, кожные наросты, цисты, перхоть, герпетиформный дерматит, дерматографизм, дисгидротическая экзема, опрелость, сухая кожа, дисгидроз, эктодермальная дисплазия, такая как гипогидротическая эктодермальная дисплазия и X-сцепленная гипогидротическая эктодермальная дисплазия, экзема, бородавчатая эпидермодисплазия, узловатая эритема, экскориированные угри, индуцированный физическими упражнениями анафилактический фолликулит, избыточного жира кожи, фолликулит, веснушки, обморожение, грибковые поражения ногтей, густота волос, скорость роста волос, вызванные соединениями галогенов акне, выпадение волос, тепловая сыпь, гематома, инфекции простого герпеса (например, негенитального), гнойный гидраденит, сыпь, гипергидроз, гиперпигментация, гипогидротическая эктодермальная дисплазия, гипопигментация, импетиго, вросшие волосы, крапивница горячечного типа, вросший ноготь пальца стопы, младенческие акне или неонатальные акне, кожный зуд, ирритантный контактный дерматит, паховая эпидермофития, келоид, волосяной кератоз, плоский лишай, склерозирующий лишай, милиарная диссеминированная волчанка лица, мелазма, бородавки, контагиозный моллюск, скорость роста ногтей, здоровье ногтей, нейродерматит, монетовидная экзема, профессиональное акне, масляные угри, онихомикоз, механическая крапивница, пилонидальная киста, розовый лишай, разноцветный лишай, высыпания от сумаха ядоносного, помадные угри, псевдофолликулит зоны роста бороды или келоидный фолликулит затылка, псориаз, псориатический артрит, компрессионная крапивница или вызванная давлением замедленная крапивница, колотые раны, такие как порезы и соскобы, сыпь, редкая крапивница или крапивница водяночного типа, ринопластия, дерматомикоз, розовые угри, синдром Ротмунда-Томсона, обвисание кожи, струпья, рубцы, себорея, себорейный дерматит, опоясывающий герпес, рак кожи, мягкая бородавка, крапивница типа солнечного ожога, укус пауков, растяжки, солнечные ожоги, смолистые угри, тропические угри, утончение кожи, молочница, разноцветный лишай, транзиторный акантолитический дерматоз, колпак магната или милиарные некротические акне, неравномерный тонус кожи, варикозное расширение вен, венозная экзема, вибрационная ангиоэдема, витилиго, наросты, болезнь Вебера-Крисчена, морщины, X-сцепленная гипогидротическая эктодермальная дисплазия, ксеротическая экзема, дрожжевая инфекция и общие признаки старения.

В некоторых вариантах реализации изобретения представлены способы лечения сухой кожи настоящими композициями. В некоторых вариантах реализации изобретения профилаггрин (белок, который превращается в филаггрин) является представляющим интерес белком (например, при лечении обыкновенного ихтиоза).

В некоторых вариантах реализации изобретения представлены способы лечения любого из различных типов псориаза (например, бляшковидного псориаза, каплевидного псориаза, пустулезного псориаза, псориаза складок и эритродермического псориаза). В различных вариантах реализации изобретения представляющий интерес белок является любым из продуктов генов, вызывающих восприимчивость к псориазу от 1 до 9 (PSORSl - PSORS9).

Различные варианты реализации изобретения относятся к лечению экземы (например, атопического дерматита, монетовидной экземы, дисгидротической экземы, себорейного дерматита, ирритантного контактного дерматита, аллергического контактного дерматита, дисгидроза, венозной экземы, герпетиформного дерматита, нейродерматита, аутоэкзематизации и ксеротической экземы и, необязательно, может таргетироваться один или более из: филаггрина; трех генетических вариантов, подобного ovo белка 1 (OVOL1), подобного актину белка 9 (ACTL9) и представителя семейства кинезинов 3 A (KIF3A), ассоциированных с экземой, и генов нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) и тахикинина, предшественника 1 (TAC1).

Сыпь или крапивница, включая, но не ограничиваясь, острой крапивницей, хронической крапивницей и ангиоэдемой, механической крапивницей, компрессионной или вызванной давлением замедленной крапивницей, холинэргической или стрессогенной крапивницей, крапивницей простудного типа, крапивницей горячечного типа, крапивницей типа солнечного ожога, редкой крапивницей или крапивницей водяночного типа, вибрационной крапивницей, индуцированной физическими упражнениями анафилаксией и дерматографизмом, могут проходить лечение настоящими композициями, к примеру, таргетированием PLCG-2.

Различные варианты реализации изобретения относятся к лечению розовых угрей, которые включают, но не ограничиваются, эритематотелеангиэктатической розацеа, папуло-пустолезными розовыми угрями, фиматозной розацеа и окулярной розацеа. Необязательно, антимикробный пептид кателицидин (CAMP) и/или родственная калликреину пептидаза 5 (также известная как триптический фермент рогового слоя (SCTE)) являются представляющими интерес белками.

В некоторых вариантах реализации изобретения представлены способы лечения акне настоящими композициями. К примеру, акне может включать, но не ограничиваться, угревидной сыпью, солнечными акне, шаровидными угрями, косметическими угрями, молниеносными угрями, келоидным фолликулитом затылка, механическими акне, вызванные медикаментами угрями, милиарными некротическими акне, некротическими акне, розовыми угрями, акне новорожденных, черными точками на лице, хлоракне, экскориированными угрями, вызванными соединениями галогенов акне, младенческими акне или неонатальными акне, милиарной диссеминированной волчанкой лица, профессиональными акне, масляными акне, помадными акне, смолистыми акне, тропическими акне, колпаком магната или милиарными некротическими акне, псевдофолликулитом зоны роста бороды или келоидным фолликулитом затылка и гнойным гидраденитом. В этих вариантах реализации изобретения представляющий интерес белок может быть одной или более матриксными металлопротеиназами (ММP), например, матриксной металлопротеиназой-1 (ММP-1 или интерстициальной коллагеназой), матриксной металлопротеиназой-9 (ММP-9) и матриксной металлопротеиназой-13 (ММP-13).

В дополнительных вариантах реализации изобретения витилиго проходит лечение настоящими композициями, например, при этом таргетируется ген, который входит в семейство NLR, содержащий пириновый домен 1 гена (NALP1).

В некоторых вариантах реализации изобретения настоящие композиции находят применение для лечения гипогидротической эктодермальной дисплазии (HED), например, посредством гена эктодисплазина A (EDA), рецептора (EDAR) и ассоциированного с рецептором домена смерти (EDARADD).

В некоторых вариантах реализации изобретения настоящие композиции находят применение для лечения облысения или утончения волос (например, облысения по мужскому типу или андрогенной алопеции (AGA)) и, необязательно, один или более из следующих может быть представляющим интерес белком: андрогенный рецептор (AR), рецептор эктодисплазина A2 (EDA2R) и рецептор 6 лизофосфатидиловой кислоты (P2RY5).

Настоящие композиции также находят применение в способах лечения шрамов и растяжек (стрии), например, посредством коллагена, рибосомальной киназы s6, секретированного фосфопротеина 1 (также известного как остеопонтин) или трансформирующего фактора роста бета 3.

Бородавчатая эпидермодисплазия (также известная как эпидермодисплазия Лютца-Левандовского), редкое аутосомальное рецессивное генетическое наследственное нарушение кожи, также может проходить лечение композициями по данному изобретению, например, таргетированием генов подобного трансмембранному каналу белка 6 (EVER1) или подобного трансмембранному каналу белка 8 (EVER2).

В некоторых вариантах реализации изобретения обвисание, утончение или веснушчатость кожи может проходить лечение настоящей композицией, например, таргетированием одного или более представляющих интерес белков, таких как коллаген, эластин, фактор роста фибробластов 7, ингибиторы металлопептидаз TIMP, матриксных металлопептидаз, супероксиддисмутаза и другие белки внеклеточного матрикса и протеогликаны.

Дополнительные варианты реализации изобретения применяются при загорании кожи, такие как, меланоцитстимулирующий гормон и/или проопиомеланокортин.

В некоторых вариантах реализации изобретения настоящие композиции могут применяться для лечения ран. В некоторых вариантах реализации изобретения способы лечения ран настоящими композициями включают дополнительные этапы, к примеру, очищение раневого ложе для облегчения заживления ран и затягивания, включая, но не ограничиваясь: хирургической обработкой, первичной хирургической обработкой (хирургическое удаление из раны мертвых или инфицированных тканей), необязательно, включающей химические агенты для хирургической обработки, такие как ферменты, для удаления некротических тканей; перевязки ран для обеспечения раны влагой, сохранения теплого окружения и содействия репарации и заживления тканей (например, перевязка ран, включающая гидрогели (например, AQUASORB®; DUODERM®), гидроколлоиды (например, AQUACEL®; COMFEEL®), пены (например, LYOFOAM®; SPYROSORB®) и альгинаты (например, ALGISITE®; CURASORB®); введение факторов роста для стимулирования деления и пролиферации клеток и для содействия заживления ран, например, бекаплермина, и (iv) покрытие раны мягкой тканью, кожным трансплантатом может быть необходимым для получения покрытия чистых незаживших ран (например, аутологические кожные трансплантаты, кадаверические кожные трансплантаты, биоинженерные заменители кожи (например, APLIGRAF®; DERMAGRAFT®)).

В различных вариантах реализации изобретения разнообразные раковые заболевания проходят лечение настоящими композициями (например, колоректальный рак, рак желчного пузыря, рак легких, рак поджелудочной железы и рак желудка). В некоторых вариантах реализации изобретения рак кожи проходит лечение настоящими композициями. Например, базально-клеточный рак (БКР), плоскоклеточный рак (ПКР) и меланома. В некоторых вариантах реализации изобретения в настоящих композициях используют адъювант для полной круговой периферической и глубокой краевой оценки, хирургия Моса, радиационного воздействия (например, внешней лучевой радиотерапии или брахитерапии), химиотерапии (включающей, но без ограничения местную химиотерапию, например, с использованием имихимода или 5-фторурацила) и криотерапии. Настоящие композиции также находят применение при лечении различных стадий раковых заболеваний, включая раковые заболевания кожи (например, базально-клеточный рак (БКР), плоскоклеточный рак (ПКР) и меланому), такие как стадия по системе TNM Американского объединенного комитета по раку (AJCC) (например, одна или более из TX, T0, Tis, T1, T1a, T1b, T2, T2A, T2B,T3, T3a, T3b, T4, T4a, T4b, NX, N0, N1, N2, N3, M0, M1a, M1b, M1c) и/или системы определения стадий (например, стадия 0, стадия IA, стадия IB, стадия IIA, стадия IIB, стадия IIC, стадия IIIA, стадия IIIB, стадия IIIC, стадия IV).

В различных вариантах реализации изобретения одно или более редких заболеваний проходят лечение настоящими композициями, включая, в качестве иллюстрации, эритропоэтическую протопорфирию, болезнь Хейли-Хейли, буллезный эпидермолиз (БЭ), пигментную ксеродерму, синдром Элерса-Данлоса, синдром вялой кожи, недостаточность белка C и белка S, синдром Альпорта, полосатую ладонно-подошвенную кератодермию, летальный акантолитический БЭ, эластическую псевдоксантому (ЭПК), обыкновенный ихтиоз, обыкновенную пузырчатку и синдром базально-клеточного невуса.

При определенных обстоятельствах может требоваться замещение компонентов, полученных из животных, полученными не из животных и/или рекомбинантными компонентами, в частности потому что полученные не из животных и/или рекомбинантные компоненты могут получаться с большей степенью стабильности, чем полученные из животных компоненты, и в частности потому что полученные не из животных и/или рекомбинантные компоненты несут меньший риск контаминации токсическими и/или патогенными субстанциями, чем полученные из животных компоненты. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к белку, который является полученным не из животных и/или рекомбинантным. Другие варианты реализации изобретения относятся к среде, в которой некоторые или все компоненты среды являются полученными не из животных и/или рекомбинантными.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу трансфекции клетки in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка трансфицируется in vivo одной или более нуклеиновыми кислотами и трансфекция проводится с использованием реагента для трансфекции, такого как реагент для трансфекции на основе липидов. В одном варианте реализации изобретения одна или более нуклеиновых кислот содержат по меньшей мере одну молекулу РНК. В другом варианте реализации изобретения клетка трансфицируется одной или более нуклеиновыми кислотами, и одна или более нуклеиновых кислот кодируют по меньшей мере одного из: p53, TERT, цитокина, секретированного белка, мембраносвязанного белка, фермента, редактирующего гены белка, модифицирующего хроматин белка, ДНК-связывающего белка, фактора транскрипции, гистондеацитилазы, патоген-ассоциированного молекулярного паттерна и опухоль-ассоциированного антигена или их биологически активного фрагмента, аналога, варианта или представителя семейства. В другом варианте реализации изобретения клетка трансфицируется повторно, в том числе по меньшей мере около 2 раз в течение около 10 последовательных суток, или по меньшей мере около 3 раз в течение около 7 последовательных суток, или по меньшей мере около 4 раз в течение около 6 последовательных суток.

Репрограммирование может проводиться трансфицированием клеток одной или более нуклеиновыми кислотами, кодирующими один или более репрограммирующих факторов. Примеры репрограммирующих факторов включают, но не ограничиваются: белком Oct4, белком Sox2, белком Klf4, белком c-Myc, белком l-Myc, белком TERT, белком Nanog, белком Lin28, белком Utf1, белком Aicda, микроРНК miR200, микроРНК miR302, микроРНК miR367, микроРНК miR369 и их биологическими активными фрагментами, аналогами, вариантами и представителями семейств. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка репрограммируется in vivo трансфицированием клетки одной или более нуклеиновыми кислотами, кодирующими один или более репрограммирующих факторов. В одном варианте реализации изобретения одна или более нуклеиновых кислот содержат молекулу РНК, которая кодирует белок Oct4. В другом варианте реализации изобретения одна или более нуклеиновых кислот также содержат одну или более молекул РНК, которые кодируют белок Sox2, белок Klf4 и белок c-Myc. В еще одном варианте реализации изобретения одна или более нуклеиновых кислот также содержат молекулу РНК, которая кодирует белок Lin28. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку кожи человека и клетка кожи человека репрограммируется в плюрипотентную стволовую клетку. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку кожи человека и клетка кожи человека репрограммируется в инсулинпродуцирующую клетку, реагирующую на изменение уровня глюкозы. Примеры других клеток, которые могут репрограммироваться, и других клеток, по отношению к которым клетка может репрограммироваться, включают, но не ограничиваются: клетками кожи, плюрипотентными стволовыми клетками, мезенхимальными стволовыми клетками, β-клетками, ретинальными пигментированными эпителиальными клетками, гемопоэтическими клетками, кардиомицитами, эпителиальными клетками дыхательных путей, нейральными стволовыми клетками, нейронами, глиальными клетками, клетками костей, клетками крови и стволовыми клетками дентальной пульпы. В одном варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт со средой, которая поддерживает репрограммированную клетку. В одном варианте реализации изобретения среда также поддерживает клетку.

Важно отметить, что сообщалось о том, что инфицирование клеток кожи вирусами, кодирующими Oct4, Sox2, Klf4 и c-Myc, в сочетании с культивирование клеток в среде, которая поддерживает рост кардиомицитов, вызывает репрограммирование клеток кожи в кардиомициты без начального репрограммирования клеток кожи в плюрипотентные стволовые клетки (см. Efs et al Nat Cell Biol. 2011;13:215-22, содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки). При определенных обстоятельствах может быть желательным прямое репрограммирование (репрограммирование одной соматической клетки в другую соматическую клетку без начального репрограммирования соматической клетки в плюрипотентную стволовую клетку, также известное как «трансдифференцировка»), в частности потому что культивирование плюрипотентных стволовых клеток может быть затратным по времени и дорогим, дополнительная работа, заключающаяся в оценке и определении характеристик стабильной линии плюрипотентных стволовых клеток, может нести повышенный риск контаминации, а дополнительный период времени пребывания в культуре, связанный с начальным получением плюрипотентных стволовых клеток, может нести повышенный риск геномной нестабильности и образования мутаций, включающих точечные мутации, вариации числа копий и кариотипические аномалии. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования соматической клетки in vivo, причем клетка репрограммируется в соматическую клетку и, при этом не получается требующая определения характеристик линия плюрипотентных стволовых клеток.

Дополнительно установлено, что при определенных обстоятельствах, может потребоваться меньшее общее количество трансфекций для репрограммирования клетки в соответствии со способами по данному изобретению, чем в соответствии с другими методами. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo, причем между около 1 и около 12 трансфекций проводятся в течение около 20 последовательных суток, или между около 4 и около 10 трансфекций проводятся в течение около 15 последовательных суток, или между около 4 и около 8 трансфекций проводятся в течение около 10 последовательных суток. Понятно, что когда клетка приводится в контакт со средой, содержащей молекулы нуклеиновых кислот, клетка вероятно может приводится в контакт и/или интернализировать более одной молекулы кислоты нуклеиновой кислоты одновременно или в разные моменты времени. Поэтому клетка может приводится в контакт с нуклеиновой кислотой более одного раза, например повторно, даже если клетка приводится в контакт со средой, содержащей нуклеиновые кислоты, один раз.

Следует отметить, что нуклеиновые кислоты могут содержать один или более неканонических, или «модифицированных», остатков (например, остатка, отличающегося от аденина, гуанина, тимина, урацила и цитозина или стандартного нуклеозида, нуклеотида, дезоксинуклеозида или их дезоксинуклеозидных производных). Следует отдельно отметить, что псевдоуридин-5'-трифосфат может быть заменен уридин-5'-трифосфатом реакцией транскрипции in vitro с получением синтетической РНК, причем до 100% остатков уридина синтетической РНК может замещаться псевдоуридиновыми остатками. Транскрипция in vitro может приводить к получению РНК с остаточной иммуногенностью даже если псевдоуридин и 5-метилцитидин, соответственно, полностью замещены на уридин и цитидин (см., например, Angel. Reprogramming Human Somatic Cells to Pluripotency Using RNA [Doctoral Thesis]. Cambridge, MA: MIT; 2011, содержание которой тем самым включено в данный документ посредством ссылки). По этой причине обычной практикой является добавление иммуносупрессанта в среду для трансфекции при трансфицировании клеток РНК. При определенных обстоятельствах может быть нежелательным добавление иммуносупрессанта в среду для трансфекции, в частности потому что наиболее часто используемый с этой целью рекомбинантный иммуносупрессант, B18R, может быть дорогим и сложным для производства. В настоящее время установлено, что клетки могут трансфицироваться и/или репрограммироваться in vivo в соответствии со способами по данному изобретению без использования B18R или любого другого иммуносупрессанта. Дополнительно установлено, что репрограммирование клеток in vivo в соответствии со способами по данному изобретению без использования иммуносупрессантов может быть быстрым, эффективным и надежным. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo, причем среда для трансфекции не содержит иммуносупрессанта. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo, причем среда для трансфекции не содержит иммуносупрессанта. При определенных обстоятельствах, к примеру при использовании высокой плотности клеток, может быть целесообразным добавлять иммуносупрессант в среду для трансфекции. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo, причем среда для трансфекции содержит иммуносупрессант. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo, причем среда для трансфекции содержит иммуносупрессант. В одном варианте реализации изобретения иммуносупрессант представляет собой B18R или его биологически активный фрагмент, аналог, вариант или представитель семейства или дексаметазон или его производное. В одном варианте реализации изобретения среда для трансфекции не содержит иммуносупрессант, а доза нуклеиновой кислоты выбирается такой, что предотвращает избыточную токсичность. В другом варианте реализации изобретения доза нуклеиновой кислоты составляет менее около 1 мг/см² ткани или менее около 1 мг/100000 клеток или менее около 10 мг/кг.

Репрограммированные клетки, полученные в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения по данному изобретению, подходят для терапевтических и/или косметических применений, поскольку они не содержат последовательности экзогенных ДНК и они не подвергаются воздействию продуктов, полученных из организма животных или человека, которые могут иметь неопределенный состав и которые могут содержать токсические и/или патогенные контаминанты. Кроме того, высокая скорость осуществления, эффективность и надежность некоторых вариантов реализации по данному изобретению могут снижать риск возникновения и накопления мутаций и других хромосомных аномалий. Таким образом, некоторые варианты реализации изобретения могут использоваться для создания клеток, которые имеют профиль безопасности, достаточный для использования для терапевтических и/или косметических применений. К примеру, репрограммирование клеток с использованием РНК и среды по данному изобретению, при котором среда не содержит компонентов, полученных из организма животных или человека, может приводить к получению клеток, которые не подвергались воздействию аллогенного материала. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к репрограммированной клетке, которая обладает требуемым профилем безопасности. В одном варианте реализации изобретения репрограммированная клетка обладает нормальным кариотипом. В другом варианте реализации изобретения репрограммированная клетка обладает меньше чем около 5 вариациями числа копий (CNV) относительно генома пациента, такими как меньше чем около 3 вариациями числа копий относительно генома пациента или отсутствием вариаций числа копий относительно генома пациента. В еще одном варианте реализации изобретения репрограммированная клетка имеет нормальный кариотип и менее чем около 100 однонуклеотидных вариантов в кодирующих участках относительно генома пациента, или менее чем около 50 однонуклеотидных вариантов в кодирующих участках относительно генома пациента, или менее чем около 10 однонуклеотидных вариантов в кодирующих участках относительно генома пациента.

Эндотоксины и нуклеазы могут совместно очищаться и/или оказываться ассоциированными с другими белками, такими как сывороточный альбумин. Рекомбинантные белки, в частности, часто могут содержать высокие уровни ассоциированных эндотоксинов и нуклеаз, в частности из-за лизиса клеток, который может происходить во время их получения. Эндотоксины и нуклеазы могут быть снижены, удалены, замещены или иным образом инактивироваться множеством способов по данному изобретению, включающими, к примеру, ацетилирование, добавление стабилизатора, такого как октаноат натрия, с последующей обработкой нагреванием, добавление в раствор альбумина и/или среду ингибиторов нуклеаз, кристаллизацию, приведение в контакт с одной или более ионообменных смол, приведение в контакт с активированным углем, препаративный электрофорез или аффинную хроматографию. В настоящее время установлено, что частичное или полное снижение, удаление, замещение или иным образом инактивирование эндотоксинов и/или нуклеаз из среды и/или из одного или более компонентов среды может увеличивать эффективность, с которой клетки могут быть трансфицированы и репрограммированы. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo одной или более нуклеиновыми кислотами, причем среда для трансфекции обрабатывается для частичного или полного снижения, удаления, замещения или иным образом инактивирования одного или более эндотоксинов и/или нуклеаз. Другие варианты реализации изобретения относятся к среде, которая вызывает минимальную деградацию нуклеиновых кислот. В одном варианте реализации изобретения среда содержит менее чем около 1 ЕЭ/мл, или менее чем около 0,1 ЕЭ/мл, или менее около 0,01 ЕЭ/мл.

При определенных обстоятельствах липидные носители на основе белков, такие как сывороточный альбумин, могут замещаться липидными носителями не на основе белков, такими как метил-бета-циклодектрин. Среда по данному изобретению также может использоваться без липидного носителя, к примеру, если трансфекция выполняется с использованием способа, который может не требовать или для которого не является целесообразным наличие липидного носителя, к примеру, с использованием одного или более реагентов для трансфекции на основе липидов, реагентов для трансфекции на основе полимеров или реагентов для трансфекции на основе пептидов или с использованием электропорации. Множество ассоциированных с белками молекул, такие как ионы металлов, могут быть очень токсическими для клеток in vivo. Эта токсичность может вызывать снижение жизнеспособности, а также возникновение мутаций. Таким образом некоторые варианты реализации изобретения имеют дополнительное преимущество получения клеток, которые свободны от токсических молекул.

Количество ассоциированного молекулярного компонента белка может измеряться суспендированием белка в растворе и измерением проводимости раствора. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к среде, которая содержит белок, причем около 10% раствор белка в воде имеет проводимость менее чем около 500 мкОм/см. В одном варианте реализации изобретения раствор имеет проводимость менее чем около 50 мкОм/см. В другом варианте реализации изобретения менее чем около 0,65% сухой массы белка содержит липиды и/или менее около 0,35% сухой массы белка содержит свободные жирные кислоты.

Количество нуклеиновой кислоты, доставляемой в клетки in vivo, может быть увеличено для увеличения требуемого эффекта нуклеиновой кислоты. Однако, увеличение количества доставляемой in vivo нуклеиновой кислоты в клетки сверх определенного значения может вызвать уменьшение жизнеспособности клеток, в частности из-за токсичности реагента для трансфекции. В настоящее время установлено, что если нуклеиновая кислота доставляется в популяцию клеток in vivo вфиксированный объем (к примеру, клетки в участке ткани), то количество нуклеиновой кислоты, доставленной в каждую клетку, может зависеть от общего количества нуклеиновой кислоты, доставленной в популяцию клеток и в скопление клеток с более высокой плотностью клеток, приводя к получению меньшего количества нуклеиновой кислоты, доставляемого в каждую клетку. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка трансфицируется in vivo одной или более нуклеиновыми кислотами более одного раза. В определенных условиях, к примеру если клетки являются пролиферирующими, плотность клеток может изменяться от одной трансфекции к следующей. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo нуклеиновой кислотой, причем клетка трансфицируется более одного раза и при этом количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку, отличается для двух трансфекций. В одном варианте реализации изобретения клетка пролиферирует между двумя трансфекциями, а количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку, больше для второй из двух трансфекций чем для первой из двух трансфекций. В другом варианте реализации изобретения клетка трансфицируется более двух раз и количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку, больше для второй из трех трансфекций чем для первой из трех одинаковых трансфекций, а количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку, больше для третьей из трех одинаковых трансфекций чем для второй из трех одинаковых трансфекций. В еще одном варианте реализации изобретения клетка трансфицируется более одного раза, а максимальное количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку во время каждой трансфекции, является достаточно низким, что обеспечивает по меньшей мере около 80% жизнеспособности для по меньшей мере двух последовательных трансфекциях.

В настоящее время установлено, что модулирование количества нуклеиновой кислоты, доставляемого в популяцию пролиферирующих клеток in vivo сериями трансфекций, может приводить как к увеличенному воздействию нуклеиновой кислоты так и к увеличенной жизнеспособности клеток. Дополнительно установлено, что при определенных обстоятельствах, если клетки приводятся в контакт in vivo с одной или более нуклеиновых кислот, кодирующих один или более репрограммирующих факторов, сериями трансфекций, то для по меньшей мере части из серии трансфекций эффективность репрограммирования может быть увеличена, когда количество нуклеиновой кислоты, доставленное в последующих трансфекциях, является большим чем количество нуклеиновой кислоты, доставленное в предыдущих трансфекциях. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo, в котором одна или более нуклеиновых кислот повторно доставляются в клетку сериями трансфекций, а количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку является большим для по меньшей мере одной последующей трансфекции чем для по меньшей мере одной предыдущей трансфекции. В одном варианте реализации изобретения клетка трансфицируется между около 2 и около 10 раз, или между около 3 и около 8 раз, или между около 4 и около 6 раз. В другом варианте реализации изобретения одна или более нуклеиновых кислот включают по меньшей мере одну молекулу РНК, клетка трансфицируется между около 2 и около 10 раз, а количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку в каждой трансфекции является одинаковым или большим чем количество нуклеиновой кислоты, доставляемой в клетку в самой последней предыдущей трансфекции. В еще одном варианте реализации изобретения количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку в первой трансфекции составляет между около 20 нг/см² и около 250 нг/см², или между 100 нг/см² и 600 нг/см². В еще одном варианте реализации изобретения клетка трансфицируется около 5 раз с интервалами между около 12 и около 48 часами, а количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку составляет около 25 нг/см² для перовой трансфекции, около 50 нг/см² для второй трансфекции, около 100 нг/см² для третьей трансфекции, около 200 нг/см² для четвертой трансфекции и около 400 нг/см² для пятой трансфекции. В еще одном варианте реализации изобретения клетка дополнительно трансфицируется по меньшей мере один раз после пятой трансфекции, а количество нуклеиновой кислоты, доставляемое в клетку составляет около 400 нг/см².

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo нуклеиновой кислотой, причем количество нуклеиновой кислоты определяется измерением плотности клеток, а выбор количества нуклеиновой кислоты для трансфицирования основывается на измерении плотности клеток. В одном варианте реализации изобретения плотность клеток измеряется оптическими средствами. В другом варианте реализации изобретения клетка трансфицируется повторно, плотность клеток увеличивается между двумя трансфекциями, а количество трансфицированной нуклеиновой кислоты больше для второй из двух трансфекций чем для первой из двух трансфекций.

В настоящее время установлено, что при определенных обстоятельствах, эффективность трансфекции in vivo и жизнеспособность клеток, контактировавших со средой по данному изобретению, могут быть улучшены кондиционированием среды. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу кондиционирования среды. Другие варианты реализации изобретения относятся к среде, которая является кондиционированной. В одном варианте реализации изобретения фидеры представляют собой фибробласты, а среда кондиционируется в течение приблизительно 24 часов. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo, причем среда для трансфекции является кондиционированной. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования и/или редактирования генов клетки in vivo, причем среда является кондиционированной. В одном варианте реализации изобретения фидеры являются митотически инактивированными, к примеру, воздействием химического вещества, такого как митомитоцин-C, или воздействием гамма-радиации. В некоторых вариантах реализации изобретения может быть целесообразным применение только аутологических материалов, в частности, к примеру и не желая связи с какой-либо теорией, для избегания риска передачи заболевание от фидеров к клетке или пациенту. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo, причем среда для трансфекции является кондиционированной и при этом фидеры получают из организма того же индивида, что и клетка, подвергаемая трансфицированию. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования и/или редактирования генов клетки in vivo, причем среда является кондиционированной и при этом фидеры получают из организма того же индивида, что и клетка, подвергаемая репрограммированию и/или редактированию генов.

В среду кондиционированием могут добавляться несколько молекул. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к среде, которая обогащается одной или более молекулами, которые присутствуют в кондиционированной среде. В одном варианте реализации изобретения среда обогащается Wnt1, Wnt2, Wnt3, Wnt3a или их биологически активным фрагментом, аналогом, вариантом, агонистом или представителем семейства. В другом варианте реализации изобретения среда обогащается ТФР-β или его биологически активным фрагментом, аналогом, вариантом, агонистом или представителем семейства. В еще одном варианте реализации изобретения клетка репрограммируется in vivo в соответствии со способом по данному изобретению, в котором среда не обогащена ТФР-β в течение между около 1 и около 5 суток, и потом обогащается ТФР-β в течение по меньшей мере около 2 суток. В еще одном варианте реализации изобретения среда обогащается ИЛ-6, IL-6R или их биологически активным фрагментом, аналогом, вариантом, агонистом или представителем семейства. В еще одном варианте реализации изобретения среда обогащается сфинголипидом или жирной кислотой. В другом варианте реализации изобретения сфинголипид представляет собой лизофосфатидиловую кислоту, лизосфингомиелин, сфингозин-1-фосфат или их биологически активный аналог, вариант или производное.

В дополнение к митотически инактивированным клеткам, в определенных условиях, изменять экспрессию генов клеток может облучение, что приводит к продукции клетками меньшего количества некоторых белков и большего количества некоторых других белков чем необлученные клетки, к примеру, представителей семейства Wnt белков. В дополнение к этому некоторые представители семейства Wnt белков могут способствовать росту и трансформации клеток. В настоящее время установлено, что при определенных обстоятельствах эффективность репрограммирования может быть существенно увеличена приведением клетки в контакт со средой in vivo, которая кондиционирована с использованием облученных фидеров вместо обработанных митомицином-C фидеров. Дополнительно установлено, что увеличение эффективности репрограммирования наблюдалось при использовании облученных фидеров, вызванное в частности белками Wnt, которые секретируются фидерами. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo, в котором клетка приводится в контакт с Wnt1, Wnt2, Wnt3, Wnt3a или их биологически активным фрагментом, аналогом, вариантом, представителем семейства или агонистом, включая агонисты последующих мишеней белков Wnt и/или агенты, которые имитируют один или более биологических эффектов белков Wnt, к примеру, 2-амино-4-[3,4-(метилендиокси)бензиламино]-6-(3-метоксифенил)пиримидин.

Из-за низкой эффективности многих способов репрограммирования на основе использования ДНК, эти способы может быть сложно или невозможно использовать с клетками, полученными из взятых у пациентов образцов, которые могут содержать только малое количество клеток. В противоположность этому высокая эффективность в некоторых вариантах реализации по данному изобретению может допускать надежное репрограммирование малого количества клеток, включая одиночные клетки. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования малого количества клеток. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования единственной клетки. В одном варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт с одним или более ферментами. В другом варианте реализации изобретения фермент представляет собой коллагеназу. В еще одном варианте реализации изобретения коллагеназа является свободной от компонентов организма животных. В одном варианте реализации коллагеназа присутствует в концентрации между около 0,1 мг/мл и около 10 мг/мл, или между около 0,5 мг/мл и около 5 мг/мл. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку крови. В еще одном варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт со средой, содержащей один или более белков, которые получены из крови пациента. В другом варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт со средой, содержащей: DMEM/F12+2 мM L-аланил-L-глутамина+между около 5% и около 25% полученной из организма пациента сыворотки, или между около 10% и около 20% полученной из организма пациента сыворотки, или около 20% полученной из организма пациента сыворотки.

В настоящее время установлено, что при определенных обстоятельствах трансфицирование клеток in vivo смесью РНК, кодирующих Oct4, Sox2, Klf4 и c-Myc, с использованием среды по данному изобретению, может вызывать увеличение скорости пролиферации клеток. Если количество РНК, доставляемое в клетки является слишком низким для обеспечения того, чтобы трансфицировались все клетки, то только часть клеток может показать увеличенную скорость пролиферации. При определенных обстоятельствах, таких как создание персонализированных терапевтических средств, может требоваться увеличение скорости пролиферации клеток, в частности потому что благодаря этому можно уменьшить период времени, необходимый для создания терапевтического средства, и таким образом можно уменьшить стоимость терапевтического средства. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo смесью РНК, кодирующих Oct4, Sox2, Klf4 и c-Myc. В одном варианте реализации изобретения клетка проявляет увеличенную скорость пролиферации. В другом варианте реализации изобретения клетка репрограммируется.

Множество заболеваний ассоциированы с одной или более мутаций. Мутации могут корректироваться приведением клетки в контакт с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок, который самостоятельно или в комбинации с другими молекулами, корректирует мутации (пример редактирования генов). Примеры таких белков включают: цинк-пальцевые нуклеазы и TALEN. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo нуклеиновой кислотой, причем нуклеиновая кислота кодирует белок, который самостоятельно или в комбинации с другими молекулами, создает в молекуле ДНК одноцепочечный или двухцепочечный разрыв. В одном варианте реализации изобретения белок представляет собой цинк-пальцевую нуклеазу или TALEN. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота представляет собой молекулу РНК. В еще одном варианте реализации изобретения одноцепочечный или двухцепочечный разрыв находится в пределах около 5000000 оснований сайта инициации транскрипции гена, выбранного из группы: CCR5, CXCR4, GAD1, GAD2, CFTR, HBA1, HBA2, HBB, HBD, FANCA, XPA, XPB, XPC, ERCC2, POLH, HTT, DMD, SOD1, APOE, PRNP, BRCA1 и BRCA2 или их аналога, варианта или представителя семейства. В еще одном варианте реализации изобретения клетка трансфицируется нуклеиновой кислотой, которая действует как матрица для репарации, вызывая образование инсерции последовательности ДНК в области одноцепочечного или двухцепочечного разрыва или иным образом вызывая изменение в последовательности ДНК в участке одноцепочечного или двухцепочечного разрыва. В еще одном варианте реализации изобретения клетка репрограммируется и, впоследствии, в клетке редактируются гены. В еще одном варианте реализации изобретения в клетке редактируются гены и, впоследствии, клетка репрограммируется. В еще одном варианте реализации изобретения редактирование генов и репрограммирование выполняется в пределах около 7 суток относительно друг друга. В еще одном варианте реализации изобретения редактирование генов и репрограммирование происходит одновременно или в один и тот же день. В еще одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку кожи, причем в клетке кожи редактируются гены для разрушения гена CCR5, клетка кожи репрограммируется в гемопоэтическую стволовую клетку, таким образом получается терапевтическое средство против ВИЧ/СПИДа и терапевтическое средство используется для лечения пациента с ВИЧ/СПИДом. В еще одном варианте реализации изобретения клетку кожи получают у того же пациента, для лечения которого применяется терапевтическое средство.

Гены, которые могут редактироваться в соответствии со способами по данному изобретению для получения терапевтических средств по данному изобретению, включают гены, которые могут редактироваться для восстановления нормальной функции, а также гены, которые могут редактироваться для снижения или ликвидации функции. Такие гены включают, но не ограничиваются геном бета-глобина (HBB), мутации в котором могут вызывать серповидноклеточную анемию (SCD) и β-талассемию, геном рака молочной железы с ранним проявлением 1 (BRCA1) и геном рака молочной железы с ранним проявлением 2 (BRCA2), мутации в которых могут увеличивать чувствительность к раку молочной железы, геном хемокинового рецептора C-C 5 типа (CCR5) и геном хемокинового рецептора C-X-C 4 типа (CXCR4), мутации в которых могут придавать устойчивость к инфекции ВИЧ, геном трансмебранного регулятора проводимости при муковисцидозе (CFTR), мутации в котором могут вызывать муковисцидоз, геном дистрофина (DMD), мутации в котором могут вызывать мышечную дистрофию, включая мышечную дистрофию Дюшенна и мышечную дистрофию Беккера, геном глутаматдекарбоксилазы 1 и геном глутаматдекарбоксилазы 2 (GAD1, GAD2), мутации в которых могут предотвращать аутоиммунное разрушение β-клеток, генами гемоглобина-альфа 1, гемоглобина-альфа 2 и гемоглобина-дельта (HBA1, HBA2 и HBD), мутации в которых могут вызывать талассемию, геном Хантингтона (HTT), мутации в котором могут вызывать болезнь Хантингтона, геном супероксиддисмутазы 1 (SOD1), мутации в котором могут вызывать латеральный амиотрофический склероз (ALS), генами XPA, XPB, XPC, XPD (ERCC6) и полимеразы (ДНК-направляемой) эта (POLH), мутации в которых могут вызывать пигментную ксеродерму, богатым лектинами повтором киназы 2 (LRRK2), мутации в котором могут вызывать болезнь Паркинсона и анемию Фанкони, комплементирующими группами A, B, C, D1, D2, E, F, G, I, J, L, M, N, P (FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCI, FANCJ, FANCL, FANCM, FANCN, FANCP) и гомологом C RAD51 (S. cerevisiae) (RAD51C), мутации в которых могут вызывать анемию Фанкони.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к терапевтической композиции, содержащей нуклеиновую кислоту. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота кодирует один или более редактирующих гены белков. Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтическому средству, содержащему одну или более клеток, которые трансфицированы, репрограммированы и/или с редактированием генов in vivo в соответствии со способами по данному изобретению. В одном варианте реализации изобретения клетка трансфицируется, репрограммируется и/или у нее редактируются гены, и/или трансфицированная/с репрограммированными генами клетка вводится пациенту. В другом варианте реализации изобретения клетка отбирается у того же пациента, которому вводится трансфицированная, репрограммированная и/или с редактированными генами клетка. Примеры заболеваний, которые могут проходить лечение терапевтическими средствами по данному изобретению включают, но не ограничиваются, болезнью Альцгеймера, повреждением спинного мозга, латеральным амиотрофическим склерозом, муковисцидозом, сердечно-сосудистым заболеванием, включающим ишемическую и дилатационную кардиомиопатию, макулярной дегенерацией, болезнью Паркинсона, болезнью Хантингтона, диабетом, серповидноклеточной анемией, талассемией, анемией Фанкони, пигментной ксеродермой, мышечной дистрофией, тяжелым комбинированным иммунодефицитом, наследственной сенсорной невропатией, раком и ВИЧ/СПИДом. В некоторых вариантах реализации изобретения терапевтическое средство содержит косметическое средство. В одном варианте реализации изобретения клетка отбирается у пациента, клетка репрограммируется и размножается до большого количества адипозных клеток для получения косметического средства и косметическое средство вводится пациенту. В другом варианте реализации изобретения косметическое средство применяется для восстановления тканей.

Несмотря на то, что в данном документе предложены подробные примеры для получения специфических типов клеток и для получения терапевтических средств, содержащих специфические типы клеток, понятно, что способы по данному изобретению могут использоваться для получения многих других типов клеток и для получения терапевтических средств, содержащих один или более из многих других типов клеток, к примеру, репрограммированием клетки в соответствии со способами по данному изобретению и культивированием клеток в условиях, которые имитируют один или более аспектов развития, обеспечивая условия, которые напоминают условия, имеющиеся в клеточном микроокружении в процессе развития.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к библиотеке клеток с разнообразными типами лейкоцитарных антигенов человека (HLA) (HLA-согласованные библиотеки). HLA-согласованные библиотеки могут быть полезными, в частности потому что они могут обеспечить быструю продукцию и/или распределение терапевтических средств без необходимости ожидания пациентом терапевтического средства, которое нужно получать из клеток пациента. Такая библиотека может быть особенно полезной для получения косметических средств и для лечения сердечно-сосудистого заболевания и заболеваний крови и/или иммунной системы, при которых пациенты могут получить выгоду от немедленной доступности терапевтического или косметического средства.

Некоторые неканонические нуклеотиды, при внедрении в молекулы синтетических РНК, могут снижать токсичность молекул синтетических РНК, в частности препятствуя связыванию белков, которые выявляют экзогенные нуклеиновые кислоты, к примеру, белковая киназа R, Rig-1 и семейство белков олигоаденилатсинтазы. Неканонические нуклеотиды, которые, как сообщалось, снижают токсичность молекул синтетических РНК при внедрении в них, включают: псевдоуридин, 5-метилуридин, 2-тиоуридин, 5-метилцитидин, N6-метиладенозин и их некоторые комбинации. Однако химические свойства неканонических нуклеотидов, которые могут обеспечить им возможность снизить токсичность молекул синтетических РНК in vivo до настоящего момента остаются неизвестными. Кроме того, внедрение большого количества из большинства неканонических нуклеотидов, к примеру, 5-метилуридина, 2-тиоуридина, 5-метилцитидина и N6-метиладенозина, может снижать эффективность, с которой молекулы синтетических РНК могут транслироваться в белок, ограничивая полезность молекул синтетических РНК, содержащих эти нуклеотиды в применениях, требующих экспрессии белков. В дополнение к этому, в то время как псевдоуридин в молекулах синтетических РНК может быть полностью заменен на уридин без снижения эффективности, с которой молекулы синтетических РНК могут транслироваться в белок, при определенных обстоятельствах, к примеру, при проведении частых повторных трансфекций, молекулы синтетических РНК, содержащие только аденозин, гуанозин, цитидин и псевдоуридин могут проявлять избыточную токсичность.

В настоящее время установлено, что молекулы синтетических РНК, содержащие один или более неканонических нуклеотидов, которые содержат одно или более замещений в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случая пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина, могут быть менее токсическими чем молекулы синтетических РНК, содержащие только канонические нуклеотиды, в частности из-за способности заместителей в этих положениях препятствовать распознаванию молекул синтетических РНК белками, которые выявляют экзогенные нуклеиновые кислоты, и кроме того, такие заместители в этих положениях могут обладать минимальным влиянием на эффективность, с которой молекулы синтетических РНК могут транслироваться в белок, в частности из-за отсутствия взаимодействия заместителей в этих положениях при взаимодействиях спаривания оснований и стекинга оснований.

Примеры неканонических нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина включают, но не ограничиваются ими: 2-тиоуридин, 5-азауридин, псевдоуридин, 4-тиоуридин, 5-метилуридин, 5-аминоуридин, 5-гидроксиуридин, 5-метил-5-азауридин, 5-амино-5-азауридин, 5-гидрокси-5-азауридин, 5-метилпсевдоуридин, 5-аминопсевдоуридин, 5-гидроксипсевдоуридин, 4-тио-5-азауридин, 4-тиопсевдоуридин, 4-тио-5-метилуридин, 4-тио-5-аминоуридин, 4-тио-5-гидроксиуридин, 4-тио-5-метил-5-азауридин, 4-тио-5-амино-5-азауридин, 4-тио-5-гидрокси-5-азауридин, 4-тио-5-метилпсевдоуридин, 4-тио-5-аминопсевдоуридин, 4-тио-5-гидроксипсевдоуридин, 2-тиоцитидин, 5-азацитидин, псевдоцитидин, N4-метилцитидин, N4-аминоцитидин, N4-гидроксицитидин, 5-метилцитидин, 5-аминоцитидин, 5-гидроксицитидин, 5-метил-5-азацитидин, 5-амино-5-азацитидин, 5-гидрокси-5-азацитидин, 5-метилпсевдоизоцитидин, 5-аминопсевдоизоцитидин, 5-гидроксипсевдоизоцитидин, N4-метил-5-азацитидин, N4-метилпсевдоизоцитидин, 2-тио-5-азацитидин, 2-тиопсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-метилцитидин, 2-тио-N4-аминоцитидин, 2-тио-N4-гидроксицитидин, 2-тио-5-метилцитидин, 2-тио-5-аминоцитидин, 2-тио-5-гидроксицитидин, 2-тио-5-метил-5-азацитидин, 2-тио-5-амино-5-азацитидин, 2-тио-5-гидрокси-5-азацитидин, 2-тио-5-метилпсевдоизоцитидин, 2-тио-5-аминопсевдоизоцитидин, 2-тио-5-гидроксипсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-метил-5-азацитидин, 2-тио-N4-метилпсевдоизоцитидин, N4-метил-5-метилцитидин, N4-метил-5-аминоцитидин, N4-метил-5-гидроксицитидин, N4-метил-5-метил-5-азацитидин, N4-метил-5-амино-5-азацитидин, N4-метил-5-гидрокси-5-азацитидин, N4-метил-5-метилпсевдоизоцитидин, N4-метил-5-аминопсевдоизоцитидин, N4-метил-5-гидроксипсевдоизоцитидин, N4-амино-5-азацитидин, N4-аминопсевдоизоцитидин, N4-амино-5-метилцитидин, N4-амино-5-аминоцитидин, N4-амино-5-гидроксицитидин, N4-амино-5-метил-5-азацитидин, N4-амино-5-амино-5-азацитидин, N4-амино-5-гидрокси-5-азацитидин, N4-амино-5-метилпсевдоизоцитидин, N4-амино-5-аминопсевдоизоцитидин, N4-амино-5-гидроксипсевдоизоцитидин, N4-гидрокси-5-азацитидин, N4-гидроксипсевдоизоцитидин, N4-гидрокси-5-метилцитидин, N4-гидрокси-5-аминоцитидин, N4-гидрокси-5-гидроксицитидин, N4-гидрокси-5-метил-5-азацитидин, N4-гидрокси-5-амино-5-азацитидин, N4-гидрокси-5-гидрокси-5-азацитидин, N4-гидрокси-5-метилпсевдоизоцитидин, N4-гидрокси-5-аминопсевдоизоцитидин, N4-гидрокси-5-гидроксипсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-метил-5-метилцитидин, 2-тио-N4-метил-5-аминоцитидин, 2-тио-N4-метил-5-гидроксицитидин, 2-тио-N4-метил-5-метил-5-азацитидин, 2-тио-N4-метил-5-амино-5-азацитидин, 2-тио-N4-метил-5-гидрокси-5-азацитидин, 2-тио-N4-метил-5-метилпсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-метил-5-аминопсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-метил-5-гидроксипсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-амино-5-азацитидин, 2-тио-N4-аминопсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-амино-5-метилцитидин, 2-тио-N4-амино-5-аминоцитидин, 2-тио-N4-амино-5-гидроксицитидин, 2-тио-N4-амино-5-метил-5-азацитидин, 2-тио-N4-амино-5-амино-5-азацитидин, 2-тио-N4-амино-5-гидрокси-5-азацитидин, 2-тио-N4-амино-5-метилпсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-амино-5-аминопсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-амино-5-гидроксипсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-азацитидин, 2-тио-N4-гидроксипсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-метилцитидин, N4-гидрокси-5-аминоцитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-гидроксицитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-метил-5-азацитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-амино-5-азацитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-гидрокси-5-азацитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-метилпсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-аминопсевдоизоцитидин, 2-тио-N4-гидрокси-5-гидроксипсевдоизоцитидин, N6-метиладенозин, N6-аминоаденозин, N6-гидроксиаденозин, 7-дезазааденозин, 8-азааденозин, N6-метил-7-дезазааденозин, N6-метил-8-азааденозин, 7-дезаза-8-азааденозин, N6-метил-7-дезаза-8-азааденозин, N6-амино-7-дезазааденозин, N6-амино-8-азааденозин, N6-амино-7-дезаза-8-азааденозин, N6-гидроксиаденозин, N6-гидрокси-7-дезазааденозин, N6-гидрокси-8-азааденозин, N6-гидрокси-7-дезаза-8-азааденозин, 6-тиогуанозин, 7-дезазагуанозин, 8-азагуанозин, 6-тио-7-дезазагуанозин, 6-тио-8-азагуанозин, 7-дезаза-8-азагуанозин и 6-тио-7-дезаза-8-азагуанозин. Следует отметить, что существуют альтернативные схемы присвоения названий некоторых неканонических нуклеотидов. К примеру, при определенных обстоятельствах, 5-метилпсевдоуридин может называться «3-метилпсевдоуридин» или «N3-метилпсевдоуридин» или «1-метилпсевдоуридин» или «N1-метилпсевдоуридин».

Нуклеотиды, которые содержат приставку «амино» могут относится к любому нуклеотиду который содержит атом азота, связанный с атомом в указанном положении нуклеотида, к примеру, 5-аминоцитидин может относится к 5-аминоцитидину, 5-метиламиноцитидину и 5-нитроцитидину. Сходным образом нуклеотиды, которые содержат приставку «метил» могут относится к любому нуклеотиду, который содержит атом углерода, связанный с атомом в указанном положении нуклеотида, к примеру, 5-метилцитидин может относится к 5-метилцитидину, 5-этилцитидину и 5-гидроксиметилцитидину, нуклеотиды, которые содержат приставку «тио» могут относится к любому нуклеотиду, который содержит атом серы, связанный с атомом в данном положении нуклеотида, а нуклеотиды, которые содержат приставку «гидрокси» могут относится к любому нуклеотиду, который содержит атом кислорода, связанный с атомом в данном положении нуклеотида, к примеру, 5-гидроксиуридин может относится к 5-гидроксиуридину и уридину с метильной группой, связанной с атомом кислорода, причем атом кислорода связан с атомом в положении 5C уридина.

Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к молекуле синтетической РНК, причем молекула синтетической РНК содержит один или более нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина. Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтическому средству, причем терапевтическое средство содержит одну или более молекул синтетических РНК и при этом одна или более молекул синтетической РНК содержит один или более нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина. В одном варианте реализации изобретения терапевтическое средство содержит реагент для трансфекции. В другом варианте реализации изобретения реагент для трансфекции содержит катионный липид, липосому или мицеллу. В другом варианте реализации изобретения липосома или мицелла содержит фолат и терапевтическую композицию, обладающую противораковой активностью. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают по меньшей мере одного из псевдоуридина, 2-тиоуридина, 4-тиоуридина, 5-азауридина, 5-гидроксиуридина, 5-метилуридина, 5-аминоуридина, 2-тиопсевдоуридина, 4-тиопсевдоуридина, 5-гидроксипсевдоуридина, 5-метилпсевдоуридина, 5-аминопсевдоуридина, псевдоизоцитидина, N4-метилцитидина, 2-тиоцитидина, 5-азацитидина, 5-гидроксицитидина, 5-аминоцитидина, 5-метилцитидина, N4-метилпсевдоизоцитидина, 2-тиопсевдоизоцитидина, 5-гидроксипсевдоизоцитидина, 5-аминопсевдоизоцитидина, 5-метилпсевдоизоцитидина, 7-дезазааденозина, 7-дезазагуанозина, 6-тиогуанозина и 6-тио-7-дезазагуанозина. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают по меньшей мере одного из псевдоуридина, 2-тиоуридина, 4-тиоуридина, 5-азауридина, 5-гидроксиуридина, 5-метилуридина, 5-аминоуридина, 2-тиопсевдоуридина, 4-тиопсевдоуридина, 5-гидроксипсевдоуридина, 5-метилпсевдоуридина и 5-аминопсевдоуридина и по меньшей мере одного из псевдоизоцитидина, N4-метилцитидина, 2-тиоцитидина, 5-азацитидина, 5-гидроксицитидина, 5-аминоцитидина, 5-метилцитидина, N4-метилпсевдоизоцитидина, 2-тиопсевдоизоцитидина, 5-гидроксипсевдоизоцитидина, 5-аминопсевдоизоцитидина и 5-метилпсевдоизоцитидина. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают по меньшей мере одного из псевдоуридина, 2-тиоуридина, 4-тиоуридина, 5-азауридина, 5-гидроксиуридина, 5-метилуридина, 5-аминоуридина, 2-тиопсевдоуридина, 4-тиопсевдоуридина, 5-гидроксипсевдоуридина и 5-метилпсевдоуридина, 5-аминопсевдоуридина и по меньшей мере одного из псевдоизоцитидина, N4-метилцитидина, 2-тиоцитидина, 5-азацитидина, 5-гидроксицитидина, 5-аминоцитидина, 5-метилцитидина, N4-метилпсевдоизоцитидина, 2-тиопсевдоизоцитидина, 5-гидроксипсевдоизоцитидина, 5-аминопсевдоизоцитидина и 5-метилпсевдоизоцитидина и по меньшей мере одного из 7-дезазагуанозина, 6-тиогуанозина и 6-тио-7-дезазагуанозина. В еще одном варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают: 5-метилцитидин и 7-дезазагуанозин. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов также включают псевдоуридин или 4-тиоуридин, или 5-метилуридин, или 5-аминоуридин, или 4-тиопсевдоуридин, или 5-метилпсевдоуридин, или 5-аминопсевдоуридин. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов также включают 7-дезазааденозин. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают: псевдоизоцитидин и 7-дезазагуанозин и 4-тиоуридин. В еще одном варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают: псевдоизоцитидин или 7-дезазагуанозин и псевдоуридин. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают: 5-метилуридин и 5-метилцитидин и 7-дезазагуанозин. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают: псевдоуридин или 5-метилпсевдоуридин и 5-метилцитидин и 7-дезазагуанозин. В другом варианте реализации изобретения один или более нуклеотидов включают: псевдоизоцитидин и 7-дезазагуанозин и псевдоуридин. В одном варианте реализации изобретения молекула синтетической РНК присутствует in vivo.

Некоторые неканонические нуклеотиды могут внедряться РНК-полимеразами, которые обычно используются для транскрипции in vitro, в молекулы синтетических РНК более эффективно чем другие неканонические нуклеотиды, в частности из-за склонности этих определенных неканонических нуклеотидов участвовать в стандартных взаимодействиях спаривания оснований и взаимодействиях стекинга оснований и взаимодействовать с РНК-полимеразой сходным образом, которым соответствующий канонический нуклеотид взаимодействует с РНК-полимеразой. В результате определенные смеси нуклеотидов, содержащие один или более неканонических нуклеотидов, могут быть полезными, в частности потому что реакции транскрипции in vitro, содержащие эти смеси нуклеотидов, могут давать большое количество синтетической РНК. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к смеси нуклеотидов, содержащей один или более нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина. Смеси нуклеотидов включают, но не ограничиваются (числа у каждого предыдущего нуклеотида указывают типичную долю неканонического нуклеотидтрифосфата в реакции транскрипции in vitro, к примеру, 0,2 псевдоизоцитидина относится к реакции, содержащей аденозин-5'-трифосфат, гуанозин-5'-трифосфат, уридин-5'-трифосфат, цитидин-5'-трифосфат и псевдоизоцитидин-5'-трифосфат, причем псевдоизоцитидин-5'-трифосфат присутствует в реакции в количестве приблизительно равном 0,2 от общего количества псевдоизоцитидин-5'-трифосфата+цитидин-5'-трифосфата, которые присутствуют в реакции с количествами, измеренными или на основе молярного или массового соотношения, и при этом более чем одно предшествующее нуклеозиду число указывает диапазон типичных долей): 1,0 псевдоуридина, 0,1-0,8 2-тиоуридина, 0,1-0,8 5-метилуридина, 0,2-1,0 5-гидроксиуридина, 0,1-1,0 5-аминоуридина, 0,1-1,0 4-тиоуридина, 0,1-1,0 2-тиопсевдоуридина, 0,1-1,0 4-тиопсевдоуридина, 0,1-1,0 5-гидроксипсевдоуридина, 0,2-1 5-метилпсевдоуридина, 0,1-1,0 5-аминопсевдоуридина, 0,2-1,0 2-тиоцитидина, 0,1-0,8 псевдоизоцитидина, 0,2-1,0 5-метилцитидина, 0,2-1,0 5-гидроксицитидина, 0,1-1,0 5-аминоцитидина, 0,2-1,0 N4-метилцитидина, 0,2-1,0 5-метилпсевдоизоцитидина, 0,2-1,0 5-гидроксипсевдоизоцитидина, 0,2-1,0 5-аминопсевдоизоцитидина, 0,2-1,0 N4-метилпсевдоизоцитидина, 0,2-1,0 2-тиопсевдоизоцитидина, 0,2-1,0 7-дезазагуанозина, 0,2-1,0 6-тиогуанозина, 0,2-1,0 6-тио-7-дезазагуанозина, 0,2-1,0 8-азагуанозина, 0,2-1,0 7-дезаза-8-азагуанозина, 0,2-1,0 6-тио-8-азагуанозина, 0,1-0,5 7-дезазааденозина и 0,1-0,5 N6-метиладенозина.

