Способы получения пептидов, полипептидов или клеток для модулирования иммунитета - RU2019129537A
Код документа: RU2019129537A
Формула
1. Способ определения способности пептидного эпитопа селективно связываться с белками CD1a, CD1b и/или CD1c, включающий стадии:
a) обеспечения выделенных клеток, экспрессирующих на своей поверхности CD1a, CD1b и/или CD1c;
b) селективного нанесения указанного эпитопа на указанные выделенные клетки;
c) приведения NKT-клеток (естественная клетка-киллер) в контакт с клетками со стадии b, потенциально презентирующими указанный эпитоп;
d) и измерения уровня активации указанных NKT-клеток.
2. Способ по п. 1, где эпитоп получен из выделенного белка или синтетического пептида, содержащего аминокислотную последовательность белка или его фрагмента, где указанный белок получен из опухоли, внутриклеточного патогена, аутоантигена, биологического белка, аллергена или агента, вызывающего хроническое воспаление, и/или где эпитоп содержит посттрансляционно модифицированные аминокислоты, предпочтительно где гидрофобность указанной посттрансляционно модифицированной аминокислоты выше, чем у соответствующей немодифицированной аминокислоты.
3. Пептид, который можно получить способом по п. 1 или 2, для применения при вакцинации против рака, против инфекций внутриклеточными патогенами, против аутоиммунных заболеваний или против аллергических заболеваний.
4. Способ повышения способности эпитопа связываться с белками CD1a, CD1b и/или CD1c, включающий стадии:
a) обеспечения выделенных клеток, экспрессирующих на своей поверхности CD1a, CD1b и/или CD1c;
b) специфического нанесения указанного эпитопа на указанные выделенные клетки;
c) приведения NKT-клеток в контакт с клетками со стадии b);
d) измерения низкой или отсутствующей активации указанных NKT-клеток;
е) модификации указанного эпитопа путем добавления фрагмента, выбранного из группы, состоящей из гидрофобной аминокислоты, гидрофобного посттрансляционно модифицированного аминокислотного остатка и/или удаления негидрофобной аминокислоты, присутствующей в указанном эпитопе, с получением таким образом модифицированного белка,
f) специфического нанесения указанного модифицированного эпитопа на указанные выделенные клетки;
g) приведения NKT-клеток в контакт с клетками со стадии f), потенциально презентирующими указанный модифицированный эпитоп, и
h) отбора модифицированного эпитопа, демонстрирующего повышенную активацию указанных NKT-клеток на стадии g) по сравнению с показателем на стадии d).
5. Способ по п. 4, где NKT-клетки представляют собой CD8+ или CD4-/CD8-, и предпочтительно где эпитоп получен из раковых клеток или из клеток, инфицированных внутриклеточным патогеном.
6. Способ по п. 4 или 5, дополнительно включающий стадию добавления в одну или обе фланкирующие области эпитопа пальмитоил-цистеинового фрагмента, CD8-специфического связывающего фрагмента, агониста TLR, и/или добавления аминокислоты цистеина или мотива цистеина в обе фланкирующие области.
7. Пептид, который можно получить способом по п. 5 или 6, для применения при лечении или вакцинации против рака или внутриклеточного патогена.
8. Способ по п. 4, где NKT-клетки представляют собой CD4+, и предпочтительно где эпитоп получен из аутоантигена, аллергена или агента, вызывающего хроническое воспаление, и терапевтического белка, выбранного из группы, состоящей из антител, факторов свертывания крови и белков, используемых в заместительной терапии.
9. Способ по п. 8, дополнительно включающий стадию добавления в одну или обе фланкирующие области указанного эпитопа пальмитоил-цистеинового фрагмента, CD4-специфического связывающего фрагмента, агониста TLR и/или добавления аминокислоты цистеина или мотива цистеина в обе фланкирующие области.
10. Терапевтический белок, который может быть получен способом по п. 8 или 9.
11. Способ снижения способности эпитопа связываться с белками CD1a, CD1b и/или CD1c, включающий стадии
a) обеспечения выделенных клеток, экспрессирующих на своей поверхности CD1a, CD1b и/или CD1c;
b) специфического нанесения указанного эпитопа на указанные выделенные клетки;
c) приведения NKT-клеток в контакт с клетками со стадии b;
d) измерения значительной активации указанных NKT-клеток,
e) замены по меньшей мере одной гидрофобной аминокислоты одной (схожей) негидрофобной аминокислотой, и/или селективного удаления одной гидрофобной аминокислоты из указанного эпитопа, и/или замены посттрансляционно модифицированной аминокислоты соответствующей немодифицированной аминокислотой;
f) специфического нанесения модифицированного эпитопа на указанные выделенные клетки;
g) приведения NKT-клеток в контакт с клетками со стадии f, потенциально презентирующими указанный модифицированный эпитоп, и
h) отбора модифицированного эпитопа, демонстрирующего сниженную активацию указанных NKT-клеток со стадии g по сравнению с показателем на стадии d.
12. Способ по п. 11, где эпитоп получен из терапевтического белка, выбранного из группы, состоящей из антител, факторов свертывания крови и белков, используемых в заместительной терапии.
13. Терапевтический белок, который можно получить способом по п. 12, для применения при лечении заболевания, выбранного из группы, состоящей из аллергического заболевания и аутоиммунного заболевания.
14. Способ повышения способности клетки презентировать эпитоп, включающий добавление в одну или обе фланкирующие области указанного эпитопа гидрофобной аминокислоты, пальмитоил-цистеинового фрагмента, CD4-специфического мотива, CD8-специфического мотива, или добавление аминокислоты цистеина или мотива цистеина в обе фланкирующие области.
15. Способ обнаружения, выделения или элиминации NKT-клеток in vitro из образца крови или ткани, включающий стадии обеспечения поверхности, содержащей белки CD1a, CD1b и/или CD1c, нанесения на указанную поверхность эпитопа, для которого было установлено, что он связывается с указанными белками CD1a, CD1b и/или CD1c и активирует NKT-клетки, и нанесения указанного образца крови или ткани на поверхность, содержащую указанный эпитоп.
