Варианты липаз для их применения в фармацевтике - RU2009128067A

Реферат

1. Липаза, используемая в качестве лекарственного препарата, где указанная липаза: ! (a) имеет последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности аминокислот 1-269 SEQ ID NO: 2; ! (b) обладает липазной активностью; и ! (c) по сравнению с последовательностью аминокислот 1-269 SEQ ID NO:2 имеет замены N33Q, T231R и N233R, а также по меньшей мере одну дополнительную замену, выбранную из нижеследующих замен: E1*,D,N; Q4H,P,R; D5E; N8L,Q; Q9H; F10L; N11C,D,H,L,P,Q,R,S; G23E; N26A,H,I; D27I,N,Q,R,S,V; P29T; A30T,V; T37K,M; G38A,D,F,H,I,K,L,M,N,P,Q,S,T,W,Y; N39H,S; E43K; K46M; A49T; L52I,R; E56K,Q,R,S; D57G,N; V60E,S; G61R; V63R; A68V; L69I; N71I,S; N73Q,Y; I76T; R84E; I86F,L; E87A,H,K,R; I90L,V; G91,A,C,E,F,K,L,M,N,S,T,V,W,Y; L93*,F; N94*,K,Q,R,S; F95*; D96*,E,G,N,R,S,W,Y; L97M,Q; K98I,T; E99D; N101Q; D102E,G,Y; R108M; G109A; D111A,E,N,S; G112A; T114I; S115L; W117C,D,E,F,G,H,I,K,L,P,S,T,V,Y; D122E,N; Q126L; V128A; D130H; H135D; P136H; Y138F; V141E,L; A150V; V154F,I,L; A155V; G156R; G161A,E; N162G,S,T; G163A,C,D,E,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y; D167E; V168M; V176A,D,F,G,H,I,K,M,N,Q,T,W; G177A; R179T; L185M; G190C,D; N200Q,S; R205I; L206F; E210D,R,V,Y; S216P; E219D; G225P; T226N; L227F,G; P229R; E239D; G240L; D242E; T244S; G246A; Q249R; N251Q,S; D254A,G,I,K,L,M,N,R,Q,S,Y; I255A,F; P256A,F,G,H,I,L,M,N,Q,S,T,V,W,Y и L269F,H. ! 2. Липаза по п.1, которая по сравнению с эталонной липазой, имеющей последовательность SEQ ID NO:2, обладает улучшенными расщепляющими свойствами in vitro и имеет нижеследующие замены: N33Q+T231R+N233R. ! 3. Способ определения расщепляющих свойств липазы in vitro по сравнению с эталонной липазой, где указанный способ включает следующие стадии: ! a) выбора эталонной липазы; ! b) смешивания 100 ч./об. корма с 20 ч./об. пепсина и 30 ч./об. липазы или эталонной липазы соответственно; ! c) добавления i) 0 или ii) 10 ч./об. буфера (0,8 M MES, 0,8 M ацетата натрия, 0,8 M имидазола, pH 7,0), где стадия i) может представлять собой стадию выделения желудочного сока при pH 3, а стадия ii) может представлять собой стадию выделения желудочного сока при pH 5; ! d) инкубирования в течение 1 