В различных вариантах реализации изобретения композиции синтетических РНК или композиции синтетических полинуклеотидов (например, которые можно готовить транскрипцией in vitro) состоят практически или целиком из канонических нуклеотидов в положениях, содержащих в генетическом коде аденин или «A». Термин «практически» в этом контексте относится к по меньшей мере 90%. В этих вариантах реализации изобретения композиция синтетических РНК или композиция синтетических полинуклеотидов может дополнительно содержать (например, состоять из) 7-дезазагуанозин в генетическом коде в положениях «G», а также соответствующий канонический нуклеотид «G», и канонический и неканонический нуклеотид в положениях G могут содержаться в диапазоне от 5:1 до 1:5 или в некоторых вариантах реализации изобретения в диапазоне от 2:1 до 1:2. В этих вариантах реализации изобретения композиция синтетических РНК или композиция синтетических полинуклеотидов может дополнительно содержать (например, состоять из) один или более (например, двух, трех или четырех) из 5-гидроксиметилцитидина, 5-гидроксицитидина, 5-карбоксицитидина и 5-формилцитидина в генетическом коде в положениях «C», а также канонический нуклеотид «C», и канонический и неканонический нуклеотид в положениях C могут содержаться в диапазоне от 5:1 до 1:5 или в некоторых вариантах реализации изобретения в диапазоне от 2:1 до 1:2. В некоторых вариантах реализации изобретения уровни неканонического нуклеотида в положениях «C» описаны в предшествующем параграфе. В этих вариантах реализации изобретения композиция синтетических РНК или композиция синтетических полинуклеотидов может дополнительно содержать (например, состоять из) один или более (например, двух, трех или четырех) из 5-гидроксиметилуридина, 5-гидроксиуридина, 5-карбоксиуридина и 5-формилуридина в генетическом коде в положениях «U», а также канонический нуклеотид «U», и канонический и неканонический нуклеотид в положениях «U» могут содержаться в диапазоне от 5:1 до 1:5 или в некоторых вариантах реализации изобретения в диапазоне от 2:1 до 1:2. В некоторых вариантах реализации изобретения уровни неканонического нуклеотида в положениях «U» описаны в предшествующем параграфе.

В настоящее время установлено, что комбинирование некоторых неканонических нуклеотидов может быть полезным в частности потому тому что вклад неканонических нуклеотидов в снижение токсичности молекул синтетических РНК может быть аддитивным. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к смеси нуклеотидов, причем смесь нуклеотидов содержит более одного из неканонических нуклеотидов, перечисленных выше, к примеру, смесь нуклеотидов содержит как псевдоуридин так и 7-дезазагуанозин или смесь нуклеотидов содержит как N4-метилцитидин так и 7-дезазагуанозин и т.д. В одном варианте реализации изобретения смесь нуклеотидов содержит более одного из неканонических нуклеотидов, перечисленных выше, и каждый из неканонических нуклеотидов присутствует в смеси нуклеотидов в долях, описанных выше, к примеру, смесь нуклеотидов содержит 0,1-0,8 псевдоуридина и 0,2-1,0 7-дезазагуанозина или смесь нуклеотидов содержит 0,2-1,0 N4-метилцитидина и 0,2-1,0 7-дезазагуанозина и т.д.

При определенных обстоятельствах, к примеру если нет необходимости или желательно максимизировать выход реакции транскрипции in vitro могут использоваться доли нуклеотидов отличающиеся от данных выше. Типичные доли и диапазоны долей, перечисленные выше, относятся к растворам нуклеотидтрифосфатов обычной чистоты (более 90% чистоты). Большие доли этих и других нуклеотидов могут применяться с использованием растворов нуклеотидтрифосфатов большей чистоты, к примеру, большей чем около 95% чистоты или большей чем около 98% чистоты или большей чем около 99% чистоты или большей чем около 99,5% чистоты, которая может достигаться, к примеру, очищением раствора нуклеотидтрифосфата с использованием существующих технологий химической очистки, таких как жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ) или другими способами. В одном варианте реализации изобретения нуклеотиды с множеством изомеров очищаются для обогащения требуемого изомера.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии представляющего интерес белка приведением клетки в контакт с молекулой синтетической РНК, которая содержит один или более неканонических нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования, репрограммирования и/или редактирования генов в клетке in vivo приведением клетки в контакт с молекулой синтетической РНК, которая содержит один или более неканонических нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина. В одном варианте реализации изобретения молекула синтетической РНК продуцируется транскрипцией in vivo. В одном варианте реализации изобретения молекула синтетической РНК кодирует один или более репрограммирующих факторов. В другом варианте реализации изобретения один или более репрограммирующих факторов включают белок Oct4. В другом варианте реализации изобретения клетка также приводится в контакт с молекулой синтетической РНК, которая кодирует белок Sox2. В еще одном варианте реализации изобретения клетка также приводится в контакт с молекулой синтетической РНК, которая кодирует белок Klf4. В еще одном варианте реализации изобретения клетка также приводится в контакт с молекулой синтетической РНК, которая кодирует белок c-Myc. В еще одном варианте реализации изобретения клетка также приводится в контакт с молекулой синтетической РНК, которая кодирует белок Lin28.

Ферменты, такие как РНК-полимераза T7, преимущественно может внедрять канонические нуклеотиды в реакции транскрипции in vitro, содержащей как канонические так и неканонические нуклеотиды. В результате реакция транскрипции in vitro, содержащая определенную долю неканонического нуклеотида, может давать РНК, содержащую разную чаще более низкую долю неканонического нуклеотида, чем доля в которой неканонический нуклеотид присутствовал в реакции. Поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения ссылки на доли внедрения нуклеотидов (к примеру, «молекула синтетической РНК, содержащие 50% псевдоуридина» или «0,1-0,8 псевдоуридина») могут относится как к молекулам РНК, содержащим установленную долю нуклеотида, так и к молекулам РНК, синтезированным в реакции, содержащей установленную долю нуклеотида (или производного нуклеотида, к примеру, нуклеотидтрифосфата), даже несмотря на что такая реакции может давать РНК, содержащую другую долю нуклеотида чем доля, в которой неканонический нуклеотид присутствовал в реакции.

Разные нуклеотидные последовательности могут кодировать такой же белок использованием альтернативных кодонов. Поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения ссылки на доли внедрения нуклеотидов могут относится как к молекулам РНК, содержащим установленную долю нуклеотида, так и к молекулам РНК, кодирующим тот же белок, что и другая молекула РНК, причем другая молекула РНК содержит установленную долю нуклеотида.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к набору, содержащему один или более материалов, необходимых для практической реализации настоящего изобретения. В одном варианте реализации изобретения набор содержит одну или более молекул синтетических РНК. В одном варианте реализации изобретения набор содержит одну или более молекул синтетических РНК, которые кодируют один или более репрограммирующих факторов и/или редактирующих гены белков. В другом варианте реализации изобретения одна или более молекул синтетических РНК содержат один или более неканонических нуклеотидов, которые включают один или более заместителей в положениях 2C и/или 4C и/или 5C в случае пиримидина или положениях 6C и/или 7N и/или 8C в случае пурина. В другом варианте реализации изобретения набор содержит один или более из: среды для трансфекции, реагент для трансфекции, среды для комплексообразования и матриксный раствор. В одном варианте реализации изобретения матриксный раствор содержит фибронектин и/или витронектин или рекомбинантный фибронектин и/или рекомбинантный витронектин. В одном варианте реализации изобретения один или более из компонентов набора присутствуют в виде множества аликвот. В одном варианте реализации изобретения набор содержит аликвоты комплексов нуклеиновая кислота-реагент для трансфекции. В другом варианте реализации изобретения набор содержит аликвоты комплексов нуклеиновая кислота-реагент для трансфекции, которые предоставляются в твердой форме, к примеру, в виде замороженных или лиофилизированных гранул. В еще одном варианте реализации изобретения набор содержит аликвоты среды, причем каждая аликвота содержит комплексы реагент для трансфекции-нуклеиновая кислота, которые стабилизированы или химической обработкой или замораживание.

Трансфекция в общем и репрограммирование в частности могут быть сложными и времязатратными методиками, которые могут быть повторяющимися и подверженными ошибке. Однако эти методики часто выполняются вручную из-за отсутствия автоматизированного оборудования для трансфекции. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к системе, которая может трансфицировать, репрограммировать и/или редактировать гены в клетках in vivo автоматизированным или полуавтоматическим способом.

В настоящее время установлено, что представители неканонических нуклеотидов из механизма деметилирования 5-метилцитидина при внедрении в синтетическую РНК, могут увеличивать эффективность, с которой синтетическая РНК может транслироваться в белок in vivo, и может уменьшать токсичность синтетической РНК in vivo. Эти неканонические нуклеотиды включают, к примеру: 5-метилцитидин, 5-гидроксиметилцитидин, 5-формилцитидин и 5-карбоксицитидин (также называемый «цитидин-5-карбоновая кислота»). Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновая кислота присутствует in vivo. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота представляет собой молекулу синтетической РНК. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит один или более неканонических нуклеотидов. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит один или более представителей неканонических нуклеотидов механизма деметилирования 5-метилцитидина. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одного из: 5-метилцитидина, 5-гидроксиметилцитидина, 5-формилцитидина и 5-карбоксицитидина или их производного. В дополнительном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одного из: псевдоуридина, 5-метилпсевдоуридина, 5-гидроксиуридина, 5-метилуридина, 5-метилцитидина, 5-гидроксиметилцитидина, N4-метилцитидина, N4-ацетилцитидина и 7-дезазагуанозина или их производного.

Механизм деметилирования 5-метилцитидина

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к белку. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, кодирующей белок. В одном варианте реализации изобретения белок является представляющим интерес белком. В другом варианте реализации изобретения белок выбирается из репрограммирующего белка или редактирующего гены белка. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота представляет собой плазмиду. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота присутствует в вирусе или вирусном векторе. В дополнительном варианте реализации изобретения вирус или вирусный вектор является репликационно некомпетентным. В дополнительном варианте реализации изобретения вирус или вирусный вектор является репликационно компетентным. В одном варианте реализации изобретения вирус или вирусный вектор включает по меньшей мере одного из: аденовируса, ретровируса, лентивируса, вируса герпеса, аденоассоциированного вируса или их природного или сконструированного варианта, и сконструированного вируса.

В настоящее время установлено, что некоторые комбинации неканонических нуклеотидов могут быть особенно эффективными для увеличения эффективности, с которой синтетическая РНК может транслироваться в белок in vivo, и уменьшения токсичности синтетической РНК in vivo, к примеру, комбинации: 5-метилуридина и 5-метилцитидина, 5-гидроксиуридина и 5-метилцитидина, 5-гидроксиуридина и 5-гидроксиметилцитидина, 5-метилуридина и 7-дезаазагуанозина, 5-метилцитидина и 7-дезаазагуанозина, 5-метилуридина, 5-метилцитидина и 7-дезаазагуанозина и 5-метилуридина, 5-гидроксиметилцитидина и 7-дезаазагуанозина. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, содержащей по меньшей мере двоих из: 5-метилуридина, 5-метилцитидина, 5-гидроксиметилцитидина и 7-дезазагуанозина или их одно или более производных. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, содержащей по меньшей мере троих из: 5-метилуридина, 5-метилцитидина, 5-гидроксиметилцитидина и 7-дезазагуанозина или их одно или более производных. Другие варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, содержащей все из: 5-метилуридина, 5-метилцитидина, 5-гидроксиметилцитидина и 7-дезазагуанозина или их одно или более производных. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит один или более остатков 5-метилуридина, один или более остатков 5-метилцитидина и один или более остатков 7-дезазагуанозина или один или более остатков 5-метилуридина, один или более остатков 5-гидроксиметилцитидина и один или более остатков 7-дезазагуанозина.

Дополнительно установлено, что молекулы синтетической РНК, содержащие определенные доли определенных неканонических нуклеотидов и их комбинаций, могут проявлять особенно высокую эффективность трансляции и низкую токсичность in vivo. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, содержащей по меньшей мере один из: одного или более остатков уридина, одного или более остатков цитидина и одного или более остатков гуанозина, и содержащей один или более неканонических нуклеотидов. В одном варианте реализации изобретения между около 20% и около 80% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина. В другом варианте реализации изобретения между около 30% и около 50% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 40% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина. В одном варианте реализации изобретения между около 60% и около 80% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина. В другом варианте реализации изобретения между около 80% и около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина. В дополнительном варианте реализации изобретения между около 20% и около 100% остатков цитидина являются остатками 5-гидроксиметилцитидина. В одном варианте реализации изобретения между около 20% и около 80% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В другом варианте реализации изобретения между около 40% и около 60% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В одном варианте реализации изобретения между около 20% и около 80% или между около 30% и около 60% или около 40% остатков цитидина являются остатками N4-метилцитидина и/или N4-ацетилцитидина. В другом варианте реализации изобретения каждый остаток цитидина представляет собой остаток 5-метилцитидина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина и/или остатками 5-гидроксиметилцитидина и/или остатками N4-метилцитидина и/или остатками N4-ацетилцитидина и/или их одним или более производных. В дополнительном варианте реализации изобретения около 40% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина, между около 20% и около 100% остатков цитидина являются остатками N4-метилцитидина и/или N4-ацетилцитидина и около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В одном варианте реализации изобретения около 40% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина, а около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина. В другом варианте реализации изобретения около 40% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина, а около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина, а около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 100% остатков уридина являются остатками 5-гидроксиуридина. В одном варианте реализации изобретения около 40% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина и около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина и около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В другом варианте реализации изобретения около 40% остатков уридина являются остатками 5-метилуридина и между около 20% и около 100% остатков цитидина являются остатками 5-гидроксиметилцитидина и около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина. В некоторых вариантах реализации изобретения менее чем около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина. В других вариантах реализации изобретения менее чем около 100% остатков цитидина являются остатками 5-гидроксиметилцитидина. В одном варианте реализации изобретения каждый остаток уридина в молекуле синтетической РНК представляет собой остаток псевдоуридина или остаток 5-метилпсевдоуридина. В другом варианте реализации изобретения около 100% остатков уридина являются остатками псевдоуридина и/или 5-метилпсевдоуридина. В дополнительном варианте реализации изобретения около 100% остатков уридина являются остатками псевдоуридина и/или остатками 5-метилпсевдоуридина и около 100% остатков цитидина являются остатками 5-метилцитидина и около 50% остатков гуанозина являются остатками 7-дезазагуанозина.

Другие неканонические нуклеотиды, которые могут использоваться вместо или в комбинации с 5-метилуридином, включают, но не ограничиваются: псевдоуридином, 5-гидроксиуридином и 5-метилпсевдоуридином (иначе называемым «1-метилпсевдоуридин», иначе называемым «N1-метилпсевдоуридин» или его одним или более производными. Другие неканонические нуклеотиды, которые могут использоваться вместо или в комбинации с 5-метилцитидином и/или 5-гидроксиметилцитидином, включают, но не ограничиваются: псевдоизоцитидином, 5-метилпсевдоизоцитидином, 5-гидроксиметилцитидином, 5-формилцитидином, 5-карбоксицитидином, N4-метилцитидином, N4-ацетилцитидином или их одним или более производных. В некоторых вариантах реализации изобретения, к примеру, при проведении единственной трансфекции, инъекции или доставки или если клетки, ткань, орган или организм пациента, подвергающиеся трансфекции, инъекции или доставки не являются особенно чувствительными к ассоциированной с трансфекцией токсичностью или передачей сигнала врожденной иммунной системе, доли неканонических нуклеотидов могут быть уменьшены. Уменьшение доли неканонических нуклеотидов может быть выгодным, в частности, потому что уменьшение доли неканонических нуклеотидов может снижать стоимость нуклеиновой кислоты. При определенных обстоятельствах, к примеру, если требуется минимальная иммуногенность нуклеиновой кислоты, то доли неканонических нуклеотидов могут быть увеличены.

Ферменты, такие как РНК-полимераза T7, преимущественно могут внедрять канонические нуклеотиды в реакции транскрипции in vitro, содержащей как канонические так и неканонические нуклеотиды. В результате реакция транскрипции in vitro, содержащая определенную долю неканонического нуклеотида, может давать РНК, содержащую разную чаще более низкую долю неканонического нуклеотида, чем доля в которой неканонический нуклеотид присутствовал в реакции. Поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения ссылки на доли внедрения нуклеотидов (к примеру, «50% 5-метилуридина») могут относится как к нуклеиновым кислотам, содержащим установленную долю нуклеотида, так и к нуклеиновым кислотам, синтезированным в реакции, содержащей установленную долю нуклеотида (или производного нуклеотида, к примеру, нуклеотидтрифосфата), даже несмотря на что такая реакции может давать нуклеиновую кислоту, содержащую другую долю нуклеотида чем доля, в которой неканонический нуклеотид присутствовал в реакции. В дополнение к этому разные нуклеотидные последовательности могут кодировать такой же белок использованием альтернативных кодонов. Поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения ссылки на доли внедрения нуклеотидов могут относится как к нуклеиновым кислотам, содержащим установленную долю нуклеотида, так и к нуклеиновым кислотам, кодирующим тот же белок, что и другая нуклеиновая кислота, причем другая нуклеиновая кислота содержит установленную долю нуклеотида.

Последовательность ДНК клетки может изменяться приведением клетки в контакт с редактирующим гены белком или индуцированием клетки для экспрессии редактирующего гены белка. Однако, ранее описанные редактирующие гены белки обладают недостатком из-за низкой эффективности связывания и избыточной нецелевой активности, которые могут вводить нежелательные мутации в ДНК клетки, что сильно ограничивает их использование in vivo, к примеру для терапевтических и косметических применений, в которых введение нежелательных мутаций в клетки пациента может привести к развитию рака. В настоящее время установлено, что редактирующие гены белки, которые содержат домен расщепления эндонуклеазы StsI (SEQ ID №: 1) может проявлять значительно более низкую нецелевую активность in vivo чем ранее описанные редактирующие гены белки, в то же время сохраняя высокий уровень целевой активности in vivo. В отношении других новосконструированных белков также установлено, что они могут проявлять высокую целевую активность in vivo, низкую нецелевой активность in vivo, могут иметь малый размер, растворимость и другие требуемые свойства, когда они используются как нуклеазный домен редактирующиго гены белка: StsI-HA (SEQ ID №: 2), StsI-HA2 (SEQ ID №: 3), StsI-UHA (SEQ ID №: 4), StsI-UHA2 (SEQ ID №: 5), StsI-HF (SEQ ID №: 6) и StsI-UHF (SEQ ID №: 7). StsI-HA, StsI-HA2 (высокая активность), StsI-UHA и StsI-UHA2 (очень высокая активность) могут проявлять более высокую целевую активность in vivo чем дикий тип StsI и дикий тип FokI, в частности благодаря специфическим аминокислотным заместителям в N-концевом участке в положениях 34 и 61, тогда как StsI-HF (высокая точность) и StsI-UHF (очень высокая точность) могут проявлять более низкую нецелевую активность in vivo чемдикий тип StsI и дикий тип FokI, в частности благодаря специфическим аминокислотным заместителям в C-концевом участке в положениях 141 и 152.

Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к белку. В некоторых вариантах реализации изобретения белок присутствует in vivo. В других вариантах реализации изобретения белок содержит нуклеазный домен. В одном варианте реализации изобретения нуклеазный домен содержит один или более из: домена расщепления эндонуклеазы FokI (SEQ ID №: 53), домена расщепления эндонуклеазы StsI (SEQ ID №: 1), StsI-HA (SEQ ID №: 2), StsI-HA2 (SEQ ID №: 3), StsI-UHA (SEQ ID №: 4), StsI-UHA2 (SEQ ID №: 5), StsI-HF (SEQ ID №: 6) и StsI-UHF (SEQ ID №: 7) или их биологически активный фрагмент или вариант.

Установлено также, что сконструированные редактирующие гены белки, которые содержат ДНК-связывающие домены, содержащие некоторые новые повторы последовательностей, могут проявлять более низкую нецелевую активность in vivo чем ранее описанные редактирующие гены белки, в то же время сохраняя высокий уровень целевой активности in vivo. Некоторые из этих сконструированных редактирующих гены белков могут обеспечивать несколько преимуществ по сравнению с ранее описанными редактирующими гены белками, включающими, к примеру, увеличенную гибкость линкерного участка, соединяющего повторы последовательностей, которые могут приводить к увеличенной эффективности связывания. Поэтому некоторые варианты реализации изобретения относятся к белку, содержащему множество повторов последовательностей. В одном варианте реализации изобретения по меньшей мере один из повторов последовательностей содержит аминокислотную последовательность: GabG, где каждый «a» и «b» представляет любую аминокислоту. В одном варианте реализации изобретения белок представляет собой редактирующий гены белок. В другом варианте реализации изобретения один или более повторов последовательностей присутствуют в ДНК-связывающем домене. В дополнительном варианте реализации изобретения «a» и «b» каждый независимо выбирают из группы: H и G. В дополнительном варианте реализации изобретения «a» и «b», соответственно, представляют собой H и G. В одном варианте реализации изобретения аминокислотная последовательность представлена в около 5 аминокислотах C-конца повтора последовательности. В другом варианте реализации изобретения аминокислотная последовательность представлена на C-конце повтора последовательности. В некоторых вариантах реализации изобретения один или более G в аминокислотной последовательности GabG заменен одной или более аминокислотами, отличающимися от G, к примеру A, H или GG. В одном варианте реализации изобретения повтор последовательности имеет длину между около 32 и около 40 аминокислотами или между около 33 и около 39 аминокислотами, или между около 34 и 38 аминокислотами, или между около 35 и около 37 аминокислотами, или около 36 аминокислотами, или более чем около 32 аминокислоты, или более чем около 33 аминокислот, или более чем около 34 аминокислоты, или более чем около 35 аминокислот. Другие варианты реализации изобретения относятся к белку, содержащему один или более подобных активатору транскрипции эффекторных доменов. В одном варианте реализации изобретения по меньшей мере один из подобных активатору транскрипции эффекторных доменов содержит повтор последовательности. Другие варианты реализации изобретения относятся к белку, содержащему множество повторов последовательностей, созданных вставкой одной или более аминокислот между по меньшей мере двумя повторами последовательностей подобного активатору транскрипции эффекторного домена. В одном варианте реализации изобретения одна или более аминокислот вставлены на расстоянии около 1 или около 2 или около 3 или около 4 или около 5 аминокислот от C-конца по меньшей мере одного повтора последовательности. Другое варианты реализации изобретения относятся к белку, содержащему множество повторов последовательностей, причем приблизительно каждый второй повтор последовательности имеет отличающуюся длину от длины повтора последовательности непосредственно предшествующего или последующего за данным повтором последовательности. В одном варианте реализации изобретения каждый второй повтор последовательности составляет в длину около 36 аминокислот. В другом варианте реализации изобретения каждый второй повтор последовательности составляет в длину около 36 аминокислот. Другие варианты реализации изобретения относятся к белку, содержащему множество повторов последовательностей, причем множество повторов последовательностей содержит по меньшей мере два повтора последовательностей, каждый составляет в длину по меньшей мере 36 аминокислот, и при этом по меньшей мере два из повторов последовательностей, которые составляют в длину по меньшей мере 36 аминокислот, разделены по меньшей мере одним повтором последовательностей, который составляет в длину менее 36 аминокислот. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к белку, который содержит одну или более последовательностей, выбранных из, к примеру, SEQ ID №: 54, SEQ ID №: 55, SEQ ID №: 56, SEQ ID №: 57, SEQ ID №: 58, SEQ ID №: 59 и SEQ ID №: 60.

Другие варианты реализации изобретения относятся к белку, который содержит ДНК-связывающий домен. В некоторых вариантах реализации изобретения ДНК-связывающий домен содержит множество повторов последовательностей. В одном варианте реализации изобретения множество повторов последовательностей обеспечивают возможность высокоспецифичного распознавания сайта связывания молекулы ДНК-мишени. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере двое из повторов последовательностей имеют по меньшей мере около 50%, или около 60%, или около 70%, или около 80%, или около 90%, или около 95%, или около 98% или около 99% гомологии друг к другу. В дополнительном варианте реализации изобретения по меньшей мере один из повторов последовательностей содержит один или более участков способных связываться с сайтом связывания в молекуле ДНК-мишени. В дополнительном варианте реализации изобретения сайт связывания содержит определенную последовательность в длину между около 1 и около 5 оснований. В одном варианте реализации изобретения ДНК-связывающий домен содержит цинковый палец. В другом варианте реализации изобретения ДНК-связывающий домен содержит подобный активатору транскрипции эффектор (TALE). В дополнительном варианте реализации изобретения множество повторов последовательностей включают один повтор последовательности, имеющий по меньшей мере около 50%, или около 60%, или около 70%, или около 80%, или около 90%, или около 95%, или около 98% или около 99% гомологии с TALE. В дополнительном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок содержит белок, ассоциированный с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR). В одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок содержит последовательность внутриядерной локализации. В другом варианте реализации изобретения последовательность внутриядерной локализации содержит аминокислотную последовательность: PKKKRKV. В одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок содержит последовательность внутримитохондриальной локализации. В другом варианте реализации изобретения последовательность внутримитохондриальной локализации содержит аминокислотную последовательность: LGRVIPRKIASRASLM. В одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок содержит линкер. В другом варианте реализации изобретения линкер соединяет ДНК-связывающий домен с нуклеазным доменом. В дополнительно варианте реализации изобретения линкер составляет в длину между около 1 и около 10 аминокислот. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер составляет в длину около 1, около 2, или около 3, или около 4, или около 5, или около 6, или около 7, или около 8, или около 9, или около 10 аминокислот. В одном варианте реализации изобретения редактирующий гены белок способен создавать одноцепочечный или двухцепочечный разрыв в молекуле ДНК-мишени.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу модификации генома клетки in vivo, причем способ содержит введение в клетку in vivo молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей не встречающийся в природе гибридный белок, содержащий искусственный домен повтора подобного активатору транскрипции эффектора (TAL), содержащий один или более единиц повтора в длину 36 аминокислот, и эндонуклеазный домен, причем домен повтора сконструирован для распознавания предварительно заданной нуклеотидной последовательности и при этом гибридный белок распознает предварительно заданную нуклеотидную последовательность. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой эукариотическую клетку. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку животного. В дополнительном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку млекопитающего. В другом дополнительном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку человека. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку растения. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой прокариотическую клетку. В некоторых вариантах реализации изобретения гибридный белок вводит в нуклеиновую кислоту клетки эндонуклеотическое расщепление, посредством чего модифицируется геном клетки.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к композиции для изменения последовательности ДНК клетки in vivo,содержащей нуклеиновую кислоту, причем нуклеиновая кислота кодирует редактирующий гены белок. Другие варианты реализации изобретения относятся к композиции для изменения последовательности ДНК клетки in vivo,содержащей смесь нуклеиновых кислот, причем смесь нуклеиновых кислот содержит: первую нуклеиновую кислоту, которая кодирует первый редактирующий гены белок, и вторую нуклеиновую кислоту, которая кодирует второй кодирующий гены белок. В одном варианте реализации изобретения сайт связывания первого редактирующего гены белка и сайт связывания второго редактирующего гены белка присутствуют в одной и той же молекуле ДНК-мишени. В другом варианте реализации изобретения сайт связывания первого редактирующего гены белка и сайт связывания второго редактирующего гены белка разделены менее чем около 50 основаниями, или менее чем около 40 основаниями, или менее чем около 30 основаниями, или менее чем около 20 основаниями, или менее чем около 10 основаниями, или между около 10 основаниями и около 25 основаниями, или около 15 основаниями. В одном варианте реализации изобретения нуклеазный домен первого редактирующего гены белка и нуклеазный домен второго редактирующего гены белка способны образовывать димер. В другом варианте реализации изобретения димер способен создавать одноцепочечный или двухцепочечный разрыв в молекуле ДНК-мишени.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к терапевтической композиции. Другие варианты реализации изобретения относятся к косметической композиции. В некоторых вариантах реализации композиция содержит матрицу для репарации. В дополнительном варианте реализации изобретения матрица для репарации представляет собой молекулу одноцепочечной ДНК или молекулу двухцепочечной ДНК.

Другие варианты реализации изобретения относятся к промышленному препарату для синтеза белка или нуклеиновой кислоты, кодирующей белок. В одном варианте реализации изобретения препарат представляет собой нуклеиновую кислоту. В другом варианте реализации изобретения белок содержит ДНК-связывающий домен. В дополнительном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую ДНК-связывающий домен. В одном варианте реализации изобретения белок содержит нуклеазный домен. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую нуклеазный домен. В одном варианте реализации изобретения белок содержит множество повторов последовательностей. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота кодирует множество повторов последовательностей. В дополнительном варианте реализации изобретения нуклеазный домен выбирается из: FokI, StsI, StsI-HA, StsI-HA2, StsI-UHA, StsI-UHA2, StsI-HF и StsI-UHF или их природный или сконструированный вариант или биологически активный фрагмент. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит промотор РНК-полимеразы. В другом варианте реализации изобретения промотор РНК-полимеразы представляет собой промотор T7 или промотор SP6. В дополнительном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит вирусный промотор. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит нетранслируемый участок. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота представляет матрицу для транскрипции in vitro.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии белка. Другие аспекты изобретения относятся к способу изменения последовательности ДНК клетки in vivo, включающий трансфицирование клетки in vivo редактирующим гены белком или индуцированием клетки для экспрессии редактирующего гены белка in vivo. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу снижения в клетке экспрессии представляющего интерес белка in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка индуцируется для экспрессии редактирующего гены белка, причем редактирующий гены белок способен создавать одноцепочечный или двухцепочечный разрыв в молекуле ДНК-мишени. В другом варианте реализации изобретения одноцепочечный или двухцепочечный разрыв приводит к инактивации гена. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу получения неактивной, со сниженной активностью или доминантно отрицательной формы белка in vivo. В одном варианте реализации изобретения белок представляет собой сурвивин. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репарации одной или более мутаций в клетке in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт с матрицей для репарации. В другом варианте реализации изобретения матрица для репарации представляет собой молекулу ДНК. В дополнительном варианте реализации изобретения матрица для репарации не содержит сайт связывания редактирующего гены белка. В дополнительном варианте реализации изобретения матрица для репарации кодирует аминокислотную последовательность, которая кодируется последовательностью ДНК, которая содержит сайт связывания редактирующего гены белка.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему введение пациенту терапевтически или косметически эффективного количества белка или нуклеиновой кислоты, кодирующей белок. В одном варианте реализации изобретения лечение приводит к облегчению одного или более симптомов пациента. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему: a. индуцирование клетки для экспрессии представляющего интерес белка трансфицированием клетки in vivo нуклеиновой кислотой, кодирующей представляющий интерес белок, и/или b. репрограммирование клетки in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка репрограммируется в менее дифференцированное состояние. В другом варианте реализации изобретения клетка репрограммируется трансфицированием клетки одной или более молекулами синтетической РНК, кодирующими один или более репрограммирующих белков. В дополнительном варианте реализации изобретения клетка представляет является дифференцированной. В дополнительном варианте реализации изобретения клетка дифференцируется в одну из: клетки кожи, инсулинпродуцирующей клетки, реагирующей на изменение уровня глюкозы, гемопоэтической клетки, кардиомицита, ретинальной клетки, клетки почек, клетки нервной системы, клетки желудка, жировой клетки, клетки костей, мышечной клетки, ооцита и сперматозоида. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему: a. индуцирование клетки для экспрессии редактирующего гены белка трансфицированием клетки in vivo нуклеиновой кислотой, кодирующей редактирующий гены белок, и/или b. репрограммирование клетки in vivo.

Другие варианты реализации изобретения относятся к среде для комплексообразования. В одном варианте реализации изобретения среда для комплексообразования имеет значение pH больше чем около 7, или больше чем около 7,2, или больше чем около 7,4, или больше чем около 7,6, или больше чем около 7,8, или больше чем около 8,0, или больше чем около 8,2, или больше чем около 8,4, или больше чем около 8,6, или больше чем около 8,8, или больше чем около 9,0. В другом варианте реализации изобретения среда для комплексообразования содержит трансферрин. В дополнительном варианте реализации изобретения среда для комплексообразования содержит DMEM. В дополнительном варианте реализации изобретения среда для комплексообразования содержит DMEM/F12. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу образования комплексов нуклеиновая кислота-реагент для трансфекции. В одном варианте реализации изобретения реагент для трансфекции инкубируется со средой для комплексообразования. В другом варианте реализации изобретения инкубация проходит перед этапом смешивания. В дополнительном варианте реализации изобретения этап инкубации длится между около 5 секунд и около 5 минут, или между около 10 секунд и около 2 минут, или между около 15 секунд и около 1 минутой, или между около 30 секунд и около 45 секунд. В одном варианте реализации изобретения реагент для трансфекции выбирается из табл. 2. В другом варианте реализации изобретения реагент для трансфекции представляет собой липид или липидоид. В дополнительном варианте реализации изобретения реагент для трансфекции содержит катион. В другом дополнительном варианте реализации изобретения катион представляет собой многовалентный катион. В другом дополнительном варианте реализации изобретения реагент для трансфекции представляет собой N1-[2-((1S)-1-[(3-аминопропил)амино]-4-[ди(3-аминопропил)амино]бутилкарбоксамидо)этил]-3,4-ди[олеилокси]-бензамид (иначе именуемый MVL5) или его производное.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки для экспрессии белка приведением клетки в контакт с нуклеиновой кислотой in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку млекопитающего. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку человека или клетку грызуна. Другие варианты реализации изобретения относятся к клетке, полученной с использованием одного или более способов по данному изобретению. В одном варианте реализации изобретения клетка присутствует в организме пациента. В другом варианте реализации изобретения клетка выделяется из организма пациента. Другие варианты реализации изобретения относятся к библиотеке для скрининга, содержащей клетку, полученную с использованием одного или более способов по данному изобретению. В одном варианте реализации изобретения библиотека для скрининга применяется для по меньшей мере одного из: скрининга токсичности, включающего: скрининг кардиотоксичности, скрининг нейротоксичности и скрининг гепатотоксичности, скрининга эффективности, высокопроизводительного скрининга, многопараметрического скрининга и других видов скрининга.

Другие варианты реализации изобретения относятся к набору, содержащему нуклеиновую кислоту. В одном варианте реализации изобретения набор содержит реагент для доставки (иначе именуемый «реагент для трансфекции»). В другом варианте реализации изобретения набор представляет собой набор для репрограммирования. В дополнительном варианте реализации изобретения набор представляет собой набор для редактирования генов. Другие варианты реализации изобретения относятся к набору для получения нуклеиновых кислот. В одном варианте реализации изобретения набор содержит по меньшей мере двоих из: псевдоуридинтрифосфата, 5-метилуридинтрифосфата, 5-метилцитидинтрифосфата, 5-гидроксиметилцитидинтрифосфата, N4-метилцитидинтрифосфата, N4-ацетилцитидинтрифосфата и 7-дезазагуанозинтрифосфата или их одного или более производных. Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтической или косметической композиции, содержащей нуклеиновую кислоту. В одном варианте реализации изобретения терапевтическая или косметическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию. В другом варианте реализации изобретения фармацевтическая композиция приготовлена в виде лекарственной формы. В дополнительном варианте реализации изобретения лекарственная форма содержит водную суспензию липосом. Примерные компоненты липосом изложены в табл. 2, даются в качестве примера и не являются ограничивающими. В одном варианте реализации изобретения липосомы включают одну или более цепей полиэтиленгликоля (ПЭГ). В другом варианте реализации изобретения клетка ПЭГ представляет собой ПЭГ2000. В дополнительном варианте реализации изобретения липосомы включают 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфороэтаноламин (DSPE) или его производное. В одном варианте реализации изобретения терапевтическое средство содержит один или более лигандов. В другом варианте реализации изобретения терапевтическое средство содержит по меньшей мере один из: андрогена, CD30 (TNFRSF8), проникающего в клетки пептида, CXCR, эстрогена, эпидермального факторов роста, EGFR, HER2, фолата, инсулина, инсулинподобного фактора роста-I, интерлейкина-13, интегрина, прогестерона, стромального фактора-1, тромбина, витамина D и трансферрина или их биологически активного фрагмента или варианта. Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтическому или косметическому средству, содержащему клетку, полученную с использованием одного или более способов по данному изобретению. В одном варианте реализации изобретения терапевтическое средство вводится пациенту для лечения одного из: диабета 1 типа, сердечно-сосудистого заболевания, включающего ишемическую и дилатационную кардиомиопатию, макулярной дегенерации, болезни Паркинсона, муковисцидоза, серповидноклеточной анемии, талассемии, анемии Фанкони, тяжелого комбинированного иммунодефицита, наследственной сенсорной нейропатии, пигментной ксеродермы, болезни Хантингтона, мышечной дистрофии, латерального амиотрофического склероза, болезни Альцгеймера, рака и инфекционных заболеваний, включающих: гепатит и ВИЧ/СПИД.

Таблица 2

Типичные биосовместимые липиды

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к одной или более методик введения, описанных в патентах США № 5711964; 5891468; 6316260; 6413544; 6770291 и 7390780, полное содержание которых тем самым включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, содержащей 5'-кэп структуру, выбранную из кэпа 0, кэпа 1, кэпа 2 и кэпа 3 или их производных. В одном варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит одну или более НТО. В другом варианте реализации изобретения одна или более НТО увеличивают стабильность нуклеиновой кислоты. В дополнительном варианте реализации изобретения одна или более НТО содержит 5'-НТО альфа-глобина или бета-глобина. В дополнительном варианте реализации изобретения одна или более НТО содержит 3'-НТО альфа-глобина или бета-глобина. В дополнительном варианте реализации изобретения молекула синтетической РНК содержит 5'-НТО альфа-глобина или бета-глобина и 3'-НТО альфа-глобина или бета-глобина. В одном варианте реализации изобретения 5'-НТО содержит последовательность Козак, которая практически сходна с консенсусной последовательностью Козак. В другом варианте реализации изобретения нуклеиновая кислота содержит 3'-поли(A) хвост. В дополнительном варианте реализации изобретения 3'-поли(A) хвост составляет в длину между около 20 нт и около 250 нт или между около 120 нт и около 150 нт. В дополнительном варианте реализации изобретения 3'-поли(A) хвост составляет в длину около 20 нт, или около 30 нт, или около 40 нт, или около 50 нт, или около 60 нт, или около 70 нт, или около 80 нт, или около 90 нт, или около 100 нт, или около 110 нт, или около 120 нт, или около 130 нт, или около 140 нт, или около 150 нт, или около 160 нт, или около 170 нт, или около 180 нт, или около 190 нт, или около 200 нт, или около 210 нт, или около 220 нт, или около 230 нт, или около 240 нт, или около 250 нт.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу репрограммирования клетки in vivo. В одном варианте реализации изобретения клетка репрограммируется приведением клетки в контакт с одной или более нуклеиновыми кислотами. В одном варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт с множеством нуклеиновых кислот, кодирующих по меньшей мере один из: белка Oct4, белка Sox2, белка Klf4, белка c-Myc, белка Lin28 или их биологически активного фрагмента, варианта или производного. В другом варианте реализации изобретения клетка приводится в контакт с множеством нуклеиновых кислот, кодирующих множество из белков включающих: белок Oct4, белок Sox2, белок Klf4 и белок c-Myc или их один или более биологически активных фрагментов, вариантов или производных. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу редактирования генов клетки in vivo. В одном варианте реализации изобретения в клетке редактируются гены приведением клетки в контакт с одной или более нуклеиновыми кислотами.

Нуклеиновые кислоты, включающие липосомальные лекарственные формы, содержащие нуклеиновые кислоты, при доставке in vivo могут накапливаться в печени и/или селезенке. В настоящее время установлено, что нуклеиновые кислоты, кодирующие белки могут модулировать экспрессию белков в печени и селезенке и что нуклеиновые кислоты, используемые таким образом, могут составлять сильные терапевтические средства для лечения заболеваний печени и селезенки. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу лечения заболевания печени и/или селезенки доставкой в организм пациента нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес белок. Другие варианты реализации изобретения относятся к терапевтической композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую представляющий интерес белок, для лечения заболевания печени и/или селезенки. Заболевания и патологические состояния печени и/или селезенки, которые могут проходить лечение включают, но не ограничиваются: гепатитом, индуцированным алкоголем заболеванием печени, индуцированным лекарствами заболеванием печени, вирусной инфекцией Эпштейна-Барр, аденовирусной инфекцией, цитомегаловирусной инфекцией, токсоплазмозом, пятнистой лихорадкой Скалистых гор, неалкогольной жировой дистрофией печени, хемохроматозом, болезнью Вильсона, болезнью Жильбера и раком печени и/или селезенки.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии представляющего интерес белка, включающему приведение клетки in vivo в контакт с раствором, содержащим альбумин, который обработан ионообменной смолой или активированным углем, и одной или более молекулами нуклеиновых кислот, причем по меньшей мере одна из одной или более молекул нуклеиновых кислот кодирует представляющий интерес белок. В одном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии клеткой представляющего интерес белка. В другом варианте реализации изобретения одна или более молекул нуклеиновых кислот содержит молекулу синтетической РНК. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку кожи. В другом варианте реализации изобретения клетка представляет собой мышечную клетку. В еще одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой дермальный фибробласт. В еще одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой миобласт. В одном варианте реализации изобретения представляющий интерес белок является белком внеклеточного матрикса. В другом варианте реализации изобретения представляющий интерес белок выбирается из: эластина, коллагена, ламинина, фибронектина, витронектина, лизилоксидазы, эластинсвязывающего белка, фактора роста, фактора роста фибробластов, трансформирующего фактора роста бета, колониестимулирующего фактора гранулоцитов, матриксной металлопротеазы, актина, фибриллина, ассоциированного с микрофибриллами гликопротеина, подобного лизилоксидазе белка и фактора роста тромбоцитов. В одном варианте реализации изобретения раствор доставляется в дерму. В другом варианте реализации изобретения доставка осуществляется инъекцией. В еще одном варианте реализации изобретения доставка осуществляется инъекцией с использованием микроигольчатой матрицы. В одном варианте реализации изобретения раствор дополнительно содержит фактор роста. В другом варианте реализации изобретения фактор роста выбирается из: фактора роста фибробластов и трансформирующего фактора роста бета. В еще одном варианте реализации изобретения раствор дополнительно содержит холестерин.

Другие варианты реализации изобретения относятся к способу индуцирования клетки in vivo для экспрессии представляющего интерес белка, включающему приведение клетки in vivo в контакт с раствором, содержащим холестерин и одну или более молекул нуклеиновых кислот, причем по меньшей мере одна из одной или более молекул нуклеиновых кислот кодирует представляющий интерес белок. В одном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии клеткой представляющего интерес белка. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу трансфицирования клетки in vivo молекулой нуклеиновой кислоты, включающему приведение в контакт клетки in vivo с раствором, содержащим альбумин, который обработан ионообменной смолой или активированным углем, и молекулой нуклеиновой кислоты. В одном варианте реализации изобретения способ приводит к тому, что клетка трансфицируется молекулой нуклеиновой кислоты. В другом варианте реализации изобретения молекула нуклеиновой кислоты является одной из: молекулы дцДНК, молекулы оцДНК, молекулы дцРНК, молекулы оцРНК, плазмиды, олигонуклеотида, молекулы синтетической РНК, молекулы миРНК, молекулы мРНК, молекулы киРНК. Другие варианты реализации изобретения относятся к способу лечения пациента, включающему доставку в организм пациента композиции, содержащей альбумин, который обработан ионообменной смолой или активированным углем, и одну или более молекул нуклеиновых кислот, причем по меньшей мере одна из одной или более молекул нуклеиновых кислот кодирует представляющий интерес белок. В одном варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии в организме пациента представляющего интерес белка. В другом варианте реализации изобретения способ приводит к экспрессии представляющего интерес белка в дерме пациента.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся к косметической композиции, содержащей альбумин, который обработан ионообменной смолой или активированным углем, и молекулу нуклеиновой кислоты. Другие варианты реализации изобретения относятся к препарату для косметического лечения. В одном варианте реализации изобретения препарат для косметического лечения содержит устройство, выполненное с возможностью доставки композиции в организм пациента. В другом варианте реализации изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует белок эластин или белок коллаген. Другие варианты реализации изобретения относятся к раствору для трансфекции клетки in vivo, содержащему холестерин или аналог холестерина и одну или более молекул нуклеиновых кислот. В одном варианте реализации изобретения холестерин или аналог холестерина ковалентно связывается с по меньшей мере одной из одной или более молекул нуклеиновых кислот. В другом варианте реализации изобретения аналог холестерина представляет собой оксистерол. В еще одном варианте реализации изобретения аналог холестерина включает один или более из: заместителя A-кольца, заместителя B-кольца, заместителя D-кольца, заместителя боковой цепи, холестаноевой кислоты, холестеноевой кислоты, полиненасыщенного фрагмента, дейтерированного фрагмента, фторированного фрагмента, сульфонированного фрагмента, фосфорилированного фрагмента и флуоресцентного фрагмента. В еще одном варианте реализации изобретения способ включает лечение пациента одним или более из: кожного наполнителя, нейротоксина (в качестве иллюстрации ингибиторы натриевых каналов (например, тетродоксин), ингибиторы калиевых каналов (например, тетраэтиламмоний), ингибиторы хлоридных каналов (например, хлоротоксин и кураре), ингибиторы кальциевых каналов (например, конотоксин), ингибиторы высвобождения синаптических везикул (например, ботулотоксин и столбнячный токсин) и ингибитор гематоэнцефалического барьера (например, алюминий и ртуть)) и лечение с индукцией репарации.

Например, ботулотоксин A типа утвержден Управлением по контролю пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA) для лечения эссенциального блефароспазма, косоглазия и гемифациального спазма у пациентов возрастом старше двенадцати лет, шейной дистонии, морщин межбровной линии (лица) и лечения гипергидроза, а ботулотоксин B типа утвержден для лечения шейной дистонии. Настоящие композиции при лечении этих заболеваний могут комбинироваться с этими токсинами.

Дополнительно комбинации любого из вышеупомянутых токсинов могут использоваться в комбинации с настоящими композициями для различных косметических процедур, включающих без ограничения, лицевые морщины, гиперкинетичекие линии кожи, межбровные линии, гусиные лапки, морщины марионетки, кожные нарушения, носогубные складки, блефароспазм, косоглазие, гемифациальные спазмы и расстройства потоотделения. Альтернативно, настоящие композиции могут применяться для таких косметических процедур в виде монотерапии.

Некоторые варианты реализации изобретения относятся комбинационной терапии, включающей одно или более терапевтических или косметических композиций по настоящему изобретению, и одной или более вспомогательных терапий или косметических процедур. В некоторых вариантах реализации изобретения одна или более терапевтических или косметических композиций по настоящему изобретению, вводятся субъекту, который проходит лечение одной или более вспомогательных терапий или косметических процедур. Примерные вспомогательные терапии или косметические процедуры изложены в табл. 3 и табл. 5 предварительной заявки США № 61/721302, содержание которой тем самым включено в данный документ посредством ссылки, дано в качестве примера и не является ограничивающим.

Таблица 3

Типичная вспомогательная терапия

Фармацевтические препараты могут дополнительно содержать реагенты для доставки (иначе именуемые «реагенты для трансфекции») и/или вспомогательные вещества. Фармацевтически приемлемые реагенты для доставки, вспомогательные вещества и способы их приготовления и применения, включающие способы получения и введения фармацевтических препаратов в организм пациентов (иначе именуемых «субъекты») хорошо известны в данной области и изложены в многочисленных публикациях, включающих, к примеру, патентную заявку США № US 2008/0213377, полный объем которой включен в данный документ посредством ссылки.

К примеру, данные композиции могут существовать в виде фармацевтически приемлемых солей. Такие соли включают перечисленные, к примеру, в J. Pharma. Sci. 66, 2-19 (1977) и The Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection, and Use. P. H. Stahl и C. G. Wermuth (eds.), Verlag, Zurich (Switzerland) 2002, которые тем самым включены в данный документ в полном объеме посредством ссылки. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых солей включают: сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, йодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат, камфорсульфонат, памоат, фенилацетат, трифторацетат, акрилат, хлорбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, o-ацетоксибензоат, нафталин-2-бензоат, изобутират, фенилбутират, α-гидроксибутират, бутин-1,4-дикарбоксилат, гексин-1,4-дикарбоксилат, капрат, каприлат, циннамат, гликолят, гептаноат, гиппурат, малат, гидроксималеат, малонат, манделат, мезилат, никотинат, фталат, терефталат, пропиолат, пропионат, фенилпрорионат, себацинат, суберат, п-бромбензолсульфонат, хлорбензолсульфонат, этилсульфонат, 2-гидроксиэтилсульфонат, метилсульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, нафталин-1,5-сульфонат, ксилолсульфонат, соли тартратов, гидроксидов щелочных металлов, таких как натрий, калий и литий; гидроксидов щелочноземельных металлов, таких как кальций и магний; гидроксидов других металлов, таких как алюминий и цинк; аммония и органических аминов, таких как незамещенные или гидроксизамещенные моно-, ди- или триалкиламины, дициклогексиламин; трибутиламин; пиридин; N-метил, N-этиламин; диэтиламин; триэтиламин; моно-, бис- или трис-(2-OH-низшие алкиламины), такие как моно-, бис- или трис-(2-гидроксиэтил)амин, 2-гидрокси-трет-бутиламин или трис-(гидроксиметил)метиламин, N,N-ди-низшие алкил-N-(гидроксилнизший алкил)-амины, такие как N,N-диметил-N-(2-гидроксиэтил)амин или три-(2-гидроксиэтил)амин; N-метил-D-глюкамин; и аминокислоты, такие как аргинин, лизин и тому подобные.

Настоящие фармацевтические композиции могут содержать вспомогательные вещества, включающие жидкости, такие как вода и масла, включая масла из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и тому подобное. Фармацевтические вспомогательные вещества могут быть, к примеру, солевым раствором, аравийской камедью, крахмальной пастой, тальком, кератином, коллоидным силикагелем, мочевиной и тому подобным. В дополнение к этому, могут использоваться вспомогательные, стабилизирующие, загущающие, смазывающие и окрашивающие агенты. В одном варианте реализации изобретения фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества при введении субъекту являются стерильными. Подходящие фармацевтические вспомогательные вещества также включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностерат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и тому подобные. Любые агенты, описанные в данном документе, если требуется, могут также содержать меньшие количества увлажняющих или эмульгирующих агентов или pH-буферизующих агентов.

В различных вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе, могут вводиться в эффективной дозе, к примеру, от около 1 мг/кг до около 100 мг/кг, от около 2,5 мг/кг до около 50 мг/кг или от около 5 мг/кг до около 25 мг/кг. Точное определение того, что может считаться эффективной дозой, может основываться на факторах, индивидуальных для каждого пациента, включая их рост, возраст и тип заболевания. Дозировки легко могут быть установлены средними специалистами в данной области из этого описания и уровня знаний в данной области. К примеру, дозы могут определяться по ссылке Physiciansʹ Desk Reference, 66th Edition, PDR Network; 2012 Edition (27 декабря 2011 г.), содержание которой включено в полном объеме посредством ссылки.

Активные композиции по данному изобретению могут включать классические фармацевтические препараты. Введение этих композиций в соответствии с данным изобретением может происходить посредством любого обычного пути при условии, что целевая ткань доступна посредством этого пути. Он включает оральное, назальное или буккальное введение. Альтернативно, введение может происходить внутрикожной, подкожной, внутримышечной, внутрибрюшинной или внутривенной инъекцией, или прямой инъекцией в раковую ткань. Агенты, описанные в данном документе, также могут вводиться катетерными системами. Такие композиции обычно могут вводиться как фармацевтически приемлемые композиции, как описано в данном документе.

После приготовления лекарственной формы растворы могут вводиться способом, согласованным с дозированной лекарственной формой и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Лекарственные формы могут легко вводится разнообразными дозированными лекарственными формами, такими как инъекционные растворы, капсулы с замедленным высвобождением лекарственного вещества и тому подобными. Для парентерального введения водным раствором, к примеру, раствор как правило содержит надлежаще забуференный и жидкий растворитель, сначала доведенный до изотонического, к примеру, достаточным количеством солевого раствора или глюкозы. К примеру, такие водные растворы могут использоваться для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. Предпочтительно применяется стерильная водная среда, как известно специалистам в данной области, особенно в свете настоящего описания.

Типичные субъекты или пациенты относятся к любому позвоночному, включающему без ограничения людей и других приматов (например, шимпанзе и другие виды высших обезьян и макак), сельскохозяйственных животных (например, крупный рогатый скот, овцы, свиньи, козы и кони), домашних животных (например, собак и кошек), лабораторных животных (например, грызуны, такие как мыши, крысы и морские свинки) и птиц (например, домашние, дикие и промысловые, такие как куры, индейки и другие куриные, утки, гуси и тому подобные). В некоторых вариантах реализации изобретения субъект представляет собой млекопитающее. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект представляет собой человека.

Введение композиций, описанных в данном документе может происходить, к примеру, инъекцией, местным введением, офтальмологическим введением интраназальным введением. Инъекция может включать инъекции такие как, но не ограниченные внутрикожной, подкожной и внутримышечной. В некоторых вариантах реализации изобретения инъекция может быть связана с применением электрической силы (например, электропорация, включая использование устройств, которые находят применение в электрохимиотерапии (например, CLINIPORATOR, IGEA Srl, г.Капри [MO], Италия)). Местное введение может проводиться, но не ограничено использованием крема, лосьона, мази, геля, спрея и тому подобным. Местное введение может дополнительно включать использование усилителя проникновения, такого как, но не ограниченного поверхностно-активными веществами, жирными кислотами, солями желчных кислот, хелатирующими агентами, нехелатирующими поверхностно-активными веществами, полиоксиэтилен-9-лауриловым эфиром, полиоксиэтилен-20-цетиловым эфиром, жирными кислотами и/или солями в комбинации с желчными кислотами и/или солями, натриевой солью в комбинации с лауриловой кислотой, каприновой кислотой и UDCA и тому подобным. Местное введение также может включать использование ароматизатора, красителя, солнцезащитного, антибактериального средства и/или увлажнителя. Композиции, описанные в данном документе, могут вводиться по меньшей мере в одно место, такое как, но не ограниченное, лбом, скальпом, волосяными фолликулами, волосами, верхними веками, нижними веками, бровями, ресницами, нижними глазничными областями, окологлазничными областями, виском, носом, переносицей, щеками, языком, носогубными складками, губами, околочелюстными областями, линией челюсти, ушами, шеей, грудью, предплечьем, плечом, ладонью, рукой, пальцем, ногтями, спиной, животом, боками, ягодицами, бедром, голенью, стопой, пальцем стопы и тому подобным.

Последовательности

Это изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими неограничивающими примерами.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Синтез РНК.

РНК, кодирующие зеленый флуоресцентный белок или белки человека эластин, тирозиназу, рецептор меланокортина 1, гиалуронансинтазу 1, гиалуронансинтазу 2, гиалуронансинтазу 3, коллаген типа III a1, коллаген типа VII a1, интерлейкин 10, гликопротеиновый лиганд-1 P-селектина, альфа-(1,3)-фукозилтрансферазу Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc-2 (T58A) и Lin28 или TALEN-таргетируемые гены человека XPA, CCR5, TERT, MYC и BIRC5, и содержащие различные комбинации канонических и неканонических нуклеотидов, синтезировали на ДНК-матрицах с использованием набора для синтеза РНК с высоким выходом T7 и набора с системой кэппирования осповакцины с 2'-O-метилтрансферазой кэппирования мРНК (все из New England Biolabs Inc.), в соответствии с инструкциями производителя и ранее описанными изобретениями данных изобретателей (заявка США № 13/465490 (сейчас патент США № 8497124), международная заявка № PCT/US12/67966, заявка США № 13/931251 и международная заявка № PCT/US13/68118, содержание всех из которых тем самым включено в полном объеме посредством ссылки) (табл. 4). Потом РНК разбавляли водой без нуклеазной активности до концентрации между 100 нг/мкл и 1000 нг/мкл. Для некоторых экспериментов добавляли ингибитор РНКазы (Superase⋅In, Life Technologies Corporation) в концентрации 1 мкл/100 мкг РНК. Растворы РНК хранили при 4 C. Для экспериментов по репрограммированию РНК, кодирующие Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc-2 (T58A) и Lin28, смешивали в молярном соотношении 3:1:1:1:1.

Таблица 4

Синтез РНК

«A» относится к аденозин-5'-трифосфату, «G» относится к гуанозин-5'-трифосфату, «U» относится к уридин-5'-трифосфату, «C» относится к цитидин-5'-трифосфату, «5mC» относится к 5-метилцитидин-5'-трифосфату, «5hmC» относится к 5-гидроксиметилцитидин-5'-трифосфату, «5cC» относится к 5-карбоксицитидин-5'-трифосфату, «5fC» относится к 5-формилцитидин-5'-трифосфату, «psU» относится к 5-псевдоуридин-5'-трифосфату, «5mU» относится к 5-метилуридин-5'-трифосфату, «5hU» относится к 5'-трифосфату уридина с метильной группой, связанной с атомом кислорода в положении 5C уридина, и «7dG» относится к 7-дезазагуанозин-5'-трифосфату.

Пример 2. Трансфекция клеток синтетической РНК.

Для трансфекции в 6-луночных планшетах сначала отдельно разводили 2 мкг РНК и 6 мкл реагента для трансфекции (Lipofectamine RNAiMAX, Life Technologies Corporation) в среде для комплексообразования (Opti-MEM, Life Technologies Corporation, или DMEM/F12+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+2 мкг/мл этаноламина) до общего объема 60 мкл каждого разведения. Потом разведенную РНК и реагент для трансфекции смешивали и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре в соответствии с инструкциями производителя реагента для трансфекции. Потом добавляли комплексы к клеткам в культуре. К каждой лунке 6-луночного планшета, которая уже содержала 2 мл среды для трансфекции на лунку, добавляли между 12 мкл и 240 мкл комплексов. Планшеты осторожно встряхивали для распределения комплексов по всей лунке. Перед заменой среды свежей средой для трансфекции (2 мл/лунку) клетки инкубировали с комплексами от 4 часов до в течение ночи. Объемы масштабировали для трансфекции в 24-луночных и 96-луночных планшетах. Альтернативно, между 0,5 мкг и 5 мкг РНК и между 2-3 мкл реагента для трансфекции (Lipofectamine 2000, Life Technologies Corporation) на мкг РНК сначала отдельно разводили в среде для комплексообразования (Opti-MEM, Life Technologies Corporation, или DMEM/F12+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+2 мкг/мл этаноламина) до общего объема между 5 мкл и 100 мкл каждого разведения. Потом разведенную РНК и реагент для трансфекции смешивали и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. Потом добавляли комплексы к клеткам в культуре. К каждой лунке 6-луночного планшета, которая уже содержала 2 мл среды для трансфекции на лунку, добавляли между 10 мкл и 200 мкл комплексов. В некоторых экспериментах вместо среды для трансфекции использовали DMEM+10% ФБС или DMEM+50% ФБС. Планшеты осторожно встряхивали для распределения комплексов по всей лунке. Клетки инкубировали с комплексами от 4 часов до в течение ночи. В некоторых экспериментах среды заменяли свежей средой для трансфекции (2 мл/лунку) через 4 ч или 24 ч после трансфекции.

Пример 3. Токсичность и трансляция белков на синтетических РНК, содержащих неканонические нуклеотиды.

Первичные фибробласты человека трансфицировали в соответствии с Примером 2, с использованием РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. Через 20-24 часа после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела против Oct4. Относительную токсичность РНК определяли оцениванием плотности клеток во время фиксации.

Пример 4. Состав среды для трансфекции.

Среду для культивирования клеток разрабатывали для обеспечения эффективной трансфекции клеток нуклеиновыми кислотами и эффективного репрограммирования («среда для трансфекции»):

DMEM/F12+15 мM ГЭПЭС+2 мM L-аланил-L-глутамина+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+2 мкг/мл этаноламина+50 мкг/мл гидрата сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты+4 мкг/мл холестерина+1 мкM гидрокортизона+25 мкг/мл полиоксиэтиленсорбитана моноолеата+2 мкг/мл D-альфа-токоферола ацетата+20 нг/мл бФРФ+5 мг/мл обработанного сывороточного альбумина человека.

Вариант этой среды разрабатывали для обеспечения устойчивого долговременного культивирования различных типов клеток, включая плюрипотентные стволовые клетки («среда для поддержания»):

DMEM/F12+2 мM L-аланил-L-глутамина+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+2 мкг/мл этаноламина+50 мкг/мл гидрата сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты+20 нг/мл бФРФ+2 нг/мл ТФР-β1.

Среду для трансфекции, в которой обработанный сывороточный альбумин человека обрабатывали добавлением 32 мM октаноата натрия с последующим нагреванием при 60 C в течение 4 ч, с последующей обработкой ионообменной смолой (AG501-X8(D), Bio-Rad Laboratories Inc.) в течение 6 ч при комнатной температуре, с последующей обработкой покрытым декстраном активированным углем (C6241, Sigma-Aldrich Co. LLC.) в течение ночи при комнатной температуре с последующим центрифугированием, фильтрованием, доведением до 10% раствора водой без нуклеазной активности, с последующим добавлением других компонентов среды, применяли как среду для трансфекции во всех примерах, описанных в данном документе, если не указано иное. Для экспериментов по репрограммированию, если не указано иное, клетки наносили или на непокрытые планшеты в DMEM+10%-20% сыворотки или на покрытые фибронектином и витронектином планшеты в среде для трансфекции. Среду для трансфекции, если не указано иное, не кондиционировали. Понятно, что состав среды для трансфекции может корректироваться для соответствия требованиям специфических типов клеток, подлежащих культивированию. Далее понятно, что обработанный сывороточный альбумин человека может заменяться другим обработанным альбумином, к примеру, обработанным бычьим сывороточным альбумином, без отрицательного влияния на показатели среды. Далее понятно, что вместо или в дополнение к L-аланил-L-глутамату могут использоваться другие источники глутамина, к примеру, L-глутамин, что вместо или в дополнение к ГЭПЭС могут использоваться другие буферные системы, к примеру, фосфатная, бикарбонатная и т.п., что вместо или в дополнение к селениту натрия селен может обеспечиваться другими формами, к примеру, селенистой кислотой, что вместо или в дополнение к гидрату сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты и/или D-альфа-токоферола ацетату могут использоваться другие антиоксиданты, к примеру, L-аскорбиновая кислота, что вместо или в дополнение к полиоксиэтиленсорбитана моноолеату могут использоваться другие поверхностно-активные вещества, к примеру, Плюроник F-68 и/или Плюроник F-127, что вместо или в дополнение к DMEM/F12 могут использоваться другие основные среды, к примеру, MEM, DMEM и т.п., и что компоненты культуральной среды могут варьировать с течением времени, к примеру, использованием среды без ТФР-β от 0 суток до 5 суток, а потом использованием среды, содержащей 2 нг/мл ТФР-β после 5 суток без отрицательного влияния на показатели среды. Далее понятно, что в соответствующих концентрациях без отрицательного влияния на показатели среды могут добавляться другие ингредиенты, к примеру, жирные кислоты, лизофосфатидиловая кислота, лизосфингомиелин, сфингозин-1-фосфат, другие сфинголипиды, ингибиторы ROCK, включающие Y-27632 и тиазовивин, представители семейства белков ТФР-β/NODAL, ИЛ-6, представители семейства белков Wnt и т.д., и что в соответствующих концентрациях в среду могут добавляться ингредиенты, которые как известно способствуют или ингибируют рост специфических типов клеток, и/или агонисты и/или антагонисты белков или другие молекулы, которые как известно способствуют или ингибируют рост специфических типов клеток, если они используются с такими типами клеток без отрицательного влияния на показатели среды, к примеру, сфингозин-1-фосфат и плюрипотентные стволовые клетки. Настоящее изобретение одинаковым образом относится к ингредиентам, которые добавляются в виде очищенных соединений, к ингредиентам, которые добавляются в виде частей смесей определенного состава, к ингредиентам, которые добавляются в виде частей сложных смесей или смесей неопределенного состава, к примеру, масла животного или растительного происхождения, и к ингредиентам, которые добавляются при биологических процессах, к примеру, при кондиционировании. Концентрации компонентов могут варьировать от перечисленных величин в пределах диапазонов, которые будут очевидны специалистам в данной области, без отрицательного влияния на показатели среды. Вариант среды без компонентов животного происхождения получали путем использования рекомбинантных вариантов всех белковых ингредиентов, и вариантов неживотного происхождения всех других компонентов, включающих полусинтетический холестерин растительного происхождения (Avanti Polar Lipids Inc.).

Пример 5. Состав среды для трансфекции.

Среду для культивирования клеток разрабатывали для поддержания эффективной трансфекции, репрограммирования и редактирования генов в клетках:

DMEM/F12+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+20 нг/мл бФРФ+5 мг/мл обработанного сывороточного альбумина человека.

Варианты этой среды также разрабатывали для обеспечения улучшенных показателей при использовании со специфическими реагентами для трансфекции, специфическими нуклеиновыми кислотами и специфическими типами клеток: DMEM/F12+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+4,5 мкг/мл холестерина+20 нг/мл бФРФ+5 мг/мл обработанного сывороточного альбумина человека, DMEM/F12+10 мг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+1 мкM гидрокортизона+20 нг/мл бФРФ+5 мг/мл обработанного сывороточного альбумина человека, и DMEM/F12+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+4,5 мкг/мл холестерина+1 мкM гидрокортизона+20 нг/мл бФРФ+5 обработанного сывороточного альбумина человека.

Примеры дополнительных компонентов, которые в некоторых экспериментах добавляли к среде для культивирования клеток (перечисленные с примерными концентрациями), включают: 15 мM ГЭПЭС, 2 мM L-аланил-L-глутамина, 2 мкг/мл этаноламина, 10 мкг/мл жирных кислот, 10 мкг/мл жирных кислот печени трески (метиловые сложные эфиры), 25 мкг/мл полиоксиэтиленсорбитана моноолеата, 2 мкг/мл D-альфа-токоферола ацетата, 1-50 мкг/мл гидрата сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты, 200 нг/мл B18R и 0,1% Плюроника F-68.

Для некоторых экспериментов, в которых среда кондиционировалась, использовали следующий вариант:

DMEM/F12+15 мM ГЭПЭС+2 мM L-аланил-L-глутамина+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+2 мкг/мл этаноламина+4,5 мкг/мл холестерина+10 мкг/мл жирных кислот печени трески (метиловые сложные эфиры)+25 мкг/мл полиоксиэтиленсорбитана моноолеата+2 мкг/мл D-альфа-токоферола ацетата+1 мкг/мл гидрата сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты+0,1% Плюроника F-68+20 нг/мл бФРФ+5 мг/мл обработанного сывороточного альбумина человека.

Для некоторых экспериментов, в которых среда не кондиционировалась, использовали следующий вариант.

DMEM/F12+15 мM ГЭПЭС+2 мM L-аланил-L-глутамина+10 мкг/мл инсулина+5,5 мкг/мл трансферрина+6,7 нг/мл селенита натрия+2 мкг/мл этаноламина+4,5 мкг/мл холестерина+1 мкM гидрокортизона+0-25 мкг/мл полиоксиэтиленсорбитана моноолеата+2 мкг/мл D-альфа-токоферола ацетата+50 мкг/мл гидрата сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты+20 нг/мл бФРФ+5 мг/мл обработанного сывороточного альбумина человека.

Для получения этих вариантов обработанный сывороточный альбумин человека обрабатывали добавлением 32 мM октаноата натрия с последующим нагреванием при 60 C в течение 4 ч, с последующей обработкой ионообменной смолой (AG501-X8(D)) в течение 6 ч при комнатной температуре, с последующей обработкой покрытым декстраном активированным углем (C6241, Sigma-Aldrich Co. LLC.) в течение ночи при комнатной температуре с последующим центрифугированием, фильтрованием, доведением до 10% раствора водой без нуклеазной активности, с последующим добавлением других компонентов среды. Для некоторых экспериментов, в которых кондиционировалась среда, среду кондиционировали в течение 24 ч на облученных фидерах неонатальных фибробластов человека. Клетки, если не указано иное, наносили на покрытые фибронектином планшеты или покрытые фибронектином и витронектином планшеты.

Состав среды может корректироваться для соответствия требованиям специфических типов клеток, подлежащих культивированию. Кроме того, при определенных обстоятельствах обработанный сывороточный альбумин человека может заменяться другим обработанным альбумином, к примеру, обработанным бычьим альбумином, вместо или в дополнение к L-аланил-L-глутамату могут использоваться другие источники глутамина, к примеру, L-глутамин, вместо или в дополнение к ГЭПЭС могут использоваться другие буферные системы, к примеру, фосфатная, бикарбонатная и т.п., вместо или в дополнение к селениту натрия селен может обеспечиваться другими формами, к примеру, селенистой кислотой, вместо или в дополнение к гидрату сесквимагниевой соли 2-фосфата L-аскорбиновой кислоты и/или D-альфа-токоферола ацетату могут использоваться другие антиоксиданты, к примеру, L-аскорбиновая кислота, вместо или в дополнение к полиоксиэтиленсорбитана моноолеату и/или Плюронику F-68 могут использоваться другие поверхностно-активные вещества, к примеру, Плюроник F-127, вместо или в дополнение к DMEM/F12 могут использоваться другие основные среды, к примеру, MEM, DMEM и т.п., и компоненты культуральной среды могут варьировать с течением времени, к примеру, использованием среды без ТФР-β от 0 суток до 5 суток, а потом использованием среды, содержащей 2 нг/мл ТФР-β после 5 суток. При определенных обстоятельствах в соответствующих концентрациях могут добавляться другие ингредиенты, к примеру, жирные кислоты, лизофосфатидиловая кислота, лизосфингомиелин, сфингозин-1-фосфат, другие сфинголипиды, представители семейства белков ТФР-β/NODAL, ИЛ-6, представители семейства белков Wnt и т.д., и в среду в соответствующих концентрациях могут добавляться ингредиенты, которые как известно способствуют или ингибируют рост специфических типов клеток, и/или агонисты и/или антагонисты белков или других молекул, которые как известно способствуют или ингибируют рост специфических типов клеток, если они используются с такими типами клеток, к примеру, сфингозин-1-фосфат и плюрипотентные стволовые клетки. Ингредиенты могут принимать вид очищенных соединений, частей смесей определенного состава, частей сложных смесей или смесей неопределенного состава, к примеру, масел животного или растительного происхождения, и могут добавляться при биологических процессах, к примеру, при кондиционировании. Концентрации компонентов могут варьировать от перечисленных величин в пределах диапазонов, которые будут очевидны специалистам в данной области.

Пример 6. Трансфекция клеток синтетической РНК.

Для трансфекции в 6-луночных планшетах сначала отдельно разводили 2 мкг РНК и 6 мкл реагента для трансфекции (Lipofectamine™ RNAiMAX, Life Technologies Corporation) в среде для комплексообразования (Opti-MEM®, Life Technologies Corporation) до общего объема 60 мкл каждого разведения. Потом разведенную РНК и реагент для трансфекции смешивали и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре в соответствии с инструкциями производителя реагента для трансфекции. Потом добавляли комплексы к клеткам в культуре. К каждой лунке 6-луночного планшета, которая уже содержала 2 мл среды для трансфекции на лунку, добавляли между 30 мкл и 240 мкл комплексов. Потом планшеты осторожно встряхивали для распределения комплексов по всей лунке. Перед заменой среды свежей средой для трансфекции (2 мл/лунку) клетки инкубировали с комплексами от 2 часов до в течение ночи. Объемы масштабировали для трансфекции в 24-луночных и 96-луночных планшетах. Через 20-24 часа после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела против Oct4. Для определения относительной токсичности РНК ядра окрашивали и подсчитывали.

Пример 7. Анализ способности препаратов обработанного сывороточного альбумина человека обеспечивать трансфекцию нуклеиновых кислот и РНК-репрограммирование.

Первичные неонатальные фибробласты человека культивировали в среде без или с 5 мг/мл САЧ. Скринингу подвергали фракцию Коэна V (A6784, Sigma-Aldrich Co. LLC.) и четыре разных рекомбинантых препаратов САЧ (A6608, A7736, A9731 и A9986, все получены из Sigma-Aldrich Co. LLC.). В соответствии с Примером 2 клетки трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. В то время как нетрансфицированные клетки хорошо росли в среде, содержавшей любые из препаратов САЧ, в трансфицированных лунках каждый из препаратов САЧ вызывал появление сильно отличавшихся морфологий клеток и плотностей клеток и ни в одной не произошло морфологических изменений, указывавших на прохождение репрограммирования.

Пример 8. Получение обработанного октаноатом сывороточного альбумина человека.

С 22 мМ хлорида натрия и 16 мМ октаноата натрия (Sigma-Aldrich Co. LLC) предварительно инкубировали 10% раствор САЧ и перед приготовлением полной среды инкубировали при 37 C в течение 3 часов.

Пример 9. Обработка сывороточного альбумина человека с использованием ионообменной хроматографии.

Растворением 2 г САЧ в 10 мл воды без нуклеазной активности при осторожном перемешивании при комнатной температуре готовили 20% раствор рекомбинантного САЧ, продуцированного в Pichia pastoris (A7736, Sigma-Aldrich Co. LLC.). Потом раствор САЧ деионизировали сначала добавлением 1 г деионизирующей смолы в смешанном слое (AG 501-X8(D), Bio-Rad Laboratories Inc.) и покачиванием в течение 1 ч при комнатной температуре. Потом раствор САЧ декантировали в пробирке, содержавшей 5 г свежей смолы и качали в течение 4 ч при комнатной температуре. Наконец, деионизированный раствор САЧ декантировали, доводили до 10% содержания общего белка водой без нуклеазной активности, стерилизовали фильтрованием с использованием мембранного фильтра из ПЭС с размером пор 0,2 мкм и хранили при 4 C.

Пример 10. Анализ эффективности трансфекции и жизнеспособности клеток, культивированных в среде, содержащей обработанный октаноатом сывороточный альбумин человека.

Первичные неонатальные фибробласты человека культивировали в среде, содержавшей рекомбинантный САЧ, обработанный в соответствии с Примером 8 и/или Примером 9, или содержавшей обработанный полученный из крови САЧ (Bio-Pure HSA, Biological Industries). Клетки, начиная с 0 суток, в соответствии с Примером 2 ежедневно трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. Фотографии делали на 3 сутки. В лунках, содержавших октаноат, наблюдали несколько небольших областей с клетками, претерпевшими морфологические изменения, напоминавшие мезенхимально-эпителиальный переход, что указывает на увеличенную эффективность трансфекции. В образцах, содержавших обработанный полученный из крови САЧ, наблюдали много больших областей с морфологическими изменениями, напоминавшими мезенхимально-эпителиальный переход. В обоих случаях морфологические изменения были свойственны репрограммированию.

Пример 11. Репрограмирование фибробластов человека с использованием среды, содержащей обработанный октаноатом сывороточный альбумин человека.

Первичные неонатальные фибробласты человека наносили на 6-луночные планшеты при плотности 5000 клеток/лунку в среде для фибробластов (DMEM+10% фетальной бычьей сыворотки). Через 6 часов среду заменяли средой для трансфекции, содержавшей обработанный октаноатом САЧ. Клетки, начиная с 0 суток, в соответствии с Примером 2 ежедневно трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. На 5 сутки лунка содержала несколько областей с клетками, проявившими соответствующую репрограммированию морфологию. Этот эксперимент не включал использование фидеров или иммуносупрессантов.

Пример 12. Анализ эффективности трансфекции и жизнеспособности клеток, культивированных в среде, содержащей обработанный ионообменной смолой сывороточный альбумин человека.

Первичные неонатальные фибробласты человека, начиная с 0 суток, в соответствии с Примером 2 трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. Фотографии делали на 2 сутки. Клетки в лунке, содержавшей необработанный САЧ, проявили низкую жизнеспособность по сравнению с лункой, содержавшей обработанный полученный из крови САЧ или обработанный ионообменной смолой рекомбинантный САЧ.

Пример 13. Репрограмирование фибробластов человека с использованием обработанного ионообменной смолой сывороточного альбумина человека.

Первичные неонатальные фибробласты человека наносили на 6-луночные планшеты на фидеры при плотности 10000 клеток/лунку в среде для фибробластов (DMEM+10% фетальной бычьей сыворотки). Клетки, начиная с 0 суток, в соответствии с Примером 2 ежедневно трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. На 4 сутки выполняли пересев с индексом разведения 1:20. Фотографии делали на 10 сутки. Лунка содержала много областей с клетками, проявившими соответствующую репрограммированию морфологию. В лунках, подвергшихся воздействию среды для культивирования клеток, содержавшей необработанный САЧ, не наблюдалось колоний.

Пример 14. Репрограмирование фибробластов человека без использования фидеров или иммуносупрессантов.

Первичные фибробласты человека наносили на 6-луночные планшеты при плотности 20000 клеток/лунку в среде для фибробластов (DMEM+10% фетальной бычьей сыворотки). Через 6 часов среду заменяли средой для трансфекции, содержавшей обработанный САЧ и не содержавшей иммуносупрессанты, и клетки в соответствии с Примером 2 ежедневно трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1, за исключением того, что доза РНК была снижена до 1 мкг/лунку и всего было выполнено 5 трансфекций. Фотографии делали на 7 сутки. Уже на 5 сутки стали видны небольшие колонии клеток, проявившие соответствующую репрограммированию морфологию. На 7 сутки среду заменяли DMEM/F12+20% раствор для замещения сыворотки Knockout™ (Life Technologies Corporation)+1X раствор с незаменимыми аминокислотами+2 мM L-глутамина, кондиционированную на облученных эмбриональных фибробластах мыши в течение 24 часов и потом добавляли 20 нг/мл бФРФ и 10 мкM Y-27632. Уже на 8 сутки стали видны большие колонии с репрограммированной морфологией. Колонии собирали на 10 сутки и наносили на лунки, покрытые экстрактом базальных мембран (Cultrex® Human BME Pathclear®, Trevigen Inc.). Клетки быстро росли и для получения линий пересевались. Полученные линии положительно окрашивались на маркеры плюрипотентных стволовых клеток Oct4 и SSEA4. Весь протокол повторяли и получали сходные результаты.

Пример 15. Эффективная быстрая деривация и репрограммирование клеток из ткани биоптата кожи человека.

Биопсию на всю толщину проводили дермальным пробойником на здоровом добровольце возрастом 31 год в соответствии с утвержденным протоколом. Вкратце, область кожи на левой верхней части руки анестезировали местным введением 2,5% лидокаина. Поле дезинфицировали 70% изопропанолом и выполняли дермальную биопсию на всю толщину с использованием пробойника диаметром 1,5 мм. Ткань промывали фосфатно-солевым буферным раствором (PBS), помещали в пробирку на 1,5 мл, содержавшую 250 мкл TrypLE™ Select CTS™ (Life Technologies Corporation), и инкубировали при 37 C в течение 30 мин. Потом ткань переносили в пробирку на 1,5 мл, содержавшую 250 мкл DMEM/F12-CTS™ (Life Technologies Corporation)+5 мг/мл коллагеназы и инкубировали при 37 C в течение 2 ч. Используя пинцет удаляли эпидермис и ткань диссоциировали механическим способом. Клетки дважды промывали DMEM/F12-CTS™ и наносили в покрытые фибронектином лунки 24-луночных и 96-луночных планшетов. У того же добровольца проводили флеботомию и в пробирки Vacutainer® SST™ (Becton, Dickinson and Company) собирали венозную кровь. Сыворотку выделяли в соответствии с протоколом производителя. Изогенную среду для нанесения готовили смешиванием DMEM/F12-CTS™+2 мM L-аланил-L-глутамина (Sigma-Aldrich Co. LLC.)+20% сыворотки человека. Клетки из образца дермальной ткани наносили или в среде для трансфекции или в изогенной среде для нанесения. Через 2 часа лунки промывали и среду заменяли средой для трансфекции. На 2 сутки присоединялось и начинало размножаться множество клеток с морфологией фибробластов. Клетки, начиная с 2 суток, в соответствии с Примером 2 трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1, с использованием всех объемов, масштабированных для соответствия меньшим лункам. На 5 сутки наблюдали области с клетками с соответствующей репрограммированию морфологией.

Пример 16. Репрограмирование фибробластов человека с использованием синтетической РНК, содержавшей неканонические нуклеотиды.

Первичные фибробласты человека наносили в 6-луночные планшеты, покрытые рекомбинантным фибронектином человека и рекомбинантным витронектином человека (каждый разведен в DMEM/F12 до концентрации 1 мкг/мл, 1 мл/лунку, с инкубированием при комнатной температуре в течение 1 ч), при плотности 20000 клеток/лунку в среде для трансфекции. На следующие сутки клетки как в Примере 2 трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1, за исключением того, что доза РНК составляла 0,5 мкг/лунку в 1 сутки, 0,5 мкг/лунку на 2 сутки и 2 мкг/лунку на 3 сутки. Фотографии делали на 4 сутки. На 4 сутки были видны небольшие колонии клеток, проявившие соответствующую репрограммированию морфологию.

Пример 17. Репрограмирование фибробластов человека с некондиционированной средой для трансфекции.

Первичные фибробласты человека наносили в 6-луночные планшеты, покрытые рекомбинантным фибронектином человека и рекомбинантным витронектином человека (каждый разведен в DMEM/F12 до концентрации 1 мкг/мл, 1 мл/лунку, с инкубированием при комнатной температуре в течение 1 ч), при плотности 20000 клеток/лунку в среде для трансфекции. На следующие сутки клетки как в Примере 2 трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1, за исключением того, что доза РНК составляла 0,5 мкг/лунку в 1 сутки, 0,5 мкг/лунку на 2 сутки, 2 мкг/лунку на 3 сутки, 2 мкг/лунку на 4 сутки и 4 мкг/лунку на 5 сутки. Уже на 5 сутки стали видны небольшие колонии клеток, проявившие соответствующую репрограммированию морфологию. На 7 сутки среду заменяли DMEM/F12+20% раствор для замещения сыворотки Knockout™ (Life Technologies Corporation)+1X раствор с незаменимыми аминокислотами+2 мM L-глутамина, кондиционированную на облученных эмбриональных фибробластах мыши в течение 24 часов и потом добавляли 20 нг/мл бФРФ и 10 мкM Y-27632. Уже на 8 сутки стали видны большие колонии с репрограммированной морфологией. Колонии собирали на 10 сутки и наносили на лунки, покрытые экстрактом базальных мембран (Cultrex® Human BME Pathclear®, Trevigen Inc.). Клетки быстро росли и для получения линий пересевались.

Пример 18. Репрограмирование фибробластов человека с использованием синтетической РНК, содержащей неканонические нуклеотиды.

Первичные неонатальные фибробласты человека наносили в 6-луночные планшеты, покрытые рекомбинантным фибронектином человека и рекомбинантным витронектином человека (каждый разведен в DMEM/F12 до концентрации 1 мкг/мл, 1 мл/лунку, с инкубированием при комнатной температуре в течение 1 ч), при плотности 10000 клеток/лунку в среде для трансфекции. На следующие сутки клетки как в Примере 2 трансфицировали с использованием РНК, содержавшей A, 0,5 7dG, 0,5 5mU и 5mC, и дозой РНК 0,5 мкг/лунку в 1 сутки, 0,5 мкг/лунку на 2 сутки, 2 мкг/лунку на 3 сутки, 2 мкг/лунку на 4 сутки и 4 мкг/лунку на 5 сутки. Уже на 5 сутки стали видны небольшие колонии клеток, проявившие соответствующую репрограммированию морфологию. На 6 сутки среду заменяли средой для поддержания. Клетки окрашивали с использованием антитела против Oct4. По всей лунки были видны Oct4-положительные колонии клеток, проявившие соответствующую репрограммированию морфологию.

Пример 19. Репрограммирование первичных фибробластов взрослого человека с использованием синтетической РНК без применения фидеров, пересевов, иммуносупрессантов и кондиционирования.

Лунки 6-луночного планшета покрывали смесью рекомбинантного фибронектина человека и рекомбинантного витронектина человека (1 мкг/мл в DMEM/F12, 1 мл/лунку) в течение 1 ч при комнатной температуре. Первичные фибробласты взрослого человека наносили на покрытые лунки в среде для трансфекции при плотности 10000 клеток/лунку. Клетки поддерживали при 37 C, 5% CO₂ и 5% O₂. Начиная со следующих суток, в соответствии с Примером 2 ежедневно в течение 5 суток клетки трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. Общее количество РНК, трансфицированное каждые из 5 суток, составляло 0,5 мкг, 0,5 мкг, 2 мкг, 2 мкг и 4 мкг, соответственно. Начиная с четвертой трансфекции, среду заменяли дважды в сутки. На сутки следующие за последней трансфекцией среду заменяли средой для трансфекции с добавкой 10 мкМ Y-27632. Альтернативно, общее количество РНК, трансфицированное каждые сутки составляло 0,25 мкг, 0, 0,5 мкг, 0,5 мкг и 0,5 мкг, соответственно, или 0,25 мкг, 0, 0,25 мкг, 0,25 мкг, 0,25 мкг и 0,25 мкг, соответственно. В некоторых экспериментах во время проведения трансфекции среда для трансфекции заменялась только раз в сутки. На 4 сутки в каждой трансфицированной лунке были видны компактные колонии клеток с репрограммированной морфологией.

Пример 20. Эффективная быстрая деривация и репрограммирование клеток из ткани биоптата кожи взрослого человека.

Биопсию на всю толщину проводили дермальным пробойником на здоровом добровольце возрастом 31 год в соответствии с утвержденным протоколом. Вкратце, область кожи на левой верхней части руки анестезировали местным введением 2,5% лидокаина. Поле дезинфицировали 70% изопропанолом и выполняли дермальную биопсию на всю толщину с использованием пробойника диаметром 1,5 мм. Ткань промывали фосфатно-солевым буферным раствором (PBS), помещали в пробирку на 1,5 мл, содержавшую 250 мкл TrypLE Select CTS (Life Technologies Corporation), и инкубировали при 37 C в течение 30 мин. Потом ткань переносили в пробирку на 1,5 мл, содержавшую 250 мкл DMEM/F12-CTS (Life Technologies Corporation)+5 мг/мл коллагеназы и инкубировали при 37 C в течение 2 ч. Используя пинцет удаляли эпидермис и ткань диссоциировали механическим способом. Клетки дважды промывали DMEM/F12-CTS. У того же добровольца проводили флеботомию и в пробирки Vacutainer SST (Becton, Dickinson and Company) собирали венозную кровь. Сыворотку выделяли в соответствии с инструкциями производителя. Изогенную среду для нанесения готовили смешиванием DMEM/F12-CTS+2 мM L-аланил-L-глутамина (Sigma-Aldrich Co. LLC.)+20% сыворотка человека. Клетки из образца дермальной ткани наносили на покрытую фибронектином лунку 6-луночного планшета в изогенной среде для нанесения. На 2 сутки присоединялось и начинало размножаться множество клеток с морфологией фибробластов. Клетки размножали и замораживали в устройстве Synth-a-Freeze (Life Technologies Corporation).

Клетки пересевали в 6-луночные планшеты при плотности 5000 клеток/лунку. На следующие сутки среду заменяли средой для трансфекции и клетки трансфицировали как в Примере 2 с использованием РНК, содержавшей A, 0,5 7dG, 0,4 5mU и 5mC, и дозой РНК 0,5 мкг/лунку в 1 сутки, 0,5 мкг/лунку на 2 сутки, 2 мкг/лунку на 3 сутки, 2 мкг/лунку на 4 сутки и 2 мкг/лунку на 5 сутки. Некоторые лунки получали дополнительные трансфекции по 2 мкг/лунку на 6 сутки и 7 сутки. В дополнение к этому, некоторые лунки получали 2 нг/мл ТФР-β1, начиная с 4 суток. На 6 сутки среду заменяли средой для поддержания. Между 5 сутками и 10 сутками стали видны колонии клеток, проявившие соответствующую репрограммированию морфологию. Колония быстро росли и многие проявили морфологию, сходную с такой у колоний эмбриональнальных стволовых клеток. Колонии собирали и переносили в лунки, покрытые рекомбинантным фибронектином человека и рекомбинантным витронектином человека (каждый разведен в DMEM/F12 до концентрации 1 мкг/мл, 1 мл/лунку, с инкубированием при комнатной температуре в течение 1 ч). Клетки быстро росли и для получения линий пересевались.

Пример 21. Высокоэффективное редактирование генов повторными трансфекциями с помощью RiboSlice.

Первичные фибробласты человека наносили как в Примере 19. На следующие сутки клетки как в Примере 2 трансфицировали РНК, синтезированной в соответствии с Примером 1. На следующие сутки клетки в одной из лунок трансфицировали второй раз. Через двое суток после второй трансфекции эффективность редактирования генов измеряли с использованием анализа с мутациеспецифическими нуклеазами.

Пример 22. Трансфекция клеток синтетической РНК, содержащей неканонические нуклеотиды, и ДНК, кодирующей матрицу для репарации.

Для трансфекции в 6-луночных планшетах сначала отдельно разводили 1 мкг РНК, кодировавшей редактирующие гены белки, таргетирующие экзон 16 гена APP человека, 1 мкг одноцепочечной ДНК-матрицы для репарации, содержавшей сайт рестрикции PstI, который отсутствовал в клетках-мишенях, и 6 мкл реагента для трансфекции (Lipofectamine RNAiMAX, Life Technologies Corporation) в среде для комплексообразования (Opti-MEM, Life Technologies Corporation) до общего объема 120 мкл. Потом разведенную РНК, матрицу для репарации и реагент для трансфекции смешивали и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре в соответствии с инструкциями производителя реагента для трансфекции. Комплексы добавляли к клеткам в культуре. К каждой лунке 6-луночного планшета, которая уже содержала 2 мл среды для трансфекции на лунку, добавляли приблизительно 120 мкл комплексов. Планшеты осторожно встряхивали для распределения комплексов по всей лунке. Перед заменой среды свежей средой для трансфекции (2 мл/лунку) клетки инкубировали с комплексами от 4 часов до в течение ночи. На следующие сутки среду заменяли на DMEM+10% ФБС. Через двое суток после трансфекции выделяли и очищали геномную ДНК. Участок внутри гена APP амплифицировали методом ПЦР, а амплифицированный продукт расщепляли PstI и анализировали методом гель-электрофореза.

Пример 23. Исследование безопасности RiboSlice in vivo.

40 самкам мышей NCr nu/nu подкожно инъецировали 5×10⁶ опухолевых клеток MDA-MB-231 в 50% Matrigel (BD Biosciences). Объем инъекции клеток составлял 0,2 мл/мышь. В начале исследования возраст мыши составлял от 8 до 12 недель. Когда опухоли достигали среднего размера 100-150 мм³, проводился подбор пар, животных разделяли на 4 группы из 10 животных в каждой и начиналось лечение. Массу тела измеряли каждые сутки в течение первых 5 суток, а потом дважды в неделю до конца исследования. Лечение заключалось в применении RiboSlice BIRC5-1.2, образовавшего комплекс с носителем (Lipofectamine 2000, Life Technologies Corporation). Для приготовления для каждой группы раствора дозирования пипеткой переносили 308 мкл буферного раствора для комплексообразования (Opti-MEM, Life Technologies Corporation) в каждую из двух стерильных пробирок на 1,5 мл без РНКазной активности. В одну из двух пробирок добавляли 22 мкл RiboSlice BIRC5-1.2 (500 нг/мл) и содержимое пробирки перемешивали пипетированием. Во вторую пробирку добавляли 22 мкл плацебо. Содержимое второй пробирки перемешивали, потом переносили в первую пробирку и пипетированием смешивали с содержимым первой пробирки для образования комплексов. Комплексы инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут. Во время инкубации наполняли шприцы. Животным внутривенно или внутрь опухолей инъецировали общую дозу 1 мкг РНК/животное в общем объеме 60 мкл/животное. Всего провели 5 обработок с введением инъекций каждый второй день. Дозы не корректировали на массу тела. За животными наблюдали 17 суток. Не наблюдалось статистически значимого снижения средней массы тела, что продемонстрировало безопасность редактирующей гены РНК RiboSlice in vivo.

Пример 24. Скрининг реагентов для доставки нуклеиновых кислот в клетки.

Реагенты для доставки, включавшие полиэтиленимин (ПЭИ), различные коммерческие реагенты для трансфекции на основе липидов, реагенты для трансфекции на основе пептидов (N-TER, Sigma-Aldrich Co. LLC.) и несколько реагентов для доставки на основе липидов и на основе стеролов подвергали скринингу на эффективность трансфекции и токсичность in vitro. Проводили образование комплексов реагентов для доставки с RiboSlice BIRC5-1.2 и комплексы доставляли в клетки HeLa в культуре. Токсичность оценивали путем анализа плотности клеток после 24 ч после трансфекции. Эффективность трансфекции оценивали посредством анализа морфологических изменений. Испытанные реагенты проявляли широкий диапазон токсичности и эффективности трансфекции. Реагенты, содержавшие большую пропорцию сложноэфирных связей проявили более низкую токсичность, чем реагенты содержавшие меньшую пропорцию сложноэфирных связей или не содержавших сложноэфирных связей.

Пример 25. Высококонцентрированный липосомальный препарат RiboSlice.

Высококонцентрированный липосомальный препарат RiboSlice получали смешиванием 1 мкг РНК в растворе 500 нг/мл с 3 мкл среды для комплексообразования (Opti-MEM, Life Technologies Corporation) и 2,5 мкл реагента для трансфекции (Lipofectamine 2000, Life Technologies Corporation) на мкг РНК с 2,5 мкл среды для комплексообразования. Потом разведенную РНК и реагент для трансфекции смешивали и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре для образования высококонцентрированного липосомального препарата RiboSlice. Альтернативно, использовался реагент для трансфекции, содержавший DOSPA или DOSPER.

Пример 26. Исследование эффективности RiboSlice in vivo - модель подкожной глиомы.

40 самкам мышей NCr nu/nu подкожно инъецировали 1×10⁷ опухолевых клеток U-251. Объем инъекции клеток составлял 0,2 мл/мышь. В начале исследования возраст мыши составлял от 8 до 12 недель. Когда опухоли достигали среднего размера 35-50 мм³, проводился подбор пар, животных разделяли на 4 группы из 10 животных в каждой и начиналось лечение. Массу тела измеряли каждые сутки в течение первых 5 суток, а потом дважды в неделю до конца исследования. Дважды в неделю проводили измерения штангенциркулем и рассчитывали размер опухолей. Лечение заключалось в применении RiboSlice BIRC5-2.1, образовавшего комплекс с носителем (Lipofectamine 2000, Life Technologies Corporation). Для получения раствора дозирования пипеткой переносили 294 мкл буферного раствора для комплексообразования (Opti-MEM, Life Technologies Corporation) в пробирку, содержавшую 196 мкл RiboSlice BIRC5-1.2 (500 нг/мкл), и содержимое пробирки перемешивали пипетированием. В пробирку, содержавшую 245 мкл носителя, пипеткой переносили 245 мкл буферного раствора для комплексообразования. Содержимое второй пробирки перемешивали, потом переносили в первую пробирку и пипетированием смешивали с содержимым первой пробирки для образования комплексов. Комплексы инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут. Во время инкубации наполняли шприцы. Животным внутрь опухолей инъецировали общую дозу 2 мкг или 5 мкг РНК/животное в общем объеме 20 мкл или 50 мкл/животное. Всего провели 5 обработок с введением инъекций каждый второй день. Дозы не корректировали на массу тела. За животными наблюдали 25 суток.

Пример 27. Липосомальный состав и инкапсулирование нуклеиновых кислот.

Липосомы получают с использованием следующего состава: 3,2 мг/мл N-(карбонилэтоксиполиэтиленгликоль 2000)-1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина (MPEG2000-DSPE), 9,6 мг/мл полностью гидрогенизированного фосфатидилхолина, 3,2 мг/мл холестерина, 2 мг/мл сульфата аммония и гистидина в качестве буферного вещества. pH контролируется с использованием гидроксида натрия, а изотоничность поддерживается с использованием сахарозы. Для образования липосом липиды смешивают с органическим растворителем, высушивают, гидратируют с перемешиванием и формируют экструзией через поликарбонатный фильтр со средним размером пор 800 нм. Нуклеиновые кислоты инкапсулируют соединением 10 мкг липосомального состава на 1 мкг нуклеиновой кислоты и инкубированием при комнатной температуре в течение 5 минут.

Пример 28. Липосомальный состав, таргетирующий фолат.

Липосомы готовили в соответствии с Примером 62, за исключением того, что к липидной смеси добавляли 0,27 мг/мл 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[фолат(полиэтиленгликоль)-5000] (FA-MPEG5000-DSPE).

Пример 29. Терапия, включающая липосомальную кодирующую белок РНК.

Липосомы с инкапсулированной синтетической РНК, кодирующей лечебный белок, синтезированной в соответствии с Примером 1, получают в соответствии с Примером 27 или Примером 28. Липосомы вводят инъекцией или внутривенной инфузией.

Пример 30. Создание ivT-РНК матрицы эластина.

Общую РНК извлекали из неонатальных дермальных фибробластов человека с использованием мининабора RNeasy (QIAGEN GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. кДНК, кодировавшую эластин человека, получали с использованием обратной транскриптазы MonsterScript™ (Epicentre Biotechnologies) и праймера: AAAAAAACCGGT TCATTTTCTCTTCCGGCCAC. Матрицу для транскрипции in vitro (ivT) получали из кДНК методом ПЦР-амплификации кодирующей эластин последовательности (CDS) с использованием праймеров: F: AAAAAAGCTAGCATGGCGGGTCTGACG и R: AAAAAAACCGGTTCATTTTCTCTTCCGGCCAC. Потом ПЦР-продукт очищали с использованием электрофореза в агарозном геле и набора для гель-экстракции QIAquick (QIAGEN GmbH) и клонировали в векторе, содержавшем 5ʹ- и 3ʹ-нетранслируемые области бета-глобина человека (HBB) и сильную последовательность Козак. Перед синтезом РНК вектор амплифицировали, очищали и линеаризировали.

Пример 31. Синтез РНК эластина.

РНК, кодировавшую эластин человека, синтезировали с использованием ДНК-матрицы из Примера 30 и набора для синтеза РНК с высоким выходом T7 (New England Biolabs Inc.) в соответствии с инструкциями производителя (табл. 4). Образцы РНК анализировали методом электрофореза в агарозном геле для оценки качества РНК (ФИГ. 1). Потом РНК разбавляли до 200 нг/мл и добавляли ингибитор РНКазы (Superase⋅In™, Life Technologies Corporation) в концентрации 1 мкл/200 мкг РНК. Раствор РНК хранили при 4 C.

Пример 32. Получение обработанного октаноатом сывороточного альбумина человека.

С 16 мМ октаноата натрия (Sigma-Aldrich Co. LLC) предварительно инкубировали 10% раствор САЧ и перед приготовлением полной среды инкубировали при 37 C в течение 3 часов.

Пример 33. Состав для доставки нуклеиновых кислот in vivo.

Состав для доставки нуклеиновых кислот in vivo готовят соединением РНК, синтезированной в соответствии с Примером 31, и сывороточного альбумина человека, обработанного в соответствии с Примерами 8, 9 и/или 32, в подходящем буферном растворе (например, воде, DMEM/F12, среде для комплексообразования, Opti-MEM и т.п.).

Пример 34. Увеличение продукции эластина в коже трансдермальной инъекцией обработанного альбумина и РНК, кодирующей эластин, через шприц.

Составом из примера 33 наполняют инсулиновый шприц с иглой 28 калибра и длиной 0,5 дюйма и доставляют его в дерму пациента через эпидермис. При необходимости вводят дополнительные дозы.

Пример 35. Увеличение продукции эластина в коже трансдермальной инъекцией обработанного альбумина и РНК, кодирующей эластин, через моторизированную микроигольчатую матрицу.

Составом из примера 33 наполняют камеру моторизированной микроигольчатой матрицы, настроенной на глубину проникновения приблизительно 0,1 мм. Микроигольчатая матрица доставляет состав в дерму пациента через эпидермис.

Пример 36. Увеличение продукции коллагена в коже трансдермальной инъекцией обработанного альбумина и РНК, кодирующей коллаген.

Состав из примера 33 получают с использованием РНК, кодирующей коллаген человека I типа и/или III типа. Состав доставляют как в Примере 34 или 35.

Пример 37. Увеличение продукции актина в скелетной мышце внутримышечной инъекцией обработанного альбумина и РНК, кодирующей актин.

Состав из примера 33 получают с использованием РНК, кодирующей скелетный актин альфа. Составы доставляют в организм пациента через внутримышечную инъекцию.

Пример 38. Лечение для заживления ран.

Состав из примера 33 получают с использованием РНК, кодирующей основный фактор роста фибробластов. Состав доставляют как в Примере 34 или 35.

Пример 39. Противорубцовое лечение.

Состав из примера 33 получают с использованием РНК, кодирующей коллагеназу. Состав доставляют как в Примере 34 или 35.

Пример 40. Создание ivT-РНК матрицы тирозиназы.

Общую РНК извлекали из эпидермальных меланоцитов человека с использованием мининабора RNeasy (QIAGEN GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. кДНК, кодировавшую тирозиназу человека, получали с использованием обратной транскриптазы MonsterScript™ (Epicentre Biotechnologies). Матрицу для транскрипции in vitro (ivT) получали из кДНК методом ПЦР-амплификации кодирующей тирозиназу последовательности (CDS). Потом ПЦР-продукт очищали с использованием электрофореза в агарозном геле и набора для гель-экстракции QIAquick (QIAGEN GmbH) и клонировали в векторе, содержавшем 5ʹ- и 3ʹ-нетранслируемые области бета-глобина человека (HBB) и сильную последовательность Козак. Перед синтезом РНК вектор амплифицировали, очищали и линеаризировали.

Пример 41. Синтез РНК тирозиназы.

РНК, кодировавшую тирозиназу человека, синтезировали в соответствии с Примером 1 с использованием ДНК-матрицы из Примера 40 и набора для синтеза РНК с высоким выходом T7 (New England Biolabs Inc.) в соответствии с инструкциями производителя (табл. 4). Образцы РНК анализировали методом электрофореза в агарозном геле для оценки качества РНК. Потом РНК разбавляли до 1 мкг/мкл. Раствор РНК хранили при 4 C.

Пример 42. Получение обработанного октаноатом сывороточного альбумина человека.

С 16 мМ октаноата натрия (Sigma-Aldrich Co. LLC) предварительно инкубировали 10% раствор САЧ и перед приготовлением полной среды инкубировали при 37 C в течение 3 часов.

Пример 43. Увеличение продукции меланина в коже трансдермальной инъекцией РНК, кодирующей тирозиназу, через шприц.

РНК из Примера 41 наполняли шприц и доставляли в дерму вентральной части предплечья здорового пациента-мужчины возрастом 33 года в течение приблизительно 30 секунд.

Пример 44. Увеличение продукции меланина в коже комбинированной доставкой РНК, кодирующей тирозиназу, и электропорацией.

Область кожи, обработанная в Примере 43, подвергалась воздействию электрических импульсов между 10 В и 155 В и между приблизительно 10 миллисекундами и приблизительно 1 секундой с использованием двухэлектродной матрицы электрически подключенной к конденсатору. Пациент сообщал об ощущении покалывания на всех напряжениях и глубинах проникновения. Через 24-48 часов обработанная область стала темнее (см. ФИГ. 16). Эксперименты повторяли несколько раз со сходным результатом.

Пример 45. Увеличение продукции меланина в коже местным или внутрикожным введением РНК, кодирующей тирозиназу.

РНК из Примера 41 или липосомы из Примера 29 наносили непосредственно на кожу с или без разрушения рогового слоя или инъецировали внутрикожно с использованием дозы один микрограмм или меньше на квадратный сантиметр. Необязательно накладывали электрическое поле как в Примере 44 или использовали пластырь с контактной поверхностью для усиления доставки РНК.

Пример 46. Увеличение продукции эластина в коже трансдермальной доставкой РНК, кодирующей эластин.

РНК, кодировавшую эластин, готовили в соответствии с Примером 1. РНК доставляют как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 47. Увеличение продукции коллагена в коже трансдермальной доставкой РНК, кодирующей коллаген.

РНК, кодировавшую коллаген, готовили в соответствии с Примером 1. РНК доставляют как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 48. Терапия анемии, включающая доставку РНК, кодирующую эритропоэтин или дарбэпоэтин.

РНК, кодировавшую дарбэпоэтин альфа, готовили в соответствии с Примером 1. РНК доставляют как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 49. Увеличение продукции актина в скелетной мышце внутримышечной доставкой РНК, кодирующей актин.

РНК, кодирующую актин, готовят в соответствии с Примером 1. РНК доставляют в организм пациента через внутримышечную инъекцию с и без применения электрического поля как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 50. Лечение для заживления ран.

РНК, кодирующую основный фактор роста фибробластов, готовят в соответствии с Примером 1. РНК доставляют как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 51. Противорубцовое лечение.

РНК, кодирующую коллагеназу, готовят в соответствии с Примером 1. РНК доставляют как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 52. Получение ботулотоксина.

РНК, кодирующую ботулотоксин, готовят в соответствии с Примером 1. РНК доставляют как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 53. Увеличение клетками кожи продукции коллагена трансфекцией РНК, кодирующей коллаген I.

РНК, содержавшую кодирующую последовательность гена COL1A1 человека, синтезировали в соответствии с Примером 1. Первичные дермальные фибробласты человека наносили в лунки 24-луночного планшета и трансфицировали в соответствии с Примером 2. Между 24 и 72 часами после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела, таргетирующего коллаген I. В трансфицированных лунках было видно много внеклеточных отложений коллагена (ФИГ. 17).

Пример 54. Увеличение клетками кожи продукции коллагена трансфекцией РНК, кодирующей коллаген VII.

РНК, содержавшую кодирующую последовательность гена COL7 человека, синтезировали в соответствии с Примером 1. Первичные дермальные фибробласты человека наносили в лунки 24-луночного планшета и трансфицировали в соответствии с Примером 2. Между 24 и 72 часами после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали с использованием антитела, таргетирующего коллаген VII. Трансфицированные клетки проявили высокие уровни коллагена VII по сравнению с нетрансфицированным контролем (ФИГ. 18).

Пример 55. Увеличение продукции коллагена в коже трансдермальной инъекцией РНК, кодирующей коллаген I или коллаген VII, через шприц.

РНК, содержавшую кодирующую последовательность гена COL1A1 человека или гена COL7 человека, синтезировали в соответствии с Примером 1. РНК наполняют шприц и доставляют в дерму пациента в течение приблизительно 30 секунд или как в Примерах 43, 44 или 45.

Пример 56. Увеличение продукции коллагена в коже комбинированной доставкой РНК, кодирующей коллаген I или коллаген VII, и электропорацией.

Область кожи, обработанная в Примере 55, подвергается воздействию электрических импульсов между 10 В и 155 В и между приблизительно 50 миллисекундами и приблизительно 1 секундой с использованием мультиэлектродной матрицы электрически подключенной к источнику питания.

ЭКВИВАЛЕНТЫ

Специалисты в данной области поймут или способны установить с использованием только лишь обычного проведения экспериментов многочисленные эквиваленты специальным вариантам реализации изобретения, описанные исключительно в данном документе. Подразумевается, что такие эквиваленты должны охватываться объемом следующей формулы изобретения.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПУТЕМ ССЫЛКИ

Все патенты и публикации, на которые ссылаются в данном документе, тем самым включены посредством ссылки в полном объеме.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Angel, Matthew

Rohde, Christopher

<120> СПОСОБЫ И ПРОДУКТЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ И ДОСТАВКИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

<130> FAB-008PC

<150> US 61/934397

<151> 2014-01-31

<150> US 62/038608

<151> 2014-08-18

<150> US 62/069667

<151> 2014-10-28

<160> 144

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 195

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 1

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Lys Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile

35 40 45

Ser Thr Lys Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Lys His Leu

50 55 60

Gly Gly Ser Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala

65 70 75 80

Ile Ile Leu Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala

85 90 95

Ser His Thr Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu

115 120 125

Asp Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr

130 135 140

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly

145 150 155 160

Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

180 185 190

Ile Ser Tyr

195

<210> 2

<211> 195

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 2

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Lys Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile

35 40 45

Ser Thr Lys Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Glu His Leu

50 55 60

Gly Gly Ser Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala

65 70 75 80

Ile Ile Leu Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala

85 90 95

Ser His Thr Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu

115 120 125

Asp Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr

130 135 140

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly

145 150 155 160

Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

180 185 190

Ile Ser Tyr

195

<210> 3

<211> 195

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 3

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Pro Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile

35 40 45

Ser Thr Lys Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Lys His Leu

50 55 60

Gly Gly Ser Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala

65 70 75 80

Ile Ile Leu Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala

85 90 95

Ser His Thr Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu

115 120 125

Asp Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr

130 135 140

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly

145 150 155 160

Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

180 185 190

Ile Ser Tyr

195

<210> 4

<211> 195

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 4

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Pro Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile

35 40 45

Ser Thr Lys Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Glu His Leu

50 55 60

Gly Gly Ser Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala

65 70 75 80

Ile Ile Leu Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala

85 90 95

Ser His Thr Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu

115 120 125

Asp Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr

130 135 140

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly

145 150 155 160

Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

180 185 190

Ile Ser Tyr

195

<210> 5

<211> 191

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 5

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Pro Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile Ser Thr Lys Ile

35 40 45

Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Glu His Leu Gly Gly Ser Asn

50 55 60

Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala Ile Ile Leu Asp

65 70 75 80

Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala Ser His Thr Asp

85 90 95

Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg Lys Glu Glu Ile

100 105 110

Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu Asp Asn Thr Tyr

115 120 125

Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr Lys Glu Gln Leu

130 135 140

Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly Ala Leu Glu Phe

145 150 155 160

Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr Gln Lys Met Ser

165 170 175

Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn Ile Ser Tyr

180 185 190

<210> 6

<211> 195

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 6

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Lys Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile

35 40 45

Ser Thr Lys Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Lys His Leu

50 55 60

Gly Gly Ser Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala

65 70 75 80

Ile Ile Leu Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala

85 90 95

Ser His Thr Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu

115 120 125

Asp Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asp Tyr

130 135 140

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly

145 150 155 160

Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

180 185 190

Ile Ser Tyr

195

<210> 7

<211> 195

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 7

Val Leu Glu Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr

1 5 10 15

Glu Leu Thr Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala

20 25 30

Ser Lys Lys Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile

35 40 45

Ser Thr Lys Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Lys His Leu

50 55 60

Gly Gly Ser Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala

65 70 75 80

Ile Ile Leu Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala

85 90 95

Ser His Thr Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu

115 120 125

Asp Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asp Tyr

130 135 140

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asn Thr Asn His Leu Gly Gly

145 150 155 160

Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

180 185 190

Ile Ser Tyr

195

<210> 8

<211> 360

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 8

Met Ala Gly His Leu Ala Ser Asp Phe Ala Phe Ser Pro Pro Pro Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Asp Gly Pro Gly Gly Pro Glu Pro Gly Trp Val Asp Pro

20 25 30

Arg Thr Trp Leu Ser Phe Gln Gly Pro Pro Gly Gly Pro Gly Ile Gly

35 40 45

Pro Gly Val Gly Pro Gly Ser Glu Val Trp Gly Ile Pro Pro Cys Pro

50 55 60

Pro Pro Tyr Glu Phe Cys Gly Gly Met Ala Tyr Cys Gly Pro Gln Val

65 70 75 80

Gly Val Gly Leu Val Pro Gln Gly Gly Leu Glu Thr Ser Gln Pro Glu

85 90 95

Gly Glu Ala Gly Val Gly Val Glu Ser Asn Ser Asp Gly Ala Ser Pro

100 105 110

Glu Pro Cys Thr Val Thr Pro Gly Ala Val Lys Leu Glu Lys Glu Lys

115 120 125

Leu Glu Gln Asn Pro Glu Glu Ser Gln Asp Ile Lys Ala Leu Gln Lys

130 135 140

Glu Leu Glu Gln Phe Ala Lys Leu Leu Lys Gln Lys Arg Ile Thr Leu

145 150 155 160

Gly Tyr Thr Gln Ala Asp Val Gly Leu Thr Leu Gly Val Leu Phe Gly

165 170 175

Lys Val Phe Ser Gln Thr Thr Ile Cys Arg Phe Glu Ala Leu Gln Leu

180 185 190

Ser Phe Lys Asn Met Cys Lys Leu Arg Pro Leu Leu Gln Lys Trp Val

195 200 205

Glu Glu Ala Asp Asn Asn Glu Asn Leu Gln Glu Ile Cys Lys Ala Glu

210 215 220

Thr Leu Val Gln Ala Arg Lys Arg Lys Arg Thr Ser Ile Glu Asn Arg

225 230 235 240

Val Arg Gly Asn Leu Glu Asn Leu Phe Leu Gln Cys Pro Lys Pro Thr

245 250 255

Leu Gln Gln Ile Ser His Ile Ala Gln Gln Leu Gly Leu Glu Lys Asp

260 265 270

Val Val Arg Val Trp Phe Cys Asn Arg Arg Gln Lys Gly Lys Arg Ser

275 280 285

Ser Ser Asp Tyr Ala Gln Arg Glu Asp Phe Glu Ala Ala Gly Ser Pro

290 295 300

Phe Ser Gly Gly Pro Val Ser Phe Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Phe

305 310 315 320

Gly Thr Pro Gly Tyr Gly Ser Pro His Phe Thr Ala Leu Tyr Ser Ser

325 330 335

Val Pro Phe Pro Glu Gly Glu Ala Phe Pro Pro Val Ser Val Thr Thr

340 345 350

Leu Gly Ser Pro Met His Ser Asn

355 360

<210> 9

<211> 317

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 9

Met Tyr Asn Met Met Glu Thr Glu Leu Lys Pro Pro Gly Pro Gln Gln

1 5 10 15

Thr Ser Gly Gly Gly Gly Gly Asn Ser Thr Ala Ala Ala Ala Gly Gly

20 25 30

Asn Gln Lys Asn Ser Pro Asp Arg Val Lys Arg Pro Met Asn Ala Phe

35 40 45

Met Val Trp Ser Arg Gly Gln Arg Arg Lys Met Ala Gln Glu Asn Pro

50 55 60

Lys Met His Asn Ser Glu Ile Ser Lys Arg Leu Gly Ala Glu Trp Lys

65 70 75 80

Leu Leu Ser Glu Thr Glu Lys Arg Pro Phe Ile Asp Glu Ala Lys Arg

85 90 95

Leu Arg Ala Leu His Met Lys Glu His Pro Asp Tyr Lys Tyr Arg Pro

100 105 110

Arg Arg Lys Thr Lys Thr Leu Met Lys Lys Asp Lys Tyr Thr Leu Pro

115 120 125

Gly Gly Leu Leu Ala Pro Gly Gly Asn Ser Met Ala Ser Gly Val Gly

130 135 140

Val Gly Ala Gly Leu Gly Ala Gly Val Asn Gln Arg Met Asp Ser Tyr

145 150 155 160

Ala His Met Asn Gly Trp Ser Asn Gly Ser Tyr Ser Met Met Gln Asp

165 170 175

Gln Leu Gly Tyr Pro Gln His Pro Gly Leu Asn Ala His Gly Ala Ala

180 185 190

Gln Met Gln Pro Met His Arg Tyr Asp Val Ser Ala Leu Gln Tyr Asn

195 200 205

Ser Met Thr Ser Ser Gln Thr Tyr Met Asn Gly Ser Pro Thr Tyr Ser

210 215 220

Met Ser Tyr Ser Gln Gln Gly Thr Pro Gly Met Ala Leu Gly Ser Met

225 230 235 240

Gly Ser Val Val Lys Ser Glu Ala Ser Ser Ser Pro Pro Val Val Thr

245 250 255

Ser Ser Ser His Ser Arg Ala Pro Cys Gln Ala Gly Asp Leu Arg Asp

260 265 270

Met Ile Ser Met Tyr Leu Pro Gly Ala Glu Val Pro Glu Pro Ala Ala

275 280 285

Pro Ser Arg Leu His Met Ser Gln His Tyr Gln Ser Gly Pro Val Pro

290 295 300

Gly Thr Ala Ile Asn Gly Thr Leu Pro Leu Ser His Met

305 310 315

<210> 10

<211> 479

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 10

Met Arg Gln Pro Pro Gly Glu Ser Asp Met Ala Val Ser Asp Ala Leu

1 5 10 15

Leu Pro Ser Phe Ser Thr Phe Ala Ser Gly Pro Ala Gly Arg Glu Lys

20 25 30

Thr Leu Arg Gln Ala Gly Ala Pro Asn Asn Arg Trp Arg Glu Glu Leu

35 40 45

Ser His Met Lys Arg Leu Pro Pro Val Leu Pro Gly Arg Pro Tyr Asp

50 55 60

Leu Ala Ala Ala Thr Val Ala Thr Asp Leu Glu Ser Gly Gly Ala Gly

65 70 75 80

Ala Ala Cys Gly Gly Ser Asn Leu Ala Pro Leu Pro Arg Arg Glu Thr

85 90 95

Glu Glu Phe Asn Asp Leu Leu Asp Leu Asp Phe Ile Leu Ser Asn Ser

100 105 110

Leu Thr His Pro Pro Glu Ser Val Ala Ala Thr Val Ser Ser Ser Ala

115 120 125

Ser Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ser Gly Pro Ala Ser Ala

130 135 140

Pro Ser Thr Cys Ser Phe Thr Tyr Pro Ile Arg Ala Gly Asn Asp Pro

145 150 155 160

Gly Val Ala Pro Gly Gly Thr Gly Gly Gly Leu Leu Tyr Gly Arg Glu

165 170 175

Ser Ala Pro Pro Pro Thr Ala Pro Phe Asn Leu Ala Asp Ile Asn Asp

180 185 190

Val Ser Pro Ser Gly Gly Phe Val Ala Glu Leu Leu Arg Pro Glu Leu

195 200 205

Asp Pro Val Tyr Ile Pro Pro Gln Gln Pro Gln Pro Pro Gly Gly Gly

210 215 220

Leu Met Gly Lys Phe Val Leu Lys Ala Ser Leu Ser Ala Pro Gly Ser

225 230 235 240

Glu Tyr Gly Ser Pro Ser Val Ile Ser Val Ser Lys Gly Ser Pro Asp

245 250 255

Gly Ser His Pro Val Val Val Ala Pro Tyr Asn Gly Gly Pro Pro Arg

260 265 270

Thr Cys Pro Lys Ile Lys Gln Glu Ala Val Ser Ser Cys Thr His Leu

275 280 285

Gly Ala Gly Pro Pro Leu Ser Asn Gly His Arg Pro Ala Ala His Asp

290 295 300

Phe Pro Leu Gly Arg Gln Leu Pro Ser Arg Thr Thr Pro Thr Leu Gly

305 310 315 320

Leu Glu Glu Val Leu Ser Ser Arg Asp Cys His Pro Ala Leu Pro Leu

325 330 335

Pro Pro Gly Phe His Pro His Pro Gly Pro Asn Tyr Pro Ser Phe Leu

340 345 350

Pro Asp Gln Met Gln Pro Gln Val Pro Pro Leu His Tyr Gln Glu Leu

355 360 365

Met Pro Pro Gly Ser Cys Met Pro Glu Glu Pro Lys Pro Lys Arg Gly

370 375 380

Arg Arg Ser Trp Pro Arg Lys Arg Thr Ala Thr His Thr Cys Asp Tyr

385 390 395 400

Ala Gly Cys Gly Lys Thr Tyr Thr Lys Ser Ser His Leu Lys Ala His

405 410 415

Leu Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr His Cys Asp Trp Asp Gly

420 425 430

Cys Gly Trp Lys Phe Ala Arg Ser Asp Glu Leu Thr Arg His Tyr Arg

435 440 445

Lys His Thr Gly His Arg Pro Phe Gln Cys Gln Lys Cys Asp Arg Ala

450 455 460

Phe Ser Arg Ser Asp His Leu Ala Leu His Met Lys Arg His Phe

465 470 475

<210> 11

<211> 454

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 11

Met Asp Phe Phe Arg Val Val Glu Asn Gln Gln Pro Pro Ala Thr Met

1 5 10 15

Pro Leu Asn Val Ser Phe Thr Asn Arg Asn Tyr Asp Leu Asp Tyr Asp

20 25 30

Ser Val Gln Pro Tyr Phe Tyr Cys Asp Glu Glu Glu Asn Phe Tyr Gln

35 40 45

Gln Gln Gln Gln Ser Glu Leu Gln Pro Pro Ala Pro Ser Glu Asp Ile

50 55 60

Trp Lys Lys Phe Glu Leu Leu Pro Thr Pro Pro Leu Ser Pro Ser Arg

65 70 75 80

Arg Ser Gly Leu Cys Ser Pro Ser Tyr Val Ala Val Thr Pro Phe Ser

85 90 95

Leu Arg Gly Asp Asn Asp Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Thr Ala Asp

100 105 110

Gln Leu Glu Met Val Thr Glu Leu Leu Gly Gly Asp Met Val Asn Gln

115 120 125

Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys Asn Ile Ile

130 135 140

Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Lys Leu Val

145 150 155 160

Ser Glu Lys Leu Ala Ser Tyr Gln Ala Ala Arg Lys Asp Ser Gly Ser

165 170 175

Pro Asn Pro Ala Arg Gly His Ser Val Cys Ser Thr Ser Ser Leu Tyr

180 185 190

Leu Gln Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Glu Cys Ile Asp Pro Ser Val

195 200 205

Val Phe Pro Tyr Pro Leu Asn Asp Ser Ser Ser Pro Lys Ser Cys Ala

210 215 220

Ser Gln Asp Ser Ser Ala Phe Ser Pro Ser Ser Asp Ser Leu Leu Ser

225 230 235 240

Ser Thr Glu Ser Ser Pro Gln Gly Ser Pro Glu Pro Leu Val Leu His

245 250 255

Glu Glu Thr Pro Pro Thr Thr Ser Ser Asp Ser Glu Glu Glu Gln Glu

260 265 270

Asp Glu Glu Glu Ile Asp Val Val Ser Val Glu Lys Arg Gln Ala Pro

275 280 285

Gly Lys Arg Ser Glu Ser Gly Ser Pro Ser Ala Gly Gly His Ser Lys

290 295 300

Pro Pro His Ser Pro Leu Val Leu Lys Arg Cys His Val Ser Thr His

305 310 315 320

Gln His Asn Tyr Ala Ala Pro Pro Ser Thr Arg Lys Asp Tyr Pro Ala

325 330 335

Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp Ser Val Arg Val Leu Arg Gln Ile Ser

340 345 350

Asn Asn Arg Lys Cys Thr Ser Pro Arg Ser Ser Asp Thr Glu Glu Asn

355 360 365

Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln Arg Arg Asn Glu

370 375 380

Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile Pro Glu Leu Glu

385 390 395 400

Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys Lys Ala Thr Ala

405 410 415

Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu

420 425 430

Asp Leu Leu Arg Lys Arg Arg Glu Gln Leu Lys His Lys Leu Glu Gln

435 440 445

Leu Arg Asn Ser Cys Ala

450

<210> 12

<211> 191

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 12

ttgaatcgcg ggacccgttg gcagaggtgg cggcggcggc atgggtgccc cgacgttgcc 60

ccctgcctgg cagccctttc tcaaggacca ccgcatctct acattcaaga actggccctt 120

cttggagggc tgcgcctgca ccccggagcg ggtgagactg cccggcctcc tggggtcccc 180

cacgcccgcc t 191

<210> 13

<211> 190

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 13

ggctgccacg tccactcacg agctgtgctg tcccttgcag atggccgagg ctggcttcat 60

ccactgcccc actgagaacg agccagactt ggcccagtgt ttcttctgct tcaaggagct 120

ggaaggctgg gagccagatg acgaccccat gtaagtcttc tctggccagc ctcgatgggc 180

tttgttttga 190

<210> 14

<211> 198

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 14

cccttcagct gcctttccgc tgttgttttg atttttctag agaggaacat aaaaagcatt 60

cgtccggttg cgctttcctt tctgtcaaga agcagtttga agaattaacc cttggtgaat 120

ttttgaaact ggacagagaa agagccaaga acaaaattgt atgtattggg aataagaact 180

gctcaaaccc tgttcaat 198

<210> 15

<211> 170

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 15

gctctggttt cagtgtcatg tgtctattct ttatttccag gcaaaggaaa ccaacaataa 60

gaagaaagaa tttgaggaaa ctgcggagaa agtgcgccgt gccatcgagc agctggctgc 120

catggattga ggcctctggc cggagctgcc tggtcccaga gtggctgcac 170

<210> 16

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 16

ttgccccctg cctggcagcc 20

<210> 17

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 17

ttcttgaatg tagagatgcg 20

<210> 18

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 18

tgggtgcccc gacgttgccc 20

<210> 19

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 19

tgcggtggtc cttgagaaag 20

<210> 20

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 20

tcaaggacca ccgcatctct 20

<210> 21

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 21

tgcaggcgca gccctccaag 20

<210> 22

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 22

tggccgaggc tggcttcatc 20

<210> 23

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 23

tgggccaagt ctggctcgtt 20

<210> 24

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 24

ttggcccagt gtttcttctg 20

<210> 25

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 25

tcgtcatctg gctcccagcc 20

<210> 26

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 26

tgcgctttcc tttctgtcaa 20

<210> 27

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 27

tcaaaaattc accaagggtt 20

<210> 28

<211> 297

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 28

Met Glu Asp Tyr Thr Lys Ile Glu Lys Ile Gly Glu Gly Thr Tyr Gly

1 5 10 15

Val Val Tyr Lys Gly Arg His Lys Thr Thr Gly Gln Val Val Ala Met

20 25 30

Lys Lys Ile Arg Leu Glu Ser Glu Glu Glu Gly Val Pro Ser Thr Ala

35 40 45

Ile Arg Glu Ile Ser Leu Leu Lys Glu Leu Arg His Pro Asn Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Asp Val Leu Met Gln Asp Ser Arg Leu Tyr Leu Ile Phe

65 70 75 80

Glu Phe Leu Ser Met Asp Leu Lys Lys Tyr Leu Asp Ser Ile Pro Pro

85 90 95

Gly Gln Tyr Met Asp Ser Ser Leu Val Lys Ser Tyr Leu Tyr Gln Ile

100 105 110

Leu Gln Gly Ile Val Phe Cys His Ser Arg Arg Val Leu His Arg Asp

115 120 125

Leu Lys Pro Gln Asn Leu Leu Ile Asp Asp Lys Gly Thr Ile Lys Leu

130 135 140

Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Ala Phe Gly Ile Pro Ile Arg Val Tyr

145 150 155 160

Thr His Glu Val Val Thr Leu Trp Tyr Arg Ser Pro Glu Val Leu Leu

165 170 175

Gly Ser Ala Arg Tyr Ser Thr Pro Val Asp Ile Trp Ser Ile Gly Thr

180 185 190

Ile Phe Ala Glu Leu Ala Thr Lys Lys Pro Leu Phe His Gly Asp Ser

195 200 205

Glu Ile Asp Gln Leu Phe Arg Ile Phe Arg Ala Leu Gly Thr Pro Asn

210 215 220

Asn Glu Val Trp Pro Glu Val Glu Ser Leu Gln Asp Tyr Lys Asn Thr

225 230 235 240

Phe Pro Lys Trp Lys Pro Gly Ser Leu Ala Ser His Val Lys Asn Leu

245 250 255

Asp Glu Asn Gly Leu Asp Leu Leu Ser Lys Met Leu Ile Tyr Asp Pro

260 265 270

Ala Lys Arg Ile Ser Gly Lys Met Ala Leu Asn His Pro Tyr Phe Asn

275 280 285

Asp Leu Asp Asn Gln Ile Lys Lys Met

290 295

<210> 29

<211> 298

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 29

Met Glu Asn Phe Gln Lys Val Glu Lys Ile Gly Glu Gly Thr Tyr Gly

1 5 10 15

Val Val Tyr Lys Ala Arg Asn Lys Leu Thr Gly Glu Val Val Ala Leu

20 25 30

Lys Lys Ile Arg Leu Asp Thr Glu Thr Glu Gly Val Pro Ser Thr Ala

35 40 45

Ile Arg Glu Ile Ser Leu Leu Lys Glu Leu Asn His Pro Asn Ile Val

50 55 60

Lys Leu Leu Asp Val Ile His Thr Glu Asn Lys Leu Tyr Leu Val Phe

65 70 75 80

Glu Phe Leu His Gln Asp Leu Lys Lys Phe Met Asp Ala Ser Ala Leu

85 90 95

Thr Gly Ile Pro Leu Pro Leu Ile Lys Ser Tyr Leu Phe Gln Leu Leu

100 105 110

Gln Gly Leu Ala Phe Cys His Ser His Arg Val Leu His Arg Asp Leu

115 120 125

Lys Pro Gln Asn Leu Leu Ile Asn Thr Glu Gly Ala Ile Lys Leu Ala

130 135 140

Asp Phe Gly Leu Ala Arg Ala Phe Gly Val Pro Val Arg Thr Tyr Thr

145 150 155 160

His Glu Val Val Thr Leu Trp Tyr Arg Ala Pro Glu Ile Leu Leu Gly

165 170 175

Cys Lys Tyr Tyr Ser Thr Ala Val Asp Ile Trp Ser Leu Gly Cys Ile

180 185 190

Phe Ala Glu Met Val Thr Arg Arg Ala Leu Phe Pro Gly Asp Ser Glu

195 200 205

Ile Asp Gln Leu Phe Arg Ile Phe Arg Thr Leu Gly Thr Pro Asp Glu

210 215 220

Val Val Trp Pro Gly Val Thr Ser Met Pro Asp Tyr Lys Pro Ser Phe

225 230 235 240

Pro Lys Trp Ala Arg Gln Asp Phe Ser Lys Val Val Pro Pro Leu Asp

245 250 255

Glu Asp Gly Arg Ser Leu Leu Ser Gln Met Leu His Tyr Asp Pro Asn

260 265 270

Lys Arg Ile Ser Ala Lys Ala Ala Leu Ala His Pro Phe Phe Gln Asp

275 280 285

Val Thr Lys Pro Val Pro His Leu Arg Leu

290 295

<210> 30

<211> 305

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 30

Met Asp Met Phe Gln Lys Val Glu Lys Ile Gly Glu Gly Thr Tyr Gly

1 5 10 15

Val Val Tyr Lys Ala Lys Asn Arg Glu Thr Gly Gln Leu Val Ala Leu

20 25 30

Lys Lys Ile Arg Leu Asp Leu Glu Met Glu Gly Val Pro Ser Thr Ala

35 40 45

Ile Arg Glu Ile Ser Leu Leu Lys Glu Leu Lys His Pro Asn Ile Val

50 55 60

Arg Leu Leu Asp Val Val His Asn Glu Arg Lys Leu Tyr Leu Val Phe

65 70 75 80

Glu Phe Leu Ser Gln Asp Leu Lys Lys Tyr Met Asp Ser Thr Pro Gly

85 90 95

Ser Glu Leu Pro Leu His Leu Ile Lys Ser Tyr Leu Phe Gln Leu Leu

100 105 110

Gln Gly Val Ser Phe Cys His Ser His Arg Val Ile His Arg Asp Leu

115 120 125

Lys Pro Gln Asn Leu Leu Ile Asn Glu Leu Gly Ala Ile Lys Leu Ala

130 135 140

Asp Phe Gly Leu Ala Arg Ala Phe Gly Val Pro Leu Arg Thr Tyr Thr

145 150 155 160

His Glu Val Val Thr Leu Trp Tyr Arg Ala Pro Glu Ile Leu Leu Gly

165 170 175

Ser Lys Phe Tyr Thr Thr Ala Val Asp Ile Trp Ser Ile Gly Cys Ile

180 185 190

Phe Ala Glu Met Val Thr Arg Lys Ala Leu Phe Pro Gly Asp Ser Glu

195 200 205

Ile Asp Gln Leu Phe Arg Ile Phe Arg Met Leu Gly Thr Pro Ser Glu

210 215 220

Asp Thr Trp Pro Gly Val Thr Gln Leu Pro Asp Tyr Lys Gly Ser Phe

225 230 235 240

Pro Lys Trp Thr Arg Lys Gly Leu Glu Glu Ile Val Pro Asn Leu Glu

245 250 255

Pro Glu Gly Arg Asp Leu Leu Met Gln Leu Leu Gln Tyr Asp Pro Ser

260 265 270

Gln Arg Ile Thr Ala Lys Thr Ala Leu Ala His Pro Tyr Phe Ser Ser

275 280 285

Pro Glu Pro Ser Pro Ala Ala Arg Gln Tyr Val Leu Gln Arg Phe Arg

290 295 300

His

305

<210> 31

<211> 303

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 31

Met Ala Thr Ser Arg Tyr Glu Pro Val Ala Glu Ile Gly Val Gly Ala

1 5 10 15

Tyr Gly Thr Val Tyr Lys Ala Arg Asp Pro His Ser Gly His Phe Val

20 25 30

Ala Leu Lys Ser Val Arg Val Pro Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

35 40 45

Leu Pro Ile Ser Thr Val Arg Glu Val Ala Leu Leu Arg Arg Leu Glu

50 55 60

Ala Phe Glu His Pro Asn Val Val Arg Leu Met Asp Val Cys Ala Thr

65 70 75 80

Ser Arg Thr Asp Arg Glu Ile Lys Val Thr Leu Val Phe Glu His Val

85 90 95

Asp Gln Asp Leu Arg Thr Tyr Leu Asp Lys Ala Pro Pro Pro Gly Leu

100 105 110

Pro Ala Glu Thr Ile Lys Asp Leu Met Arg Gln Phe Leu Arg Gly Leu

115 120 125

Asp Phe Leu His Ala Asn Cys Ile Val His Arg Asp Leu Lys Pro Glu

130 135 140

Asn Ile Leu Val Thr Ser Gly Gly Thr Val Lys Leu Ala Asp Phe Gly

145 150 155 160

Leu Ala Arg Ile Tyr Ser Tyr Gln Met Ala Leu Thr Pro Val Val Val

165 170 175

Thr Leu Trp Tyr Arg Ala Pro Glu Val Leu Leu Gln Ser Thr Tyr Ala

180 185 190

Thr Pro Val Asp Met Trp Ser Val Gly Cys Ile Phe Ala Glu Met Phe

195 200 205

Arg Arg Lys Pro Leu Phe Cys Gly Asn Ser Glu Ala Asp Gln Leu Gly

210 215 220

Lys Ile Phe Asp Leu Ile Gly Leu Pro Pro Glu Asp Asp Trp Pro Arg

225 230 235 240

Asp Val Ser Leu Pro Arg Gly Ala Phe Pro Pro Arg Gly Pro Arg Pro

245 250 255

Val Gln Ser Val Val Pro Glu Met Glu Glu Ser Gly Ala Gln Leu Leu

260 265 270

Leu Glu Met Leu Thr Phe Asn Pro His Lys Arg Ile Ser Ala Phe Arg

275 280 285

Ala Leu Gln His Ser Tyr Leu His Lys Asp Glu Gly Asn Pro Glu

290 295 300

<210> 32

<211> 292

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 32

Met Gln Lys Tyr Glu Lys Leu Glu Lys Ile Gly Glu Gly Thr Tyr Gly

1 5 10 15

Thr Val Phe Lys Ala Lys Asn Arg Glu Thr His Glu Ile Val Ala Leu

20 25 30

Lys Arg Val Arg Leu Asp Asp Asp Asp Glu Gly Val Pro Ser Ser Ala

35 40 45

Leu Arg Glu Ile Cys Leu Leu Lys Glu Leu Lys His Lys Asn Ile Val

50 55 60

Arg Leu His Asp Val Leu His Ser Asp Lys Lys Leu Thr Leu Val Phe

65 70 75 80

Glu Phe Cys Asp Gln Asp Leu Lys Lys Tyr Phe Asp Ser Cys Asn Gly

85 90 95

Asp Leu Asp Pro Glu Ile Val Lys Ser Phe Leu Phe Gln Leu Leu Lys

100 105 110

Gly Leu Gly Phe Cys His Ser Arg Asn Val Leu His Arg Asp Leu Lys

115 120 125

Pro Gln Asn Leu Leu Ile Asn Arg Asn Gly Glu Leu Lys Leu Ala Asp

130 135 140

Phe Gly Leu Ala Arg Ala Phe Gly Ile Pro Val Arg Cys Tyr Ser Ala

145 150 155 160

Glu Val Val Thr Leu Trp Tyr Arg Pro Pro Asp Val Leu Phe Gly Ala

165 170 175

Lys Leu Tyr Ser Thr Ser Ile Asp Met Trp Ser Ala Gly Cys Ile Phe

180 185 190

Ala Glu Leu Ala Asn Ala Gly Arg Pro Leu Phe Pro Gly Asn Asp Val

195 200 205

Asp Asp Gln Leu Lys Arg Ile Phe Arg Leu Leu Gly Thr Pro Thr Glu

210 215 220

Glu Gln Trp Pro Ser Met Thr Lys Leu Pro Asp Tyr Lys Pro Tyr Pro

225 230 235 240

Met Tyr Pro Ala Thr Thr Ser Leu Val Asn Val Val Pro Lys Leu Asn

245 250 255

Ala Thr Gly Arg Asp Leu Leu Gln Asn Leu Leu Lys Cys Asn Pro Val

260 265 270

Gln Arg Ile Ser Ala Glu Glu Ala Leu Gln His Pro Tyr Phe Ser Asp

275 280 285

Phe Cys Pro Pro

290

<210> 33

<211> 326

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 33

Met Glu Lys Asp Gly Leu Cys Arg Ala Asp Gln Gln Tyr Glu Cys Val

1 5 10 15

Ala Glu Ile Gly Glu Gly Ala Tyr Gly Lys Val Phe Lys Ala Arg Asp

20 25 30

Leu Lys Asn Gly Gly Arg Phe Val Ala Leu Lys Arg Val Arg Val Gln

35 40 45

Thr Gly Glu Glu Gly Met Pro Leu Ser Thr Ile Arg Glu Val Ala Val

50 55 60

Leu Arg His Leu Glu Thr Phe Glu His Pro Asn Val Val Arg Leu Phe

65 70 75 80

Asp Val Cys Thr Val Ser Arg Thr Asp Arg Glu Thr Lys Leu Thr Leu

85 90 95

Val Phe Glu His Val Asp Gln Asp Leu Thr Thr Tyr Leu Asp Lys Val

100 105 110

Pro Glu Pro Gly Val Pro Thr Glu Thr Ile Lys Asp Met Met Phe Gln

115 120 125

Leu Leu Arg Gly Leu Asp Phe Leu His Ser His Arg Val Val His Arg

130 135 140

Asp Leu Lys Pro Gln Asn Ile Leu Val Thr Ser Ser Gly Gln Ile Lys

145 150 155 160

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Ile Tyr Ser Phe Gln Met Ala Leu

165 170 175

Thr Ser Val Val Val Thr Leu Trp Tyr Arg Ala Pro Glu Val Leu Leu

180 185 190

Gln Ser Ser Tyr Ala Thr Pro Val Asp Leu Trp Ser Val Gly Cys Ile

195 200 205

Phe Ala Glu Met Phe Arg Arg Lys Pro Leu Phe Arg Gly Ser Ser Asp

210 215 220

Val Asp Gln Leu Gly Lys Ile Leu Asp Val Ile Gly Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Glu Asp Trp Pro Arg Asp Val Ala Leu Pro Arg Gln Ala Phe His Ser

245 250 255

Lys Ser Ala Gln Pro Ile Glu Lys Phe Val Thr Asp Ile Asp Glu Leu

260 265 270

Gly Lys Asp Leu Leu Leu Lys Cys Leu Thr Phe Asn Pro Ala Lys Arg

275 280 285

Ile Ser Ala Tyr Ser Ala Leu Ser His Pro Tyr Phe Gln Asp Leu Glu

290 295 300

Arg Cys Lys Glu Asn Leu Asp Ser His Leu Pro Pro Ser Gln Asn Thr

305 310 315 320

Ser Glu Leu Asn Thr Ala

325

<210> 34

<211> 142

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 34

Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp

1 5 10 15

His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala

20 25 30

Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr

35 40 45

Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu

50 55 60

Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His

65 70 75 80

Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu

85 90 95

Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys

100 105 110

Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Ala

115 120 125

Glu Lys Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp

130 135 140

<210> 35

<211> 826

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 35

Met Glu Gly Ala Gly Gly Ala Asn Asp Lys Lys Lys Ile Ser Ser Glu

1 5 10 15

Arg Arg Lys Glu Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Ser Arg Arg Ser Lys

20 25 30

Glu Ser Glu Val Phe Tyr Glu Leu Ala His Gln Leu Pro Leu Pro His

35 40 45

Asn Val Ser Ser His Leu Asp Lys Ala Ser Val Met Arg Leu Thr Ile

50 55 60

Ser Tyr Leu Arg Val Arg Lys Leu Leu Asp Ala Gly Asp Leu Asp Ile

65 70 75 80

Glu Asp Asp Met Lys Ala Gln Met Asn Cys Phe Tyr Leu Lys Ala Leu

85 90 95

Asp Gly Phe Val Met Val Leu Thr Asp Asp Gly Asp Met Ile Tyr Ile

100 105 110

Ser Asp Asn Val Asn Lys Tyr Met Gly Leu Thr Gln Phe Glu Leu Thr

115 120 125

Gly His Ser Val Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu Met

130 135 140

Arg Glu Met Leu Thr His Arg Asn Gly Leu Val Lys Lys Gly Lys Glu

145 150 155 160

Gln Asn Thr Gln Arg Ser Phe Phe Leu Arg Met Lys Cys Thr Leu Thr

165 170 175

Ser Arg Gly Arg Thr Met Asn Ile Lys Ser Ala Thr Trp Lys Val Leu

180 185 190

His Cys Thr Gly His Ile His Val Tyr Asp Thr Asn Ser Asn Gln Pro

195 200 205

Gln Cys Gly Tyr Lys Lys Pro Pro Met Thr Cys Leu Val Leu Ile Cys

210 215 220

Glu Pro Ile Pro His Pro Ser Asn Ile Glu Ile Pro Leu Asp Ser Lys

225 230 235 240

Thr Phe Leu Ser Arg His Ser Leu Asp Met Lys Phe Ser Tyr Cys Asp

245 250 255

Glu Arg Ile Thr Glu Leu Met Gly Tyr Glu Pro Glu Glu Leu Leu Gly

260 265 270

Arg Ser Ile Tyr Glu Tyr Tyr His Ala Leu Asp Ser Asp His Leu Thr

275 280 285

Lys Thr His His Asp Met Phe Thr Lys Gly Gln Val Thr Thr Gly Gln

290 295 300

Tyr Arg Met Leu Ala Lys Arg Gly Gly Tyr Val Trp Val Glu Thr Gln

305 310 315 320

Ala Thr Val Ile Tyr Asn Thr Lys Asn Ser Gln Pro Gln Cys Ile Val

325 330 335

Cys Val Asn Tyr Val Val Ser Gly Ile Ile Gln His Asp Leu Ile Phe

340 345 350

Ser Leu Gln Gln Thr Glu Cys Val Leu Lys Pro Val Glu Ser Ser Asp

355 360 365

Met Lys Met Thr Gln Leu Phe Thr Lys Val Glu Ser Glu Asp Thr Ser

370 375 380

Ser Leu Phe Asp Lys Leu Lys Lys Glu Pro Asp Ala Leu Thr Leu Leu

385 390 395 400

Ala Pro Ala Ala Gly Asp Thr Ile Ile Ser Leu Asp Phe Gly Ser Asn

405 410 415

Asp Thr Glu Thr Asp Asp Gln Gln Leu Glu Glu Val Pro Leu Tyr Asn

420 425 430

Asp Val Met Leu Pro Ser Pro Asn Glu Lys Leu Gln Asn Ile Asn Leu

435 440 445

Ala Met Ser Pro Leu Pro Thr Ala Glu Thr Pro Lys Pro Leu Arg Ser

450 455 460

Ser Ala Asp Pro Ala Leu Asn Gln Glu Val Ala Leu Lys Leu Glu Pro

465 470 475 480

Asn Pro Glu Ser Leu Glu Leu Ser Phe Thr Met Pro Gln Ile Gln Asp

485 490 495

Gln Thr Pro Ser Pro Ser Asp Gly Ser Thr Arg Gln Ser Ser Pro Glu

500 505 510

Pro Asn Ser Pro Ser Glu Tyr Cys Phe Tyr Val Asp Ser Asp Met Val

515 520 525

Asn Glu Phe Lys Leu Glu Leu Val Glu Lys Leu Phe Ala Glu Asp Thr

530 535 540

Glu Ala Lys Asn Pro Phe Ser Thr Gln Asp Thr Asp Leu Asp Leu Glu

545 550 555 560

Met Leu Ala Pro Tyr Ile Pro Met Asp Asp Asp Phe Gln Leu Arg Ser

565 570 575

Phe Asp Gln Leu Ser Pro Leu Glu Ser Ser Ser Ala Ser Pro Glu Ser

580 585 590

Ala Ser Pro Gln Ser Thr Val Thr Val Phe Gln Gln Thr Gln Ile Gln

595 600 605

Glu Pro Thr Ala Asn Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Asp Glu Leu

610 615 620

Lys Thr Val Thr Lys Asp Arg Met Glu Asp Ile Lys Ile Leu Ile Ala

625 630 635 640

Ser Pro Ser Pro Thr His Ile His Lys Glu Thr Thr Ser Ala Thr Ser

645 650 655

Ser Pro Tyr Arg Asp Thr Gln Ser Arg Thr Ala Ser Pro Asn Arg Ala

660 665 670

Gly Lys Gly Val Ile Glu Gln Thr Glu Lys Ser His Pro Arg Ser Pro

675 680 685

Asn Val Leu Ser Val Ala Leu Ser Gln Arg Thr Thr Val Pro Glu Glu

690 695 700

Glu Leu Asn Pro Lys Ile Leu Ala Leu Gln Asn Ala Gln Arg Lys Arg

705 710 715 720

Lys Met Glu His Asp Gly Ser Leu Phe Gln Ala Val Gly Ile Gly Thr

725 730 735

Leu Leu Gln Gln Pro Asp Asp His Ala Ala Thr Thr Ser Leu Ser Trp

740 745 750

Lys Arg Val Lys Gly Cys Lys Ser Ser Glu Gln Asn Gly Met Glu Gln

755 760 765

Lys Thr Ile Ile Leu Ile Pro Ser Asp Leu Ala Cys Arg Leu Leu Gly

770 775 780

Gln Ser Met Asp Glu Ser Gly Leu Pro Gln Leu Thr Ser Tyr Asp Cys

785 790 795 800

Glu Val Asn Ala Pro Ile Gln Gly Ser Arg Asn Leu Leu Gln Gly Glu

805 810 815

Glu Leu Leu Arg Ala Leu Asp Gln Val Asn

820 825

<210> 36

<211> 449

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 36

Met Gly Arg Val Gly Gly Met Ala Gln Pro Met Gly Arg Ala Gly Ala

1 5 10 15

Pro Lys Pro Met Gly Arg Ala Gly Ser Ala Arg Arg Gly Arg Phe Lys

20 25 30

Gly Cys Trp Ser Glu Gly Ser Pro Val His Pro Val Pro Ala Val Leu

35 40 45

Ser Trp Leu Leu Ala Leu Leu Arg Cys Ala Ser Thr Met Leu Ser Leu

50 55 60

Arg Val Pro Leu Ala Pro Ile Thr Asp Pro Gln Gln Leu Gln Leu Ser

65 70 75 80

Pro Leu Lys Gly Leu Ser Leu Val Asp Lys Glu Asn Thr Pro Pro Ala

85 90 95

Leu Ser Gly Thr Arg Val Leu Ala Ser Lys Thr Ala Arg Arg Ile Phe

100 105 110

Gln Glu Pro Thr Glu Pro Lys Thr Lys Ala Ala Ala Pro Gly Val Glu

115 120 125

Asp Glu Pro Leu Leu Arg Glu Asn Pro Arg Arg Phe Val Ile Phe Pro

130 135 140

Ile Glu Tyr His Asp Ile Trp Gln Met Tyr Lys Lys Ala Glu Ala Ser

145 150 155 160

Phe Trp Thr Ala Glu Glu Val Asp Leu Ser Lys Asp Ile Gln His Trp

165 170 175

Glu Ser Leu Lys Pro Glu Glu Arg Tyr Phe Ile Ser His Val Leu Ala

180 185 190

Phe Phe Ala Ala Ser Asp Gly Ile Val Asn Glu Asn Leu Val Glu Arg

195 200 205

Phe Ser Gln Glu Val Gln Ile Thr Glu Ala Arg Cys Phe Tyr Gly Phe

210 215 220

Gln Ile Ala Met Glu Asn Ile His Ser Glu Met Tyr Ser Leu Leu Ile

225 230 235 240

Asp Thr Tyr Ile Lys Asp Pro Lys Glu Arg Glu Phe Leu Phe Asn Ala

245 250 255

Ile Glu Thr Met Pro Cys Val Lys Lys Lys Ala Asp Trp Ala Leu Arg

260 265 270

Trp Ile Gly Asp Lys Glu Ala Thr Tyr Gly Glu Arg Val Val Ala Phe

275 280 285

Ala Ala Val Glu Gly Ile Phe Phe Ser Gly Ser Phe Ala Ser Ile Phe

290 295 300

Trp Leu Lys Lys Arg Gly Leu Met Pro Gly Leu Thr Phe Ser Asn Glu

305 310 315 320

Leu Ile Ser Arg Asp Glu Gly Leu His Cys Asp Phe Ala Cys Leu Met

325 330 335

Phe Lys His Leu Val His Lys Pro Ser Glu Glu Arg Val Arg Glu Ile

340 345 350

Ile Ile Asn Ala Val Arg Ile Glu Gln Glu Phe Leu Thr Glu Ala Leu

355 360 365

Pro Val Lys Leu Ile Gly Met Asn Cys Thr Leu Met Lys Gln Tyr Ile

370 375 380

Glu Phe Val Ala Asp Arg Leu Met Leu Glu Leu Gly Phe Ser Lys Val

385 390 395 400

Phe Arg Val Glu Asn Pro Phe Asp Phe Met Glu Asn Ile Ser Leu Glu

405 410 415

Gly Lys Thr Asn Phe Phe Glu Lys Arg Val Gly Glu Tyr Gln Arg Met

420 425 430

Gly Val Met Ser Ser Pro Thr Glu Asn Ser Phe Thr Leu Asp Ala Asp

435 440 445

Phe

<210> 37

<211> 188

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 37

Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys

1 5 10 15

Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr

20 25 30

Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly

35 40 45

Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr

50 55 60

Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys

65 70 75 80

Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr

85 90 95

Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val

100 105 110

Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys

115 120 125

Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr

130 135 140

Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Asp Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val

145 150 155 160

Arg Glu Ile Arg Lys His Lys Glu Lys Met Ser Lys Asp Gly Lys Lys

165 170 175

Lys Lys Lys Lys Ser Lys Thr Lys Cys Val Ile Met

180 185

<210> 38

<211> 1210

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 38

Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln

20 25 30

Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe

35 40 45

Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn

50 55 60

Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys

65 70 75 80

Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val

85 90 95

Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr

100 105 110

Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn

115 120 125

Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu

130 135 140

His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu

145 150 155 160

Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met

165 170 175

Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro

180 185 190

Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln

195 200 205

Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg

210 215 220

Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys

225 230 235 240

Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp

245 250 255

Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro

260 265 270

Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly

275 280 285

Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His

290 295 300

Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu

305 310 315 320

Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val

325 330 335

Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn

340 345 350

Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp

355 360 365

Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr

370 375 380

Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu

385 390 395 400

Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp

405 410 415

Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln

420 425 430

His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu

435 440 445

Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser

450 455 460

Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu

465 470 475 480

Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu

485 490 495

Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro

500 505 510

Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn

515 520 525

Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly

530 535 540

Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro

545 550 555 560

Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro

565 570 575

Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val

580 585 590

Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp

595 600 605

Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys

610 615 620

Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly

625 630 635 640

Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu

645 650 655

Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His

660 665 670

Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu

675 680 685

Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu

690 695 700

Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser

705 710 715 720

Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu

725 730 735

Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser

740 745 750

Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser

755 760 765

Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser

770 775 780

Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp

785 790 795 800

Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn

805 810 815

Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg

820 825 830

Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro

835 840 845

Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala

850 855 860

Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp

865 870 875 880

Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp

885 890 895

Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser

900 905 910

Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu

915 920 925

Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr

930 935 940

Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys

945 950 955 960

Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln

965 970 975

Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro

980 985 990

Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp

995 1000 1005

Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe

1010 1015 1020

Phe Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu

1025 1030 1035

Ser Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn

1040 1045 1050

Gly Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg

1055 1060 1065

Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp

1070 1075 1080

Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro

1085 1090 1095

Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln

1100 1105 1110

Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro

1115 1120 1125

His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln

1130 1135 1140

Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala

1145 1150 1155

Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln

1160 1165 1170

Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys

1175 1180 1185

Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln

1190 1195 1200

Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

1205 1210

<210> 39

<211> 454

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 39

Met Asp Phe Phe Arg Val Val Glu Asn Gln Gln Pro Pro Ala Thr Met

1 5 10 15

Pro Leu Asn Val Ser Phe Thr Asn Arg Asn Tyr Asp Leu Asp Tyr Asp

20 25 30

Ser Val Gln Pro Tyr Phe Tyr Cys Asp Glu Glu Glu Asn Phe Tyr Gln

35 40 45

Gln Gln Gln Gln Ser Glu Leu Gln Pro Pro Ala Pro Ser Glu Asp Ile

50 55 60

Trp Lys Lys Phe Glu Leu Leu Pro Thr Pro Pro Leu Ser Pro Ser Arg

65 70 75 80

Arg Ser Gly Leu Cys Ser Pro Ser Tyr Val Ala Val Thr Pro Phe Ser

85 90 95

Leu Arg Gly Asp Asn Asp Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Thr Ala Asp

100 105 110

Gln Leu Glu Met Val Thr Glu Leu Leu Gly Gly Asp Met Val Asn Gln

115 120 125

Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys Asn Ile Ile

130 135 140

Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Lys Leu Val

145 150 155 160

Ser Glu Lys Leu Ala Ser Tyr Gln Ala Ala Arg Lys Asp Ser Gly Ser

165 170 175

Pro Asn Pro Ala Arg Gly His Ser Val Cys Ser Thr Ser Ser Leu Tyr

180 185 190

Leu Gln Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Glu Cys Ile Asp Pro Ser Val

195 200 205

Val Phe Pro Tyr Pro Leu Asn Asp Ser Ser Ser Pro Lys Ser Cys Ala

210 215 220

Ser Gln Asp Ser Ser Ala Phe Ser Pro Ser Ser Asp Ser Leu Leu Ser

225 230 235 240

Ser Thr Glu Ser Ser Pro Gln Gly Ser Pro Glu Pro Leu Val Leu His

245 250 255

Glu Glu Thr Pro Pro Thr Thr Ser Ser Asp Ser Glu Glu Glu Gln Glu

260 265 270

Asp Glu Glu Glu Ile Asp Val Val Ser Val Glu Lys Arg Gln Ala Pro

275 280 285

Gly Lys Arg Ser Glu Ser Gly Ser Pro Ser Ala Gly Gly His Ser Lys

290 295 300

Pro Pro His Ser Pro Leu Val Leu Lys Arg Cys His Val Ser Thr His

305 310 315 320

Gln His Asn Tyr Ala Ala Pro Pro Ser Thr Arg Lys Asp Tyr Pro Ala

325 330 335

Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp Ser Val Arg Val Leu Arg Gln Ile Ser

340 345 350

Asn Asn Arg Lys Cys Thr Ser Pro Arg Ser Ser Asp Thr Glu Glu Asn

355 360 365

Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln Arg Arg Asn Glu

370 375 380

Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile Pro Glu Leu Glu

385 390 395 400

Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys Lys Ala Thr Ala

405 410 415

Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu

420 425 430

Asp Leu Leu Arg Lys Arg Arg Glu Gln Leu Lys His Lys Leu Glu Gln

435 440 445

Leu Arg Asn Ser Cys Ala

450

<210> 40

<211> 889

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 40

Met Glu Glu Gly Ala Pro Arg Gln Pro Gly Pro Ser Gln Trp Pro Pro

1 5 10 15

Glu Asp Glu Lys Glu Val Ile Arg Arg Ala Ile Gln Lys Glu Leu Lys

20 25 30

Ile Lys Glu Gly Val Glu Asn Leu Arg Arg Val Ala Thr Asp Arg Arg

35 40 45

His Leu Gly His Val Gln Gln Leu Leu Arg Ser Ser Asn Arg Arg Leu

50 55 60

Glu Gln Leu His Gly Glu Leu Arg Glu Leu His Ala Arg Ile Leu Leu

65 70 75 80

Pro Gly Pro Gly Pro Gly Pro Ala Glu Pro Val Ala Ser Gly Pro Arg

85 90 95

Pro Trp Ala Glu Gln Leu Arg Ala Arg His Leu Glu Ala Leu Arg Arg

100 105 110

Gln Leu His Val Glu Leu Lys Val Lys Gln Gly Ala Glu Asn Met Thr

115 120 125

His Thr Cys Ala Ser Gly Thr Pro Lys Glu Arg Lys Leu Leu Ala Ala

130 135 140

Ala Gln Gln Met Leu Arg Asp Ser Gln Leu Lys Val Ala Leu Leu Arg

145 150 155 160

Met Lys Ile Ser Ser Leu Glu Ala Ser Gly Ser Pro Glu Pro Gly Pro

165 170 175

Glu Leu Leu Ala Glu Glu Leu Gln His Arg Leu His Val Glu Ala Ala

180 185 190

Val Ala Glu Gly Ala Lys Asn Val Val Lys Leu Leu Ser Ser Arg Arg

195 200 205

Thr Gln Asp Arg Lys Ala Leu Ala Glu Ala Gln Ala Gln Leu Gln Glu

210 215 220

Ser Ser Gln Lys Leu Asp Leu Leu Arg Leu Ala Leu Glu Gln Leu Leu

225 230 235 240

Glu Gln Leu Pro Pro Ala His Pro Leu Arg Ser Arg Val Thr Arg Glu

245 250 255

Leu Arg Ala Ala Val Pro Gly Tyr Pro Gln Pro Ser Gly Thr Pro Val

260 265 270

Lys Pro Thr Ala Leu Thr Gly Thr Leu Gln Val Arg Leu Leu Gly Cys

275 280 285

Glu Gln Leu Leu Thr Ala Val Pro Gly Arg Ser Pro Ala Ala Ala Leu

290 295 300

Ala Ser Ser Pro Ser Glu Gly Trp Leu Arg Thr Lys Ala Lys His Gln

305 310 315 320

Arg Gly Arg Gly Glu Leu Ala Ser Glu Val Leu Ala Val Leu Lys Val

325 330 335

Asp Asn Arg Val Val Gly Gln Thr Gly Trp Gly Gln Val Ala Glu Gln

340 345 350

Ser Trp Asp Gln Thr Phe Val Ile Pro Leu Glu Arg Ala Arg Glu Leu

355 360 365

Glu Ile Gly Val His Trp Arg Asp Trp Arg Gln Leu Cys Gly Val Ala

370 375 380

Phe Leu Arg Leu Glu Asp Phe Leu Asp Asn Ala Cys His Gln Leu Ser

385 390 395 400

Leu Ser Leu Val Pro Gln Gly Leu Leu Phe Ala Gln Val Thr Phe Cys

405 410 415

Asp Pro Val Ile Glu Arg Arg Pro Arg Leu Gln Arg Gln Glu Arg Ile

420 425 430

Phe Ser Lys Arg Arg Gly Gln Asp Phe Leu Arg Ala Ser Gln Met Asn

435 440 445

Leu Gly Met Ala Ala Trp Gly Arg Leu Val Met Asn Leu Leu Pro Pro

450 455 460

Cys Ser Ser Pro Ser Thr Ile Ser Pro Pro Lys Gly Cys Pro Arg Thr

465 470 475 480

Pro Thr Thr Leu Arg Glu Ala Ser Asp Pro Ala Thr Pro Ser Asn Phe

485 490 495

Leu Pro Lys Lys Thr Pro Leu Gly Glu Glu Met Thr Pro Pro Pro Lys

500 505 510

Pro Pro Arg Leu Tyr Leu Pro Gln Glu Pro Thr Ser Glu Glu Thr Pro

515 520 525

Arg Thr Lys Arg Pro His Met Glu Pro Arg Thr Arg Arg Gly Pro Ser

530 535 540

Pro Pro Ala Ser Pro Thr Arg Lys Pro Pro Arg Leu Gln Asp Phe Arg

545 550 555 560

Cys Leu Ala Val Leu Gly Arg Gly His Phe Gly Lys Val Leu Leu Val

565 570 575

Gln Phe Lys Gly Thr Gly Lys Tyr Tyr Ala Ile Lys Ala Leu Lys Lys

580 585 590

Gln Glu Val Leu Ser Arg Asp Glu Ile Glu Ser Leu Tyr Cys Glu Lys

595 600 605

Arg Ile Leu Glu Ala Val Gly Cys Thr Gly His Pro Phe Leu Leu Ser

610 615 620

Leu Leu Ala Cys Phe Gln Thr Ser Ser His Ala Cys Phe Val Thr Glu

625 630 635 640

Phe Val Pro Gly Gly Asp Leu Met Met Gln Ile His Glu Asp Val Phe

645 650 655

Pro Glu Pro Gln Ala Arg Phe Tyr Val Ala Cys Val Val Leu Gly Leu

660 665 670

Gln Phe Leu His Glu Lys Lys Ile Ile Tyr Arg Asp Leu Lys Leu Asp

675 680 685

Asn Leu Leu Leu Asp Ala Gln Gly Phe Leu Lys Ile Ala Asp Phe Gly

690 695 700

Leu Cys Lys Glu Gly Ile Gly Phe Gly Asp Arg Thr Ser Thr Phe Cys

705 710 715 720

Gly Thr Pro Glu Phe Leu Ala Pro Glu Val Leu Thr Gln Glu Ala Tyr

725 730 735

Thr Arg Ala Val Asp Trp Trp Gly Leu Gly Val Leu Leu Tyr Glu Met

740 745 750

Leu Val Gly Glu Cys Pro Phe Pro Gly Asp Thr Glu Glu Glu Val Phe

755 760 765

Asp Cys Ile Val Asn Met Asp Ala Pro Tyr Pro Gly Phe Leu Ser Val

770 775 780

Gln Gly Leu Glu Phe Ile Gln Lys Leu Leu Gln Lys Cys Pro Glu Lys

785 790 795 800

Arg Leu Gly Ala Gly Glu Gln Asp Ala Glu Glu Ile Lys Val Gln Pro

805 810 815

Phe Phe Arg Thr Thr Asn Trp Gln Ala Leu Leu Ala Arg Thr Ile Gln

820 825 830

Pro Pro Phe Val Pro Thr Leu Cys Gly Pro Ala Asp Leu Arg Tyr Phe

835 840 845

Glu Gly Glu Phe Thr Gly Leu Pro Pro Ala Leu Thr Pro Pro Ala Pro

850 855 860

His Ser Leu Leu Thr Ala Arg Gln Gln Ala Ala Phe Arg Asp Phe Asp

865 870 875 880

Phe Val Ser Glu Arg Phe Leu Glu Pro

885

<210> 41

<211> 1056

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 41

Met Ala Ser Gln Pro Asn Ser Ser Ala Lys Lys Lys Glu Glu Lys Gly

1 5 10 15

Lys Asn Ile Gln Val Val Val Arg Cys Arg Pro Phe Asn Leu Ala Glu

20 25 30

Arg Lys Ala Ser Ala His Ser Ile Val Glu Cys Asp Pro Val Arg Lys

35 40 45

Glu Val Ser Val Arg Thr Gly Gly Leu Ala Asp Lys Ser Ser Arg Lys

50 55 60

Thr Tyr Thr Phe Asp Met Val Phe Gly Ala Ser Thr Lys Gln Ile Asp

65 70 75 80

Val Tyr Arg Ser Val Val Cys Pro Ile Leu Asp Glu Val Ile Met Gly

85 90 95

Tyr Asn Cys Thr Ile Phe Ala Tyr Gly Gln Thr Gly Thr Gly Lys Thr

100 105 110

Phe Thr Met Glu Gly Glu Arg Ser Pro Asn Glu Glu Tyr Thr Trp Glu

115 120 125

Glu Asp Pro Leu Ala Gly Ile Ile Pro Arg Thr Leu His Gln Ile Phe

130 135 140

Glu Lys Leu Thr Asp Asn Gly Thr Glu Phe Ser Val Lys Val Ser Leu

145 150 155 160

Leu Glu Ile Tyr Asn Glu Glu Leu Phe Asp Leu Leu Asn Pro Ser Ser

165 170 175

Asp Val Ser Glu Arg Leu Gln Met Phe Asp Asp Pro Arg Asn Lys Arg

180 185 190

Gly Val Ile Ile Lys Gly Leu Glu Glu Ile Thr Val His Asn Lys Asp

195 200 205

Glu Val Tyr Gln Ile Leu Glu Lys Gly Ala Ala Lys Arg Thr Thr Ala

210 215 220

Ala Thr Leu Met Asn Ala Tyr Ser Ser Arg Ser His Ser Val Phe Ser

225 230 235 240

Val Thr Ile His Met Lys Glu Thr Thr Ile Asp Gly Glu Glu Leu Val

245 250 255

Lys Ile Gly Lys Leu Asn Leu Val Asp Leu Ala Gly Ser Glu Asn Ile

260 265 270

Gly Arg Ser Gly Ala Val Asp Lys Arg Ala Arg Glu Ala Gly Asn Ile

275 280 285

Asn Gln Ser Leu Leu Thr Leu Gly Arg Val Ile Thr Ala Leu Val Glu

290 295 300

Arg Thr Pro His Val Pro Tyr Arg Glu Ser Lys Leu Thr Arg Ile Leu

305 310 315 320

Gln Asp Ser Leu Gly Gly Arg Thr Arg Thr Ser Ile Ile Ala Thr Ile

325 330 335

Ser Pro Ala Ser Leu Asn Leu Glu Glu Thr Leu Ser Thr Leu Glu Tyr

340 345 350

Ala His Arg Ala Lys Asn Ile Leu Asn Lys Pro Glu Val Asn Gln Lys

355 360 365

Leu Thr Lys Lys Ala Leu Ile Lys Glu Tyr Thr Glu Glu Ile Glu Arg

370 375 380

Leu Lys Arg Asp Leu Ala Ala Ala Arg Glu Lys Asn Gly Val Tyr Ile

385 390 395 400

Ser Glu Glu Asn Phe Arg Val Met Ser Gly Lys Leu Thr Val Gln Glu

405 410 415

Glu Gln Ile Val Glu Leu Ile Glu Lys Ile Gly Ala Val Glu Glu Glu

420 425 430

Leu Asn Arg Val Thr Glu Leu Phe Met Asp Asn Lys Asn Glu Leu Asp

435 440 445

Gln Cys Lys Ser Asp Leu Gln Asn Lys Thr Gln Glu Leu Glu Thr Thr

450 455 460

Gln Lys His Leu Gln Glu Thr Lys Leu Gln Leu Val Lys Glu Glu Tyr

465 470 475 480

Ile Thr Ser Ala Leu Glu Ser Thr Glu Glu Lys Leu His Asp Ala Ala

485 490 495

Ser Lys Leu Leu Asn Thr Val Glu Glu Thr Thr Lys Asp Val Ser Gly

500 505 510

Leu His Ser Lys Leu Asp Arg Lys Lys Ala Val Asp Gln His Asn Ala

515 520 525

Glu Ala Gln Asp Ile Phe Gly Lys Asn Leu Asn Ser Leu Phe Asn Asn

530 535 540

Met Glu Glu Leu Ile Lys Asp Gly Ser Ser Lys Gln Lys Ala Met Leu

545 550 555 560

Glu Val His Lys Thr Leu Phe Gly Asn Leu Leu Ser Ser Ser Val Ser

565 570 575

Ala Leu Asp Thr Ile Thr Thr Val Ala Leu Gly Ser Leu Thr Ser Ile

580 585 590

Pro Glu Asn Val Ser Thr His Val Ser Gln Ile Phe Asn Met Ile Leu

595 600 605

Lys Glu Gln Ser Leu Ala Ala Glu Ser Lys Thr Val Leu Gln Glu Leu

610 615 620

Ile Asn Val Leu Lys Thr Asp Leu Leu Ser Ser Leu Glu Met Ile Leu

625 630 635 640

Ser Pro Thr Val Val Ser Ile Leu Lys Ile Asn Ser Gln Leu Lys His

645 650 655

Ile Phe Lys Thr Ser Leu Thr Val Ala Asp Lys Ile Glu Asp Gln Lys

660 665 670

Lys Glu Leu Asp Gly Phe Leu Ser Ile Leu Cys Asn Asn Leu His Glu

675 680 685

Leu Gln Glu Asn Thr Ile Cys Ser Leu Val Glu Ser Gln Lys Gln Cys

690 695 700

Gly Asn Leu Thr Glu Asp Leu Lys Thr Ile Lys Gln Thr His Ser Gln

705 710 715 720

Glu Leu Cys Lys Leu Met Asn Leu Trp Thr Glu Arg Phe Cys Ala Leu

725 730 735

Glu Glu Lys Cys Glu Asn Ile Gln Lys Pro Leu Ser Ser Val Gln Glu

740 745 750

Asn Ile Gln Gln Lys Ser Lys Asp Ile Val Asn Lys Met Thr Phe His

755 760 765

Ser Gln Lys Phe Cys Ala Asp Ser Asp Gly Phe Ser Gln Glu Leu Arg

770 775 780

Asn Phe Asn Gln Glu Gly Thr Lys Leu Val Glu Glu Ser Val Lys His

785 790 795 800

Ser Asp Lys Leu Asn Gly Asn Leu Glu Lys Ile Ser Gln Glu Thr Glu

805 810 815

Gln Arg Cys Glu Ser Leu Asn Thr Arg Thr Val Tyr Phe Ser Glu Gln

820 825 830

Trp Val Ser Ser Leu Asn Glu Arg Glu Gln Glu Leu His Asn Leu Leu

835 840 845

Glu Val Val Ser Gln Cys Cys Glu Ala Ser Ser Ser Asp Ile Thr Glu

850 855 860

Lys Ser Asp Gly Arg Lys Ala Ala His Glu Lys Gln His Asn Ile Phe

865 870 875 880

Leu Asp Gln Met Thr Ile Asp Glu Asp Lys Leu Ile Ala Gln Asn Leu

885 890 895

Glu Leu Asn Glu Thr Ile Lys Ile Gly Leu Thr Lys Leu Asn Cys Phe

900 905 910

Leu Glu Gln Asp Leu Lys Leu Asp Ile Pro Thr Gly Thr Thr Pro Gln

915 920 925

Arg Lys Ser Tyr Leu Tyr Pro Ser Thr Leu Val Arg Thr Glu Pro Arg

930 935 940

Glu His Leu Leu Asp Gln Leu Lys Arg Lys Gln Pro Glu Leu Leu Met

945 950 955 960

Met Leu Asn Cys Ser Glu Asn Asn Lys Glu Glu Thr Ile Pro Asp Val

965 970 975

Asp Val Glu Glu Ala Val Leu Gly Gln Tyr Thr Glu Glu Pro Leu Ser

980 985 990

Gln Glu Pro Ser Val Asp Ala Gly Val Asp Cys Ser Ser Ile Gly Gly

995 1000 1005

Val Pro Phe Phe Gln His Lys Lys Ser His Gly Lys Asp Lys Glu

1010 1015 1020

Asn Arg Gly Ile Asn Thr Leu Glu Arg Ser Lys Val Glu Glu Thr

1025 1030 1035

Thr Glu His Leu Val Thr Lys Ser Arg Leu Pro Leu Arg Ala Gln

1040 1045 1050

Ile Asn Leu

1055

<210> 42

<211> 2825

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 42

Met Tyr Ala Ser Leu Gly Ser Gly Pro Val Ala Pro Leu Pro Ala Ser

1 5 10 15

Val Pro Pro Ser Val Leu Gly Ser Trp Ser Thr Gly Gly Ser Arg Ser

20 25 30

Cys Val Arg Gln Glu Thr Lys Ser Pro Gly Gly Ala Arg Thr Ser Gly

35 40 45

His Trp Ala Ser Val Trp Gln Glu Val Leu Lys Gln Leu Gln Gly Ser

50 55 60

Ile Glu Asp Glu Ala Met Ala Ser Ser Gly Gln Ile Asp Leu Leu Glu

65 70 75 80

Arg Leu Lys Glu Leu Asn Leu Asp Ser Ser Asn Phe Pro Gly Val Lys

85 90 95

Leu Arg Ser Lys Met Ser Leu Arg Ser Tyr Gly Ser Arg Glu Gly Ser

100 105 110

Val Ser Ser Arg Ser Gly Glu Cys Ser Pro Val Pro Met Gly Ser Phe

115 120 125

Pro Arg Arg Gly Phe Val Asn Gly Ser Arg Glu Ser Thr Gly Tyr Leu

130 135 140

Glu Glu Leu Glu Lys Glu Arg Ser Leu Leu Leu Ala Asp Leu Asp Lys

145 150 155 160

Glu Glu Lys Glu Lys Asp Trp Tyr Tyr Ala Gln Leu Gln Asn Leu Thr

165 170 175

Lys Arg Ile Asp Ser Leu Pro Leu Thr Glu Asn Phe Ser Leu Gln Thr

180 185 190

Asp Met Thr Arg Arg Gln Leu Glu Tyr Glu Ala Arg Gln Ile Arg Val

195 200 205

Ala Met Glu Glu Gln Leu Gly Thr Cys Gln Asp Met Glu Lys Arg Ala

210 215 220

Gln Arg Ser Ser Gln Asn Lys His Glu Thr Gly Ser His Asp Ala Glu

225 230 235 240

Arg Gln Asn Glu Gly Gln Gly Val Gly Glu Ile Asn Met Ala Thr Ser

245 250 255

Gly Asn Gly Gln Gly Ser Thr Thr Arg Met Asp His Glu Thr Ala Ser

260 265 270

Val Leu Ser Ser Ser Ser Thr His Ser Ala Pro Arg Arg Leu Thr Ser

275 280 285

His Leu Gly Thr Lys Val Glu Met Val Tyr Ser Leu Leu Ser Met Leu

290 295 300

Gly Thr His Asp Lys Asp Asp Met Ser Arg Thr Leu Leu Ala Met Ser

305 310 315 320

Ser Ser Gln Asp Ser Cys Ile Ser Met Arg Gln Ser Gly Cys Leu Pro

325 330 335

Leu Leu Ile Gln Leu Leu His Gly Asn Asp Lys Asp Ser Val Leu Leu

340 345 350

Gly Asn Ser Arg Gly Ser Lys Glu Ala Arg Ala Arg Ala Ser Ala Ala

355 360 365

Leu His Asn Ile Ile His Ser Gln Pro Asp Asp Lys Arg Gly Arg Arg

370 375 380

Glu Ile Arg Val Leu His Leu Leu Glu Gln Ile Arg Ala Tyr Cys Glu

385 390 395 400

Thr Cys Trp Glu Trp Gln Glu Ala His Glu Pro Gly Met Asp Gln Asp

405 410 415

Lys Asn Pro Met Pro Ala Pro Val Glu His Gln Ile Cys Pro Ala Val

420 425 430

Cys Val Leu Met Lys Leu Ser Phe Asp Glu Glu His Arg His Ala Met

435 440 445

Asn Glu Leu Gly Gly Leu Gln Ala Ile Ala Glu Leu Leu Gln Val Asp

450 455 460

Cys Glu Met Tyr Gly Leu Thr Asn Asp His Tyr Ser Ile Thr Leu Arg

465 470 475 480

Arg Tyr Ala Gly Met Ala Leu Thr Asn Leu Thr Phe Gly Asp Val Ala

485 490 495

Asn Lys Ala Thr Leu Cys Ser Met Lys Gly Cys Met Arg Ala Leu Val

500 505 510

Ala Gln Leu Lys Ser Glu Ser Glu Asp Leu Gln Gln Val Ile Ala Ser

515 520 525

Val Leu Arg Asn Leu Ser Trp Arg Ala Asp Val Asn Ser Lys Lys Thr

530 535 540

Leu Arg Glu Val Gly Ser Val Lys Ala Leu Met Glu Cys Ala Leu Glu

545 550 555 560

Val Lys Lys Glu Ser Thr Leu Lys Ser Val Leu Ser Ala Leu Trp Asn

565 570 575

Leu Ser Ala His Cys Thr Glu Asn Lys Ala Asp Ile Cys Ala Val Asp

580 585 590

Gly Ala Leu Ala Phe Leu Val Gly Thr Leu Thr Tyr Arg Ser Gln Thr

595 600 605

Asn Thr Leu Ala Ile Ile Glu Ser Gly Gly Gly Ile Leu Arg Asn Val

610 615 620

Ser Ser Leu Ile Ala Thr Asn Glu Asp His Arg Gln Ile Leu Arg Glu

625 630 635 640

Asn Asn Cys Leu Gln Thr Leu Leu Gln His Leu Lys Ser His Ser Leu

645 650 655

Thr Ile Val Ser Asn Ala Cys Gly Thr Leu Trp Asn Leu Ser Ala Arg

660 665 670

Asn Pro Lys Asp Gln Glu Ala Leu Trp Asp Met Gly Ala Val Ser Met

675 680 685

Leu Lys Asn Leu Ile His Ser Lys His Lys Met Ile Ala Met Gly Ser

690 695 700

Ala Ala Ala Leu Arg Asn Leu Met Ala Asn Arg Pro Ala Lys Tyr Lys

705 710 715 720

Asp Ala Asn Ile Met Ser Pro Gly Ser Ser Leu Pro Ser Leu His Val

725 730 735

Arg Lys Gln Lys Ala Leu Glu Ala Glu Leu Asp Ala Gln His Leu Ser

740 745 750

Glu Thr Phe Asp Asn Ile Asp Asn Leu Ser Pro Lys Ala Ser His Arg

755 760 765

Ser Lys Gln Arg His Lys Gln Ser Leu Tyr Gly Asp Tyr Val Phe Asp

770 775 780

Thr Asn Arg His Asp Asp Asn Arg Ser Asp Asn Phe Asn Thr Gly Asn

785 790 795 800

Met Thr Val Leu Ser Pro Tyr Leu Asn Thr Thr Val Leu Pro Ser Ser

805 810 815

Ser Ser Ser Arg Gly Ser Leu Asp Ser Ser Arg Ser Glu Lys Asp Arg

820 825 830

Ser Leu Glu Arg Glu Arg Gly Ile Gly Leu Gly Asn Tyr His Pro Ala

835 840 845

Thr Glu Asn Pro Gly Thr Ser Ser Lys Arg Gly Leu Gln Ile Ser Thr

850 855 860

Thr Ala Ala Gln Ile Ala Lys Val Met Glu Glu Val Ser Ala Ile His

865 870 875 880

Thr Ser Gln Glu Asp Arg Ser Ser Gly Ser Thr Thr Glu Leu His Cys

885 890 895

Val Thr Asp Glu Arg Asn Ala Leu Arg Arg Ser Ser Ala Ala His Thr

900 905 910

His Ser Asn Thr Tyr Asn Phe Thr Lys Ser Glu Asn Ser Asn Arg Thr

915 920 925

Cys Ser Met Pro Tyr Ala Lys Leu Glu Tyr Lys Arg Ser Ser Asn Asp

930 935 940

Ser Leu Asn Ser Val Ser Ser Ser Asp Gly Tyr Gly Lys Arg Gly Gln

945 950 955 960

Met Lys Pro Ser Ile Glu Ser Tyr Ser Glu Asp Asp Glu Ser Lys Phe

965 970 975

Cys Ser Tyr Gly Gln Tyr Pro Ala Asp Leu Ala His Lys Ile His Ser

980 985 990

Ala Asn His Met Asp Asp Asn Asp Gly Glu Leu Asp Thr Pro Ile Asn

995 1000 1005

Tyr Ser Leu Lys Tyr Ser Asp Glu Gln Leu Asn Ser Gly Arg Gln

1010 1015 1020

Ser Pro Ser Gln Asn Glu Arg Trp Ala Arg Pro Lys His Ile Ile

1025 1030 1035

Glu Asp Glu Ile Lys Gln Ser Glu Gln Arg Gln Ser Arg Asn Gln

1040 1045 1050

Ser Thr Thr Tyr Pro Val Tyr Thr Glu Ser Thr Asp Asp Lys His

1055 1060 1065

Leu Lys Phe Gln Pro His Phe Gly Gln Gln Glu Cys Val Ser Pro

1070 1075 1080

Tyr Arg Ser Arg Gly Ala Asn Gly Ser Glu Thr Asn Arg Val Gly

1085 1090 1095

Ser Asn His Gly Ile Asn Gln Asn Val Ser Gln Ser Leu Cys Gln

1100 1105 1110

Glu Asp Asp Tyr Glu Asp Asp Lys Pro Thr Asn Tyr Ser Glu Arg

1115 1120 1125

Tyr Ser Glu Glu Glu Gln His Glu Glu Glu Glu Arg Pro Thr Asn

1130 1135 1140

Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Glu Glu Lys Arg His Val Asp Gln Pro

1145 1150 1155

Ile Asp Tyr Ser Leu Lys Tyr Ala Thr Asp Ile Pro Ser Ser Gln

1160 1165 1170

Lys Gln Ser Phe Ser Phe Ser Lys Ser Ser Ser Gly Gln Ser Ser

1175 1180 1185

Lys Thr Glu His Met Ser Ser Ser Ser Glu Asn Thr Ser Thr Pro

1190 1195 1200

Ser Ser Asn Ala Lys Arg Gln Asn Gln Leu His Pro Ser Ser Ala

1205 1210 1215

Gln Ser Arg Ser Gly Gln Pro Gln Lys Ala Ala Thr Cys Lys Val

1220 1225 1230

Ser Ser Ile Asn Gln Glu Thr Ile Gln Thr Tyr Cys Val Glu Asp

1235 1240 1245

Thr Pro Ile Cys Phe Ser Arg Cys Ser Ser Leu Ser Ser Leu Ser

1250 1255 1260

Ser Ala Glu Asp Glu Ile Gly Cys Asn Gln Thr Thr Gln Glu Ala

1265 1270 1275

Asp Ser Ala Asn Thr Leu Gln Ile Ala Glu Ile Lys Glu Lys Ile

1280 1285 1290

Gly Thr Arg Ser Ala Glu Asp Pro Val Ser Glu Val Pro Ala Val

1295 1300 1305

Ser Gln His Pro Arg Thr Lys Ser Ser Arg Leu Gln Gly Ser Ser

1310 1315 1320

Leu Ser Ser Glu Ser Ala Arg His Lys Ala Val Glu Phe Ser Ser

1325 1330 1335

Gly Ala Lys Ser Pro Ser Lys Ser Gly Ala Gln Thr Pro Lys Ser

1340 1345 1350

Pro Pro Glu His Tyr Val Gln Glu Thr Pro Leu Met Phe Ser Arg

1355 1360 1365

Cys Thr Ser Val Ser Ser Leu Asp Ser Phe Glu Ser Arg Ser Ile

1370 1375 1380

Ala Ser Ser Val Gln Ser Glu Pro Cys Ser Gly Met Val Ser Gly

1385 1390 1395

Ile Ile Ser Pro Ser Asp Leu Pro Asp Ser Pro Gly Gln Thr Met

1400 1405 1410

Pro Pro Ser Arg Ser Lys Thr Pro Pro Pro Pro Pro Gln Thr Ala

1415 1420 1425

Gln Thr Lys Arg Glu Val Pro Lys Asn Lys Ala Pro Thr Ala Glu

1430 1435 1440

Lys Arg Glu Ser Gly Pro Lys Gln Ala Ala Val Asn Ala Ala Val

1445 1450 1455

Gln Arg Val Gln Val Leu Pro Asp Ala Asp Thr Leu Leu His Phe

1460 1465 1470

Ala Thr Glu Ser Thr Pro Asp Gly Phe Ser Cys Ser Ser Ser Leu

1475 1480 1485

Ser Ala Leu Ser Leu Asp Glu Pro Phe Ile Gln Lys Asp Val Glu

1490 1495 1500

Leu Arg Ile Met Pro Pro Val Gln Glu Asn Asp Asn Gly Asn Glu

1505 1510 1515

Thr Glu Ser Glu Gln Pro Lys Glu Ser Asn Glu Asn Gln Glu Lys

1520 1525 1530

Glu Ala Glu Lys Thr Ile Asp Ser Glu Lys Asp Leu Leu Asp Asp

1535 1540 1545

Ser Asp Asp Asp Asp Ile Glu Ile Leu Glu Glu Cys Ile Ile Ser

1550 1555 1560

Ala Met Pro Thr Lys Ser Ser Arg Lys Ala Lys Lys Pro Ala Gln

1565 1570 1575

Thr Ala Ser Lys Leu Pro Pro Pro Val Ala Arg Lys Pro Ser Gln

1580 1585 1590

Leu Pro Val Tyr Lys Leu Leu Pro Ser Gln Asn Arg Leu Gln Pro

1595 1600 1605

Gln Lys His Val Ser Phe Thr Pro Gly Asp Asp Met Pro Arg Val

1610 1615 1620

Tyr Cys Val Glu Gly Thr Pro Ile Asn Phe Ser Thr Ala Thr Ser

1625 1630 1635

Leu Ser Asp Leu Thr Ile Glu Ser Pro Pro Asn Glu Leu Ala Ala

1640 1645 1650

Gly Glu Gly Val Arg Gly Gly Ala Gln Ser Gly Glu Phe Glu Lys

1655 1660 1665

Arg Asp Thr Ile Pro Thr Glu Gly Arg Ser Thr Asp Glu Ala Gln

1670 1675 1680

Gly Gly Lys Thr Ser Ser Val Thr Ile Pro Glu Leu Asp Asp Asn

1685 1690 1695

Lys Ala Glu Glu Gly Asp Ile Leu Ala Glu Cys Ile Asn Ser Ala

1700 1705 1710

Met Pro Lys Gly Lys Ser His Lys Pro Phe Arg Val Lys Lys Ile

1715 1720 1725

Met Asp Gln Val Gln Gln Ala Ser Ala Ser Ser Ser Ala Pro Asn

1730 1735 1740

Lys Asn Gln Leu Asp Gly Lys Lys Lys Lys Pro Thr Ser Pro Val

1745 1750 1755

Lys Pro Ile Pro Gln Asn Thr Glu Tyr Arg Thr Arg Val Arg Lys

1760 1765 1770

Asn Ala Asp Ser Lys Asn Asn Leu Asn Ala Glu Arg Val Phe Ser

1775 1780 1785

Asp Asn Lys Asp Ser Lys Lys Gln Asn Leu Lys Asn Asn Ser Lys

1790 1795 1800

Val Phe Asn Asp Lys Leu Pro Asn Asn Glu Asp Arg Val Arg Gly

1805 1810 1815

Ser Phe Ala Phe Asp Ser Pro His His Tyr Thr Pro Ile Glu Gly

1820 1825 1830

Thr Pro Tyr Cys Phe Ser Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser Leu Asp

1835 1840 1845

Phe Asp Asp Asp Asp Val Asp Leu Ser Arg Glu Lys Ala Glu Leu

1850 1855 1860

Arg Lys Ala Lys Glu Asn Lys Glu Ser Glu Ala Lys Val Thr Ser

1865 1870 1875

His Thr Glu Leu Thr Ser Asn Gln Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gln

1880 1885 1890

Ala Ile Ala Lys Gln Pro Ile Asn Arg Gly Gln Pro Lys Pro Ile

1895 1900 1905

Leu Gln Lys Gln Ser Thr Phe Pro Gln Ser Ser Lys Asp Ile Pro

1910 1915 1920

Asp Arg Gly Ala Ala Thr Asp Glu Lys Leu Gln Asn Phe Ala Ile

1925 1930 1935

Glu Asn Thr Pro Val Cys Phe Ser His Asn Ser Ser Leu Ser Ser

1940 1945 1950

Leu Ser Asp Ile Asp Gln Glu Asn Asn Asn Lys Glu Asn Glu Pro

1955 1960 1965

Ile Lys Glu Thr Glu Pro Pro Asp Ser Gln Gly Glu Pro Ser Lys

1970 1975 1980

Pro Gln Ala Ser Gly Tyr Ala Pro Lys Ser Phe His Val Glu Asp

1985 1990 1995

Thr Pro Val Cys Phe Ser Arg Asn Ser Ser Leu Ser Ser Leu Ser

2000 2005 2010

Ile Asp Ser Glu Asp Asp Leu Leu Gln Glu Cys Ile Ser Ser Ala

2015 2020 2025

Met Pro Lys Lys Lys Lys Pro Ser Arg Leu Lys Gly Asp Asn Glu

2030 2035 2040

Lys His Ser Pro Arg Asn Met Gly Gly Ile Leu Gly Glu Asp Leu

2045 2050 2055

Thr Leu Asp Leu Lys Asp Ile Gln Arg Pro Asp Ser Glu His Gly

2060 2065 2070

Leu Ser Pro Asp Ser Glu Asn Phe Asp Trp Lys Ala Ile Gln Glu

2075 2080 2085

Gly Ala Asn Ser Ile Val Ser Ser Leu His Gln Ala Ala Ala Ala

2090 2095 2100

Ala Cys Leu Ser Arg Gln Ala Ser Ser Asp Ser Asp Ser Ile Leu

2105 2110 2115

Ser Leu Lys Ser Gly Ile Ser Leu Gly Ser Pro Phe His Leu Thr

2120 2125 2130

Pro Asp Gln Glu Glu Lys Pro Phe Thr Ser Asn Lys Gly Pro Arg

2135 2140 2145

Ile Leu Lys Pro Gly Glu Lys Ser Thr Leu Glu Thr Lys Lys Ile

2150 2155 2160

Glu Ser Glu Ser Lys Gly Ile Lys Gly Gly Lys Lys Val Tyr Lys

2165 2170 2175

Ser Leu Ile Thr Gly Lys Val Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ser Gly

2180 2185 2190

Gln Met Lys Gln Pro Leu Gln Ala Asn Met Pro Ser Ile Ser Arg

2195 2200 2205

Gly Arg Thr Met Ile His Ile Pro Gly Val Arg Asn Ser Ser Ser

2210 2215 2220

Ser Thr Ser Pro Val Ser Lys Lys Gly Pro Pro Leu Lys Thr Pro

2225 2230 2235

Ala Ser Lys Ser Pro Ser Glu Gly Gln Thr Ala Thr Thr Ser Pro

2240 2245 2250

Arg Gly Ala Lys Pro Ser Val Lys Ser Glu Leu Ser Pro Val Ala

2255 2260 2265

Arg Gln Thr Ser Gln Ile Gly Gly Ser Ser Lys Ala Pro Ser Arg

2270 2275 2280

Ser Gly Ser Arg Asp Ser Thr Pro Ser Arg Pro Ala Gln Gln Pro

2285 2290 2295

Leu Ser Arg Pro Ile Gln Ser Pro Gly Arg Asn Ser Ile Ser Pro

2300 2305 2310

Gly Arg Asn Gly Ile Ser Pro Pro Asn Lys Leu Ser Gln Leu Pro

2315 2320 2325

Arg Thr Ser Ser Pro Ser Thr Ala Ser Thr Lys Ser Ser Gly Ser

2330 2335 2340

Gly Lys Met Ser Tyr Thr Ser Pro Gly Arg Gln Met Ser Gln Gln

2345 2350 2355

Asn Leu Thr Lys Gln Thr Gly Leu Ser Lys Asn Ala Ser Ser Ile

2360 2365 2370

Pro Arg Ser Glu Ser Ala Ser Lys Gly Leu Asn Gln Met Asn Asn

2375 2380 2385

Gly Asn Gly Ala Asn Lys Lys Val Glu Leu Ser Arg Met Ser Ser

2390 2395 2400

Thr Lys Ser Ser Gly Ser Glu Ser Asp Arg Ser Glu Arg Pro Val

2405 2410 2415

Leu Val Arg Gln Ser Thr Phe Ile Lys Glu Ala Pro Ser Pro Thr

2420 2425 2430

Leu Arg Arg Lys Leu Glu Glu Ser Ala Ser Phe Glu Ser Leu Ser

2435 2440 2445

Pro Ser Ser Arg Pro Ala Ser Pro Thr Arg Ser Gln Ala Gln Thr

2450 2455 2460

Pro Val Leu Ser Pro Ser Leu Pro Asp Met Ser Leu Ser Thr His

2465 2470 2475

Ser Ser Val Gln Ala Gly Gly Trp Arg Lys Leu Pro Pro Asn Leu

2480 2485 2490

Ser Pro Thr Ile Glu Tyr Asn Asp Gly Arg Pro Ala Lys Arg His

2495 2500 2505

Asp Ile Ala Arg Ser His Ser Glu Ser Pro Ser Arg Leu Pro Ile

2510 2515 2520

Asn Arg Ser Gly Thr Trp Lys Arg Glu His Ser Lys His Ser Ser

2525 2530 2535

Ser Leu Pro Arg Val Ser Thr Trp Arg Arg Thr Gly Ser Ser Ser

2540 2545 2550

Ser Ile Leu Ser Ala Ser Ser Glu Ser Ser Glu Lys Ala Lys Ser

2555 2560 2565

Glu Asp Glu Lys His Val Asn Ser Ile Ser Gly Thr Lys Gln Ser

2570 2575 2580

Lys Glu Asn Gln Val Ser Ala Lys Gly Thr Trp Arg Lys Ile Lys

2585 2590 2595

Glu Asn Glu Phe Ser Pro Thr Asn Ser Thr Ser Gln Thr Val Ser

2600 2605 2610

Ser Gly Ala Thr Asn Gly Ala Glu Ser Lys Thr Leu Ile Tyr Gln

2615 2620 2625

Met Ala Pro Ala Val Ser Lys Thr Glu Asp Val Trp Val Arg Ile

2630 2635 2640

Glu Asp Cys Pro Ile Asn Asn Pro Arg Ser Gly Arg Ser Pro Thr

2645 2650 2655

Gly Asn Thr Pro Pro Val Ile Asp Ser Val Ser Glu Lys Ala Asn

2660 2665 2670

Pro Asn Ile Lys Asp Ser Lys Asp Asn Gln Ala Lys Gln Asn Val

2675 2680 2685

Gly Asn Gly Ser Val Pro Met Arg Thr Val Gly Leu Glu Asn Arg

2690 2695 2700

Leu Asn Ser Phe Ile Gln Val Asp Ala Pro Asp Gln Lys Gly Thr

2705 2710 2715

Glu Ile Lys Pro Gly Gln Asn Asn Pro Val Pro Val Ser Glu Thr

2720 2725 2730

Asn Glu Ser Ser Ile Val Glu Arg Thr Pro Phe Ser Ser Ser Ser

2735 2740 2745

Ser Ser Lys His Ser Ser Pro Ser Gly Thr Val Ala Ala Arg Val

2750 2755 2760

Thr Pro Phe Asn Tyr Asn Pro Ser Pro Arg Lys Ser Ser Ala Asp

2765 2770 2775

Ser Thr Ser Ala Arg Pro Ser Gln Ile Pro Thr Pro Val Asn Asn

2780 2785 2790

Asn Thr Lys Lys Arg Asp Ser Lys Thr Asp Ser Thr Glu Ser Ser

2795 2800 2805

Gly Thr Gln Ser Pro Lys Arg His Ser Gly Ser Tyr Leu Val Thr

2810 2815 2820

Ser Val

2825

<210> 43

<211> 1863

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 43

Met Asp Leu Ser Ala Leu Arg Val Glu Glu Val Gln Asn Val Ile Asn

1 5 10 15

Ala Met Gln Lys Ile Leu Glu Cys Pro Ile Cys Leu Glu Leu Ile Lys

20 25 30

Glu Pro Val Ser Thr Lys Cys Asp His Ile Phe Cys Lys Phe Cys Met

35 40 45

Leu Lys Leu Leu Asn Gln Lys Lys Gly Pro Ser Gln Cys Pro Leu Cys

50 55 60

Lys Asn Asp Ile Thr Lys Arg Ser Leu Gln Glu Ser Thr Arg Phe Ser

65 70 75 80

Gln Leu Val Glu Glu Leu Leu Lys Ile Ile Cys Ala Phe Gln Leu Asp

85 90 95

Thr Gly Leu Glu Tyr Ala Asn Ser Tyr Asn Phe Ala Lys Lys Glu Asn

100 105 110

Asn Ser Pro Glu His Leu Lys Asp Glu Val Ser Ile Ile Gln Ser Met

115 120 125

Gly Tyr Arg Asn Arg Ala Lys Arg Leu Leu Gln Ser Glu Pro Glu Asn

130 135 140

Pro Ser Leu Gln Glu Thr Ser Leu Ser Val Gln Leu Ser Asn Leu Gly

145 150 155 160

Thr Val Arg Thr Leu Arg Thr Lys Gln Arg Ile Gln Pro Gln Lys Thr

165 170 175

Ser Val Tyr Ile Glu Leu Gly Ser Asp Ser Ser Glu Asp Thr Val Asn

180 185 190

Lys Ala Thr Tyr Cys Ser Val Gly Asp Gln Glu Leu Leu Gln Ile Thr

195 200 205

Pro Gln Gly Thr Arg Asp Glu Ile Ser Leu Asp Ser Ala Lys Lys Ala

210 215 220

Ala Cys Glu Phe Ser Glu Thr Asp Val Thr Asn Thr Glu His His Gln

225 230 235 240

Pro Ser Asn Asn Asp Leu Asn Thr Thr Glu Lys Arg Ala Ala Glu Arg

245 250 255

His Pro Glu Lys Tyr Gln Gly Ser Ser Val Ser Asn Leu His Val Glu

260 265 270

Pro Cys Gly Thr Asn Thr His Ala Ser Ser Leu Gln His Glu Asn Ser

275 280 285

Ser Leu Leu Leu Thr Lys Asp Arg Met Asn Val Glu Lys Ala Glu Phe

290 295 300

Cys Asn Lys Ser Lys Gln Pro Gly Leu Ala Arg Ser Gln His Asn Arg

305 310 315 320

Trp Ala Gly Ser Lys Glu Thr Cys Asn Asp Arg Arg Thr Pro Ser Thr

325 330 335

Glu Lys Lys Val Asp Leu Asn Ala Asp Pro Leu Cys Glu Arg Lys Glu

340 345 350

Trp Asn Lys Gln Lys Leu Pro Cys Ser Glu Asn Pro Arg Asp Thr Glu

355 360 365

Asp Val Pro Trp Ile Thr Leu Asn Ser Ser Ile Gln Lys Val Asn Glu

370 375 380

Trp Phe Ser Arg Ser Asp Glu Leu Leu Gly Ser Asp Asp Ser His Asp

385 390 395 400

Gly Glu Ser Glu Ser Asn Ala Lys Val Ala Asp Val Leu Asp Val Leu

405 410 415

Asn Glu Val Asp Glu Tyr Ser Gly Ser Ser Glu Lys Ile Asp Leu Leu

420 425 430

Ala Ser Asp Pro His Glu Ala Leu Ile Cys Lys Ser Glu Arg Val His

435 440 445

Ser Lys Ser Val Glu Ser Asn Ile Glu Asp Lys Ile Phe Gly Lys Thr

450 455 460

Tyr Arg Lys Lys Ala Ser Leu Pro Asn Leu Ser His Val Thr Glu Asn

465 470 475 480

Leu Ile Ile Gly Ala Phe Val Thr Glu Pro Gln Ile Ile Gln Glu Arg

485 490 495

Pro Leu Thr Asn Lys Leu Lys Arg Lys Arg Arg Pro Thr Ser Gly Leu

500 505 510

His Pro Glu Asp Phe Ile Lys Lys Ala Asp Leu Ala Val Gln Lys Thr

515 520 525

Pro Glu Met Ile Asn Gln Gly Thr Asn Gln Thr Glu Gln Asn Gly Gln

530 535 540

Val Met Asn Ile Thr Asn Ser Gly His Glu Asn Lys Thr Lys Gly Asp

545 550 555 560

Ser Ile Gln Asn Glu Lys Asn Pro Asn Pro Ile Glu Ser Leu Glu Lys

565 570 575

Glu Ser Ala Phe Lys Thr Lys Ala Glu Pro Ile Ser Ser Ser Ile Ser

580 585 590

Asn Met Glu Leu Glu Leu Asn Ile His Asn Ser Lys Ala Pro Lys Lys

595 600 605

Asn Arg Leu Arg Arg Lys Ser Ser Thr Arg His Ile His Ala Leu Glu

610 615 620

Leu Val Val Ser Arg Asn Leu Ser Pro Pro Asn Cys Thr Glu Leu Gln

625 630 635 640

Ile Asp Ser Cys Ser Ser Ser Glu Glu Ile Lys Lys Lys Lys Tyr Asn

645 650 655

Gln Met Pro Val Arg His Ser Arg Asn Leu Gln Leu Met Glu Gly Lys

660 665 670

Glu Pro Ala Thr Gly Ala Lys Lys Ser Asn Lys Pro Asn Glu Gln Thr

675 680 685

Ser Lys Arg His Asp Ser Asp Thr Phe Pro Glu Leu Lys Leu Thr Asn

690 695 700

Ala Pro Gly Ser Phe Thr Lys Cys Ser Asn Thr Ser Glu Leu Lys Glu

705 710 715 720

Phe Val Asn Pro Ser Leu Pro Arg Glu Glu Lys Glu Glu Lys Leu Glu

725 730 735

Thr Val Lys Val Ser Asn Asn Ala Glu Asp Pro Lys Asp Leu Met Leu

740 745 750

Ser Gly Glu Arg Val Leu Gln Thr Glu Arg Ser Val Glu Ser Ser Ser

755 760 765

Ile Ser Leu Val Pro Gly Thr Asp Tyr Gly Thr Gln Glu Ser Ile Ser

770 775 780

Leu Leu Glu Val Ser Thr Leu Gly Lys Ala Lys Thr Glu Pro Asn Lys

785 790 795 800

Cys Val Ser Gln Cys Ala Ala Phe Glu Asn Pro Lys Gly Leu Ile His

805 810 815

Gly Cys Ser Lys Asp Asn Arg Asn Asp Thr Glu Gly Phe Lys Tyr Pro

820 825 830

Leu Gly His Glu Val Asn His Ser Arg Glu Thr Ser Ile Glu Met Glu

835 840 845

Glu Ser Glu Leu Asp Ala Gln Tyr Leu Gln Asn Thr Phe Lys Val Ser

850 855 860

Lys Arg Gln Ser Phe Ala Pro Phe Ser Asn Pro Gly Asn Ala Glu Glu

865 870 875 880

Glu Cys Ala Thr Phe Ser Ala His Ser Gly Ser Leu Lys Lys Gln Ser

885 890 895

Pro Lys Val Thr Phe Glu Cys Glu Gln Lys Glu Glu Asn Gln Gly Lys

900 905 910

Asn Glu Ser Asn Ile Lys Pro Val Gln Thr Val Asn Ile Thr Ala Gly

915 920 925

Phe Pro Val Val Gly Gln Lys Asp Lys Pro Val Asp Asn Ala Lys Cys

930 935 940

Ser Ile Lys Gly Gly Ser Arg Phe Cys Leu Ser Ser Gln Phe Arg Gly

945 950 955 960

Asn Glu Thr Gly Leu Ile Thr Pro Asn Lys His Gly Leu Leu Gln Asn

965 970 975

Pro Tyr Arg Ile Pro Pro Leu Phe Pro Ile Lys Ser Phe Val Lys Thr

980 985 990

Lys Cys Lys Lys Asn Leu Leu Glu Glu Asn Phe Glu Glu His Ser Met

995 1000 1005

Ser Pro Glu Arg Glu Met Gly Asn Glu Asn Ile Pro Ser Thr Val

1010 1015 1020

Ser Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ile Arg Glu Asn Val Phe Lys Glu

1025 1030 1035

Ala Ser Ser Ser Asn Ile Asn Glu Val Gly Ser Ser Thr Asn Glu

1040 1045 1050

Val Gly Ser Ser Ile Asn Glu Ile Gly Ser Ser Asp Glu Asn Ile

1055 1060 1065

Gln Ala Glu Leu Gly Arg Asn Arg Gly Pro Lys Leu Asn Ala Met

1070 1075 1080

Leu Arg Leu Gly Val Leu Gln Pro Glu Val Tyr Lys Gln Ser Leu

1085 1090 1095

Pro Gly Ser Asn Cys Lys His Pro Glu Ile Lys Lys Gln Glu Tyr

1100 1105 1110

Glu Glu Val Val Gln Thr Val Asn Thr Asp Phe Ser Pro Tyr Leu

1115 1120 1125

Ile Ser Asp Asn Leu Glu Gln Pro Met Gly Ser Ser His Ala Ser

1130 1135 1140

Gln Val Cys Ser Glu Thr Pro Asp Asp Leu Leu Asp Asp Gly Glu

1145 1150 1155

Ile Lys Glu Asp Thr Ser Phe Ala Glu Asn Asp Ile Lys Glu Ser

1160 1165 1170

Ser Ala Val Phe Ser Lys Ser Val Gln Lys Gly Glu Leu Ser Arg

1175 1180 1185

Ser Pro Ser Pro Phe Thr His Thr His Leu Ala Gln Gly Tyr Arg

1190 1195 1200

Arg Gly Ala Lys Lys Leu Glu Ser Ser Glu Glu Asn Leu Ser Ser

1205 1210 1215

Glu Asp Glu Glu Leu Pro Cys Phe Gln His Leu Leu Phe Gly Lys

1220 1225 1230

Val Asn Asn Ile Pro Ser Gln Ser Thr Arg His Ser Thr Val Ala

1235 1240 1245

Thr Glu Cys Leu Ser Lys Asn Thr Glu Glu Asn Leu Leu Ser Leu

1250 1255 1260

Lys Asn Ser Leu Asn Asp Cys Ser Asn Gln Val Ile Leu Ala Lys

1265 1270 1275

Ala Ser Gln Glu His His Leu Ser Glu Glu Thr Lys Cys Ser Ala

1280 1285 1290

Ser Leu Phe Ser Ser Gln Cys Ser Glu Leu Glu Asp Leu Thr Ala

1295 1300 1305

Asn Thr Asn Thr Gln Asp Pro Phe Leu Ile Gly Ser Ser Lys Gln

1310 1315 1320

Met Arg His Gln Ser Glu Ser Gln Gly Val Gly Leu Ser Asp Lys

1325 1330 1335

Glu Leu Val Ser Asp Asp Glu Glu Arg Gly Thr Gly Leu Glu Glu

1340 1345 1350

Asn Asn Gln Glu Glu Gln Ser Met Asp Ser Asn Leu Gly Glu Ala

1355 1360 1365

Ala Ser Gly Cys Glu Ser Glu Thr Ser Val Ser Glu Asp Cys Ser

1370 1375 1380

Gly Leu Ser Ser Gln Ser Asp Ile Leu Thr Thr Gln Gln Arg Asp

1385 1390 1395

Thr Met Gln His Asn Leu Ile Lys Leu Gln Gln Glu Met Ala Glu

1400 1405 1410

Leu Glu Ala Val Leu Glu Gln His Gly Ser Gln Pro Ser Asn Ser

1415 1420 1425

Tyr Pro Ser Ile Ile Ser Asp Ser Ser Ala Leu Glu Asp Leu Arg

1430 1435 1440

Asn Pro Glu Gln Ser Thr Ser Glu Lys Ala Val Leu Thr Ser Gln

1445 1450 1455

Lys Ser Ser Glu Tyr Pro Ile Ser Gln Asn Pro Glu Gly Leu Ser

1460 1465 1470

Ala Asp Lys Phe Glu Val Ser Ala Asp Ser Ser Thr Ser Lys Asn

1475 1480 1485

Lys Glu Pro Gly Val Glu Arg Ser Ser Pro Ser Lys Cys Pro Ser

1490 1495 1500

Leu Asp Asp Arg Trp Tyr Met His Ser Cys Ser Gly Ser Leu Gln

1505 1510 1515

Asn Arg Asn Tyr Pro Ser Gln Glu Glu Leu Ile Lys Val Val Asp

1520 1525 1530

Val Glu Glu Gln Gln Leu Glu Glu Ser Gly Pro His Asp Leu Thr

1535 1540 1545

Glu Thr Ser Tyr Leu Pro Arg Gln Asp Leu Glu Gly Thr Pro Tyr

1550 1555 1560

Leu Glu Ser Gly Ile Ser Leu Phe Ser Asp Asp Pro Glu Ser Asp

1565 1570 1575

Pro Ser Glu Asp Arg Ala Pro Glu Ser Ala Arg Val Gly Asn Ile

1580 1585 1590

Pro Ser Ser Thr Ser Ala Leu Lys Val Pro Gln Leu Lys Val Ala

1595 1600 1605

Glu Ser Ala Gln Ser Pro Ala Ala Ala His Thr Thr Asp Thr Ala

1610 1615 1620

Gly Tyr Asn Ala Met Glu Glu Ser Val Ser Arg Glu Lys Pro Glu

1625 1630 1635

Leu Thr Ala Ser Thr Glu Arg Val Asn Lys Arg Met Ser Met Val

1640 1645 1650

Val Ser Gly Leu Thr Pro Glu Glu Phe Met Leu Val Tyr Lys Phe

1655 1660 1665

Ala Arg Lys His His Ile Thr Leu Thr Asn Leu Ile Thr Glu Glu

1670 1675 1680

Thr Thr His Val Val Met Lys Thr Asp Ala Glu Phe Val Cys Glu

1685 1690 1695

Arg Thr Leu Lys Tyr Phe Leu Gly Ile Ala Gly Gly Lys Trp Val

1700 1705 1710

Val Ser Tyr Phe Trp Val Thr Gln Ser Ile Lys Glu Arg Lys Met

1715 1720 1725

Leu Asn Glu His Asp Phe Glu Val Arg Gly Asp Val Val Asn Gly

1730 1735 1740

Arg Asn His Gln Gly Pro Lys Arg Ala Arg Glu Ser Gln Asp Arg

1745 1750 1755

Lys Ile Phe Arg Gly Leu Glu Ile Cys Cys Tyr Gly Pro Phe Thr

1760 1765 1770

Asn Met Pro Thr Asp Gln Leu Glu Trp Met Val Gln Leu Cys Gly

1775 1780 1785

Ala Ser Val Val Lys Glu Leu Ser Ser Phe Thr Leu Gly Thr Gly

1790 1795 1800

Val His Pro Ile Val Val Val Gln Pro Asp Ala Trp Thr Glu Asp

1805 1810 1815

Asn Gly Phe His Ala Ile Gly Gln Met Cys Glu Ala Pro Val Val

1820 1825 1830

Thr Arg Glu Trp Val Leu Asp Ser Val Ala Leu Tyr Gln Cys Gln

1835 1840 1845

Glu Leu Asp Thr Tyr Leu Ile Pro Gln Ile Pro His Ser His Tyr

1850 1855 1860

<210> 44

<211> 3418

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 44

Met Pro Ile Gly Ser Lys Glu Arg Pro Thr Phe Phe Glu Ile Phe Lys

1 5 10 15

Thr Arg Cys Asn Lys Ala Asp Leu Gly Pro Ile Ser Leu Asn Trp Phe

20 25 30

Glu Glu Leu Ser Ser Glu Ala Pro Pro Tyr Asn Ser Glu Pro Ala Glu

35 40 45

Glu Ser Glu His Lys Asn Asn Asn Tyr Glu Pro Asn Leu Phe Lys Thr

50 55 60

Pro Gln Arg Lys Pro Ser Tyr Asn Gln Leu Ala Ser Thr Pro Ile Ile

65 70 75 80

Phe Lys Glu Gln Gly Leu Thr Leu Pro Leu Tyr Gln Ser Pro Val Lys

85 90 95

Glu Leu Asp Lys Phe Lys Leu Asp Leu Gly Arg Asn Val Pro Asn Ser

100 105 110

Arg His Lys Ser Leu Arg Thr Val Lys Thr Lys Met Asp Gln Ala Asp

115 120 125

Asp Val Ser Cys Pro Leu Leu Asn Ser Cys Leu Ser Glu Ser Pro Val

130 135 140

Val Leu Gln Cys Thr His Val Thr Pro Gln Arg Asp Lys Ser Val Val

145 150 155 160

Cys Gly Ser Leu Phe His Thr Pro Lys Phe Val Lys Gly Arg Gln Thr

165 170 175

Pro Lys His Ile Ser Glu Ser Leu Gly Ala Glu Val Asp Pro Asp Met

180 185 190

Ser Trp Ser Ser Ser Leu Ala Thr Pro Pro Thr Leu Ser Ser Thr Val

195 200 205

Leu Ile Val Arg Asn Glu Glu Ala Ser Glu Thr Val Phe Pro His Asp

210 215 220

Thr Thr Ala Asn Val Lys Ser Tyr Phe Ser Asn His Asp Glu Ser Leu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Asp Arg Phe Ile Ala Ser Val Thr Asp Ser Glu Asn Thr

245 250 255

Asn Gln Arg Glu Ala Ala Ser His Gly Phe Gly Lys Thr Ser Gly Asn

260 265 270

Ser Phe Lys Val Asn Ser Cys Lys Asp His Ile Gly Lys Ser Met Pro

275 280 285

Asn Val Leu Glu Asp Glu Val Tyr Glu Thr Val Val Asp Thr Ser Glu

290 295 300

Glu Asp Ser Phe Ser Leu Cys Phe Ser Lys Cys Arg Thr Lys Asn Leu

305 310 315 320

Gln Lys Val Arg Thr Ser Lys Thr Arg Lys Lys Ile Phe His Glu Ala

325 330 335

Asn Ala Asp Glu Cys Glu Lys Ser Lys Asn Gln Val Lys Glu Lys Tyr

340 345 350

Ser Phe Val Ser Glu Val Glu Pro Asn Asp Thr Asp Pro Leu Asp Ser

355 360 365

Asn Val Ala Asn Gln Lys Pro Phe Glu Ser Gly Ser Asp Lys Ile Ser

370 375 380

Lys Glu Val Val Pro Ser Leu Ala Cys Glu Trp Ser Gln Leu Thr Leu

385 390 395 400

Ser Gly Leu Asn Gly Ala Gln Met Glu Lys Ile Pro Leu Leu His Ile

405 410 415

Ser Ser Cys Asp Gln Asn Ile Ser Glu Lys Asp Leu Leu Asp Thr Glu

420 425 430

Asn Lys Arg Lys Lys Asp Phe Leu Thr Ser Glu Asn Ser Leu Pro Arg

435 440 445

Ile Ser Ser Leu Pro Lys Ser Glu Lys Pro Leu Asn Glu Glu Thr Val

450 455 460

Val Asn Lys Arg Asp Glu Glu Gln His Leu Glu Ser His Thr Asp Cys

465 470 475 480

Ile Leu Ala Val Lys Gln Ala Ile Ser Gly Thr Ser Pro Val Ala Ser

485 490 495

Ser Phe Gln Gly Ile Lys Lys Ser Ile Phe Arg Ile Arg Glu Ser Pro

500 505 510

Lys Glu Thr Phe Asn Ala Ser Phe Ser Gly His Met Thr Asp Pro Asn

515 520 525

Phe Lys Lys Glu Thr Glu Ala Ser Glu Ser Gly Leu Glu Ile His Thr

530 535 540

Val Cys Ser Gln Lys Glu Asp Ser Leu Cys Pro Asn Leu Ile Asp Asn

545 550 555 560

Gly Ser Trp Pro Ala Thr Thr Thr Gln Asn Ser Val Ala Leu Lys Asn

565 570 575

Ala Gly Leu Ile Ser Thr Leu Lys Lys Lys Thr Asn Lys Phe Ile Tyr

580 585 590

Ala Ile His Asp Glu Thr Ser Tyr Lys Gly Lys Lys Ile Pro Lys Asp

595 600 605

Gln Lys Ser Glu Leu Ile Asn Cys Ser Ala Gln Phe Glu Ala Asn Ala

610 615 620

Phe Glu Ala Pro Leu Thr Phe Ala Asn Ala Asp Ser Gly Leu Leu His

625 630 635 640

Ser Ser Val Lys Arg Ser Cys Ser Gln Asn Asp Ser Glu Glu Pro Thr

645 650 655

Leu Ser Leu Thr Ser Ser Phe Gly Thr Ile Leu Arg Lys Cys Ser Arg

660 665 670

Asn Glu Thr Cys Ser Asn Asn Thr Val Ile Ser Gln Asp Leu Asp Tyr

675 680 685

Lys Glu Ala Lys Cys Asn Lys Glu Lys Leu Gln Leu Phe Ile Thr Pro

690 695 700

Glu Ala Asp Ser Leu Ser Cys Leu Gln Glu Gly Gln Cys Glu Asn Asp

705 710 715 720

Pro Lys Ser Lys Lys Val Ser Asp Ile Lys Glu Glu Val Leu Ala Ala

725 730 735

Ala Cys His Pro Val Gln His Ser Lys Val Glu Tyr Ser Asp Thr Asp

740 745 750

Phe Gln Ser Gln Lys Ser Leu Leu Tyr Asp His Glu Asn Ala Ser Thr

755 760 765

Leu Ile Leu Thr Pro Thr Ser Lys Asp Val Leu Ser Asn Leu Val Met

770 775 780

Ile Ser Arg Gly Lys Glu Ser Tyr Lys Met Ser Asp Lys Leu Lys Gly

785 790 795 800

Asn Asn Tyr Glu Ser Asp Val Glu Leu Thr Lys Asn Ile Pro Met Glu

805 810 815

Lys Asn Gln Asp Val Cys Ala Leu Asn Glu Asn Tyr Lys Asn Val Glu

820 825 830

Leu Leu Pro Pro Glu Lys Tyr Met Arg Val Ala Ser Pro Ser Arg Lys

835 840 845

Val Gln Phe Asn Gln Asn Thr Asn Leu Arg Val Ile Gln Lys Asn Gln

850 855 860

Glu Glu Thr Thr Ser Ile Ser Lys Ile Thr Val Asn Pro Asp Ser Glu

865 870 875 880

Glu Leu Phe Ser Asp Asn Glu Asn Asn Phe Val Phe Gln Val Ala Asn

885 890 895

Glu Arg Asn Asn Leu Ala Leu Gly Asn Thr Lys Glu Leu His Glu Thr

900 905 910

Asp Leu Thr Cys Val Asn Glu Pro Ile Phe Lys Asn Ser Thr Met Val

915 920 925

Leu Tyr Gly Asp Thr Gly Asp Lys Gln Ala Thr Gln Val Ser Ile Lys

930 935 940

Lys Asp Leu Val Tyr Val Leu Ala Glu Glu Asn Lys Asn Ser Val Lys

945 950 955 960

Gln His Ile Lys Met Thr Leu Gly Gln Asp Leu Lys Ser Asp Ile Ser

965 970 975

Leu Asn Ile Asp Lys Ile Pro Glu Lys Asn Asn Asp Tyr Met Asn Lys

980 985 990

Trp Ala Gly Leu Leu Gly Pro Ile Ser Asn His Ser Phe Gly Gly Ser

995 1000 1005

Phe Arg Thr Ala Ser Asn Lys Glu Ile Lys Leu Ser Glu His Asn

1010 1015 1020

Ile Lys Lys Ser Lys Met Phe Phe Lys Asp Ile Glu Glu Gln Tyr

1025 1030 1035

Pro Thr Ser Leu Ala Cys Val Glu Ile Val Asn Thr Leu Ala Leu

1040 1045 1050

Asp Asn Gln Lys Lys Leu Ser Lys Pro Gln Ser Ile Asn Thr Val

1055 1060 1065

Ser Ala His Leu Gln Ser Ser Val Val Val Ser Asp Cys Lys Asn

1070 1075 1080

Ser His Ile Thr Pro Gln Met Leu Phe Ser Lys Gln Asp Phe Asn

1085 1090 1095

Ser Asn His Asn Leu Thr Pro Ser Gln Lys Ala Glu Ile Thr Glu

1100 1105 1110

Leu Ser Thr Ile Leu Glu Glu Ser Gly Ser Gln Phe Glu Phe Thr

1115 1120 1125

Gln Phe Arg Lys Pro Ser Tyr Ile Leu Gln Lys Ser Thr Phe Glu

1130 1135 1140

Val Pro Glu Asn Gln Met Thr Ile Leu Lys Thr Thr Ser Glu Glu

1145 1150 1155

Cys Arg Asp Ala Asp Leu His Val Ile Met Asn Ala Pro Ser Ile

1160 1165 1170

Gly Gln Val Asp Ser Ser Lys Gln Phe Glu Gly Thr Val Glu Ile

1175 1180 1185

Lys Arg Lys Phe Ala Gly Leu Leu Lys Asn Asp Cys Asn Lys Ser

1190 1195 1200

Ala Ser Gly Tyr Leu Thr Asp Glu Asn Glu Val Gly Phe Arg Gly

1205 1210 1215

Phe Tyr Ser Ala His Gly Thr Lys Leu Asn Val Ser Thr Glu Ala

1220 1225 1230

Leu Gln Lys Ala Val Lys Leu Phe Ser Asp Ile Glu Asn Ile Ser

1235 1240 1245

Glu Glu Thr Ser Ala Glu Val His Pro Ile Ser Leu Ser Ser Ser

1250 1255 1260

Lys Cys His Asp Ser Val Val Ser Met Phe Lys Ile Glu Asn His

1265 1270 1275

Asn Asp Lys Thr Val Ser Glu Lys Asn Asn Lys Cys Gln Leu Ile

1280 1285 1290

Leu Gln Asn Asn Ile Glu Met Thr Thr Gly Thr Phe Val Glu Glu

1295 1300 1305

Ile Thr Glu Asn Tyr Lys Arg Asn Thr Glu Asn Glu Asp Asn Lys

1310 1315 1320

Tyr Thr Ala Ala Ser Arg Asn Ser His Asn Leu Glu Phe Asp Gly

1325 1330 1335

Ser Asp Ser Ser Lys Asn Asp Thr Val Cys Ile His Lys Asp Glu

1340 1345 1350

Thr Asp Leu Leu Phe Thr Asp Gln His Asn Ile Cys Leu Lys Leu

1355 1360 1365

Ser Gly Gln Phe Met Lys Glu Gly Asn Thr Gln Ile Lys Glu Asp

1370 1375 1380

Leu Ser Asp Leu Thr Phe Leu Glu Val Ala Lys Ala Gln Glu Ala

1385 1390 1395

Cys His Gly Asn Thr Ser Asn Lys Glu Gln Leu Thr Ala Thr Lys

1400 1405 1410

Thr Glu Gln Asn Ile Lys Asp Phe Glu Thr Ser Asp Thr Phe Phe

1415 1420 1425

Gln Thr Ala Ser Gly Lys Asn Ile Ser Val Ala Lys Glu Ser Phe

1430 1435 1440

Asn Lys Ile Val Asn Phe Phe Asp Gln Lys Pro Glu Glu Leu His

1445 1450 1455

Asn Phe Ser Leu Asn Ser Glu Leu His Ser Asp Ile Arg Lys Asn

1460 1465 1470

Lys Met Asp Ile Leu Ser Tyr Glu Glu Thr Asp Ile Val Lys His

1475 1480 1485

Lys Ile Leu Lys Glu Ser Val Pro Val Gly Thr Gly Asn Gln Leu

1490 1495 1500

Val Thr Phe Gln Gly Gln Pro Glu Arg Asp Glu Lys Ile Lys Glu

1505 1510 1515

Pro Thr Leu Leu Gly Phe His Thr Ala Ser Gly Lys Lys Val Lys

1520 1525 1530

Ile Ala Lys Glu Ser Leu Asp Lys Val Lys Asn Leu Phe Asp Glu

1535 1540 1545

Lys Glu Gln Gly Thr Ser Glu Ile Thr Ser Phe Ser His Gln Trp

1550 1555 1560

Ala Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Glu Ala Cys Lys Asp Leu Glu Leu

1565 1570 1575

Ala Cys Glu Thr Ile Glu Ile Thr Ala Ala Pro Lys Cys Lys Glu

1580 1585 1590

Met Gln Asn Ser Leu Asn Asn Asp Lys Asn Leu Val Ser Ile Glu

1595 1600 1605

Thr Val Val Pro Pro Lys Leu Leu Ser Asp Asn Leu Cys Arg Gln

1610 1615 1620

Thr Glu Asn Leu Lys Thr Ser Lys Ser Ile Phe Leu Lys Val Lys

1625 1630 1635

Val His Glu Asn Val Glu Lys Glu Thr Ala Lys Ser Pro Ala Thr

1640 1645 1650

Cys Tyr Thr Asn Gln Ser Pro Tyr Ser Val Ile Glu Asn Ser Ala

1655 1660 1665

Leu Ala Phe Tyr Thr Ser Cys Ser Arg Lys Thr Ser Val Ser Gln

1670 1675 1680

Thr Ser Leu Leu Glu Ala Lys Lys Trp Leu Arg Glu Gly Ile Phe

1685 1690 1695

Asp Gly Gln Pro Glu Arg Ile Asn Thr Ala Asp Tyr Val Gly Asn

1700 1705 1710

Tyr Leu Tyr Glu Asn Asn Ser Asn Ser Thr Ile Ala Glu Asn Asp

1715 1720 1725

Lys Asn His Leu Ser Glu Lys Gln Asp Thr Tyr Leu Ser Asn Ser

1730 1735 1740

Ser Met Ser Asn Ser Tyr Ser Tyr His Ser Asp Glu Val Tyr Asn

1745 1750 1755

Asp Ser Gly Tyr Leu Ser Lys Asn Lys Leu Asp Ser Gly Ile Glu

1760 1765 1770

Pro Val Leu Lys Asn Val Glu Asp Gln Lys Asn Thr Ser Phe Ser

1775 1780 1785

Lys Val Ile Ser Asn Val Lys Asp Ala Asn Ala Tyr Pro Gln Thr

1790 1795 1800

Val Asn Glu Asp Ile Cys Val Glu Glu Leu Val Thr Ser Ser Ser

1805 1810 1815

Pro Cys Lys Asn Lys Asn Ala Ala Ile Lys Leu Ser Ile Ser Asn

1820 1825 1830

Ser Asn Asn Phe Glu Val Gly Pro Pro Ala Phe Arg Ile Ala Ser

1835 1840 1845

Gly Lys Ile Val Cys Val Ser His Glu Thr Ile Lys Lys Val Lys

1850 1855 1860

Asp Ile Phe Thr Asp Ser Phe Ser Lys Val Ile Lys Glu Asn Asn

1865 1870 1875

Glu Asn Lys Ser Lys Ile Cys Gln Thr Lys Ile Met Ala Gly Cys

1880 1885 1890

Tyr Glu Ala Leu Asp Asp Ser Glu Asp Ile Leu His Asn Ser Leu

1895 1900 1905

Asp Asn Asp Glu Cys Ser Thr His Ser His Lys Val Phe Ala Asp

1910 1915 1920

Ile Gln Ser Glu Glu Ile Leu Gln His Asn Gln Asn Met Ser Gly

1925 1930 1935

Leu Glu Lys Val Ser Lys Ile Ser Pro Cys Asp Val Ser Leu Glu

1940 1945 1950

Thr Ser Asp Ile Cys Lys Cys Ser Ile Gly Lys Leu His Lys Ser

1955 1960 1965

Val Ser Ser Ala Asn Thr Cys Gly Ile Phe Ser Thr Ala Ser Gly

1970 1975 1980

Lys Ser Val Gln Val Ser Asp Ala Ser Leu Gln Asn Ala Arg Gln

1985 1990 1995

Val Phe Ser Glu Ile Glu Asp Ser Thr Lys Gln Val Phe Ser Lys

2000 2005 2010

Val Leu Phe Lys Ser Asn Glu His Ser Asp Gln Leu Thr Arg Glu

2015 2020 2025

Glu Asn Thr Ala Ile Arg Thr Pro Glu His Leu Ile Ser Gln Lys

2030 2035 2040

Gly Phe Ser Tyr Asn Val Val Asn Ser Ser Ala Phe Ser Gly Phe

2045 2050 2055

Ser Thr Ala Ser Gly Lys Gln Val Ser Ile Leu Glu Ser Ser Leu

2060 2065 2070

His Lys Val Lys Gly Val Leu Glu Glu Phe Asp Leu Ile Arg Thr

2075 2080 2085

Glu His Ser Leu His Tyr Ser Pro Thr Ser Arg Gln Asn Val Ser

2090 2095 2100

Lys Ile Leu Pro Arg Val Asp Lys Arg Asn Pro Glu His Cys Val

2105 2110 2115

Asn Ser Glu Met Glu Lys Thr Cys Ser Lys Glu Phe Lys Leu Ser

2120 2125 2130

Asn Asn Leu Asn Val Glu Gly Gly Ser Ser Glu Asn Asn His Ser

2135 2140 2145

Ile Lys Val Ser Pro Tyr Leu Ser Gln Phe Gln Gln Asp Lys Gln

2150 2155 2160

Gln Leu Val Leu Gly Thr Lys Val Ser Leu Val Glu Asn Ile His

2165 2170 2175

Val Leu Gly Lys Glu Gln Ala Ser Pro Lys Asn Val Lys Met Glu

2180 2185 2190

Ile Gly Lys Thr Glu Thr Phe Ser Asp Val Pro Val Lys Thr Asn

2195 2200 2205

Ile Glu Val Cys Ser Thr Tyr Ser Lys Asp Ser Glu Asn Tyr Phe

2210 2215 2220

Glu Thr Glu Ala Val Glu Ile Ala Lys Ala Phe Met Glu Asp Asp

2225 2230 2235

Glu Leu Thr Asp Ser Lys Leu Pro Ser His Ala Thr His Ser Leu

2240 2245 2250

Phe Thr Cys Pro Glu Asn Glu Glu Met Val Leu Ser Asn Ser Arg

2255 2260 2265

Ile Gly Lys Arg Arg Gly Glu Pro Leu Ile Leu Val Gly Glu Pro

2270 2275 2280

Ser Ile Lys Arg Asn Leu Leu Asn Glu Phe Asp Arg Ile Ile Glu

2285 2290 2295

Asn Gln Glu Lys Ser Leu Lys Ala Ser Lys Ser Thr Pro Asp Gly

2300 2305 2310

Thr Ile Lys Asp Arg Arg Leu Phe Met His His Val Ser Leu Glu

2315 2320 2325

Pro Ile Thr Cys Val Pro Phe Arg Thr Thr Lys Glu Arg Gln Glu

2330 2335 2340

Ile Gln Asn Pro Asn Phe Thr Ala Pro Gly Gln Glu Phe Leu Ser

2345 2350 2355

Lys Ser His Leu Tyr Glu His Leu Thr Leu Glu Lys Ser Ser Ser

2360 2365 2370

Asn Leu Ala Val Ser Gly His Pro Phe Tyr Gln Val Ser Ala Thr

2375 2380 2385

Arg Asn Glu Lys Met Arg His Leu Ile Thr Thr Gly Arg Pro Thr

2390 2395 2400

Lys Val Phe Val Pro Pro Phe Lys Thr Lys Ser His Phe His Arg

2405 2410 2415

Val Glu Gln Cys Val Arg Asn Ile Asn Leu Glu Glu Asn Arg Gln

2420 2425 2430

Lys Gln Asn Ile Asp Gly His Gly Ser Asp Asp Ser Lys Asn Lys

2435 2440 2445

Ile Asn Asp Asn Glu Ile His Gln Phe Asn Lys Asn Asn Ser Asn

2450 2455 2460

Gln Ala Ala Ala Val Thr Phe Thr Lys Cys Glu Glu Glu Pro Leu

2465 2470 2475

Asp Leu Ile Thr Ser Leu Gln Asn Ala Arg Asp Ile Gln Asp Met

2480 2485 2490

Arg Ile Lys Lys Lys Gln Arg Gln Arg Val Phe Pro Gln Pro Gly

2495 2500 2505

Ser Leu Tyr Leu Ala Lys Thr Ser Thr Leu Pro Arg Ile Ser Leu

2510 2515 2520

Lys Ala Ala Val Gly Gly Gln Val Pro Ser Ala Cys Ser His Lys

2525 2530 2535

Gln Leu Tyr Thr Tyr Gly Val Ser Lys His Cys Ile Lys Ile Asn

2540 2545 2550

Ser Lys Asn Ala Glu Ser Phe Gln Phe His Thr Glu Asp Tyr Phe

2555 2560 2565

Gly Lys Glu Ser Leu Trp Thr Gly Lys Gly Ile Gln Leu Ala Asp

2570 2575 2580

Gly Gly Trp Leu Ile Pro Ser Asn Asp Gly Lys Ala Gly Lys Glu

2585 2590 2595

Glu Phe Tyr Arg Ala Leu Cys Asp Thr Pro Gly Val Asp Pro Lys

2600 2605 2610

Leu Ile Ser Arg Ile Trp Val Tyr Asn His Tyr Arg Trp Ile Ile

2615 2620 2625

Trp Lys Leu Ala Ala Met Glu Cys Ala Phe Pro Lys Glu Phe Ala

2630 2635 2640

Asn Arg Cys Leu Ser Pro Glu Arg Val Leu Leu Gln Leu Lys Tyr

2645 2650 2655

Arg Tyr Asp Thr Glu Ile Asp Arg Ser Arg Arg Ser Ala Ile Lys

2660 2665 2670

Lys Ile Met Glu Arg Asp Asp Thr Ala Ala Lys Thr Leu Val Leu

2675 2680 2685

Cys Val Ser Asp Ile Ile Ser Leu Ser Ala Asn Ile Ser Glu Thr

2690 2695 2700

Ser Ser Asn Lys Thr Ser Ser Ala Asp Thr Gln Lys Val Ala Ile

2705 2710 2715

Ile Glu Leu Thr Asp Gly Trp Tyr Ala Val Lys Ala Gln Leu Asp

2720 2725 2730

Pro Pro Leu Leu Ala Val Leu Lys Asn Gly Arg Leu Thr Val Gly

2735 2740 2745

Gln Lys Ile Ile Leu His Gly Ala Glu Leu Val Gly Ser Pro Asp

2750 2755 2760

Ala Cys Thr Pro Leu Glu Ala Pro Glu Ser Leu Met Leu Lys Ile

2765 2770 2775

Ser Ala Asn Ser Thr Arg Pro Ala Arg Trp Tyr Thr Lys Leu Gly

2780 2785 2790

Phe Phe Pro Asp Pro Arg Pro Phe Pro Leu Pro Leu Ser Ser Leu

2795 2800 2805

Phe Ser Asp Gly Gly Asn Val Gly Cys Val Asp Val Ile Ile Gln

2810 2815 2820

Arg Ala Tyr Pro Ile Gln Trp Met Glu Lys Thr Ser Ser Gly Leu

2825 2830 2835

Tyr Ile Phe Arg Asn Glu Arg Glu Glu Glu Lys Glu Ala Ala Lys

2840 2845 2850

Tyr Val Glu Ala Gln Gln Lys Arg Leu Glu Ala Leu Phe Thr Lys

2855 2860 2865

Ile Gln Glu Glu Phe Glu Glu His Glu Glu Asn Thr Thr Lys Pro

2870 2875 2880

Tyr Leu Pro Ser Arg Ala Leu Thr Arg Gln Gln Val Arg Ala Leu

2885 2890 2895

Gln Asp Gly Ala Glu Leu Tyr Glu Ala Val Lys Asn Ala Ala Asp

2900 2905 2910

Pro Ala Tyr Leu Glu Gly Tyr Phe Ser Glu Glu Gln Leu Arg Ala

2915 2920 2925

Leu Asn Asn His Arg Gln Met Leu Asn Asp Lys Lys Gln Ala Gln

2930 2935 2940

Ile Gln Leu Glu Ile Arg Lys Ala Met Glu Ser Ala Glu Gln Lys

2945 2950 2955

Glu Gln Gly Leu Ser Arg Asp Val Thr Thr Val Trp Lys Leu Arg

2960 2965 2970

Ile Val Ser Tyr Ser Lys Lys Glu Lys Asp Ser Val Ile Leu Ser

2975 2980 2985

Ile Trp Arg Pro Ser Ser Asp Leu Tyr Ser Leu Leu Thr Glu Gly

2990 2995 3000

Lys Arg Tyr Arg Ile Tyr His Leu Ala Thr Ser Lys Ser Lys Ser

3005 3010 3015

Lys Ser Glu Arg Ala Asn Ile Gln Leu Ala Ala Thr Lys Lys Thr

3020 3025 3030

Gln Tyr Gln Gln Leu Pro Val Ser Asp Glu Ile Leu Phe Gln Ile

3035 3040 3045

Tyr Gln Pro Arg Glu Pro Leu His Phe Ser Lys Phe Leu Asp Pro

3050 3055 3060

Asp Phe Gln Pro Ser Cys Ser Glu Val Asp Leu Ile Gly Phe Val

3065 3070 3075

Val Ser Val Val Lys Lys Thr Gly Leu Ala Pro Phe Val Tyr Leu

3080 3085 3090

Ser Asp Glu Cys Tyr Asn Leu Leu Ala Ile Lys Phe Trp Ile Asp

3095 3100 3105

Leu Asn Glu Asp Ile Ile Lys Pro His Met Leu Ile Ala Ala Ser

3110 3115 3120

Asn Leu Gln Trp Arg Pro Glu Ser Lys Ser Gly Leu Leu Thr Leu

3125 3130 3135

Phe Ala Gly Asp Phe Ser Val Phe Ser Ala Ser Pro Lys Glu Gly

3140 3145 3150

His Phe Gln Glu Thr Phe Asn Lys Met Lys Asn Thr Val Glu Asn

3155 3160 3165

Ile Asp Ile Leu Cys Asn Glu Ala Glu Asn Lys Leu Met His Ile

3170 3175 3180

Leu His Ala Asn Asp Pro Lys Trp Ser Thr Pro Thr Lys Asp Cys

3185 3190 3195

Thr Ser Gly Pro Tyr Thr Ala Gln Ile Ile Pro Gly Thr Gly Asn

3200 3205 3210

Lys Leu Leu Met Ser Ser Pro Asn Cys Glu Ile Tyr Tyr Gln Ser

3215 3220 3225

Pro Leu Ser Leu Cys Met Ala Lys Arg Lys Ser Val Ser Thr Pro

3230 3235 3240

Val Ser Ala Gln Met Thr Ser Lys Ser Cys Lys Gly Glu Lys Glu

3245 3250 3255

Ile Asp Asp Gln Lys Asn Cys Lys Lys Arg Arg Ala Leu Asp Phe

3260 3265 3270

Leu Ser Arg Leu Pro Leu Pro Pro Pro Val Ser Pro Ile Cys Thr

3275 3280 3285

Phe Val Ser Pro Ala Ala Gln Lys Ala Phe Gln Pro Pro Arg Ser

3290 3295 3300

Cys Gly Thr Lys Tyr Glu Thr Pro Ile Lys Lys Lys Glu Leu Asn

3305 3310 3315

Ser Pro Gln Met Thr Pro Phe Lys Lys Phe Asn Glu Ile Ser Leu

3320 3325 3330

Leu Glu Ser Asn Ser Ile Ala Asp Glu Glu Leu Ala Leu Ile Asn

3335 3340 3345

Thr Gln Ala Leu Leu Ser Gly Ser Thr Gly Glu Lys Gln Phe Ile

3350 3355 3360

Ser Val Ser Glu Ser Thr Arg Thr Ala Pro Thr Ser Ser Glu Asp

3365 3370 3375

Tyr Leu Arg Leu Lys Arg Arg Cys Thr Thr Ser Leu Ile Lys Glu

3380 3385 3390

Gln Glu Ser Ser Gln Ala Ser Thr Glu Glu Cys Glu Lys Asn Lys

3395 3400 3405

Gln Asp Thr Ile Thr Thr Lys Lys Tyr Ile

3410 3415

<210> 45

<211> 393

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 45

Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln

1 5 10 15

Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu

20 25 30

Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp

35 40 45

Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro

50 55 60

Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro

65 70 75 80

Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser

85 90 95

Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly

100 105 110

Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro

115 120 125

Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln

130 135 140

Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met

145 150 155 160

Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys

165 170 175

Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln

180 185 190

His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp

195 200 205

Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu

210 215 220

Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser

225 230 235 240

Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr

245 250 255

Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val

260 265 270

Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn

275 280 285

Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr

290 295 300

Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys

305 310 315 320

Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu

325 330 335

Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp

340 345 350

Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His

355 360 365

Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met

370 375 380

Phe Lys Thr Glu Gly Pro Asp Ser Asp

385 390

<210> 46

<211> 770

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 46

Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg

1 5 10 15

Ala Leu Glu Val Pro Thr Asp Gly Asn Ala Gly Leu Leu Ala Glu Pro

20 25 30

Gln Ile Ala Met Phe Cys Gly Arg Leu Asn Met His Met Asn Val Gln

35 40 45

Asn Gly Lys Trp Asp Ser Asp Pro Ser Gly Thr Lys Thr Cys Ile Asp

50 55 60

Thr Lys Glu Gly Ile Leu Gln Tyr Cys Gln Glu Val Tyr Pro Glu Leu

65 70 75 80

Gln Ile Thr Asn Val Val Glu Ala Asn Gln Pro Val Thr Ile Gln Asn

85 90 95

Trp Cys Lys Arg Gly Arg Lys Gln Cys Lys Thr His Pro His Phe Val

100 105 110

Ile Pro Tyr Arg Cys Leu Val Gly Glu Phe Val Ser Asp Ala Leu Leu

115 120 125

Val Pro Asp Lys Cys Lys Phe Leu His Gln Glu Arg Met Asp Val Cys

130 135 140

Glu Thr His Leu His Trp His Thr Val Ala Lys Glu Thr Cys Ser Glu

145 150 155 160

Lys Ser Thr Asn Leu His Asp Tyr Gly Met Leu Leu Pro Cys Gly Ile

165 170 175

Asp Lys Phe Arg Gly Val Glu Phe Val Cys Cys Pro Leu Ala Glu Glu

180 185 190

Ser Asp Asn Val Asp Ser Ala Asp Ala Glu Glu Asp Asp Ser Asp Val

195 200 205

Trp Trp Gly Gly Ala Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Gly Ser Glu Asp Lys

210 215 220

Val Val Glu Val Ala Glu Glu Glu Glu Val Ala Glu Val Glu Glu Glu

225 230 235 240

Glu Ala Asp Asp Asp Glu Asp Asp Glu Asp Gly Asp Glu Val Glu Glu

245 250 255

Glu Ala Glu Glu Pro Tyr Glu Glu Ala Thr Glu Arg Thr Thr Ser Ile

260 265 270

Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Ser Val Glu Glu Val Val Arg

275 280 285

Glu Val Cys Ser Glu Gln Ala Glu Thr Gly Pro Cys Arg Ala Met Ile

290 295 300

Ser Arg Trp Tyr Phe Asp Val Thr Glu Gly Lys Cys Ala Pro Phe Phe

305 310 315 320

Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Arg Asn Asn Phe Asp Thr Glu Glu Tyr

325 330 335

Cys Met Ala Val Cys Gly Ser Ala Met Ser Gln Ser Leu Leu Lys Thr

340 345 350

Thr Gln Glu Pro Leu Ala Arg Asp Pro Val Lys Leu Pro Thr Thr Ala

355 360 365

Ala Ser Thr Pro Asp Ala Val Asp Lys Tyr Leu Glu Thr Pro Gly Asp

370 375 380

Glu Asn Glu His Ala His Phe Gln Lys Ala Lys Glu Arg Leu Glu Ala

385 390 395 400

Lys His Arg Glu Arg Met Ser Gln Val Met Arg Glu Trp Glu Glu Ala

405 410 415

Glu Arg Gln Ala Lys Asn Leu Pro Lys Ala Asp Lys Lys Ala Val Ile

420 425 430

Gln His Phe Gln Glu Lys Val Glu Ser Leu Glu Gln Glu Ala Ala Asn

435 440 445

Glu Arg Gln Gln Leu Val Glu Thr His Met Ala Arg Val Glu Ala Met

450 455 460

Leu Asn Asp Arg Arg Arg Leu Ala Leu Glu Asn Tyr Ile Thr Ala Leu

465 470 475 480

Gln Ala Val Pro Pro Arg Pro Arg His Val Phe Asn Met Leu Lys Lys

485 490 495

Tyr Val Arg Ala Glu Gln Lys Asp Arg Gln His Thr Leu Lys His Phe

500 505 510

Glu His Val Arg Met Val Asp Pro Lys Lys Ala Ala Gln Ile Arg Ser

515 520 525

Gln Val Met Thr His Leu Arg Val Ile Tyr Glu Arg Met Asn Gln Ser

530 535 540

Leu Ser Leu Leu Tyr Asn Val Pro Ala Val Ala Glu Glu Ile Gln Asp

545 550 555 560

Glu Val Asp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Gln Asn Tyr Ser Asp Asp Val

565 570 575

Leu Ala Asn Met Ile Ser Glu Pro Arg Ile Ser Tyr Gly Asn Asp Ala

580 585 590

Leu Met Pro Ser Leu Thr Glu Thr Lys Thr Thr Val Glu Leu Leu Pro

595 600 605

Val Asn Gly Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Gln Pro Trp His Ser Phe

610 615 620

Gly Ala Asp Ser Val Pro Ala Asn Thr Glu Asn Glu Val Glu Pro Val

625 630 635 640

Asp Ala Arg Pro Ala Ala Asp Arg Gly Leu Thr Thr Arg Pro Gly Ser

645 650 655

Gly Leu Thr Asn Ile Lys Thr Glu Glu Ile Ser Glu Val Lys Met Asp

660 665 670

Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu

675 680 685

Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly

690 695 700

Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr Leu

705 710 715 720

Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile His His Gly Val Val

725 730 735

Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg His Leu Ser Lys Met

740 745 750

Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys Phe Phe Glu Gln Met

755 760 765

Gln Asn

770

<210> 47

<211> 3144

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 47

Met Ala Thr Leu Glu Lys Leu Met Lys Ala Phe Glu Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

Phe Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln

20 25 30

Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro

35 40 45

Pro Pro Pro Gln Leu Pro Gln Pro Pro Pro Gln Ala Gln Pro Leu Leu

50 55 60

Pro Gln Pro Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Pro

65 70 75 80

Ala Val Ala Glu Glu Pro Leu His Arg Pro Lys Lys Glu Leu Ser Ala

85 90 95

Thr Lys Lys Asp Arg Val Asn His Cys Leu Thr Ile Cys Glu Asn Ile

100 105 110

Val Ala Gln Ser Val Arg Asn Ser Pro Glu Phe Gln Lys Leu Leu Gly

115 120 125

Ile Ala Met Glu Leu Phe Leu Leu Cys Ser Asp Asp Ala Glu Ser Asp

130 135 140

Val Arg Met Val Ala Asp Glu Cys Leu Asn Lys Val Ile Lys Ala Leu

145 150 155 160

Met Asp Ser Asn Leu Pro Arg Leu Gln Leu Glu Leu Tyr Lys Glu Ile

165 170 175

Lys Lys Asn Gly Ala Pro Arg Ser Leu Arg Ala Ala Leu Trp Arg Phe

180 185 190

Ala Glu Leu Ala His Leu Val Arg Pro Gln Lys Cys Arg Pro Tyr Leu

195 200 205

Val Asn Leu Leu Pro Cys Leu Thr Arg Thr Ser Lys Arg Pro Glu Glu

210 215 220

Ser Val Gln Glu Thr Leu Ala Ala Ala Val Pro Lys Ile Met Ala Ser

225 230 235 240

Phe Gly Asn Phe Ala Asn Asp Asn Glu Ile Lys Val Leu Leu Lys Ala

245 250 255

Phe Ile Ala Asn Leu Lys Ser Ser Ser Pro Thr Ile Arg Arg Thr Ala

260 265 270

Ala Gly Ser Ala Val Ser Ile Cys Gln His Ser Arg Arg Thr Gln Tyr

275 280 285

Phe Tyr Ser Trp Leu Leu Asn Val Leu Leu Gly Leu Leu Val Pro Val

290 295 300

Glu Asp Glu His Ser Thr Leu Leu Ile Leu Gly Val Leu Leu Thr Leu

305 310 315 320

Arg Tyr Leu Val Pro Leu Leu Gln Gln Gln Val Lys Asp Thr Ser Leu

325 330 335

Lys Gly Ser Phe Gly Val Thr Arg Lys Glu Met Glu Val Ser Pro Ser

340 345 350

Ala Glu Gln Leu Val Gln Val Tyr Glu Leu Thr Leu His His Thr Gln

355 360 365

His Gln Asp His Asn Val Val Thr Gly Ala Leu Glu Leu Leu Gln Gln

370 375 380

Leu Phe Arg Thr Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gln Thr Leu Thr Ala Val

385 390 395 400

Gly Gly Ile Gly Gln Leu Thr Ala Ala Lys Glu Glu Ser Gly Gly Arg

405 410 415

Ser Arg Ser Gly Ser Ile Val Glu Leu Ile Ala Gly Gly Gly Ser Ser

420 425 430

Cys Ser Pro Val Leu Ser Arg Lys Gln Lys Gly Lys Val Leu Leu Gly

435 440 445

Glu Glu Glu Ala Leu Glu Asp Asp Ser Glu Ser Arg Ser Asp Val Ser

450 455 460

Ser Ser Ala Leu Thr Ala Ser Val Lys Asp Glu Ile Ser Gly Glu Leu

465 470 475 480

Ala Ala Ser Ser Gly Val Ser Thr Pro Gly Ser Ala Gly His Asp Ile

485 490 495

Ile Thr Glu Gln Pro Arg Ser Gln His Thr Leu Gln Ala Asp Ser Val

500 505 510

Asp Leu Ala Ser Cys Asp Leu Thr Ser Ser Ala Thr Asp Gly Asp Glu

515 520 525

Glu Asp Ile Leu Ser His Ser Ser Ser Gln Val Ser Ala Val Pro Ser

530 535 540

Asp Pro Ala Met Asp Leu Asn Asp Gly Thr Gln Ala Ser Ser Pro Ile

545 550 555 560

Ser Asp Ser Ser Gln Thr Thr Thr Glu Gly Pro Asp Ser Ala Val Thr

565 570 575

Pro Ser Asp Ser Ser Glu Ile Val Leu Asp Gly Thr Asp Asn Gln Tyr

580 585 590

Leu Gly Leu Gln Ile Gly Gln Pro Gln Asp Glu Asp Glu Glu Ala Thr

595 600 605

Gly Ile Leu Pro Asp Glu Ala Ser Glu Ala Phe Arg Asn Ser Ser Met

610 615 620

Ala Leu Gln Gln Ala His Leu Leu Lys Asn Met Ser His Cys Arg Gln

625 630 635 640

Pro Ser Asp Ser Ser Val Asp Lys Phe Val Leu Arg Asp Glu Ala Thr

645 650 655

Glu Pro Gly Asp Gln Glu Asn Lys Pro Cys Arg Ile Lys Gly Asp Ile

660 665 670

Gly Gln Ser Thr Asp Asp Asp Ser Ala Pro Leu Val His Cys Val Arg

675 680 685

Leu Leu Ser Ala Ser Phe Leu Leu Thr Gly Gly Lys Asn Val Leu Val

690 695 700

Pro Asp Arg Asp Val Arg Val Ser Val Lys Ala Leu Ala Leu Ser Cys

705 710 715 720

Val Gly Ala Ala Val Ala Leu His Pro Glu Ser Phe Phe Ser Lys Leu

725 730 735

Tyr Lys Val Pro Leu Asp Thr Thr Glu Tyr Pro Glu Glu Gln Tyr Val

740 745 750

Ser Asp Ile Leu Asn Tyr Ile Asp His Gly Asp Pro Gln Val Arg Gly

755 760 765

Ala Thr Ala Ile Leu Cys Gly Thr Leu Ile Cys Ser Ile Leu Ser Arg

770 775 780

Ser Arg Phe His Val Gly Asp Trp Met Gly Thr Ile Arg Thr Leu Thr

785 790 795 800

Gly Asn Thr Phe Ser Leu Ala Asp Cys Ile Pro Leu Leu Arg Lys Thr

805 810 815

Leu Lys Asp Glu Ser Ser Val Thr Cys Lys Leu Ala Cys Thr Ala Val

820 825 830

Arg Asn Cys Val Met Ser Leu Cys Ser Ser Ser Tyr Ser Glu Leu Gly

835 840 845

Leu Gln Leu Ile Ile Asp Val Leu Thr Leu Arg Asn Ser Ser Tyr Trp

850 855 860

Leu Val Arg Thr Glu Leu Leu Glu Thr Leu Ala Glu Ile Asp Phe Arg

865 870 875 880

Leu Val Ser Phe Leu Glu Ala Lys Ala Glu Asn Leu His Arg Gly Ala

885 890 895

His His Tyr Thr Gly Leu Leu Lys Leu Gln Glu Arg Val Leu Asn Asn

900 905 910

Val Val Ile His Leu Leu Gly Asp Glu Asp Pro Arg Val Arg His Val

915 920 925

Ala Ala Ala Ser Leu Ile Arg Leu Val Pro Lys Leu Phe Tyr Lys Cys

930 935 940

Asp Gln Gly Gln Ala Asp Pro Val Val Ala Val Ala Arg Asp Gln Ser

945 950 955 960

Ser Val Tyr Leu Lys Leu Leu Met His Glu Thr Gln Pro Pro Ser His

965 970 975

Phe Ser Val Ser Thr Ile Thr Arg Ile Tyr Arg Gly Tyr Asn Leu Leu

980 985 990

Pro Ser Ile Thr Asp Val Thr Met Glu Asn Asn Leu Ser Arg Val Ile

995 1000 1005

Ala Ala Val Ser His Glu Leu Ile Thr Ser Thr Thr Arg Ala Leu

1010 1015 1020

Thr Phe Gly Cys Cys Glu Ala Leu Cys Leu Leu Ser Thr Ala Phe

1025 1030 1035

Pro Val Cys Ile Trp Ser Leu Gly Trp His Cys Gly Val Pro Pro

1040 1045 1050

Leu Ser Ala Ser Asp Glu Ser Arg Lys Ser Cys Thr Val Gly Met

1055 1060 1065

Ala Thr Met Ile Leu Thr Leu Leu Ser Ser Ala Trp Phe Pro Leu

1070 1075 1080

Asp Leu Ser Ala His Gln Asp Ala Leu Ile Leu Ala Gly Asn Leu

1085 1090 1095

Leu Ala Ala Ser Ala Pro Lys Ser Leu Arg Ser Ser Trp Ala Ser

1100 1105 1110

Glu Glu Glu Ala Asn Pro Ala Ala Thr Lys Gln Glu Glu Val Trp

1115 1120 1125

Pro Ala Leu Gly Asp Arg Ala Leu Val Pro Met Val Glu Gln Leu

1130 1135 1140

Phe Ser His Leu Leu Lys Val Ile Asn Ile Cys Ala His Val Leu

1145 1150 1155

Asp Asp Val Ala Pro Gly Pro Ala Ile Lys Ala Ala Leu Pro Ser

1160 1165 1170

Leu Thr Asn Pro Pro Ser Leu Ser Pro Ile Arg Arg Lys Gly Lys

1175 1180 1185

Glu Lys Glu Pro Gly Glu Gln Ala Ser Val Pro Leu Ser Pro Lys

1190 1195 1200

Lys Gly Ser Glu Ala Ser Ala Ala Ser Arg Gln Ser Asp Thr Ser

1205 1210 1215

Gly Pro Val Thr Thr Ser Lys Ser Ser Ser Leu Gly Ser Phe Tyr

1220 1225 1230

His Leu Pro Ser Tyr Leu Lys Leu His Asp Val Leu Lys Ala Thr

1235 1240 1245

His Ala Asn Tyr Lys Val Thr Leu Asp Leu Gln Asn Ser Thr Glu

1250 1255 1260

Lys Phe Gly Gly Phe Leu Arg Ser Ala Leu Asp Val Leu Ser Gln

1265 1270 1275

Ile Leu Glu Leu Ala Thr Leu Gln Asp Ile Gly Lys Cys Val Glu

1280 1285 1290

Glu Ile Leu Gly Tyr Leu Lys Ser Cys Phe Ser Arg Glu Pro Met

1295 1300 1305

Met Ala Thr Val Cys Val Gln Gln Leu Leu Lys Thr Leu Phe Gly

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Ala Ser Gln Phe Asp Gly Leu Ser Ser Asn Pro Ser

1325 1330 1335

Lys Ser Gln Gly Arg Ala Gln Arg Leu Gly Ser Ser Ser Val Arg

1340 1345 1350

Pro Gly Leu Tyr His Tyr Cys Phe Met Ala Pro Tyr Thr His Phe

1355 1360 1365

Thr Gln Ala Leu Ala Asp Ala Ser Leu Arg Asn Met Val Gln Ala

1370 1375 1380

Glu Gln Glu Asn Asp Thr Ser Gly Trp Phe Asp Val Leu Gln Lys

1385 1390 1395

Val Ser Thr Gln Leu Lys Thr Asn Leu Thr Ser Val Thr Lys Asn

1400 1405 1410

Arg Ala Asp Lys Asn Ala Ile His Asn His Ile Arg Leu Phe Glu

1415 1420 1425

Pro Leu Val Ile Lys Ala Leu Lys Gln Tyr Thr Thr Thr Thr Cys

1430 1435 1440

Val Gln Leu Gln Lys Gln Val Leu Asp Leu Leu Ala Gln Leu Val

1445 1450 1455

Gln Leu Arg Val Asn Tyr Cys Leu Leu Asp Ser Asp Gln Val Phe

1460 1465 1470

Ile Gly Phe Val Leu Lys Gln Phe Glu Tyr Ile Glu Val Gly Gln

1475 1480 1485

Phe Arg Glu Ser Glu Ala Ile Ile Pro Asn Ile Phe Phe Phe Leu

1490 1495 1500

Val Leu Leu Ser Tyr Glu Arg Tyr His Ser Lys Gln Ile Ile Gly

1505 1510 1515

Ile Pro Lys Ile Ile Gln Leu Cys Asp Gly Ile Met Ala Ser Gly

1520 1525 1530

Arg Lys Ala Val Thr His Ala Ile Pro Ala Leu Gln Pro Ile Val

1535 1540 1545

His Asp Leu Phe Val Leu Arg Gly Thr Asn Lys Ala Asp Ala Gly

1550 1555 1560

Lys Glu Leu Glu Thr Gln Lys Glu Val Val Val Ser Met Leu Leu

1565 1570 1575

Arg Leu Ile Gln Tyr His Gln Val Leu Glu Met Phe Ile Leu Val

1580 1585 1590

Leu Gln Gln Cys His Lys Glu Asn Glu Asp Lys Trp Lys Arg Leu

1595 1600 1605

Ser Arg Gln Ile Ala Asp Ile Ile Leu Pro Met Leu Ala Lys Gln

1610 1615 1620

Gln Met His Ile Asp Ser His Glu Ala Leu Gly Val Leu Asn Thr

1625 1630 1635

Leu Phe Glu Ile Leu Ala Pro Ser Ser Leu Arg Pro Val Asp Met

1640 1645 1650

Leu Leu Arg Ser Met Phe Val Thr Pro Asn Thr Met Ala Ser Val

1655 1660 1665

Ser Thr Val Gln Leu Trp Ile Ser Gly Ile Leu Ala Ile Leu Arg

1670 1675 1680

Val Leu Ile Ser Gln Ser Thr Glu Asp Ile Val Leu Ser Arg Ile

1685 1690 1695

Gln Glu Leu Ser Phe Ser Pro Tyr Leu Ile Ser Cys Thr Val Ile

1700 1705 1710

Asn Arg Leu Arg Asp Gly Asp Ser Thr Ser Thr Leu Glu Glu His

1715 1720 1725

Ser Glu Gly Lys Gln Ile Lys Asn Leu Pro Glu Glu Thr Phe Ser

1730 1735 1740

Arg Phe Leu Leu Gln Leu Val Gly Ile Leu Leu Glu Asp Ile Val

1745 1750 1755

Thr Lys Gln Leu Lys Val Glu Met Ser Glu Gln Gln His Thr Phe

1760 1765 1770

Tyr Cys Gln Glu Leu Gly Thr Leu Leu Met Cys Leu Ile His Ile

1775 1780 1785

Phe Lys Ser Gly Met Phe Arg Arg Ile Thr Ala Ala Ala Thr Arg

1790 1795 1800

Leu Phe Arg Ser Asp Gly Cys Gly Gly Ser Phe Tyr Thr Leu Asp

1805 1810 1815

Ser Leu Asn Leu Arg Ala Arg Ser Met Ile Thr Thr His Pro Ala

1820 1825 1830

Leu Val Leu Leu Trp Cys Gln Ile Leu Leu Leu Val Asn His Thr

1835 1840 1845

Asp Tyr Arg Trp Trp Ala Glu Val Gln Gln Thr Pro Lys Arg His

1850 1855 1860

Ser Leu Ser Ser Thr Lys Leu Leu Ser Pro Gln Met Ser Gly Glu

1865 1870 1875

Glu Glu Asp Ser Asp Leu Ala Ala Lys Leu Gly Met Cys Asn Arg

1880 1885 1890

Glu Ile Val Arg Arg Gly Ala Leu Ile Leu Phe Cys Asp Tyr Val

1895 1900 1905

Cys Gln Asn Leu His Asp Ser Glu His Leu Thr Trp Leu Ile Val

1910 1915 1920

Asn His Ile Gln Asp Leu Ile Ser Leu Ser His Glu Pro Pro Val

1925 1930 1935

Gln Asp Phe Ile Ser Ala Val His Arg Asn Ser Ala Ala Ser Gly

1940 1945 1950

Leu Phe Ile Gln Ala Ile Gln Ser Arg Cys Glu Asn Leu Ser Thr

1955 1960 1965

Pro Thr Met Leu Lys Lys Thr Leu Gln Cys Leu Glu Gly Ile His

1970 1975 1980

Leu Ser Gln Ser Gly Ala Val Leu Thr Leu Tyr Val Asp Arg Leu

1985 1990 1995

Leu Cys Thr Pro Phe Arg Val Leu Ala Arg Met Val Asp Ile Leu

2000 2005 2010

Ala Cys Arg Arg Val Glu Met Leu Leu Ala Ala Asn Leu Gln Ser

2015 2020 2025

Ser Met Ala Gln Leu Pro Met Glu Glu Leu Asn Arg Ile Gln Glu

2030 2035 2040

Tyr Leu Gln Ser Ser Gly Leu Ala Gln Arg His Gln Arg Leu Tyr

2045 2050 2055

Ser Leu Leu Asp Arg Phe Arg Leu Ser Thr Met Gln Asp Ser Leu

2060 2065 2070

Ser Pro Ser Pro Pro Val Ser Ser His Pro Leu Asp Gly Asp Gly

2075 2080 2085

His Val Ser Leu Glu Thr Val Ser Pro Asp Lys Asp Trp Tyr Val

2090 2095 2100

His Leu Val Lys Ser Gln Cys Trp Thr Arg Ser Asp Ser Ala Leu

2105 2110 2115

Leu Glu Gly Ala Glu Leu Val Asn Arg Ile Pro Ala Glu Asp Met

2120 2125 2130

Asn Ala Phe Met Met Asn Ser Glu Phe Asn Leu Ser Leu Leu Ala

2135 2140 2145

Pro Cys Leu Ser Leu Gly Met Ser Glu Ile Ser Gly Gly Gln Lys

2150 2155 2160

Ser Ala Leu Phe Glu Ala Ala Arg Glu Val Thr Leu Ala Arg Val

2165 2170 2175

Ser Gly Thr Val Gln Gln Leu Pro Ala Val His His Val Phe Gln

2180 2185 2190

Pro Glu Leu Pro Ala Glu Pro Ala Ala Tyr Trp Ser Lys Leu Asn

2195 2200 2205

Asp Leu Phe Gly Asp Ala Ala Leu Tyr Gln Ser Leu Pro Thr Leu

2210 2215 2220

Ala Arg Ala Leu Ala Gln Tyr Leu Val Val Val Ser Lys Leu Pro

2225 2230 2235

Ser His Leu His Leu Pro Pro Glu Lys Glu Lys Asp Ile Val Lys

2240 2245 2250

Phe Val Val Ala Thr Leu Glu Ala Leu Ser Trp His Leu Ile His

2255 2260 2265

Glu Gln Ile Pro Leu Ser Leu Asp Leu Gln Ala Gly Leu Asp Cys

2270 2275 2280

Cys Cys Leu Ala Leu Gln Leu Pro Gly Leu Trp Ser Val Val Ser

2285 2290 2295

Ser Thr Glu Phe Val Thr His Ala Cys Ser Leu Ile Tyr Cys Val

2300 2305 2310

His Phe Ile Leu Glu Ala Val Ala Val Gln Pro Gly Glu Gln Leu

2315 2320 2325

Leu Ser Pro Glu Arg Arg Thr Asn Thr Pro Lys Ala Ile Ser Glu

2330 2335 2340

Glu Glu Glu Glu Val Asp Pro Asn Thr Gln Asn Pro Lys Tyr Ile

2345 2350 2355

Thr Ala Ala Cys Glu Met Val Ala Glu Met Val Glu Ser Leu Gln

2360 2365 2370

Ser Val Leu Ala Leu Gly His Lys Arg Asn Ser Gly Val Pro Ala

2375 2380 2385

Phe Leu Thr Pro Leu Leu Arg Asn Ile Ile Ile Ser Leu Ala Arg

2390 2395 2400

Leu Pro Leu Val Asn Ser Tyr Thr Arg Val Pro Pro Leu Val Trp

2405 2410 2415

Lys Leu Gly Trp Ser Pro Lys Pro Gly Gly Asp Phe Gly Thr Ala

2420 2425 2430

Phe Pro Glu Ile Pro Val Glu Phe Leu Gln Glu Lys Glu Val Phe

2435 2440 2445

Lys Glu Phe Ile Tyr Arg Ile Asn Thr Leu Gly Trp Thr Ser Arg

2450 2455 2460

Thr Gln Phe Glu Glu Thr Trp Ala Thr Leu Leu Gly Val Leu Val

2465 2470 2475

Thr Gln Pro Leu Val Met Glu Gln Glu Glu Ser Pro Pro Glu Glu

2480 2485 2490

Asp Thr Glu Arg Thr Gln Ile Asn Val Leu Ala Val Gln Ala Ile

2495 2500 2505

Thr Ser Leu Val Leu Ser Ala Met Thr Val Pro Val Ala Gly Asn

2510 2515 2520

Pro Ala Val Ser Cys Leu Glu Gln Gln Pro Arg Asn Lys Pro Leu

2525 2530 2535

Lys Ala Leu Asp Thr Arg Phe Gly Arg Lys Leu Ser Ile Ile Arg

2540 2545 2550

Gly Ile Val Glu Gln Glu Ile Gln Ala Met Val Ser Lys Arg Glu

2555 2560 2565

Asn Ile Ala Thr His His Leu Tyr Gln Ala Trp Asp Pro Val Pro

2570 2575 2580

Ser Leu Ser Pro Ala Thr Thr Gly Ala Leu Ile Ser His Glu Lys

2585 2590 2595

Leu Leu Leu Gln Ile Asn Pro Glu Arg Glu Leu Gly Ser Met Ser

2600 2605 2610

Tyr Lys Leu Gly Gln Val Ser Ile His Ser Val Trp Leu Gly Asn

2615 2620 2625

Ser Ile Thr Pro Leu Arg Glu Glu Glu Trp Asp Glu Glu Glu Glu

2630 2635 2640

Glu Glu Ala Asp Ala Pro Ala Pro Ser Ser Pro Pro Thr Ser Pro

2645 2650 2655

Val Asn Ser Arg Lys His Arg Ala Gly Val Asp Ile His Ser Cys

2660 2665 2670

Ser Gln Phe Leu Leu Glu Leu Tyr Ser Arg Trp Ile Leu Pro Ser

2675 2680 2685

Ser Ser Ala Arg Arg Thr Pro Ala Ile Leu Ile Ser Glu Val Val

2690 2695 2700

Arg Ser Leu Leu Val Val Ser Asp Leu Phe Thr Glu Arg Asn Gln

2705 2710 2715

Phe Glu Leu Met Tyr Val Thr Leu Thr Glu Leu Arg Arg Val His

2720 2725 2730

Pro Ser Glu Asp Glu Ile Leu Ala Gln Tyr Leu Val Pro Ala Thr

2735 2740 2745

Cys Lys Ala Ala Ala Val Leu Gly Met Asp Lys Ala Val Ala Glu

2750 2755 2760

Pro Val Ser Arg Leu Leu Glu Ser Thr Leu Arg Ser Ser His Leu

2765 2770 2775

Pro Ser Arg Val Gly Ala Leu His Gly Val Leu Tyr Val Leu Glu

2780 2785 2790

Cys Asp Leu Leu Asp Asp Thr Ala Lys Gln Leu Ile Pro Val Ile

2795 2800 2805

Ser Asp Tyr Leu Leu Ser Asn Leu Lys Gly Ile Ala His Cys Val

2810 2815 2820

Asn Ile His Ser Gln Gln His Val Leu Val Met Cys Ala Thr Ala

2825 2830 2835

Phe Tyr Leu Ile Glu Asn Tyr Pro Leu Asp Val Gly Pro Glu Phe

2840 2845 2850

Ser Ala Ser Ile Ile Gln Met Cys Gly Val Met Leu Ser Gly Ser

2855 2860 2865

Glu Glu Ser Thr Pro Ser Ile Ile Tyr His Cys Ala Leu Arg Gly

2870 2875 2880

Leu Glu Arg Leu Leu Leu Ser Glu Gln Leu Ser Arg Leu Asp Ala

2885 2890 2895

Glu Ser Leu Val Lys Leu Ser Val Asp Arg Val Asn Val His Ser

2900 2905 2910

Pro His Arg Ala Met Ala Ala Leu Gly Leu Met Leu Thr Cys Met

2915 2920 2925

Tyr Thr Gly Lys Glu Lys Val Ser Pro Gly Arg Thr Ser Asp Pro

2930 2935 2940

Asn Pro Ala Ala Pro Asp Ser Glu Ser Val Ile Val Ala Met Glu

2945 2950 2955

Arg Val Ser Val Leu Phe Asp Arg Ile Arg Lys Gly Phe Pro Cys

2960 2965 2970

Glu Ala Arg Val Val Ala Arg Ile Leu Pro Gln Phe Leu Asp Asp

2975 2980 2985

Phe Phe Pro Pro Gln Asp Ile Met Asn Lys Val Ile Gly Glu Phe

2990 2995 3000

Leu Ser Asn Gln Gln Pro Tyr Pro Gln Phe Met Ala Thr Val Val

3005 3010 3015

Tyr Lys Val Phe Gln Thr Leu His Ser Thr Gly Gln Ser Ser Met

3020 3025 3030

Val Arg Asp Trp Val Met Leu Ser Leu Ser Asn Phe Thr Gln Arg

3035 3040 3045

Ala Pro Val Ala Met Ala Thr Trp Ser Leu Ser Cys Phe Phe Val

3050 3055 3060

Ser Ala Ser Thr Ser Pro Trp Val Ala Ala Ile Leu Pro His Val

3065 3070 3075

Ile Ser Arg Met Gly Lys Leu Glu Gln Val Asp Val Asn Leu Phe

3080 3085 3090

Cys Leu Val Ala Thr Asp Phe Tyr Arg His Gln Ile Glu Glu Glu

3095 3100 3105

Leu Asp Arg Arg Ala Phe Gln Ser Val Leu Glu Val Val Ala Ala

3110 3115 3120

Pro Gly Ser Pro Tyr His Arg Leu Leu Thr Cys Leu Arg Asn Val

3125 3130 3135

His Lys Val Thr Thr Cys

3140

<210> 48

<211> 89

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 48

Met Gly Ile Leu Lys Leu Gln Val Phe Leu Ile Val Leu Ser Val Ala

1 5 10 15

Leu Asn His Leu Lys Ala Thr Pro Ile Glu Ser His Gln Val Glu Lys

20 25 30

Arg Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe

35 40 45

Leu Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn

50 55 60

Val Gly Ser Asn Thr Tyr Gly Lys Arg Asn Ala Val Glu Val Leu Lys

65 70 75 80

Arg Glu Pro Leu Asn Tyr Leu Pro Leu

85

<210> 49

<211> 776

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 49

Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly

1 5 10 15

Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His

20 25 30

Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu

35 40 45

Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser

50 55 60

Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val

65 70 75 80

Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu

85 90 95

Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro

100 105 110

Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Glu Pro Glu Ser

115 120 125

Gly Lys Val Val Gln Glu Gly Phe Leu Arg Glu Pro Gly Pro Pro Gly

130 135 140

Leu Ser His Gln Leu Met Ser Gly Met Pro Gly Ala Pro Leu Leu Pro

145 150 155 160

Glu Gly Pro Arg Glu Ala Thr Arg Gln Pro Ser Gly Thr Gly Pro Glu

165 170 175

Asp Thr Glu Gly Gly Arg His Ala Pro Glu Leu Leu Lys His Gln Leu

180 185 190

Leu Gly Asp Leu His Gln Glu Gly Pro Pro Leu Lys Gly Ala Gly Gly

195 200 205

Lys Glu Arg Pro Gly Ser Lys Glu Glu Val Asp Glu Asp Arg Asp Val

210 215 220

Asp Glu Ser Ser Pro Gln Asp Ser Pro Pro Ser Lys Ala Ser Pro Ala

225 230 235 240

Gln Asp Gly Arg Pro Pro Gln Thr Ala Ala Arg Glu Ala Thr Ser Ile

245 250 255

Pro Gly Phe Pro Ala Glu Gly Ala Ile Pro Leu Pro Val Asp Phe Leu

260 265 270

Ser Lys Val Ser Thr Glu Ile Pro Ala Ser Glu Pro Asp Gly Pro Ser

275 280 285

Val Gly Arg Ala Lys Gly Gln Asp Ala Pro Leu Glu Phe Thr Phe His

290 295 300

Val Glu Ile Thr Pro Asn Val Gln Lys Glu Gln Ala His Ser Glu Glu

305 310 315 320

His Leu Gly Arg Ala Ala Phe Pro Gly Ala Pro Gly Glu Gly Pro Glu

325 330 335

Ala Arg Gly Pro Ser Leu Gly Glu Asp Thr Lys Glu Ala Asp Leu Pro

340 345 350

Glu Pro Ser Glu Lys Gln Pro Ala Ala Ala Pro Arg Gly Lys Pro Val

355 360 365

Ser Arg Val Pro Gln Leu Lys Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp

370 375 380

Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Thr Ser Thr Arg Ser Ser

385 390 395 400

Ala Lys Thr Leu Lys Asn Arg Pro Cys Leu Ser Pro Lys His Pro Thr

405 410 415

Pro Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ile Gln Pro Ser Ser Pro Ala Val Cys

420 425 430

Pro Glu Pro Pro Ser Ser Pro Lys Tyr Val Ser Ser Val Thr Ser Arg

435 440 445

Thr Gly Ser Ser Gly Ala Lys Glu Met Lys Leu Lys Gly Ala Asp Gly

450 455 460

Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys

465 470 475 480

Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro

485 490 495

Lys Thr Pro Pro Ser Ser Ala Thr Lys Gln Val Gln Arg Arg Pro Pro

500 505 510

Pro Ala Gly Pro Arg Ser Glu Arg Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp

515 520 525

Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg

530 535 540

Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys

545 550 555 560

Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser

565 570 575

Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys

580 585 590

Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly Gly

595 600 605

Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser

610 615 620

Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly Ser

625 630 635 640

Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys

645 650 655

Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val

660 665 670

Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys

675 680 685

Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys

690 695 700

Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys

705 710 715 720

Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly

725 730 735

Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile

740 745 750

Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser

755 760 765

Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu

770 775

<210> 50

<211> 253

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 50

Met Ala Asn Leu Gly Cys Trp Met Leu Val Leu Phe Val Ala Thr Trp

1 5 10 15

Ser Asp Leu Gly Leu Cys Lys Lys Arg Pro Lys Pro Gly Gly Trp Asn

20 25 30

Thr Gly Gly Ser Arg Tyr Pro Gly Gln Gly Ser Pro Gly Gly Asn Arg

35 40 45

Tyr Pro Pro Gln Gly Gly Gly Gly Trp Gly Gln Pro His Gly Gly Gly

50 55 60

Trp Gly Gln Pro His Gly Gly Gly Trp Gly Gln Pro His Gly Gly Gly

65 70 75 80

Trp Gly Gln Pro His Gly Gly Gly Trp Gly Gln Gly Gly Gly Thr His

85 90 95

Ser Gln Trp Asn Lys Pro Ser Lys Pro Lys Thr Asn Met Lys His Met

100 105 110

Ala Gly Ala Ala Ala Ala Gly Ala Val Val Gly Gly Leu Gly Gly Tyr

115 120 125

Met Leu Gly Ser Ala Met Ser Arg Pro Ile Ile His Phe Gly Ser Asp

130 135 140

Tyr Glu Asp Arg Tyr Tyr Arg Glu Asn Met His Arg Tyr Pro Asn Gln

145 150 155 160

Val Tyr Tyr Arg Pro Met Asp Glu Tyr Ser Asn Gln Asn Asn Phe Val

165 170 175

His Asp Cys Val Asn Ile Thr Ile Lys Gln His Thr Val Thr Thr Thr

180 185 190

Thr Lys Gly Glu Asn Phe Thr Glu Thr Asp Val Lys Met Met Glu Arg

195 200 205

Val Val Glu Gln Met Cys Ile Thr Gln Tyr Glu Arg Glu Ser Gln Ala

210 215 220

Tyr Tyr Gln Arg Gly Ser Ser Met Val Leu Phe Ser Ser Pro Pro Val

225 230 235 240

Ile Leu Leu Ile Ser Phe Leu Ile Phe Leu Ile Val Gly

245 250

<210> 51

<211> 140

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 51

Met Asp Val Phe Met Lys Gly Leu Ser Lys Ala Lys Glu Gly Val Val

1 5 10 15

Ala Ala Ala Glu Lys Thr Lys Gln Gly Val Ala Glu Ala Ala Gly Lys

20 25 30

Thr Lys Glu Gly Val Leu Tyr Val Gly Ser Lys Thr Lys Glu Gly Val

35 40 45

Val His Gly Val Ala Thr Val Ala Glu Lys Thr Lys Glu Gln Val Thr

50 55 60

Asn Val Gly Gly Ala Val Val Thr Gly Val Thr Ala Val Ala Gln Lys

65 70 75 80

Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser Ile Ala Ala Ala Thr Gly Phe Val Lys

85 90 95

Lys Asp Gln Leu Gly Lys Asn Glu Glu Gly Ala Pro Gln Glu Gly Ile

100 105 110

Leu Glu Asp Met Pro Val Asp Pro Asp Asn Glu Ala Tyr Glu Met Pro

115 120 125

Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp Tyr Glu Pro Glu Ala

130 135 140

<210> 52

<211> 140

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 52

Met Asp Val Phe Met Lys Gly Leu Ser Lys Ala Lys Glu Gly Val Val

1 5 10 15

Ala Ala Ala Glu Lys Thr Lys Gln Gly Val Ala Glu Ala Ala Gly Lys

20 25 30

Thr Lys Glu Gly Val Leu Tyr Val Gly Ser Lys Thr Lys Glu Gly Val

35 40 45

Val His Gly Val Ala Thr Val Ala Glu Lys Thr Lys Glu Gln Val Thr

50 55 60

Asn Val Gly Gly Ala Val Val Thr Gly Val Thr Ala Val Ala Gln Lys

65 70 75 80

Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser Ile Ala Ala Ala Thr Gly Phe Val Lys

85 90 95

Lys Asp Gln Leu Gly Lys Asn Glu Glu Gly Ala Pro Gln Glu Gly Ile

100 105 110

Leu Glu Asp Met Pro Val Asp Pro Asp Asn Glu Ala Tyr Glu Met Pro

115 120 125

Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp Tyr Glu Pro Glu Ala

130 135 140

<210> 53

<211> 196

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 53

Gln Leu Val Lys Ser Glu Leu Glu Glu Lys Lys Ser Glu Leu Arg His

1 5 10 15

Lys Leu Lys Tyr Val Pro His Glu Tyr Ile Glu Leu Ile Glu Ile Ala

20 25 30

Arg Asn Ser Thr Gln Asp Arg Ile Leu Glu Met Lys Val Met Glu Phe

35 40 45

Phe Met Lys Val Tyr Gly Tyr Arg Gly Lys His Leu Gly Gly Ser Arg

50 55 60

Lys Pro Asp Gly Ala Ile Tyr Thr Val Gly Ser Pro Ile Asp Tyr Gly

65 70 75 80

Val Ile Val Asp Thr Lys Ala Tyr Ser Gly Gly Tyr Asn Leu Pro Ile

85 90 95

Gly Gln Ala Asp Glu Met Gln Arg Tyr Val Glu Glu Asn Gln Thr Arg

100 105 110

Asn Lys His Ile Asn Pro Asn Glu Trp Trp Lys Val Tyr Pro Ser Ser

115 120 125

Val Thr Glu Phe Lys Phe Leu Phe Val Ser Gly His Phe Lys Gly Asn

130 135 140

Tyr Lys Ala Gln Leu Thr Arg Leu Asn His Ile Thr Asn Cys Asn Gly

145 150 155 160

Ala Val Leu Ser Val Glu Glu Leu Leu Ile Gly Gly Glu Met Ile Lys

165 170 175

Ala Gly Thr Leu Thr Leu Glu Glu Val Arg Arg Lys Phe Asn Asn Gly

180 185 190

Glu Ile Asn Phe

195

<210> 54

<211> 36

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 54

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

1 5 10 15

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

20 25 30

His Gly Gly Gly

35

<210> 55

<211> 36

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 55

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

1 5 10 15

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

20 25 30

Gly His Gly Gly

35

<210> 56

<211> 36

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 56

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

1 5 10 15

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

20 25 30

His Gly Ser Gly

35

<210> 57

<211> 1089

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (188)..(189)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (224)..(225)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (258)..(259)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (294)..(295)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (328)..(329)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (364)..(365)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (398)..(399)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (434)..(435)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (468)..(469)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (504)..(505)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (538)..(539)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (574)..(575)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (608)..(609)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (644)..(645)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (678)..(679)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (714)..(715)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (748)..(749)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (784)..(785)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (818)..(819)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 57

Met Asp Tyr Lys Asp His Asp Gly Asp Tyr Lys Asp His Asp Ile Asp

1 5 10 15

Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25 30

Gly Ile His Gly Val Pro Ala Ala Val Asp Leu Arg Thr Leu Gly Tyr

35 40 45

Ser Gln Gln Gln Gln Glu Lys Ile Lys Pro Lys Val Arg Ser Thr Val

50 55 60

Ala Gln His His Glu Ala Leu Val Gly His Gly Phe Thr His Ala His

65 70 75 80

Ile Val Ala Leu Ser Gln His Pro Ala Ala Leu Gly Thr Val Ala Val

85 90 95

Lys Tyr Gln Asp Met Ile Ala Ala Leu Pro Glu Ala Thr His Glu Ala

100 105 110

Ile Val Gly Val Gly Lys Gln Trp Ser Gly Ala Arg Ala Leu Glu Ala

115 120 125

Leu Leu Thr Val Ala Gly Glu Leu Arg Gly Pro Pro Leu Gln Leu Asp

130 135 140

Thr Gly Gln Leu Leu Lys Ile Ala Lys Arg Gly Gly Val Thr Ala Val

145 150 155 160

Glu Ala Val His Ala Trp Arg Asn Ala Leu Thr Gly Ala Pro Leu Asn

165 170 175

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

180 185 190

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

195 200 205

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

210 215 220

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

225 230 235 240

Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala

245 250 255

Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu

260 265 270

Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val

275 280 285

Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val

290 295 300

Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu

305 310 315 320

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

325 330 335

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

340 345 350

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

355 360 365

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

370 375 380

His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly

385 390 395 400

Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys

405 410 415

Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala

420 425 430

Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu

435 440 445

Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

450 455 460

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

465 470 475 480

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

485 490 495

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

500 505 510

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr

515 520 525

Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala

530 535 540

Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His

545 550 555 560

Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly

565 570 575

Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys

580 585 590

Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

595 600 605

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

610 615 620

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

625 630 635 640

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

645 650 655

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val

660 665 670

Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val

675 680 685

Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr

690 695 700

Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala

705 710 715 720

Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly

725 730 735

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

740 745 750

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

755 760 765

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

770 775 780

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

785 790 795 800

Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala

805 810 815

Ser Xaa Xaa Gly Gly Arg Pro Ala Leu Glu Ser Ile Val Ala Gln Leu

820 825 830

Ser Arg Pro Asp Pro Ala Leu Ala Ala Leu Thr Asn Asp His Leu Val

835 840 845

Ala Leu Ala Cys Leu Gly Gly Arg Pro Ala Leu Asp Ala Val Lys Lys

850 855 860

Gly Leu Pro His Ala Pro Ala Leu Ile Lys Arg Thr Asn Arg Arg Ile

865 870 875 880

Pro Glu Arg Thr Ser His Arg Val Ala Gly Ser Gln Leu Val Lys Ser

885 890 895

Glu Leu Glu Glu Lys Lys Ser Glu Leu Arg His Lys Leu Lys Tyr Val

900 905 910

Pro His Glu Tyr Ile Glu Leu Ile Glu Ile Ala Arg Asn Ser Thr Gln

915 920 925

Asp Arg Ile Leu Glu Met Lys Val Met Glu Phe Phe Met Lys Val Tyr

930 935 940

Gly Tyr Arg Gly Lys His Leu Gly Gly Ser Arg Lys Pro Asp Gly Ala

945 950 955 960

Ile Tyr Thr Val Gly Ser Pro Ile Asp Tyr Gly Val Ile Val Asp Thr

965 970 975

Lys Ala Tyr Ser Gly Gly Tyr Asn Leu Pro Ile Gly Gln Ala Asp Glu

980 985 990

Met Gln Arg Tyr Val Glu Glu Asn Gln Thr Arg Asn Lys His Ile Asn

995 1000 1005

Pro Asn Glu Trp Trp Lys Val Tyr Pro Ser Ser Val Thr Glu Phe

1010 1015 1020

Lys Phe Leu Phe Val Ser Gly His Phe Lys Gly Asn Tyr Lys Ala

1025 1030 1035

Gln Leu Thr Arg Leu Asn His Ile Thr Asn Cys Asn Gly Ala Val

1040 1045 1050

Leu Ser Val Glu Glu Leu Leu Ile Gly Gly Glu Met Ile Lys Ala

1055 1060 1065

Gly Thr Leu Thr Leu Glu Glu Val Arg Arg Lys Phe Asn Asn Gly

1070 1075 1080

Glu Ile Asn Phe Arg Ser

1085

<210> 58

<211> 1107

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (188)..(189)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (224)..(225)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (260)..(261)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (296)..(297)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (332)..(333)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (368)..(369)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (404)..(405)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (440)..(441)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (476)..(477)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (512)..(513)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (548)..(549)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (584)..(585)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (620)..(621)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (656)..(657)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (692)..(693)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (728)..(729)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (764)..(765)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (800)..(801)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (836)..(837)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 58

Met Asp Tyr Lys Asp His Asp Gly Asp Tyr Lys Asp His Asp Ile Asp

1 5 10 15

Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25 30

Gly Ile His Gly Val Pro Ala Ala Val Asp Leu Arg Thr Leu Gly Tyr

35 40 45

Ser Gln Gln Gln Gln Glu Lys Ile Lys Pro Lys Val Arg Ser Thr Val

50 55 60

Ala Gln His His Glu Ala Leu Val Gly His Gly Phe Thr His Ala His

65 70 75 80

Ile Val Ala Leu Ser Gln His Pro Ala Ala Leu Gly Thr Val Ala Val

85 90 95

Lys Tyr Gln Asp Met Ile Ala Ala Leu Pro Glu Ala Thr His Glu Ala

100 105 110

Ile Val Gly Val Gly Lys Gln Trp Ser Gly Ala Arg Ala Leu Glu Ala

115 120 125

Leu Leu Thr Val Ala Gly Glu Leu Arg Gly Pro Pro Leu Gln Leu Asp

130 135 140

Thr Gly Gln Leu Leu Lys Ile Ala Lys Arg Gly Gly Val Thr Ala Val

145 150 155 160

Glu Ala Val His Ala Trp Arg Asn Ala Leu Thr Gly Ala Pro Leu Asn

165 170 175

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

180 185 190

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

195 200 205

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

210 215 220

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

225 230 235 240

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

245 250 255

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

260 265 270

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

275 280 285

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

290 295 300

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

305 310 315 320

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

325 330 335

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

340 345 350

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

355 360 365

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

370 375 380

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

385 390 395 400

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

405 410 415

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

420 425 430

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

435 440 445

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

450 455 460

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

465 470 475 480

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

485 490 495

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

500 505 510

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

515 520 525

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

530 535 540

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

545 550 555 560

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

565 570 575

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

580 585 590

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

595 600 605

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

610 615 620

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

625 630 635 640

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

645 650 655

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

660 665 670

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

675 680 685

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

690 695 700

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

705 710 715 720

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

725 730 735

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

740 745 750

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

755 760 765

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

770 775 780

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

785 790 795 800

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

805 810 815

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

820 825 830

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Arg Pro Ala Leu Glu Ser Ile Val Ala

835 840 845

Gln Leu Ser Arg Pro Asp Pro Ala Leu Ala Ala Leu Thr Asn Asp His

850 855 860

Leu Val Ala Leu Ala Cys Leu Gly Gly Arg Pro Ala Leu Asp Ala Val

865 870 875 880

Lys Lys Gly Leu Pro His Ala Pro Ala Leu Ile Lys Arg Thr Asn Arg

885 890 895

Arg Ile Pro Glu Arg Thr Ser His Arg Val Ala Gly Ser Gln Leu Val

900 905 910

Lys Ser Glu Leu Glu Glu Lys Lys Ser Glu Leu Arg His Lys Leu Lys

915 920 925

Tyr Val Pro His Glu Tyr Ile Glu Leu Ile Glu Ile Ala Arg Asn Ser

930 935 940

Thr Gln Asp Arg Ile Leu Glu Met Lys Val Met Glu Phe Phe Met Lys

945 950 955 960

Val Tyr Gly Tyr Arg Gly Lys His Leu Gly Gly Ser Arg Lys Pro Asp

965 970 975

Gly Ala Ile Tyr Thr Val Gly Ser Pro Ile Asp Tyr Gly Val Ile Val

980 985 990

Asp Thr Lys Ala Tyr Ser Gly Gly Tyr Asn Leu Pro Ile Gly Gln Ala

995 1000 1005

Asp Glu Met Gln Arg Tyr Val Glu Glu Asn Gln Thr Arg Asn Lys

1010 1015 1020

His Ile Asn Pro Asn Glu Trp Trp Lys Val Tyr Pro Ser Ser Val

1025 1030 1035

Thr Glu Phe Lys Phe Leu Phe Val Ser Gly His Phe Lys Gly Asn

1040 1045 1050

Tyr Lys Ala Gln Leu Thr Arg Leu Asn His Ile Thr Asn Cys Asn

1055 1060 1065

Gly Ala Val Leu Ser Val Glu Glu Leu Leu Ile Gly Gly Glu Met

1070 1075 1080

Ile Lys Ala Gly Thr Leu Thr Leu Glu Glu Val Arg Arg Lys Phe

1085 1090 1095

Asn Asn Gly Glu Ile Asn Phe Arg Ser

1100 1105

<210> 59

<211> 1086

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (188)..(189)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (224)..(225)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (258)..(259)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (294)..(295)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (328)..(329)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (364)..(365)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (398)..(399)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (434)..(435)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (468)..(469)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (504)..(505)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (538)..(539)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (574)..(575)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (608)..(609)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (644)..(645)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (678)..(679)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (714)..(715)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (748)..(749)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (784)..(785)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (818)..(819)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 59

Met Asp Tyr Lys Asp His Asp Gly Asp Tyr Lys Asp His Asp Ile Asp

1 5 10 15

Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25 30

Gly Ile His Gly Val Pro Ala Ala Val Asp Leu Arg Thr Leu Gly Tyr

35 40 45

Ser Gln Gln Gln Gln Glu Lys Ile Lys Pro Lys Val Arg Ser Thr Val

50 55 60

Ala Gln His His Glu Ala Leu Val Gly His Gly Phe Thr His Ala His

65 70 75 80

Ile Val Ala Leu Ser Gln His Pro Ala Ala Leu Gly Thr Val Ala Val

85 90 95

Lys Tyr Gln Asp Met Ile Ala Ala Leu Pro Glu Ala Thr His Glu Ala

100 105 110

Ile Val Gly Val Gly Lys Gln Trp Ser Gly Ala Arg Ala Leu Glu Ala

115 120 125

Leu Leu Thr Val Ala Gly Glu Leu Arg Gly Pro Pro Leu Gln Leu Asp

130 135 140

Thr Gly Gln Leu Leu Lys Ile Ala Lys Arg Gly Gly Val Thr Ala Val

145 150 155 160

Glu Ala Val His Ala Trp Arg Asn Ala Leu Thr Gly Ala Pro Leu Asn

165 170 175

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

180 185 190

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

195 200 205

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

210 215 220

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

225 230 235 240

Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala

245 250 255

Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu

260 265 270

Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val

275 280 285

Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val

290 295 300

Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu

305 310 315 320

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

325 330 335

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

340 345 350

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

355 360 365

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

370 375 380

His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly

385 390 395 400

Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys

405 410 415

Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala

420 425 430

Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu

435 440 445

Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

450 455 460

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

465 470 475 480

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

485 490 495

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

500 505 510

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr

515 520 525

Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala

530 535 540

Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His

545 550 555 560

Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly

565 570 575

Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys

580 585 590

Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

595 600 605

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

610 615 620

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

625 630 635 640

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

645 650 655

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val

660 665 670

Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val

675 680 685

Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr

690 695 700

Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala

705 710 715 720

Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly

725 730 735

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

740 745 750

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

755 760 765

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

770 775 780

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

785 790 795 800

Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala

805 810 815

Ser Xaa Xaa Gly Gly Arg Pro Ala Leu Glu Ser Ile Val Ala Gln Leu

820 825 830

Ser Arg Pro Asp Pro Ala Leu Ala Ala Leu Thr Asn Asp His Leu Val

835 840 845

Ala Leu Ala Cys Leu Gly Gly Arg Pro Ala Leu Asp Ala Val Lys Lys

850 855 860

Gly Leu Pro His Ala Pro Ala Leu Ile Lys Arg Thr Asn Arg Arg Ile

865 870 875 880

Pro Glu Arg Thr Ser His Arg Val Ala Gly Ser Val Leu Glu Lys Ser

885 890 895

Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr Glu Leu Thr Asn Ile

900 905 910

Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala Ser Lys Lys Lys Thr

915 920 925

Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile Ser Thr Lys Ile Phe

930 935 940

Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Lys His Leu Gly Gly Ser Asn Lys

945 950 955 960

Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala Ile Ile Leu Asp Ser

965 970 975

Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala Ser His Thr Asp Ala

980 985 990

Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg Lys Glu Glu Ile Lys

995 1000 1005

Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu Asp Asn Thr Tyr

1010 1015 1020

Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr Lys Glu Gln

1025 1030 1035

Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly Gly Ala Leu

1040 1045 1050

Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr Lys Thr Gln

1055 1060 1065

Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu Asp Tyr Asn

1070 1075 1080

Ile Ser Tyr

1085

<210> 60

<211> 1104

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (188)..(189)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (224)..(225)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (260)..(261)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (296)..(297)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (332)..(333)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (368)..(369)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (404)..(405)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (440)..(441)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (476)..(477)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (512)..(513)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (548)..(549)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (584)..(585)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (620)..(621)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (656)..(657)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (692)..(693)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (728)..(729)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (764)..(765)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (800)..(801)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (836)..(837)

<223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой

<400> 60

Met Asp Tyr Lys Asp His Asp Gly Asp Tyr Lys Asp His Asp Ile Asp

1 5 10 15

Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25 30

Gly Ile His Gly Val Pro Ala Ala Val Asp Leu Arg Thr Leu Gly Tyr

35 40 45

Ser Gln Gln Gln Gln Glu Lys Ile Lys Pro Lys Val Arg Ser Thr Val

50 55 60

Ala Gln His His Glu Ala Leu Val Gly His Gly Phe Thr His Ala His

65 70 75 80

Ile Val Ala Leu Ser Gln His Pro Ala Ala Leu Gly Thr Val Ala Val

85 90 95

Lys Tyr Gln Asp Met Ile Ala Ala Leu Pro Glu Ala Thr His Glu Ala

100 105 110

Ile Val Gly Val Gly Lys Gln Trp Ser Gly Ala Arg Ala Leu Glu Ala

115 120 125

Leu Leu Thr Val Ala Gly Glu Leu Arg Gly Pro Pro Leu Gln Leu Asp

130 135 140

Thr Gly Gln Leu Leu Lys Ile Ala Lys Arg Gly Gly Val Thr Ala Val

145 150 155 160

Glu Ala Val His Ala Trp Arg Asn Ala Leu Thr Gly Ala Pro Leu Asn

165 170 175

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

180 185 190

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

195 200 205

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

210 215 220

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

225 230 235 240

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

245 250 255

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

260 265 270

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

275 280 285

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

290 295 300

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

305 310 315 320

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

325 330 335

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

340 345 350

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

355 360 365

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

370 375 380

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

385 390 395 400

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

405 410 415

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

420 425 430

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

435 440 445

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

450 455 460

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

465 470 475 480

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

485 490 495

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

500 505 510

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

515 520 525

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

530 535 540

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

545 550 555 560

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

565 570 575

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

580 585 590

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

595 600 605

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

610 615 620

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

625 630 635 640

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

645 650 655

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

660 665 670

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

675 680 685

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg

690 695 700

Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu

705 710 715 720

Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu

725 730 735

Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly

740 745 750

Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Lys

755 760 765

Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala

770 775 780

Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Xaa

785 790 795 800

Xaa Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val

805 810 815

Leu Cys Gln Ala Gly His Gly Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala

820 825 830

Ile Ala Ser Xaa Xaa Gly Gly Arg Pro Ala Leu Glu Ser Ile Val Ala

835 840 845

Gln Leu Ser Arg Pro Asp Pro Ala Leu Ala Ala Leu Thr Asn Asp His

850 855 860

Leu Val Ala Leu Ala Cys Leu Gly Gly Arg Pro Ala Leu Asp Ala Val

865 870 875 880

Lys Lys Gly Leu Pro His Ala Pro Ala Leu Ile Lys Arg Thr Asn Arg

885 890 895

Arg Ile Pro Glu Arg Thr Ser His Arg Val Ala Gly Ser Val Leu Glu

900 905 910

Lys Ser Asp Ile Glu Lys Phe Lys Asn Gln Leu Arg Thr Glu Leu Thr

915 920 925

Asn Ile Asp His Ser Tyr Leu Lys Gly Ile Asp Ile Ala Ser Lys Lys

930 935 940

Lys Thr Ser Asn Val Glu Asn Thr Glu Phe Glu Ala Ile Ser Thr Lys

945 950 955 960

Ile Phe Thr Asp Glu Leu Gly Phe Ser Gly Lys His Leu Gly Gly Ser

965 970 975

Asn Lys Pro Asp Gly Leu Leu Trp Asp Asp Asp Cys Ala Ile Ile Leu

980 985 990

Asp Ser Lys Ala Tyr Ser Glu Gly Phe Pro Leu Thr Ala Ser His Thr

995 1000 1005

Asp Ala Met Gly Arg Tyr Leu Arg Gln Phe Thr Glu Arg Lys Glu

1010 1015 1020

Glu Ile Lys Pro Thr Trp Trp Asp Ile Ala Pro Glu His Leu Asp

1025 1030 1035

Asn Thr Tyr Phe Ala Tyr Val Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Tyr

1040 1045 1050

Lys Glu Gln Leu Gln Lys Phe Arg Gln Asp Thr Asn His Leu Gly

1055 1060 1065

Gly Ala Leu Glu Phe Val Lys Leu Leu Leu Leu Ala Asn Asn Tyr

1070 1075 1080

Lys Thr Gln Lys Met Ser Lys Lys Glu Val Lys Lys Ser Ile Leu

1085 1090 1095

Asp Tyr Asn Ile Ser Tyr

1100

<210> 61

<211> 1464

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 61

Met Phe Ser Phe Val Asp Leu Arg Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Thr

1 5 10 15

Ala Leu Leu Thr His Gly Gln Glu Glu Gly Gln Val Glu Gly Gln Asp

20 25 30

Glu Asp Ile Pro Pro Ile Thr Cys Val Gln Asn Gly Leu Arg Tyr His

35 40 45

Asp Arg Asp Val Trp Lys Pro Glu Pro Cys Arg Ile Cys Val Cys Asp

50 55 60

Asn Gly Lys Val Leu Cys Asp Asp Val Ile Cys Asp Glu Thr Lys Asn

65 70 75 80

Cys Pro Gly Ala Glu Val Pro Glu Gly Glu Cys Cys Pro Val Cys Pro

85 90 95

Asp Gly Ser Glu Ser Pro Thr Asp Gln Glu Thr Thr Gly Val Glu Gly

100 105 110

Pro Lys Gly Asp Thr Gly Pro Arg Gly Pro Arg Gly Pro Ala Gly Pro

115 120 125

Pro Gly Arg Asp Gly Ile Pro Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly Pro Pro

130 135 140

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Gly Gly Asn Phe Ala

145 150 155 160

Pro Gln Leu Ser Tyr Gly Tyr Asp Glu Lys Ser Thr Gly Gly Ile Ser

165 170 175

Val Pro Gly Pro Met Gly Pro Ser Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Pro

180 185 190

Pro Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Phe Gln Gly Pro Pro Gly Glu Pro

195 200 205

Gly Glu Pro Gly Ala Ser Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly

210 215 220

Pro Pro Gly Lys Asn Gly Asp Asp Gly Glu Ala Gly Lys Pro Gly Arg

225 230 235 240

Pro Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Ala Arg Gly Leu Pro

245 250 255

Gly Thr Ala Gly Leu Pro Gly Met Lys Gly His Arg Gly Phe Ser Gly

260 265 270

Leu Asp Gly Ala Lys Gly Asp Ala Gly Pro Ala Gly Pro Lys Gly Glu

275 280 285

Pro Gly Ser Pro Gly Glu Asn Gly Ala Pro Gly Gln Met Gly Pro Arg

290 295 300

Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Arg Pro Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly

305 310 315 320

Ala Arg Gly Asn Asp Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Pro Pro Gly Pro

325 330 335

Thr Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Phe Pro Gly Ala Val Gly Ala Lys

340 345 350

Gly Glu Ala Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Ser Glu Gly Pro Gln Gly

355 360 365

Val Arg Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Pro

370 375 380

Ala Gly Asn Pro Gly Ala Asp Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly Ala Asn

385 390 395 400

Gly Ala Pro Gly Ile Ala Gly Ala Pro Gly Phe Pro Gly Ala Arg Gly

405 410 415

Pro Ser Gly Pro Gln Gly Pro Gly Gly Pro Pro Gly Pro Lys Gly Asn

420 425 430

Ser Gly Glu Pro Gly Ala Pro Gly Ser Lys Gly Asp Thr Gly Ala Lys

435 440 445

Gly Glu Pro Gly Pro Val Gly Val Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly

450 455 460

Glu Glu Gly Lys Arg Gly Ala Arg Gly Glu Pro Gly Pro Thr Gly Leu

465 470 475 480

Pro Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Gly Pro Gly Ser Arg Gly Phe Pro

485 490 495

Gly Ala Asp Gly Val Ala Gly Pro Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly

500 505 510

Ser Pro Gly Pro Ala Gly Pro Lys Gly Ser Pro Gly Glu Ala Gly Arg

515 520 525

Pro Gly Glu Ala Gly Leu Pro Gly Ala Lys Gly Leu Thr Gly Ser Pro

530 535 540

Gly Ser Pro Gly Pro Asp Gly Lys Thr Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly

545 550 555 560

Gln Asp Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Arg Gly Gln

565 570 575

Ala Gly Val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Ala Ala Gly Glu Pro

580 585 590

Gly Lys Ala Gly Glu Arg Gly Val Pro Gly Pro Pro Gly Ala Val Gly

595 600 605

Pro Ala Gly Lys Asp Gly Glu Ala Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Pro

610 615 620

Ala Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Glu Gln Gly Pro Ala Gly Ser Pro

625 630 635 640

Gly Phe Gln Gly Leu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Glu Ala Gly

645 650 655

Lys Pro Gly Glu Gln Gly Val Pro Gly Asp Leu Gly Ala Pro Gly Pro

660 665 670

Ser Gly Ala Arg Gly Glu Arg Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Val Gln

675 680 685

Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Ala Asn Gly Ala Pro Gly

690 695 700

Asn Asp Gly Ala Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser

705 710 715 720

Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala

725 730 735

Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly

740 745 750

Ala Asp Gly Ser Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu Thr Gly Pro

755 760 765

Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Asp Lys Gly Glu Ser

770 775 780

Gly Pro Ser Gly Pro Ala Gly Pro Thr Gly Ala Arg Gly Ala Pro Gly

785 790 795 800

Asp Arg Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Phe Ala Gly Pro

805 810 815

Pro Gly Ala Asp Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly Glu Pro Gly Asp Ala

820 825 830

Gly Ala Lys Gly Asp Ala Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly

835 840 845

Pro Pro Gly Pro Ile Gly Asn Val Gly Ala Pro Gly Ala Lys Gly Ala

850 855 860

Arg Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly Ala Thr Gly Phe Pro Gly Ala Ala

865 870 875 880

Gly Arg Val Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Asn Ala Gly Pro Pro Gly

885 890 895

Pro Pro Gly Pro Ala Gly Lys Glu Gly Gly Lys Gly Pro Arg Gly Glu

900 905 910

Thr Gly Pro Ala Gly Arg Pro Gly Glu Val Gly Pro Pro Gly Pro Pro

915 920 925

Gly Pro Ala Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Ala Asp Gly Pro Ala Gly

930 935 940

Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Ile Ala Gly Gln Arg Gly Val

945 950 955 960

Val Gly Leu Pro Gly Gln Arg Gly Glu Arg Gly Phe Pro Gly Leu Pro

965 970 975

Gly Pro Ser Gly Glu Pro Gly Lys Gln Gly Pro Ser Gly Ala Ser Gly

980 985 990

Glu Arg Gly Pro Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Leu Ala Gly Pro

995 1000 1005

Pro Gly Glu Ser Gly Arg Glu Gly Ala Pro Gly Ala Glu Gly Ser

1010 1015 1020

Pro Gly Arg Asp Gly Ser Pro Gly Ala Lys Gly Asp Arg Gly Glu

1025 1030 1035

Thr Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ala

1040 1045 1050

Pro Gly Pro Val Gly Pro Ala Gly Lys Ser Gly Asp Arg Gly Glu

1055 1060 1065

Thr Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Val Gly Pro Val Gly Ala

1070 1075 1080

Arg Gly Pro Ala Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Asp Lys Gly Glu

1085 1090 1095

Thr Gly Glu Gln Gly Asp Arg Gly Ile Lys Gly His Arg Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Gly Leu Gln Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Glu

1115 1120 1125

Gln Gly Pro Ser Gly Ala Ser Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Pro

1130 1135 1140

Pro Gly Ser Ala Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Leu Asn Gly Leu

1145 1150 1155

Pro Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Arg Thr Gly Asp

1160 1165 1170

Ala Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro

1175 1180 1185

Pro Gly Pro Pro Ser Ala Gly Phe Asp Phe Ser Phe Leu Pro Gln

1190 1195 1200

Pro Pro Gln Glu Lys Ala His Asp Gly Gly Arg Tyr Tyr Arg Ala

1205 1210 1215

Asp Asp Ala Asn Val Val Arg Asp Arg Asp Leu Glu Val Asp Thr

1220 1225 1230

Thr Leu Lys Ser Leu Ser Gln Gln Ile Glu Asn Ile Arg Ser Pro

1235 1240 1245

Glu Gly Ser Arg Lys Asn Pro Ala Arg Thr Cys Arg Asp Leu Lys

1250 1255 1260

Met Cys His Ser Asp Trp Lys Ser Gly Glu Tyr Trp Ile Asp Pro

1265 1270 1275

Asn Gln Gly Cys Asn Leu Asp Ala Ile Lys Val Phe Cys Asn Met

1280 1285 1290

Glu Thr Gly Glu Thr Cys Val Tyr Pro Thr Gln Pro Ser Val Ala

1295 1300 1305

Gln Lys Asn Trp Tyr Ile Ser Lys Asn Pro Lys Asp Lys Arg His

1310 1315 1320

Val Trp Phe Gly Glu Ser Met Thr Asp Gly Phe Gln Phe Glu Tyr

1325 1330 1335

Gly Gly Gln Gly Ser Asp Pro Ala Asp Val Ala Ile Gln Leu Thr

1340 1345 1350

Phe Leu Arg Leu Met Ser Thr Glu Ala Ser Gln Asn Ile Thr Tyr

1355 1360 1365

His Cys Lys Asn Ser Val Ala Tyr Met Asp Gln Gln Thr Gly Asn

1370 1375 1380

Leu Lys Lys Ala Leu Leu Leu Gln Gly Ser Asn Glu Ile Glu Ile

1385 1390 1395

Arg Ala Glu Gly Asn Ser Arg Phe Thr Tyr Ser Val Thr Val Asp

1400 1405 1410

Gly Cys Thr Ser His Thr Gly Ala Trp Gly Lys Thr Val Ile Glu

1415 1420 1425

Tyr Lys Thr Thr Lys Thr Ser Arg Leu Pro Ile Ile Asp Val Ala

1430 1435 1440

Pro Leu Asp Val Gly Ala Pro Asp Gln Glu Phe Gly Phe Asp Val

1445 1450 1455

Gly Pro Val Cys Phe Leu

1460

<210> 62

<211> 1366

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 62

Met Leu Ser Phe Val Asp Thr Arg Thr Leu Leu Leu Leu Ala Val Thr

1 5 10 15

Leu Cys Leu Ala Thr Cys Gln Ser Leu Gln Glu Glu Thr Val Arg Lys

20 25 30

Gly Pro Ala Gly Asp Arg Gly Pro Arg Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly

35 40 45

Pro Pro Gly Arg Asp Gly Glu Asp Gly Pro Thr Gly Pro Pro Gly Pro

50 55 60

Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Gly Gly Asn Phe Ala Ala Gln

65 70 75 80

Tyr Asp Gly Lys Gly Val Gly Leu Gly Pro Gly Pro Met Gly Leu Met

85 90 95

Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly Ala Ala Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly

100 105 110

Phe Gln Gly Pro Ala Gly Glu Pro Gly Glu Pro Gly Gln Thr Gly Pro

115 120 125

Ala Gly Ala Arg Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Lys Ala Gly Glu Asp

130 135 140

Gly His Pro Gly Lys Pro Gly Arg Pro Gly Glu Arg Gly Val Val Gly

145 150 155 160

Pro Gln Gly Ala Arg Gly Phe Pro Gly Thr Pro Gly Leu Pro Gly Phe

165 170 175

Lys Gly Ile Arg Gly His Asn Gly Leu Asp Gly Leu Lys Gly Gln Pro

180 185 190

Gly Ala Pro Gly Val Lys Gly Glu Pro Gly Ala Pro Gly Glu Asn Gly

195 200 205

Thr Pro Gly Gln Thr Gly Ala Arg Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Arg

210 215 220

Val Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly Ala Arg Gly Ser Asp Gly Ser Val

225 230 235 240

Gly Pro Val Gly Pro Ala Gly Pro Ile Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly

245 250 255

Phe Pro Gly Ala Pro Gly Pro Lys Gly Glu Ile Gly Ala Val Gly Asn

260 265 270

Ala Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Glu Val Gly Leu Pro

275 280 285

Gly Leu Ser Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Asn Pro Gly Ala Asn Gly

290 295 300

Leu Thr Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Val Ala Gly Ala

305 310 315 320

Pro Gly Leu Pro Gly Pro Arg Gly Ile Pro Gly Pro Val Gly Ala Ala

325 330 335

Gly Ala Thr Gly Ala Arg Gly Leu Val Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly

340 345 350

Ser Lys Gly Glu Ser Gly Asn Lys Gly Glu Pro Gly Ser Ala Gly Pro

355 360 365

Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Glu Glu Gly Lys Arg Gly Pro Asn

370 375 380

Gly Glu Ala Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Arg Gly

385 390 395 400

Ser Pro Gly Ser Arg Gly Leu Pro Gly Ala Asp Gly Arg Ala Gly Val

405 410 415

Met Gly Pro Pro Gly Ser Arg Gly Ala Ser Gly Pro Ala Gly Val Arg

420 425 430

Gly Pro Asn Gly Asp Ala Gly Arg Pro Gly Glu Pro Gly Leu Met Gly

435 440 445

Pro Arg Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Asn Ile Gly Pro Ala Gly Lys

450 455 460

Glu Gly Pro Val Gly Leu Pro Gly Ile Asp Gly Arg Pro Gly Pro Ile

465 470 475 480

Gly Pro Ala Gly Ala Arg Gly Glu Pro Gly Asn Ile Gly Phe Pro Gly

485 490 495

Pro Lys Gly Pro Thr Gly Asp Pro Gly Lys Asn Gly Asp Lys Gly His

500 505 510

Ala Gly Leu Ala Gly Ala Arg Gly Ala Pro Gly Pro Asp Gly Asn Asn

515 520 525

Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Gly Lys Gly

530 535 540

Glu Gln Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Phe Gln Gly Leu Pro Gly Pro

545 550 555 560

Ser Gly Pro Ala Gly Glu Val Gly Lys Pro Gly Glu Arg Gly Leu His

565 570 575

Gly Glu Phe Gly Leu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Glu Arg Gly

580 585 590

Pro Pro Gly Glu Ser Gly Ala Ala Gly Pro Thr Gly Pro Ile Gly Ser

595 600 605

Arg Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Asp Gly Asn Lys Gly Glu Pro

610 615 620

Gly Val Val Gly Ala Val Gly Thr Ala Gly Pro Ser Gly Pro Ser Gly

625 630 635 640

Leu Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Ile Pro Gly Gly Lys Gly Glu

645 650 655

Lys Gly Glu Pro Gly Leu Arg Gly Glu Ile Gly Asn Pro Gly Arg Asp

660 665 670

Gly Ala Arg Gly Ala Pro Gly Ala Val Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly

675 680 685

Ala Thr Gly Asp Arg Gly Glu Ala Gly Ala Ala Gly Pro Ala Gly Pro

690 695 700

Ala Gly Pro Arg Gly Ser Pro Gly Glu Arg Gly Glu Val Gly Pro Ala

705 710 715 720

Gly Pro Asn Gly Phe Ala Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Gln Pro Gly

725 730 735

Ala Lys Gly Glu Arg Gly Ala Lys Gly Pro Lys Gly Glu Asn Gly Val

740 745 750

Val Gly Pro Thr Gly Pro Val Gly Ala Ala Gly Pro Ala Gly Pro Asn

755 760 765

Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ser Arg Gly Asp Gly Gly Pro Pro Gly

770 775 780

Met Thr Gly Phe Pro Gly Ala Ala Gly Arg Thr Gly Pro Pro Gly Pro

785 790 795 800

Ser Gly Ile Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Lys Glu

805 810 815

Gly Leu Arg Gly Pro Arg Gly Asp Gln Gly Pro Val Gly Arg Thr Gly

820 825 830

Glu Val Gly Ala Val Gly Pro Pro Gly Phe Ala Gly Glu Lys Gly Pro

835 840 845

Ser Gly Glu Ala Gly Thr Ala Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln

850 855 860

Gly Leu Leu Gly Ala Pro Gly Ile Leu Gly Leu Pro Gly Ser Arg Gly

865 870 875 880

Glu Arg Gly Leu Pro Gly Val Ala Gly Ala Val Gly Glu Pro Gly Pro

885 890 895

Leu Gly Ile Ala Gly Pro Pro Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Ala Val

900 905 910

Gly Ser Pro Gly Val Asn Gly Ala Pro Gly Glu Ala Gly Arg Asp Gly

915 920 925

Asn Pro Gly Asn Asp Gly Pro Pro Gly Arg Asp Gly Gln Pro Gly His

930 935 940

Lys Gly Glu Arg Gly Tyr Pro Gly Asn Ile Gly Pro Val Gly Ala Ala

945 950 955 960

Gly Ala Pro Gly Pro His Gly Pro Val Gly Pro Ala Gly Lys His Gly

965 970 975

Asn Arg Gly Glu Thr Gly Pro Ser Gly Pro Val Gly Pro Ala Gly Ala

980 985 990

Val Gly Pro Arg Gly Pro Ser Gly Pro Gln Gly Ile Arg Gly Asp Lys

995 1000 1005

Gly Glu Pro Gly Glu Lys Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Leu Lys

1010 1015 1020

Gly His Asn Gly Leu Gln Gly Leu Pro Gly Ile Ala Gly His His

1025 1030 1035

Gly Asp Gln Gly Ala Pro Gly Ser Val Gly Pro Ala Gly Pro Arg

1040 1045 1050

Gly Pro Ala Gly Pro Ser Gly Pro Ala Gly Lys Asp Gly Arg Thr

1055 1060 1065

Gly His Pro Gly Thr Val Gly Pro Ala Gly Ile Arg Gly Pro Gln

1070 1075 1080

Gly His Gln Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro

1085 1090 1095

Gly Pro Pro Gly Val Ser Gly Gly Gly Tyr Asp Phe Gly Tyr Asp

1100 1105 1110

Gly Asp Phe Tyr Arg Ala Asp Gln Pro Arg Ser Ala Pro Ser Leu

1115 1120 1125

Arg Pro Lys Asp Tyr Glu Val Asp Ala Thr Leu Lys Ser Leu Asn

1130 1135 1140

Asn Gln Ile Glu Thr Leu Leu Thr Pro Glu Gly Ser Arg Lys Asn

1145 1150 1155

Pro Ala Arg Thr Cys Arg Asp Leu Arg Leu Ser His Pro Glu Trp

1160 1165 1170

Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Ile Asp Pro Asn Gln Gly Cys Thr Met

1175 1180 1185

Asp Ala Ile Lys Val Tyr Cys Asp Phe Ser Thr Gly Glu Thr Cys

1190 1195 1200

Ile Arg Ala Gln Pro Glu Asn Ile Pro Ala Lys Asn Trp Tyr Arg

1205 1210 1215

Ser Ser Lys Asp Lys Lys His Val Trp Leu Gly Glu Thr Ile Asn

1220 1225 1230

Ala Gly Ser Gln Phe Glu Tyr Asn Val Glu Gly Val Thr Ser Lys

1235 1240 1245

Glu Met Ala Thr Gln Leu Ala Phe Met Arg Leu Leu Ala Asn Tyr

1250 1255 1260

Ala Ser Gln Asn Ile Thr Tyr His Cys Lys Asn Ser Ile Ala Tyr

1265 1270 1275

Met Asp Glu Glu Thr Gly Asn Leu Lys Lys Ala Val Ile Leu Gln

1280 1285 1290

Gly Ser Asn Asp Val Glu Leu Val Ala Glu Gly Asn Ser Arg Phe

1295 1300 1305

Thr Tyr Thr Val Leu Val Asp Gly Cys Ser Lys Lys Thr Asn Glu

1310 1315 1320

Trp Gly Lys Thr Ile Ile Glu Tyr Lys Thr Asn Lys Pro Ser Arg

1325 1330 1335

Leu Pro Phe Leu Asp Ile Ala Pro Leu Asp Ile Gly Gly Ala Asp

1340 1345 1350

Gln Glu Phe Phe Val Asp Ile Gly Pro Val Cys Phe Lys

1355 1360 1365

<210> 63

<211> 1487

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 63

Met Ile Arg Leu Gly Ala Pro Gln Thr Leu Val Leu Leu Thr Leu Leu

1 5 10 15

Val Ala Ala Val Leu Arg Cys Gln Gly Gln Asp Val Gln Glu Ala Gly

20 25 30

Ser Cys Val Gln Asp Gly Gln Arg Tyr Asn Asp Lys Asp Val Trp Lys

35 40 45

Pro Glu Pro Cys Arg Ile Cys Val Cys Asp Thr Gly Thr Val Leu Cys

50 55 60

Asp Asp Ile Ile Cys Glu Asp Val Lys Asp Cys Leu Ser Pro Glu Ile

65 70 75 80

Pro Phe Gly Glu Cys Cys Pro Ile Cys Pro Thr Asp Leu Ala Thr Ala

85 90 95

Ser Gly Gln Pro Gly Pro Lys Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Asp Ile

100 105 110

Lys Asp Ile Val Gly Pro Lys Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ala

115 120 125

Gly Glu Gln Gly Pro Arg Gly Asp Arg Gly Asp Lys Gly Glu Lys Gly

130 135 140

Ala Pro Gly Pro Arg Gly Arg Asp Gly Glu Pro Gly Thr Pro Gly Asn

145 150 155 160

Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Gly

165 170 175

Gly Asn Phe Ala Ala Gln Met Ala Gly Gly Phe Asp Glu Lys Ala Gly

180 185 190

Gly Ala Gln Leu Gly Val Met Gln Gly Pro Met Gly Pro Met Gly Pro

195 200 205

Arg Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Phe Gln

210 215 220

Gly Asn Pro Gly Glu Pro Gly Glu Pro Gly Val Ser Gly Pro Met Gly

225 230 235 240

Pro Arg Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Lys Pro Gly Asp Asp Gly Glu

245 250 255

Ala Gly Lys Pro Gly Lys Ala Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Pro Gln

260 265 270

Gly Ala Arg Gly Phe Pro Gly Thr Pro Gly Leu Pro Gly Val Lys Gly

275 280 285

His Arg Gly Tyr Pro Gly Leu Asp Gly Ala Lys Gly Glu Ala Gly Ala

290 295 300

Pro Gly Val Lys Gly Glu Ser Gly Ser Pro Gly Glu Asn Gly Ser Pro

305 310 315 320

Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Arg Thr Gly

325 330 335

Pro Ala Gly Ala Ala Gly Ala Arg Gly Asn Asp Gly Gln Pro Gly Pro

340 345 350

Ala Gly Pro Pro Gly Pro Val Gly Pro Ala Gly Gly Pro Gly Phe Pro

355 360 365

Gly Ala Pro Gly Ala Lys Gly Glu Ala Gly Pro Thr Gly Ala Arg Gly

370 375 380

Pro Glu Gly Ala Gln Gly Pro Arg Gly Glu Pro Gly Thr Pro Gly Ser

385 390 395 400

Pro Gly Pro Ala Gly Ala Ser Gly Asn Pro Gly Thr Asp Gly Ile Pro

405 410 415

Gly Ala Lys Gly Ser Ala Gly Ala Pro Gly Ile Ala Gly Ala Pro Gly

420 425 430

Phe Pro Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Ala Thr Gly Pro

435 440 445

Leu Gly Pro Lys Gly Gln Thr Gly Glu Pro Gly Ile Ala Gly Phe Lys

450 455 460

Gly Glu Gln Gly Pro Lys Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Gln Gly

465 470 475 480

Ala Pro Gly Pro Ala Gly Glu Glu Gly Lys Arg Gly Ala Arg Gly Glu

485 490 495

Pro Gly Gly Val Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Ala Pro

500 505 510

Gly Asn Arg Gly Phe Pro Gly Gln Asp Gly Leu Ala Gly Pro Lys Gly

515 520 525

Ala Pro Gly Glu Arg Gly Pro Ser Gly Leu Ala Gly Pro Lys Gly Ala

530 535 540

Asn Gly Asp Pro Gly Arg Pro Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Ala Arg

545 550 555 560

Gly Leu Thr Gly Arg Pro Gly Asp Ala Gly Pro Gln Gly Lys Val Gly

565 570 575

Pro Ser Gly Ala Pro Gly Glu Asp Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro

580 585 590

Gln Gly Ala Arg Gly Gln Pro Gly Val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys

595 600 605

Gly Ala Asn Gly Glu Pro Gly Lys Ala Gly Glu Lys Gly Leu Pro Gly

610 615 620

Ala Pro Gly Leu Arg Gly Leu Pro Gly Lys Asp Gly Glu Thr Gly Ala

625 630 635 640

Ala Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Glu Gln

645 650 655

Gly Ala Pro Gly Pro Ser Gly Phe Gln Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly

660 665 670

Pro Pro Gly Glu Gly Gly Lys Pro Gly Asp Gln Gly Val Pro Gly Glu

675 680 685

Ala Gly Ala Pro Gly Leu Val Gly Pro Arg Gly Glu Arg Gly Phe Pro

690 695 700

Gly Glu Arg Gly Ser Pro Gly Ala Gln Gly Leu Gln Gly Pro Arg Gly

705 710 715 720

Leu Pro Gly Thr Pro Gly Thr Asp Gly Pro Lys Gly Ala Ser Gly Pro

725 730 735

Ala Gly Pro Pro Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro

740 745 750

Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Ile Ala Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly

755 760 765

Asp Val Gly Glu Lys Gly Pro Glu Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Gly

770 775 780

Arg Gly Leu Thr Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Asn

785 790 795 800

Gly Glu Lys Gly Glu Val Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ser Ala Gly

805 810 815

Ala Arg Gly Ala Pro Gly Glu Arg Gly Glu Thr Gly Pro Pro Gly Pro

820 825 830

Ala Gly Phe Ala Gly Pro Pro Gly Ala Asp Gly Gln Pro Gly Ala Lys

835 840 845

Gly Glu Gln Gly Glu Ala Gly Gln Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly

850 855 860

Pro Gln Gly Pro Ser Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Pro Thr Gly Val

865 870 875 880

Thr Gly Pro Lys Gly Ala Arg Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Ala Thr

885 890 895

Gly Phe Pro Gly Ala Ala Gly Arg Val Gly Pro Pro Gly Ser Asn Gly

900 905 910

Asn Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Lys Asp Gly Pro

915 920 925

Lys Gly Ala Arg Gly Asp Ser Gly Pro Pro Gly Arg Ala Gly Glu Pro

930 935 940

Gly Leu Gln Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly

945 950 955 960

Asp Asp Gly Pro Ser Gly Ala Glu Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Leu

965 970 975

Ala Gly Gln Arg Gly Ile Val Gly Leu Pro Gly Gln Arg Gly Glu Arg

980 985 990

Gly Phe Pro Gly Leu Pro Gly Pro Ser Gly Glu Pro Gly Lys Gln Gly

995 1000 1005

Ala Pro Gly Ala Ser Gly Asp Arg Gly Pro Pro Gly Pro Val Gly

1010 1015 1020

Pro Pro Gly Leu Thr Gly Pro Ala Gly Glu Pro Gly Arg Glu Gly

1025 1030 1035

Ser Pro Gly Ala Asp Gly Pro Pro Gly Arg Asp Gly Ala Ala Gly

1040 1045 1050

Val Lys Gly Asp Arg Gly Glu Thr Gly Ala Val Gly Ala Pro Gly

1055 1060 1065

Ala Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Pro Thr Gly

1070 1075 1080

Lys Gln Gly Asp Arg Gly Glu Ala Gly Ala Gln Gly Pro Met Gly

1085 1090 1095

Pro Ser Gly Pro Ala Gly Ala Arg Gly Ile Gln Gly Pro Gln Gly

1100 1105 1110

Pro Arg Gly Asp Lys Gly Glu Ala Gly Glu Pro Gly Glu Arg Gly

1115 1120 1125

Leu Lys Gly His Arg Gly Phe Thr Gly Leu Gln Gly Leu Pro Gly

1130 1135 1140

Pro Pro Gly Pro Ser Gly Asp Gln Gly Ala Ser Gly Pro Ala Gly

1145 1150 1155

Pro Ser Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly Pro Val Gly Pro Ser Gly

1160 1165 1170

Lys Asp Gly Ala Asn Gly Ile Pro Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly

1175 1180 1185

Pro Arg Gly Arg Ser Gly Glu Thr Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly

1190 1195 1200

Asn Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Gly Ile

1205 1210 1215

Asp Met Ser Ala Phe Ala Gly Leu Gly Pro Arg Glu Lys Gly Pro

1220 1225 1230

Asp Pro Leu Gln Tyr Met Arg Ala Asp Gln Ala Ala Gly Gly Leu

1235 1240 1245

Arg Gln His Asp Ala Glu Val Asp Ala Thr Leu Lys Ser Leu Asn

1250 1255 1260

Asn Gln Ile Glu Ser Ile Arg Ser Pro Glu Gly Ser Arg Lys Asn

1265 1270 1275

Pro Ala Arg Thr Cys Arg Asp Leu Lys Leu Cys His Pro Glu Trp

1280 1285 1290

Lys Ser Gly Asp Tyr Trp Ile Asp Pro Asn Gln Gly Cys Thr Leu

1295 1300 1305

Asp Ala Met Lys Val Phe Cys Asn Met Glu Thr Gly Glu Thr Cys

1310 1315 1320

Val Tyr Pro Asn Pro Ala Asn Val Pro Lys Lys Asn Trp Trp Ser

1325 1330 1335

Ser Lys Ser Lys Glu Lys Lys His Ile Trp Phe Gly Glu Thr Ile

1340 1345 1350

Asn Gly Gly Phe His Phe Ser Tyr Gly Asp Asp Asn Leu Ala Pro

1355 1360 1365

Asn Thr Ala Asn Val Gln Met Thr Phe Leu Arg Leu Leu Ser Thr

1370 1375 1380

Glu Gly Ser Gln Asn Ile Thr Tyr His Cys Lys Asn Ser Ile Ala

1385 1390 1395

Tyr Leu Asp Glu Ala Ala Gly Asn Leu Lys Lys Ala Leu Leu Ile

1400 1405 1410

Gln Gly Ser Asn Asp Val Glu Ile Arg Ala Glu Gly Asn Ser Arg

1415 1420 1425

Phe Thr Tyr Thr Ala Leu Lys Asp Gly Cys Thr Lys His Thr Gly

1430 1435 1440

Lys Trp Gly Lys Thr Val Ile Glu Tyr Arg Ser Gln Lys Thr Ser

1445 1450 1455

Arg Leu Pro Ile Ile Asp Ile Ala Pro Met Asp Ile Gly Gly Pro

1460 1465 1470

Glu Gln Glu Phe Gly Val Asp Ile Gly Pro Val Cys Phe Leu

1475 1480 1485

<210> 64

<211> 1418

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 64

Met Ile Arg Leu Gly Ala Pro Gln Thr Leu Val Leu Leu Thr Leu Leu

1 5 10 15

Val Ala Ala Val Leu Arg Cys Gln Gly Gln Asp Val Arg Gln Pro Gly

20 25 30

Pro Lys Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Asp Ile Lys Asp Ile Val Gly

35 40 45

Pro Lys Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ala Gly Glu Gln Gly Pro

50 55 60

Arg Gly Asp Arg Gly Asp Lys Gly Glu Lys Gly Ala Pro Gly Pro Arg

65 70 75 80

Gly Arg Asp Gly Glu Pro Gly Thr Pro Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly

85 90 95

Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Gly Gly Asn Phe Ala Ala

100 105 110

Gln Met Ala Gly Gly Phe Asp Glu Lys Ala Gly Gly Ala Gln Leu Gly

115 120 125

Val Met Gln Gly Pro Met Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly

130 135 140

Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Phe Gln Gly Asn Pro Gly Glu

145 150 155 160

Pro Gly Glu Pro Gly Val Ser Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Pro Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Gly Lys Pro Gly Asp Asp Gly Glu Ala Gly Lys Pro Gly

180 185 190

Lys Ala Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Ala Arg Gly Phe

195 200 205

Pro Gly Thr Pro Gly Leu Pro Gly Val Lys Gly His Arg Gly Tyr Pro

210 215 220

Gly Leu Asp Gly Ala Lys Gly Glu Ala Gly Ala Pro Gly Val Lys Gly

225 230 235 240

Glu Ser Gly Ser Pro Gly Glu Asn Gly Ser Pro Gly Pro Met Gly Pro

245 250 255

Arg Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Arg Thr Gly Pro Ala Gly Ala Ala

260 265 270

Gly Ala Arg Gly Asn Asp Gly Gln Pro Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly

275 280 285

Pro Val Gly Pro Ala Gly Gly Pro Gly Phe Pro Gly Ala Pro Gly Ala

290 295 300

Lys Gly Glu Ala Gly Pro Thr Gly Ala Arg Gly Pro Glu Gly Ala Gln

305 310 315 320

Gly Pro Arg Gly Glu Pro Gly Thr Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly

325 330 335

Ala Ser Gly Asn Pro Gly Thr Asp Gly Ile Pro Gly Ala Lys Gly Ser

340 345 350

Ala Gly Ala Pro Gly Ile Ala Gly Ala Pro Gly Phe Pro Gly Pro Arg

355 360 365

Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Ala Thr Gly Pro Leu Gly Pro Lys Gly

370 375 380

Gln Thr Gly Glu Pro Gly Ile Ala Gly Phe Lys Gly Glu Gln Gly Pro

385 390 395 400

Lys Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Gln Gly Ala Pro Gly Pro Ala

405 410 415

Gly Glu Glu Gly Lys Arg Gly Ala Arg Gly Glu Pro Gly Gly Val Gly

420 425 430

Pro Ile Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Asn Arg Gly Phe

435 440 445

Pro Gly Gln Asp Gly Leu Ala Gly Pro Lys Gly Ala Pro Gly Glu Arg

450 455 460

Gly Pro Ser Gly Leu Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asn Gly Asp Pro Gly

465 470 475 480

Arg Pro Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Ala Arg Gly Leu Thr Gly Arg

485 490 495

Pro Gly Asp Ala Gly Pro Gln Gly Lys Val Gly Pro Ser Gly Ala Pro

500 505 510

Gly Glu Asp Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Ala Arg Gly

515 520 525

Gln Pro Gly Val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Ala Asn Gly Glu

530 535 540

Pro Gly Lys Ala Gly Glu Lys Gly Leu Pro Gly Ala Pro Gly Leu Arg

545 550 555 560

Gly Leu Pro Gly Lys Asp Gly Glu Thr Gly Ala Ala Gly Pro Pro Gly

565 570 575

Pro Ala Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Glu Gln Gly Ala Pro Gly Pro

580 585 590

Ser Gly Phe Gln Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Gly

595 600 605

Gly Lys Pro Gly Asp Gln Gly Val Pro Gly Glu Ala Gly Ala Pro Gly

610 615 620

Leu Val Gly Pro Arg Gly Glu Arg Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Ser

625 630 635 640

Pro Gly Ala Gln Gly Leu Gln Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Thr Pro

645 650 655

Gly Thr Asp Gly Pro Lys Gly Ala Ser Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly

660 665 670

Ala Gln Gly Pro Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala

675 680 685

Ala Gly Ile Ala Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly Asp Val Gly Glu Lys

690 695 700

Gly Pro Glu Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Gly Arg Gly Leu Thr Gly

705 710 715 720

Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Asn Gly Glu Lys Gly Glu

725 730 735

Val Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ser Ala Gly Ala Arg Gly Ala Pro

740 745 750

Gly Glu Arg Gly Glu Thr Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Phe Ala Gly

755 760 765

Pro Pro Gly Ala Asp Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly Glu Gln Gly Glu

770 775 780

Ala Gly Gln Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ser

785 790 795 800

Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Pro Thr Gly Val Thr Gly Pro Lys Gly

805 810 815

Ala Arg Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Ala Thr Gly Phe Pro Gly Ala

820 825 830

Ala Gly Arg Val Gly Pro Pro Gly Ser Asn Gly Asn Pro Gly Pro Pro

835 840 845

Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Lys Asp Gly Pro Lys Gly Ala Arg Gly

850 855 860

Asp Ser Gly Pro Pro Gly Arg Ala Gly Glu Pro Gly Leu Gln Gly Pro

865 870 875 880

Ala Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Asp Asp Gly Pro Ser

885 890 895

Gly Ala Glu Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Leu Ala Gly Gln Arg Gly

900 905 910

Ile Val Gly Leu Pro Gly Gln Arg Gly Glu Arg Gly Phe Pro Gly Leu

915 920 925

Pro Gly Pro Ser Gly Glu Pro Gly Lys Gln Gly Ala Pro Gly Ala Ser

930 935 940

Gly Asp Arg Gly Pro Pro Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Leu Thr Gly

945 950 955 960

Pro Ala Gly Glu Pro Gly Arg Glu Gly Ser Pro Gly Ala Asp Gly Pro

965 970 975

Pro Gly Arg Asp Gly Ala Ala Gly Val Lys Gly Asp Arg Gly Glu Thr

980 985 990

Gly Ala Val Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly

995 1000 1005

Pro Ala Gly Pro Thr Gly Lys Gln Gly Asp Arg Gly Glu Ala Gly

1010 1015 1020

Ala Gln Gly Pro Met Gly Pro Ser Gly Pro Ala Gly Ala Arg Gly

1025 1030 1035

Ile Gln Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Asp Lys Gly Glu Ala Gly

1040 1045 1050

Glu Pro Gly Glu Arg Gly Leu Lys Gly His Arg Gly Phe Thr Gly

1055 1060 1065

Leu Gln Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Asp Gln Gly

1070 1075 1080

Ala Ser Gly Pro Ala Gly Pro Ser Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly

1085 1090 1095

Pro Val Gly Pro Ser Gly Lys Asp Gly Ala Asn Gly Ile Pro Gly

1100 1105 1110

Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Arg Ser Gly Glu Thr Gly

1115 1120 1125

Pro Ala Gly Pro Pro Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly

1130 1135 1140

Pro Pro Gly Pro Gly Ile Asp Met Ser Ala Phe Ala Gly Leu Gly

1145 1150 1155

Pro Arg Glu Lys Gly Pro Asp Pro Leu Gln Tyr Met Arg Ala Asp

1160 1165 1170

Gln Ala Ala Gly Gly Leu Arg Gln His Asp Ala Glu Val Asp Ala

1175 1180 1185

Thr Leu Lys Ser Leu Asn Asn Gln Ile Glu Ser Ile Arg Ser Pro

1190 1195 1200

Glu Gly Ser Arg Lys Asn Pro Ala Arg Thr Cys Arg Asp Leu Lys

1205 1210 1215

Leu Cys His Pro Glu Trp Lys Ser Gly Asp Tyr Trp Ile Asp Pro

1220 1225 1230

Asn Gln Gly Cys Thr Leu Asp Ala Met Lys Val Phe Cys Asn Met

1235 1240 1245

Glu Thr Gly Glu Thr Cys Val Tyr Pro Asn Pro Ala Asn Val Pro

1250 1255 1260

Lys Lys Asn Trp Trp Ser Ser Lys Ser Lys Glu Lys Lys His Ile

1265 1270 1275

Trp Phe Gly Glu Thr Ile Asn Gly Gly Phe His Phe Ser Tyr Gly

1280 1285 1290

Asp Asp Asn Leu Ala Pro Asn Thr Ala Asn Val Gln Met Thr Phe

1295 1300 1305

Leu Arg Leu Leu Ser Thr Glu Gly Ser Gln Asn Ile Thr Tyr His

1310 1315 1320

Cys Lys Asn Ser Ile Ala Tyr Leu Asp Glu Ala Ala Gly Asn Leu

1325 1330 1335

Lys Lys Ala Leu Leu Ile Gln Gly Ser Asn Asp Val Glu Ile Arg

1340 1345 1350

Ala Glu Gly Asn Ser Arg Phe Thr Tyr Thr Ala Leu Lys Asp Gly

1355 1360 1365

Cys Thr Lys His Thr Gly Lys Trp Gly Lys Thr Val Ile Glu Tyr

1370 1375 1380

Arg Ser Gln Lys Thr Ser Arg Leu Pro Ile Ile Asp Ile Ala Pro

1385 1390 1395

Met Asp Ile Gly Gly Pro Glu Gln Glu Phe Gly Val Asp Ile Gly

1400 1405 1410

Pro Val Cys Phe Leu

1415

<210> 65

<211> 1466

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 65

Met Met Ser Phe Val Gln Lys Gly Ser Trp Leu Leu Leu Ala Leu Leu

1 5 10 15

His Pro Thr Ile Ile Leu Ala Gln Gln Glu Ala Val Glu Gly Gly Cys

20 25 30

Ser His Leu Gly Gln Ser Tyr Ala Asp Arg Asp Val Trp Lys Pro Glu

35 40 45

Pro Cys Gln Ile Cys Val Cys Asp Ser Gly Ser Val Leu Cys Asp Asp

50 55 60

Ile Ile Cys Asp Asp Gln Glu Leu Asp Cys Pro Asn Pro Glu Ile Pro

65 70 75 80

Phe Gly Glu Cys Cys Ala Val Cys Pro Gln Pro Pro Thr Ala Pro Thr

85 90 95

Arg Pro Pro Asn Gly Gln Gly Pro Gln Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly

100 105 110

Pro Pro Gly Ile Pro Gly Arg Asn Gly Asp Pro Gly Ile Pro Gly Gln

115 120 125

Pro Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Ile Cys Glu Ser Cys

130 135 140

Pro Thr Gly Pro Gln Asn Tyr Ser Pro Gln Tyr Asp Ser Tyr Asp Val

145 150 155 160

Lys Ser Gly Val Ala Val Gly Gly Leu Ala Gly Tyr Pro Gly Pro Ala

165 170 175

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Thr Ser Gly His Pro Gly

180 185 190

Ser Pro Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Gln

195 200 205

Ala Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Ile Gly Pro Ser

210 215 220

Gly Pro Ala Gly Lys Asp Gly Glu Ser Gly Arg Pro Gly Arg Pro Gly

225 230 235 240

Glu Arg Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Ile Lys Gly Pro Ala Gly Ile

245 250 255

Pro Gly Phe Pro Gly Met Lys Gly His Arg Gly Phe Asp Gly Arg Asn

260 265 270

Gly Glu Lys Gly Glu Thr Gly Ala Pro Gly Leu Lys Gly Glu Asn Gly

275 280 285

Leu Pro Gly Glu Asn Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Ala

290 295 300

Pro Gly Glu Arg Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala Gly Ala Arg

305 310 315 320

Gly Asn Asp Gly Ala Arg Gly Ser Asp Gly Gln Pro Gly Pro Pro Gly

325 330 335

Pro Pro Gly Thr Ala Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Ala Lys Gly Glu

340 345 350

Val Gly Pro Ala Gly Ser Pro Gly Ser Asn Gly Ala Pro Gly Gln Arg

355 360 365

Gly Glu Pro Gly Pro Gln Gly His Ala Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly

370 375 380

Pro Pro Gly Ile Asn Gly Ser Pro Gly Gly Lys Gly Glu Met Gly Pro

385 390 395 400

Ala Gly Ile Pro Gly Ala Pro Gly Leu Met Gly Ala Arg Gly Pro Pro

405 410 415

Gly Pro Ala Gly Ala Asn Gly Ala Pro Gly Leu Arg Gly Gly Ala Gly

420 425 430

Glu Pro Gly Lys Asn Gly Ala Lys Gly Glu Pro Gly Pro Arg Gly Glu

435 440 445

Arg Gly Glu Ala Gly Ile Pro Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Glu Asp

450 455 460

Gly Lys Asp Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gly Ala Asn Gly Leu Pro Gly

465 470 475 480

Ala Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly Pro

485 490 495

Asn Gly Ile Pro Gly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro

500 505 510

Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Ala Ala Gly Glu Pro Gly Arg Asp Gly

515 520 525

Val Pro Gly Gly Pro Gly Met Arg Gly Met Pro Gly Ser Pro Gly Gly

530 535 540

Pro Gly Ser Asp Gly Lys Pro Gly Pro Pro Gly Ser Gln Gly Glu Ser

545 550 555 560

Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Pro Arg Gly Gln Pro Gly

565 570 575

Val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Asn Asp Gly Ala Pro Gly Lys

580 585 590

Asn Gly Glu Arg Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro

595 600 605

Gly Lys Asn Gly Glu Thr Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly

610 615 620

Pro Gly Gly Asp Lys Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Leu

625 630 635 640

Gln Gly Leu Pro Gly Thr Gly Gly Pro Pro Gly Glu Asn Gly Lys Pro

645 650 655

Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly

660 665 670

Gly Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Leu

675 680 685

Ala Gly Ala Pro Gly Leu Arg Gly Gly Ala Gly Pro Pro Gly Pro Glu

690 695 700

Gly Gly Lys Gly Ala Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Ala Gly

705 710 715 720

Thr Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Gly Leu Gly Ser

725 730 735

Pro Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Glu Pro Gly Gly Pro Gly Ala Asp

740 745 750

Gly Val Pro Gly Lys Asp Gly Pro Arg Gly Pro Thr Gly Pro Ile Gly

755 760 765

Pro Pro Gly Pro Ala Gly Gln Pro Gly Asp Lys Gly Glu Gly Gly Ala

770 775 780

Pro Gly Leu Pro Gly Ile Ala Gly Pro Arg Gly Ser Pro Gly Glu Arg

785 790 795 800

Gly Glu Thr Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Phe Pro Gly Ala Pro Gly

805 810 815

Gln Asn Gly Glu Pro Gly Gly Lys Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Glu

820 825 830

Lys Gly Glu Gly Gly Pro Pro Gly Val Ala Gly Pro Pro Gly Gly Ser

835 840 845

Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Val Lys Gly Glu Arg Gly

850 855 860

Ser Pro Gly Gly Pro Gly Ala Ala Gly Phe Pro Gly Ala Arg Gly Leu

865 870 875 880

Pro Gly Pro Pro Gly Ser Asn Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser

885 890 895

Gly Ser Pro Gly Lys Asp Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Asn Thr Gly

900 905 910

Ala Pro Gly Ser Pro Gly Val Ser Gly Pro Lys Gly Asp Ala Gly Gln

915 920 925

Pro Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Ala Pro

930 935 940

Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Ile Thr Gly Ala Arg Gly Leu Ala Gly

945 950 955 960

Pro Pro Gly Met Pro Gly Pro Arg Gly Ser Pro Gly Pro Gln Gly Val

965 970 975

Lys Gly Glu Ser Gly Lys Pro Gly Ala Asn Gly Leu Ser Gly Glu Arg

980 985 990

Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Leu Ala Gly Thr Ala Gly

995 1000 1005

Glu Pro Gly Arg Asp Gly Asn Pro Gly Ser Asp Gly Leu Pro Gly

1010 1015 1020

Arg Asp Gly Ser Pro Gly Gly Lys Gly Asp Arg Gly Glu Asn Gly

1025 1030 1035

Ser Pro Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly His Pro Gly Pro Pro Gly

1040 1045 1050

Pro Val Gly Pro Ala Gly Lys Ser Gly Asp Arg Gly Glu Ser Gly

1055 1060 1065

Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly Ser Arg Gly

1070 1075 1080

Ala Pro Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Asp Lys Gly Glu Thr Gly

1085 1090 1095

Glu Arg Gly Ala Ala Gly Ile Lys Gly His Arg Gly Phe Pro Gly

1100 1105 1110

Asn Pro Gly Ala Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Gln Gln Gly

1115 1120 1125

Ala Ile Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Pro Val Gly

1130 1135 1140

Pro Ser Gly Pro Pro Gly Lys Asp Gly Thr Ser Gly His Pro Gly

1145 1150 1155

Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Asn Arg Gly Glu Arg Gly

1160 1165 1170

Ser Glu Gly Ser Pro Gly His Pro Gly Gln Pro Gly Pro Pro Gly

1175 1180 1185

Pro Pro Gly Ala Pro Gly Pro Cys Cys Gly Gly Val Gly Ala Ala

1190 1195 1200

Ala Ile Ala Gly Ile Gly Gly Glu Lys Ala Gly Gly Phe Ala Pro

1205 1210 1215

Tyr Tyr Gly Asp Glu Pro Met Asp Phe Lys Ile Asn Thr Asp Glu

1220 1225 1230

Ile Met Thr Ser Leu Lys Ser Val Asn Gly Gln Ile Glu Ser Leu

1235 1240 1245

Ile Ser Pro Asp Gly Ser Arg Lys Asn Pro Ala Arg Asn Cys Arg

1250 1255 1260

Asp Leu Lys Phe Cys His Pro Glu Leu Lys Ser Gly Glu Tyr Trp

1265 1270 1275

Val Asp Pro Asn Gln Gly Cys Lys Leu Asp Ala Ile Lys Val Phe

1280 1285 1290

Cys Asn Met Glu Thr Gly Glu Thr Cys Ile Ser Ala Asn Pro Leu

1295 1300 1305

Asn Val Pro Arg Lys His Trp Trp Thr Asp Ser Ser Ala Glu Lys

1310 1315 1320

Lys His Val Trp Phe Gly Glu Ser Met Asp Gly Gly Phe Gln Phe

1325 1330 1335

Ser Tyr Gly Asn Pro Glu Leu Pro Glu Asp Val Leu Asp Val Gln

1340 1345 1350

Leu Ala Phe Leu Arg Leu Leu Ser Ser Arg Ala Ser Gln Asn Ile

1355 1360 1365

Thr Tyr His Cys Lys Asn Ser Ile Ala Tyr Met Asp Gln Ala Ser

1370 1375 1380

Gly Asn Val Lys Lys Ala Leu Lys Leu Met Gly Ser Asn Glu Gly

1385 1390 1395

Glu Phe Lys Ala Glu Gly Asn Ser Lys Phe Thr Tyr Thr Val Leu

1400 1405 1410

Glu Asp Gly Cys Thr Lys His Thr Gly Glu Trp Ser Lys Thr Val

1415 1420 1425

Phe Glu Tyr Arg Thr Arg Lys Ala Val Arg Leu Pro Ile Val Asp

1430 1435 1440

Ile Ala Pro Tyr Asp Ile Gly Gly Pro Asp Gln Glu Phe Gly Val

1445 1450 1455

Asp Val Gly Pro Val Cys Phe Leu

1460 1465

<210> 66

<211> 1669

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 66

Met Gly Pro Arg Leu Ser Val Trp Leu Leu Leu Leu Pro Ala Ala Leu

1 5 10 15

Leu Leu His Glu Glu His Ser Arg Ala Ala Ala Lys Gly Gly Cys Ala

20 25 30

Gly Ser Gly Cys Gly Lys Cys Asp Cys His Gly Val Lys Gly Gln Lys

35 40 45

Gly Glu Arg Gly Leu Pro Gly Leu Gln Gly Val Ile Gly Phe Pro Gly

50 55 60

Met Gln Gly Pro Glu Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Gln Lys Gly Asp

65 70 75 80

Thr Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Thr Lys Gly Thr Arg Gly Pro Pro

85 90 95

Gly Ala Ser Gly Tyr Pro Gly Asn Pro Gly Leu Pro Gly Ile Pro Gly

100 105 110

Gln Asp Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ile Pro Gly Cys Asn Gly Thr

115 120 125

Lys Gly Glu Arg Gly Pro Leu Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Phe Ala

130 135 140

Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Met Lys Gly Asp Pro Gly

145 150 155 160

Glu Ile Leu Gly His Val Pro Gly Met Leu Leu Lys Gly Glu Arg Gly

165 170 175

Phe Pro Gly Ile Pro Gly Thr Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Leu

180 185 190

Gln Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Phe Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro

195 200 205

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Gln Met Gly Leu Ser Phe

210 215 220

Gln Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Asp Gln Gly Val Ser Gly Pro Pro

225 230 235 240

Gly Val Pro Gly Gln Ala Gln Val Gln Glu Lys Gly Asp Phe Ala Thr

245 250 255

Lys Gly Glu Lys Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Phe Gln Gly Met Pro

260 265 270

Gly Val Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Lys Pro Gly Pro Arg Gly Lys

275 280 285

Pro Gly Lys Asp Gly Asp Lys Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Phe Pro

290 295 300

Gly Glu Pro Gly Tyr Pro Gly Leu Ile Gly Arg Gln Gly Pro Gln Gly

305 310 315 320

Glu Lys Gly Glu Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ile Val Ile Gly

325 330 335

Thr Gly Pro Leu Gly Glu Lys Gly Glu Arg Gly Tyr Pro Gly Thr Pro

340 345 350

Gly Pro Arg Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Phe Pro Gly Leu Pro Gly

355 360 365

Gln Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Val Pro Gly Gln Ala Gly Ala Pro

370 375 380

Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Glu Lys Gly Asp Arg Gly Phe Pro Gly

385 390 395 400

Thr Ser Leu Pro Gly Pro Ser Gly Arg Asp Gly Leu Pro Gly Pro Pro

405 410 415

Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Gln Pro Gly Tyr Thr Asn Gly Ile Val

420 425 430

Glu Cys Gln Pro Gly Pro Pro Gly Asp Gln Gly Pro Pro Gly Ile Pro

435 440 445

Gly Gln Pro Gly Phe Ile Gly Glu Ile Gly Glu Lys Gly Gln Lys Gly

450 455 460

Glu Ser Cys Leu Ile Cys Asp Ile Asp Gly Tyr Arg Gly Pro Pro Gly

465 470 475 480

Pro Gln Gly Pro Pro Gly Glu Ile Gly Phe Pro Gly Gln Pro Gly Ala

485 490 495

Lys Gly Asp Arg Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Val Ala Gly Val Pro

500 505 510

Gly Pro Gln Gly Thr Pro Gly Leu Ile Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly

515 520 525

Glu Pro Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys Gly

530 535 540

Asp Pro Gly Phe Pro Gly Gln Pro Gly Met Thr Gly Arg Ala Gly Ser

545 550 555 560

Pro Gly Arg Asp Gly His Pro Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Ser Pro

565 570 575

Gly Ser Val Gly Leu Lys Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Gly Val Gly

580 585 590

Phe Pro Gly Ser Arg Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Tyr

595 600 605

Gly Pro Ala Gly Pro Ile Gly Asp Lys Gly Gln Ala Gly Phe Pro Gly

610 615 620

Gly Pro Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Pro Gly Lys

625 630 635 640

Ile Val Pro Leu Pro Gly Pro Pro Gly Ala Glu Gly Leu Pro Gly Ser

645 650 655

Pro Gly Phe Pro Gly Pro Gln Gly Asp Arg Gly Phe Pro Gly Thr Pro

660 665 670

Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Ala Val Gly Gln Pro Gly

675 680 685

Ile Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Pro Lys Gly Val Asp Gly Leu Pro

690 695 700

Gly Asp Met Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Arg Pro Gly Phe Asn Gly

705 710 715 720

Leu Pro Gly Asn Pro Gly Val Gln Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Val

725 730 735

Gly Leu Pro Gly Leu Lys Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Ile Pro Gly

740 745 750

Thr Pro Gly Glu Lys Gly Ser Ile Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Glu

755 760 765

His Gly Ala Ile Gly Pro Pro Gly Leu Gln Gly Ile Arg Gly Glu Pro

770 775 780

Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ser Val Gly Ser Pro Gly Val Pro Gly

785 790 795 800

Ile Gly Pro Pro Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Gly Gln Gly Pro Pro

805 810 815

Gly Leu Ser Gly Pro Pro Gly Ile Lys Gly Glu Lys Gly Phe Pro Gly

820 825 830

Phe Pro Gly Leu Asp Met Pro Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Ala Gln

835 840 845

Gly Leu Pro Gly Ile Thr Gly Gln Ser Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly

850 855 860

Gln Gln Gly Ala Pro Gly Ile Pro Gly Phe Pro Gly Ser Lys Gly Glu

865 870 875 880

Met Gly Val Met Gly Thr Pro Gly Gln Pro Gly Ser Pro Gly Pro Val

885 890 895

Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Asp His Gly Phe Pro Gly

900 905 910

Ser Ser Gly Pro Arg Gly Asp Pro Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly Asp

915 920 925

Val Gly Leu Pro Gly Lys Pro Gly Ser Met Asp Lys Val Asp Met Gly

930 935 940

Ser Met Lys Gly Gln Lys Gly Asp Gln Gly Glu Lys Gly Gln Ile Gly

945 950 955 960

Pro Ile Gly Glu Lys Gly Ser Arg Gly Asp Pro Gly Thr Pro Gly Val

965 970 975

Pro Gly Lys Asp Gly Gln Ala Gly Gln Pro Gly Gln Pro Gly Pro Lys

980 985 990

Gly Asp Pro Gly Ile Ser Gly Thr Pro Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly

995 1000 1005

Pro Lys Gly Ser Val Gly Gly Met Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly

1010 1015 1020

Glu Lys Gly Val Pro Gly Ile Pro Gly Pro Gln Gly Ser Pro Gly

1025 1030 1035

Leu Pro Gly Asp Lys Gly Ala Lys Gly Glu Lys Gly Gln Ala Gly

1040 1045 1050

Pro Pro Gly Ile Gly Ile Pro Gly Leu Arg Gly Glu Lys Gly Asp

1055 1060 1065

Gln Gly Ile Ala Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Glu Lys Gly Glu

1070 1075 1080

Lys Gly Ser Ile Gly Ile Pro Gly Met Pro Gly Ser Pro Gly Leu

1085 1090 1095

Lys Gly Ser Pro Gly Ser Val Gly Tyr Pro Gly Ser Pro Gly Leu

1100 1105 1110

Pro Gly Glu Lys Gly Asp Lys Gly Leu Pro Gly Leu Asp Gly Ile

1115 1120 1125

Pro Gly Val Lys Gly Glu Ala Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly Pro

1130 1135 1140

Thr Gly Pro Ala Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Ser Asp Gly Ile

1145 1150 1155

Pro Gly Ser Ala Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Arg

1160 1165 1170

Gly Phe Pro Gly Phe Pro Gly Ala Lys Gly Asp Lys Gly Ser Lys

1175 1180 1185

Gly Glu Val Gly Phe Pro Gly Leu Ala Gly Ser Pro Gly Ile Pro

1190 1195 1200

Gly Ser Lys Gly Glu Gln Gly Phe Met Gly Pro Pro Gly Pro Gln

1205 1210 1215

Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly His Ala Thr Glu Gly

1220 1225 1230

Pro Lys Gly Asp Arg Gly Pro Gln Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly

1235 1240 1245

Leu Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ile Asp Gly

1250 1255 1260

Val Lys Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro Gly

1265 1270 1275

Val Pro Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Phe Gln Gly Met Pro Gly

1280 1285 1290

Ile Gly Gly Ser Pro Gly Ile Thr Gly Ser Lys Gly Asp Met Gly

1295 1300 1305

Pro Pro Gly Val Pro Gly Phe Gln Gly Pro Lys Gly Leu Pro Gly

1310 1315 1320

Leu Gln Gly Ile Lys Gly Asp Gln Gly Asp Gln Gly Val Pro Gly

1325 1330 1335

Ala Lys Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Tyr Asp

1340 1345 1350

Ile Ile Lys Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Pro Glu Gly Pro Pro

1355 1360 1365

Gly Leu Lys Gly Leu Gln Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Gln Gln

1370 1375 1380

Gly Val Thr Gly Leu Val Gly Ile Pro Gly Pro Pro Gly Ile Pro

1385 1390 1395

Gly Phe Asp Gly Ala Pro Gly Gln Lys Gly Glu Met Gly Pro Ala

1400 1405 1410

Gly Pro Thr Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Pro Asp

1415 1420 1425

Gly Leu Pro Gly Ser Met Gly Pro Pro Gly Thr Pro Ser Val Asp

1430 1435 1440

His Gly Phe Leu Val Thr Arg His Ser Gln Thr Ile Asp Asp Pro

1445 1450 1455

Gln Cys Pro Ser Gly Thr Lys Ile Leu Tyr His Gly Tyr Ser Leu

1460 1465 1470

Leu Tyr Val Gln Gly Asn Glu Arg Ala His Gly Gln Asp Leu Gly

1475 1480 1485

Thr Ala Gly Ser Cys Leu Arg Lys Phe Ser Thr Met Pro Phe Leu

1490 1495 1500

Phe Cys Asn Ile Asn Asn Val Cys Asn Phe Ala Ser Arg Asn Asp

1505 1510 1515

Tyr Ser Tyr Trp Leu Ser Thr Pro Glu Pro Met Pro Met Ser Met

1520 1525 1530

Ala Pro Ile Thr Gly Glu Asn Ile Arg Pro Phe Ile Ser Arg Cys

1535 1540 1545

Ala Val Cys Glu Ala Pro Ala Met Val Met Ala Val His Ser Gln

1550 1555 1560

Thr Ile Gln Ile Pro Pro Cys Pro Ser Gly Trp Ser Ser Leu Trp

1565 1570 1575

Ile Gly Tyr Ser Phe Val Met His Thr Ser Ala Gly Ala Glu Gly

1580 1585 1590

Ser Gly Gln Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Cys Leu Glu Glu Phe

1595 1600 1605

Arg Ser Ala Pro Phe Ile Glu Cys His Gly Arg Gly Thr Cys Asn

1610 1615 1620

Tyr Tyr Ala Asn Ala Tyr Ser Phe Trp Leu Ala Thr Ile Glu Arg

1625 1630 1635

Ser Glu Met Phe Lys Lys Pro Thr Pro Ser Thr Leu Lys Ala Gly

1640 1645 1650

Glu Leu Arg Thr His Val Ser Arg Cys Gln Val Cys Met Arg Arg

1655 1660 1665

Thr

<210> 67

<211> 1712

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 67

Met Gly Arg Asp Gln Arg Ala Val Ala Gly Pro Ala Leu Arg Arg Trp

1 5 10 15

Leu Leu Leu Gly Thr Val Thr Val Gly Phe Leu Ala Gln Ser Val Leu

20 25 30

Ala Gly Val Lys Lys Phe Asp Val Pro Cys Gly Gly Arg Asp Cys Ser

35 40 45

Gly Gly Cys Gln Cys Tyr Pro Glu Lys Gly Gly Arg Gly Gln Pro Gly

50 55 60

Pro Val Gly Pro Gln Gly Tyr Asn Gly Pro Pro Gly Leu Gln Gly Phe

65 70 75 80

Pro Gly Leu Gln Gly Arg Lys Gly Asp Lys Gly Glu Arg Gly Ala Pro

85 90 95

Gly Val Thr Gly Pro Lys Gly Asp Val Gly Ala Arg Gly Val Ser Gly

100 105 110

Phe Pro Gly Ala Asp Gly Ile Pro Gly His Pro Gly Gln Gly Gly Pro

115 120 125

Arg Gly Arg Pro Gly Tyr Asp Gly Cys Asn Gly Thr Gln Gly Asp Ser

130 135 140

Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Ser Glu Gly Phe Thr Gly Pro Pro Gly

145 150 155 160

Pro Gln Gly Pro Lys Gly Gln Lys Gly Glu Pro Tyr Ala Leu Pro Lys

165 170 175

Glu Glu Arg Asp Arg Tyr Arg Gly Glu Pro Gly Glu Pro Gly Leu Val

180 185 190

Gly Phe Gln Gly Pro Pro Gly Arg Pro Gly His Val Gly Gln Met Gly

195 200 205

Pro Val Gly Ala Pro Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro

210 215 220

Lys Gly Gln Gln Gly Asn Arg Gly Leu Gly Phe Tyr Gly Val Lys Gly

225 230 235 240

Glu Lys Gly Asp Val Gly Gln Pro Gly Pro Asn Gly Ile Pro Ser Asp

245 250 255

Thr Leu His Pro Ile Ile Ala Pro Thr Gly Val Thr Phe His Pro Asp

260 265 270

Gln Tyr Lys Gly Glu Lys Gly Ser Glu Gly Glu Pro Gly Ile Arg Gly

275 280 285

Ile Ser Leu Lys Gly Glu Glu Gly Ile Met Gly Phe Pro Gly Leu Arg

290 295 300

Gly Tyr Pro Gly Leu Ser Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gln Lys Gly

305 310 315 320

Ser Arg Gly Leu Asp Gly Tyr Gln Gly Pro Asp Gly Pro Arg Gly Pro

325 330 335

Lys Gly Glu Ala Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Ala Tyr Ser

340 345 350

Pro His Pro Ser Leu Ala Lys Gly Ala Arg Gly Asp Pro Gly Phe Pro

355 360 365

Gly Ala Gln Gly Glu Pro Gly Ser Gln Gly Glu Pro Gly Asp Pro Gly

370 375 380

Leu Pro Gly Pro Pro Gly Leu Ser Ile Gly Asp Gly Asp Gln Arg Arg

385 390 395 400

Gly Leu Pro Gly Glu Met Gly Pro Lys Gly Phe Ile Gly Asp Pro Gly

405 410 415

Ile Pro Ala Leu Tyr Gly Gly Pro Pro Gly Pro Asp Gly Lys Arg Gly

420 425 430

Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Asp Gly Phe

435 440 445

Leu Phe Gly Leu Lys Gly Ala Lys Gly Arg Ala Gly Phe Pro Gly Leu

450 455 460

Pro Gly Ser Pro Gly Ala Arg Gly Pro Lys Gly Trp Lys Gly Asp Ala

465 470 475 480

Gly Glu Cys Arg Cys Thr Glu Gly Asp Glu Ala Ile Lys Gly Leu Pro

485 490 495

Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Phe Ala Gly Ile Asn Gly Glu Pro Gly

500 505 510

Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Pro Gly Gln His Gly Leu Pro Gly Phe

515 520 525

Pro Gly Leu Lys Gly Val Pro Gly Asn Ile Gly Ala Pro Gly Pro Lys

530 535 540

Gly Ala Lys Gly Asp Ser Arg Thr Ile Thr Thr Lys Gly Glu Arg Gly

545 550 555 560

Gln Pro Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Met Lys Gly Asp Asp Gly Ser

565 570 575

Pro Gly Arg Asp Gly Leu Asp Gly Phe Pro Gly Leu Pro Gly Pro Pro

580 585 590

Gly Asp Gly Ile Lys Gly Pro Pro Gly Asp Pro Gly Tyr Pro Gly Ile

595 600 605

Pro Gly Thr Lys Gly Thr Pro Gly Glu Met Gly Pro Pro Gly Leu Gly

610 615 620

Leu Pro Gly Leu Lys Gly Gln Arg Gly Phe Pro Gly Asp Ala Gly Leu

625 630 635 640

Pro Gly Pro Pro Gly Phe Leu Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Thr Pro

645 650 655

Gly Gln Ile Asp Cys Asp Thr Asp Val Lys Arg Ala Val Gly Gly Asp

660 665 670

Arg Gln Glu Ala Ile Gln Pro Gly Cys Ile Gly Gly Pro Lys Gly Leu

675 680 685

Pro Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly Ala Lys Gly Leu Arg

690 695 700

Gly Ile Pro Gly Phe Ala Gly Ala Asp Gly Gly Pro Gly Pro Arg Gly

705 710 715 720

Leu Pro Gly Asp Ala Gly Arg Glu Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Phe

725 730 735

Ile Gly Pro Arg Gly Ser Lys Gly Ala Val Gly Leu Pro Gly Pro Asp

740 745 750

Gly Ser Pro Gly Pro Ile Gly Leu Pro Gly Pro Asp Gly Pro Pro Gly

755 760 765

Glu Arg Gly Leu Pro Gly Glu Val Leu Gly Ala Gln Pro Gly Pro Arg

770 775 780

Gly Asp Ala Gly Val Pro Gly Gln Pro Gly Leu Lys Gly Leu Pro Gly

785 790 795 800

Asp Arg Gly Pro Pro Gly Phe Arg Gly Ser Gln Gly Met Pro Gly Met

805 810 815

Pro Gly Leu Lys Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly Pro Ser Gly Gln Pro

820 825 830

Gly Leu Tyr Gly Pro Pro Gly Leu His Gly Phe Pro Gly Ala Pro Gly

835 840 845

Gln Glu Gly Pro Leu Gly Leu Pro Gly Ile Pro Gly Arg Glu Gly Leu

850 855 860

Pro Gly Asp Arg Gly Asp Pro Gly Asp Thr Gly Ala Pro Gly Pro Val

865 870 875 880

Gly Met Lys Gly Leu Ser Gly Asp Arg Gly Asp Ala Gly Phe Thr Gly

885 890 895

Glu Gln Gly His Pro Gly Ser Pro Gly Phe Lys Gly Ile Asp Gly Met

900 905 910

Pro Gly Thr Pro Gly Leu Lys Gly Asp Arg Gly Ser Pro Gly Met Asp

915 920 925

Gly Phe Gln Gly Met Pro Gly Leu Lys Gly Arg Pro Gly Phe Pro Gly

930 935 940

Ser Lys Gly Glu Ala Gly Phe Phe Gly Ile Pro Gly Leu Lys Gly Leu

945 950 955 960

Ala Gly Glu Pro Gly Phe Lys Gly Ser Arg Gly Asp Pro Gly Pro Pro

965 970 975

Gly Pro Pro Pro Val Ile Leu Pro Gly Met Lys Asp Ile Lys Gly Glu

980 985 990

Lys Gly Asp Glu Gly Pro Met Gly Leu Lys Gly Tyr Leu Gly Ala Lys

995 1000 1005

Gly Ile Gln Gly Met Pro Gly Ile Pro Gly Leu Ser Gly Ile Pro

1010 1015 1020

Gly Leu Pro Gly Arg Pro Gly His Ile Lys Gly Val Lys Gly Asp

1025 1030 1035

Ile Gly Val Pro Gly Ile Pro Gly Leu Pro Gly Phe Pro Gly Val

1040 1045 1050

Ala Gly Pro Pro Gly Ile Thr Gly Phe Pro Gly Phe Ile Gly Ser

1055 1060 1065

Arg Gly Asp Lys Gly Ala Pro Gly Arg Ala Gly Leu Tyr Gly Glu

1070 1075 1080

Ile Gly Ala Thr Gly Asp Phe Gly Asp Ile Gly Asp Thr Ile Asn

1085 1090 1095

Leu Pro Gly Arg Pro Gly Leu Lys Gly Glu Arg Gly Thr Thr Gly

1100 1105 1110

Ile Pro Gly Leu Lys Gly Phe Phe Gly Glu Lys Gly Thr Glu Gly

1115 1120 1125

Asp Ile Gly Phe Pro Gly Ile Thr Gly Val Thr Gly Val Gln Gly

1130 1135 1140

Pro Pro Gly Leu Lys Gly Gln Thr Gly Phe Pro Gly Leu Thr Gly

1145 1150 1155

Pro Pro Gly Ser Gln Gly Glu Leu Gly Arg Ile Gly Leu Pro Gly

1160 1165 1170

Gly Lys Gly Asp Asp Gly Trp Pro Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly

1175 1180 1185

Phe Pro Gly Leu Arg Gly Ile Arg Gly Leu His Gly Leu Pro Gly

1190 1195 1200

Thr Lys Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Ser Asp Ile His Gly Asp

1205 1210 1215

Pro Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Asp Pro Gly Glu

1220 1225 1230

Ala Asn Thr Leu Pro Gly Pro Val Gly Val Pro Gly Gln Lys Gly

1235 1240 1245

Asp Gln Gly Ala Pro Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly

1250 1255 1260

Leu Gln Gly Phe Pro Gly Ile Thr Pro Pro Ser Asn Ile Ser Gly

1265 1270 1275

Ala Pro Gly Asp Lys Gly Ala Pro Gly Ile Phe Gly Leu Lys Gly

1280 1285 1290

Tyr Arg Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser Ala Ala Leu Pro Gly

1295 1300 1305

Ser Lys Gly Asp Thr Gly Asn Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly

1310 1315 1320

Thr Lys Gly Trp Ala Gly Asp Ser Gly Pro Gln Gly Arg Pro Gly

1325 1330 1335

Val Phe Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Pro Arg Gly Glu Gln Gly

1340 1345 1350

Phe Met Gly Asn Thr Gly Pro Thr Gly Ala Val Gly Asp Arg Gly

1355 1360 1365

Pro Lys Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Phe Pro Gly Ala Pro Gly

1370 1375 1380

Thr Val Gly Ala Pro Gly Ile Ala Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ala

1385 1390 1395

Val Gln Pro Gly Thr Val Gly Pro Gln Gly Arg Arg Gly Pro Pro

1400 1405 1410

Gly Ala Pro Gly Glu Met Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Glu Pro

1415 1420 1425

Gly Phe Arg Gly Ala Pro Gly Lys Ala Gly Pro Gln Gly Arg Gly

1430 1435 1440

Gly Val Ser Ala Val Pro Gly Phe Arg Gly Asp Glu Gly Pro Ile

1445 1450 1455

Gly His Gln Gly Pro Ile Gly Gln Glu Gly Ala Pro Gly Arg Pro

1460 1465 1470

Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Met Pro Gly Arg Ser Val Ser Ile

1475 1480 1485

Gly Tyr Leu Leu Val Lys His Ser Gln Thr Asp Gln Glu Pro Met

1490 1495 1500

Cys Pro Val Gly Met Asn Lys Leu Trp Ser Gly Tyr Ser Leu Leu

1505 1510 1515

Tyr Phe Glu Gly Gln Glu Lys Ala His Asn Gln Asp Leu Gly Leu

1520 1525 1530

Ala Gly Ser Cys Leu Ala Arg Phe Ser Thr Met Pro Phe Leu Tyr

1535 1540 1545

Cys Asn Pro Gly Asp Val Cys Tyr Tyr Ala Ser Arg Asn Asp Lys

1550 1555 1560

Ser Tyr Trp Leu Ser Thr Thr Ala Pro Leu Pro Met Met Pro Val

1565 1570 1575

Ala Glu Asp Glu Ile Lys Pro Tyr Ile Ser Arg Cys Ser Val Cys

1580 1585 1590

Glu Ala Pro Ala Ile Ala Ile Ala Val His Ser Gln Asp Val Ser

1595 1600 1605

Ile Pro His Cys Pro Ala Gly Trp Arg Ser Leu Trp Ile Gly Tyr

1610 1615 1620

Ser Phe Leu Met His Thr Ala Ala Gly Asp Glu Gly Gly Gly Gln

1625 1630 1635

Ser Leu Val Ser Pro Gly Ser Cys Leu Glu Asp Phe Arg Ala Thr

1640 1645 1650

Pro Phe Ile Glu Cys Asn Gly Gly Arg Gly Thr Cys His Tyr Tyr

1655 1660 1665

Ala Asn Lys Tyr Ser Phe Trp Leu Thr Thr Ile Pro Glu Gln Ser

1670 1675 1680

Phe Gln Gly Ser Pro Ser Ala Asp Thr Leu Lys Ala Gly Leu Ile

1685 1690 1695

Arg Thr His Ile Ser Arg Cys Gln Val Cys Met Lys Asn Leu

1700 1705 1710

<210> 68

<211> 1670

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 68

Met Ser Ala Arg Thr Ala Pro Arg Pro Gln Val Leu Leu Leu Pro Leu

1 5 10 15

Leu Leu Val Leu Leu Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ser Lys Gly Cys Val

20 25 30

Cys Lys Asp Lys Gly Gln Cys Phe Cys Asp Gly Ala Lys Gly Glu Lys

35 40 45

Gly Glu Lys Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Gln Lys Gly

50 55 60

Phe Thr Gly Pro Glu Gly Leu Pro Gly Pro Gln Gly Pro Lys Gly Phe

65 70 75 80

Pro Gly Leu Pro Gly Leu Thr Gly Ser Lys Gly Val Arg Gly Ile Ser

85 90 95

Gly Leu Pro Gly Phe Ser Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly

100 105 110

Asn Thr Gly Pro Tyr Gly Leu Val Gly Val Pro Gly Cys Ser Gly Ser

115 120 125

Lys Gly Glu Gln Gly Phe Pro Gly Leu Pro Gly Thr Leu Gly Tyr Pro

130 135 140

Gly Ile Pro Gly Ala Ala Gly Leu Lys Gly Gln Lys Gly Ala Pro Ala

145 150 155 160

Lys Glu Glu Asp Ile Glu Leu Asp Ala Lys Gly Asp Pro Gly Leu Pro

165 170 175

Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Phe Pro Gly

180 185 190

Pro Val Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Phe Phe Gly Phe Pro Gly Ala

195 200 205

Met Gly Pro Arg Gly Pro Lys Gly His Met Gly Glu Arg Val Ile Gly

210 215 220

His Lys Gly Glu Arg Gly Val Lys Gly Leu Thr Gly Pro Pro Gly Pro

225 230 235 240

Pro Gly Thr Val Ile Val Thr Leu Thr Gly Pro Asp Asn Arg Thr Asp

245 250 255

Leu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Lys Gly Ala Met Gly Glu Pro Gly Pro

260 265 270

Pro Gly Pro Ser Gly Leu Pro Gly Glu Ser Tyr Gly Ser Glu Lys Gly

275 280 285

Ala Pro Gly Asp Pro Gly Leu Gln Gly Lys Pro Gly Lys Asp Gly Val

290 295 300

Pro Gly Phe Pro Gly Ser Glu Gly Val Lys Gly Asn Arg Gly Phe Pro

305 310 315 320

Gly Leu Met Gly Glu Asp Gly Ile Lys Gly Gln Lys Gly Asp Ile Gly

325 330 335

Pro Pro Gly Phe Arg Gly Pro Thr Glu Tyr Tyr Asp Thr Tyr Gln Glu

340 345 350

Lys Gly Asp Glu Gly Thr Pro Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Ala Arg

355 360 365

Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Val Pro Gly Ser Pro Gly

370 375 380

Ser Ser Arg Pro Gly Leu Arg Gly Ala Pro Gly Trp Pro Gly Leu Lys

385 390 395 400

Gly Ser Lys Gly Glu Arg Gly Arg Pro Gly Lys Asp Ala Met Gly Thr

405 410 415

Pro Gly Ser Pro Gly Cys Ala Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Ser Pro

420 425 430

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Asp Ile Val Phe Arg Lys Gly Pro Pro

435 440 445

Gly Asp His Gly Leu Pro Gly Tyr Leu Gly Ser Pro Gly Ile Pro Gly

450 455 460

Val Asp Gly Pro Lys Gly Glu Pro Gly Leu Leu Cys Thr Gln Cys Pro

465 470 475 480

Tyr Ile Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Leu His Gly

485 490 495

Val Lys Gly Ile Pro Gly Arg Gln Gly Ala Ala Gly Leu Lys Gly Ser

500 505 510

Pro Gly Ser Pro Gly Asn Thr Gly Leu Pro Gly Phe Pro Gly Phe Pro

515 520 525

Gly Ala Gln Gly Asp Pro Gly Leu Lys Gly Glu Lys Gly Glu Thr Leu

530 535 540

Gln Pro Glu Gly Gln Val Gly Val Pro Gly Asp Pro Gly Leu Arg Gly

545 550 555 560

Gln Pro Gly Arg Lys Gly Leu Asp Gly Ile Pro Gly Thr Pro Gly Val

565 570 575

Lys Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Leu Ala Leu Ser Gly Glu Lys

580 585 590

Gly Asp Gln Gly Pro Pro Gly Asp Pro Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly

595 600 605

Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Tyr Gly Pro Gln Gly Glu Pro

610 615 620

Gly Leu Gln Gly Thr Gln Gly Val Pro Gly Ala Pro Gly Pro Pro Gly

625 630 635 640

Glu Ala Gly Pro Arg Gly Glu Leu Ser Val Ser Thr Pro Val Pro Gly

645 650 655

Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly His Pro Gly Pro Gln Gly Pro

660 665 670

Pro Gly Ile Pro Gly Ser Leu Gly Lys Cys Gly Asp Pro Gly Leu Pro

675 680 685

Gly Pro Asp Gly Glu Pro Gly Ile Pro Gly Ile Gly Phe Pro Gly Pro

690 695 700

Pro Gly Pro Lys Gly Asp Gln Gly Phe Pro Gly Thr Lys Gly Ser Leu

705 710 715 720

Gly Cys Pro Gly Lys Met Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Lys Pro Gly

725 730 735

Leu Pro Gly Ala Lys Gly Glu Pro Ala Val Ala Met Pro Gly Gly Pro

740 745 750

Gly Thr Pro Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Asn Ser Gly Glu His Gly

755 760 765

Glu Ile Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly Asn

770 775 780

Glu Gly Leu Asp Gly Pro Arg Gly Asp Pro Gly Gln Pro Gly Pro Pro

785 790 795 800

Gly Glu Gln Gly Pro Pro Gly Arg Cys Ile Glu Gly Pro Arg Gly Ala

805 810 815

Gln Gly Leu Pro Gly Leu Asn Gly Leu Lys Gly Gln Gln Gly Arg Arg

820 825 830

Gly Lys Thr Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Ile Pro Gly Leu Asp Arg

835 840 845

Ser Gly Phe Pro Gly Glu Thr Gly Ser Pro Gly Ile Pro Gly His Gln

850 855 860

Gly Glu Met Gly Pro Leu Gly Gln Arg Gly Tyr Pro Gly Asn Pro Gly

865 870 875 880

Ile Leu Gly Pro Pro Gly Glu Asp Gly Val Ile Gly Met Met Gly Phe

885 890 895

Pro Gly Ala Ile Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Asn Pro Gly Thr Pro

900 905 910

Gly Gln Arg Gly Ser Pro Gly Ile Pro Gly Val Lys Gly Gln Arg Gly

915 920 925

Thr Pro Gly Ala Lys Gly Glu Gln Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Pro

930 935 940

Ser Glu Ile Ser His Val Ile Gly Asp Lys Gly Glu Pro Gly Leu Lys

945 950 955 960

Gly Phe Ala Gly Asn Pro Gly Glu Lys Gly Asn Arg Gly Val Pro Gly

965 970 975

Met Pro Gly Leu Lys Gly Leu Lys Gly Leu Pro Gly Pro Ala Gly Pro

980 985 990

Pro Gly Pro Arg Gly Asp Leu Gly Ser Thr Gly Asn Pro Gly Glu Pro

995 1000 1005

Gly Leu Arg Gly Ile Pro Gly Ser Met Gly Asn Met Gly Met Pro

1010 1015 1020

Gly Ser Lys Gly Lys Arg Gly Thr Leu Gly Phe Pro Gly Arg Ala

1025 1030 1035

Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Ile His Gly Leu Gln Gly Asp Lys

1040 1045 1050

Gly Glu Pro Gly Tyr Ser Glu Gly Thr Arg Pro Gly Pro Pro Gly

1055 1060 1065

Pro Thr Gly Asp Pro Gly Leu Pro Gly Asp Met Gly Lys Lys Gly

1070 1075 1080

Glu Met Gly Gln Pro Gly Pro Pro Gly His Leu Gly Pro Ala Gly

1085 1090 1095

Pro Glu Gly Ala Pro Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly

1100 1105 1110

Lys Pro Gly Pro His Gly Asp Leu Gly Phe Lys Gly Ile Lys Gly

1115 1120 1125

Leu Leu Gly Pro Pro Gly Ile Arg Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly

1130 1135 1140

Phe Pro Gly Ser Pro Gly Pro Met Gly Ile Arg Gly Asp Gln Gly

1145 1150 1155

Arg Asp Gly Ile Pro Gly Pro Ala Gly Glu Lys Gly Glu Thr Gly

1160 1165 1170

Leu Leu Arg Ala Pro Pro Gly Pro Arg Gly Asn Pro Gly Ala Gln

1175 1180 1185

Gly Ala Lys Gly Asp Arg Gly Ala Pro Gly Phe Pro Gly Leu Pro

1190 1195 1200

Gly Arg Lys Gly Ala Met Gly Asp Ala Gly Pro Arg Gly Pro Thr

1205 1210 1215

Gly Ile Glu Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ile

1220 1225 1230

Ile Pro Gly Gln Thr Gly Asn Arg Gly Pro Pro Gly Ser Arg Gly

1235 1240 1245

Ser Pro Gly Ala Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser His Val

1250 1255 1260

Ile Gly Ile Lys Gly Asp Lys Gly Ser Met Gly His Pro Gly Pro

1265 1270 1275

Lys Gly Pro Pro Gly Thr Ala Gly Asp Met Gly Pro Pro Gly Arg

1280 1285 1290

Leu Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Leu Pro Gly Pro Arg Gly Asp

1295 1300 1305

Pro Gly Phe Gln Gly Phe Pro Gly Val Lys Gly Glu Lys Gly Asn

1310 1315 1320

Pro Gly Phe Leu Gly Ser Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ile Gly Pro

1325 1330 1335

Lys Gly Pro Pro Gly Val Arg Gly Asp Pro Gly Thr Leu Lys Ile

1340 1345 1350

Ile Ser Leu Pro Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Glu

1355 1360 1365

Pro Gly Met Gln Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Asn

1370 1375 1380

Leu Gly Pro Cys Gly Pro Arg Gly Lys Pro Gly Lys Asp Gly Lys

1385 1390 1395

Pro Gly Thr Pro Gly Pro Ala Gly Glu Lys Gly Asn Lys Gly Ser

1400 1405 1410

Lys Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Ser Asp Gly Leu Pro Gly Leu

1415 1420 1425

Lys Gly Lys Arg Gly Asp Ser Gly Ser Pro Ala Thr Trp Thr Thr

1430 1435 1440

Arg Gly Phe Val Phe Thr Arg His Ser Gln Thr Thr Ala Ile Pro

1445 1450 1455

Ser Cys Pro Glu Gly Thr Val Pro Leu Tyr Ser Gly Phe Ser Phe

1460 1465 1470

Leu Phe Val Gln Gly Asn Gln Arg Ala His Gly Gln Asp Leu Gly

1475 1480 1485

Thr Leu Gly Ser Cys Leu Gln Arg Phe Thr Thr Met Pro Phe Leu

1490 1495 1500

Phe Cys Asn Val Asn Asp Val Cys Asn Phe Ala Ser Arg Asn Asp

1505 1510 1515

Tyr Ser Tyr Trp Leu Ser Thr Pro Ala Leu Met Pro Met Asn Met

1520 1525 1530

Ala Pro Ile Thr Gly Arg Ala Leu Glu Pro Tyr Ile Ser Arg Cys

1535 1540 1545

Thr Val Cys Glu Gly Pro Ala Ile Ala Ile Ala Val His Ser Gln

1550 1555 1560

Thr Thr Asp Ile Pro Pro Cys Pro His Gly Trp Ile Ser Leu Trp

1565 1570 1575

Lys Gly Phe Ser Phe Ile Met Phe Thr Ser Ala Gly Ser Glu Gly

1580 1585 1590

Thr Gly Gln Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Cys Leu Glu Glu Phe

1595 1600 1605

Arg Ala Ser Pro Phe Leu Glu Cys His Gly Arg Gly Thr Cys Asn

1610 1615 1620

Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Ser Phe Trp Leu Ala Ser Leu Asn Pro

1625 1630 1635

Glu Arg Met Phe Arg Lys Pro Ile Pro Ser Thr Val Lys Ala Gly

1640 1645 1650

Glu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Arg Cys Gln Val Cys Met Lys Lys

1655 1660 1665

Arg His

1670

<210> 69

<211> 1690

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 69

Met Trp Ser Leu His Ile Val Leu Met Arg Cys Ser Phe Arg Leu Thr

1 5 10 15

Lys Ser Leu Ala Thr Gly Pro Trp Ser Leu Ile Leu Ile Leu Phe Ser

20 25 30

Val Gln Tyr Val Tyr Gly Ser Gly Lys Lys Tyr Ile Gly Pro Cys Gly

35 40 45

Gly Arg Asp Cys Ser Val Cys His Cys Val Pro Glu Lys Gly Ser Arg

50 55 60

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ile Gly Pro Leu Gly

65 70 75 80

Ala Pro Gly Pro Ile Gly Leu Ser Gly Glu Lys Gly Met Arg Gly Asp

85 90 95

Arg Gly Pro Pro Gly Ala Ala Gly Asp Lys Gly Asp Lys Gly Pro Thr

100 105 110

Gly Val Pro Gly Phe Pro Gly Leu Asp Gly Ile Pro Gly His Pro Gly

115 120 125

Pro Pro Gly Pro Arg Gly Lys Pro Gly Met Ser Gly His Asn Gly Ser

130 135 140

Arg Gly Asp Pro Gly Phe Pro Gly Gly Arg Gly Ala Leu Gly Pro Gly

145 150 155 160

Gly Pro Leu Gly His Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asn Ser Val

165 170 175

Phe Ile Leu Gly Ala Val Lys Gly Ile Gln Gly Asp Arg Gly Asp Pro

180 185 190

Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Ser Trp Gly Ala Gly Gly Pro Ala Gly

195 200 205

Pro Thr Gly Tyr Pro Gly Glu Pro Gly Leu Val Gly Pro Pro Gly Gln

210 215 220

Pro Gly Arg Pro Gly Leu Lys Gly Asn Pro Gly Val Gly Val Lys Gly

225 230 235 240

Gln Met Gly Asp Pro Gly Glu Val Gly Gln Gln Gly Ser Pro Gly Pro

245 250 255

Thr Leu Leu Val Glu Pro Pro Asp Phe Cys Leu Tyr Lys Gly Glu Lys

260 265 270

Gly Ile Lys Gly Ile Pro Gly Met Val Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly

275 280 285

Arg Lys Gly Glu Ser Gly Ile Gly Ala Lys Gly Glu Lys Gly Ile Pro

290 295 300

Gly Phe Pro Gly Pro Arg Gly Asp Pro Gly Ser Tyr Gly Ser Pro Gly

305 310 315 320

Phe Pro Gly Leu Lys Gly Glu Leu Gly Leu Val Gly Asp Pro Gly Leu

325 330 335

Phe Gly Leu Ile Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Asn Arg Gly His Pro

340 345 350

Gly Pro Pro Gly Val Leu Val Thr Pro Pro Leu Pro Leu Lys Gly Pro

355 360 365

Pro Gly Asp Pro Gly Phe Pro Gly Arg Tyr Gly Glu Thr Gly Asp Val

370 375 380

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Leu Gly Arg Pro Gly Glu Ala Cys

385 390 395 400

Ala Gly Met Ile Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Phe Pro Gly Leu Pro

405 410 415

Gly Leu Pro Gly Glu Ala Gly Ile Pro Gly Arg Pro Asp Ser Ala Pro

420 425 430

Gly Lys Pro Gly Lys Pro Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Ala Pro Gly

435 440 445

Leu Gln Gly Leu Pro Gly Ser Ser Val Ile Tyr Cys Ser Val Gly Asn

450 455 460

Pro Gly Pro Gln Gly Ile Lys Gly Lys Val Gly Pro Pro Gly Gly Arg

465 470 475 480

Gly Pro Lys Gly Glu Lys Gly Asn Glu Gly Leu Cys Ala Cys Glu Pro

485 490 495

Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Arg Gln Gly

500 505 510

Ser Lys Gly Asp Leu Gly Leu Pro Gly Trp Leu Gly Thr Lys Gly Asp

515 520 525

Pro Gly Pro Pro Gly Ala Glu Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Lys His

530 535 540

Gly Ala Ser Gly Pro Pro Gly Asn Lys Gly Ala Lys Gly Asp Met Val

545 550 555 560

Val Ser Arg Val Lys Gly His Lys Gly Glu Arg Gly Pro Asp Gly Pro

565 570 575

Pro Gly Phe Pro Gly Gln Pro Gly Ser His Gly Arg Asp Gly His Ala

580 585 590

Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Asp His Glu Asp Ala Thr

595 600 605

Pro Gly Gly Lys Gly Phe Pro Gly Pro Leu Gly Pro Pro Gly Lys Ala

610 615 620

Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Leu Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Glu

625 630 635 640

Arg Gly His Pro Gly Val Pro Gly His Pro Gly Val Arg Gly Pro Asp

645 650 655

Gly Leu Lys Gly Gln Lys Gly Asp Thr Ile Ser Cys Asn Val Thr Tyr

660 665 670

Pro Gly Arg His Gly Pro Pro Gly Phe Asp Gly Pro Pro Gly Pro Lys

675 680 685

Gly Phe Pro Gly Pro Gln Gly Ala Pro Gly Leu Ser Gly Ser Asp Gly

690 695 700

His Lys Gly Arg Pro Gly Thr Pro Gly Thr Ala Glu Ile Pro Gly Pro

705 710 715 720

Pro Gly Phe Arg Gly Asp Met Gly Asp Pro Gly Phe Gly Gly Glu Lys

725 730 735

Gly Ser Ser Pro Val Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Val

740 745 750

Asn Gly Gln Lys Gly Ile Pro Gly Asp Pro Ala Phe Gly His Leu Gly

755 760 765

Pro Pro Gly Lys Arg Gly Leu Ser Gly Val Pro Gly Ile Lys Gly Pro

770 775 780

Arg Gly Asp Pro Gly Cys Pro Gly Ala Glu Gly Pro Ala Gly Ile Pro

785 790 795 800

Gly Phe Leu Gly Leu Lys Gly Pro Lys Gly Arg Glu Gly His Ala Gly

805 810 815

Phe Pro Gly Val Pro Gly Pro Pro Gly His Ser Cys Glu Arg Gly Ala

820 825 830

Pro Gly Ile Pro Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly Tyr Pro Gly Ser Pro

835 840 845

Gly Ala Pro Gly Gly Lys Gly Gln Pro Gly Asp Val Gly Pro Pro Gly

850 855 860

Pro Ala Gly Met Lys Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Arg Pro Gly Ala

865 870 875 880

His Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ile Pro Gly Pro Phe Gly Asp Asp

885 890 895

Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Lys Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly

900 905 910

Phe Pro Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Lys Pro Gly Ala Glu Gly Cys

915 920 925

Pro Gly Ala Lys Gly Glu Pro Gly Glu Lys Gly Met Ser Gly Leu Pro

930 935 940

Gly Asp Arg Gly Leu Arg Gly Ala Lys Gly Ala Ile Gly Pro Pro Gly

945 950 955 960

Asp Glu Gly Glu Met Ala Ile Ile Ser Gln Lys Gly Thr Pro Gly Glu

965 970 975

Pro Gly Pro Pro Gly Asp Asp Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Asp Lys

980 985 990

Gly Thr Pro Gly Met Gln Gly Arg Arg Gly Glu Pro Gly Arg Tyr Gly

995 1000 1005

Pro Pro Gly Phe His Arg Gly Glu Pro Gly Glu Lys Gly Gln Pro

1010 1015 1020

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser Thr Gly Leu Arg

1025 1030 1035

Gly Phe Ile Gly Phe Pro Gly Leu Pro Gly Asp Gln Gly Glu Pro

1040 1045 1050

Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Phe Ser Gly Ile Asp Gly Ala Arg

1055 1060 1065

Gly Pro Lys Gly Asn Lys Gly Asp Pro Ala Ser His Phe Gly Pro

1070 1075 1080

Pro Gly Pro Lys Gly Glu Pro Gly Ser Pro Gly Cys Pro Gly His

1085 1090 1095

Phe Gly Ala Ser Gly Glu Gln Gly Leu Pro Gly Ile Gln Gly Pro

1100 1105 1110

Arg Gly Ser Pro Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Ser Ser Gly Pro

1115 1120 1125

Pro Gly Cys Pro Gly Asp His Gly Met Pro Gly Leu Arg Gly Gln

1130 1135 1140

Pro Gly Glu Met Gly Asp Pro Gly Pro Arg Gly Leu Gln Gly Asp

1145 1150 1155

Pro Gly Ile Pro Gly Pro Pro Gly Ile Lys Gly Pro Ser Gly Ser

1160 1165 1170

Pro Gly Leu Asn Gly Leu His Gly Leu Lys Gly Gln Lys Gly Thr

1175 1180 1185

Lys Gly Ala Ser Gly Leu His Asp Val Gly Pro Pro Gly Pro Val

1190 1195 1200

Gly Ile Pro Gly Leu Lys Gly Glu Arg Gly Asp Pro Gly Ser Pro

1205 1210 1215

Gly Ile Ser Pro Pro Gly Pro Arg Gly Lys Lys Gly Pro Pro Gly

1220 1225 1230

Pro Pro Gly Ser Ser Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Thr Gly

1235 1240 1245

Arg Ala Pro Lys Asp Ile Pro Asp Pro Gly Pro Pro Gly Asp Gln