Аденовирусный/альфавитный гибридный вектор для эффективного введения и экспрессии терапевтических генов в опухолевые клетки - RU2006145306A

Реферат

1. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена, отличающийся тем, что он содержит, по меньшей мере, следующие элементы, ориентированные в направлении от 5' к 3':

i. первую цепь из аденовируса, содержащую последовательность первого инвертированного концевого повтора (ITR) и сигнальную последовательность для упаковки аденовируса;

ii. первую некодирующую «лишнюю» последовательность;

iii. последовательность, соответствующую тканеспецифическому промотору;

iv. цепь кДНК, полученную из альфавируса, последовательность которой частично комплементарна РНК альфавируса, включающую, по меньшей мере, последовательность, кодирующую, по меньшей мере, один интересующий экзогенный ген;

v. последовательность полиаденилирования; и

vi. последовательность второго аденовирусного инвертированного концевого повтора (ITR).

2. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит элемент vii, который представляет вторую некодирующую "лишнюю" последовательность между элементом v и элементом vi.

3. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент ii представляет человеческую некодирующую "лишнюю" последовательность.

4. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1 или 3, отличающийся тем, что элемент ii представляет собой область интрона человеческой геномной гипоксантинфосфорибозилтрансферазы, HPRT.

5. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент i имеет последовательность SEQ ID № 1.

6. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент iii представляет опухолеспецифический промотор.

7. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.6, отличающийся тем, что элемент iii представляет опухолеспецифический промотор, выбранный из AFP, теломеразы TERT, PAP, E2F и HIF.

8. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент iii представляет опухолеспецифический промотор, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID № 7, соответствующую AFP р+е, и SEQ ID № 15, соответствующей теломеразе TERT.

9. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент iv содержит последовательность, полученную из вируса леса Семлики (SFV).

10. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что указанная цепь iv кДНК, полученная из альфавируса, последовательность которой частично комплементарна РНК альфавируса, содержит, по меньшей мере, одну последовательность, кодирующую, по меньшей мере, один интересующий экзогенный ген, и которая также содержит

а) 5'-последовательность, необходимую для репликации альфавируса,

b) последовательность, кодирующую неструктурные белки, необходимые для репликации РНК альфавируса,

с) по меньшей мере, один субгеномный промотор альфавируса, и

d) 3'-последовательность, необходимую для репликации альфавируса.

11. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.10, отличающийся тем, что последовательности а)-с) элемента iv в целом имеют последовательность, выбранную из SEQ ID № 3 и SEQ ID № 4.

12. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.10, отличающийся тем, что элемент iv d) имеет последовательность SEQ ID № 5.

13. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что интересующий экзогенный ген выбран из одного или нескольких терапевтических генов, одного или нескольких генов-репортеров и их комбинаций.

14. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.13, отличающийся тем, что интересующий экзогенный ген является терапевтическим геном интерлейкина IL-12 млекопитающих.

15. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.13, отличающийся тем, что интересующий экзогенный ген является терапевтическим геном человеческого интерлейкина IL-12.

16. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.13, отличающийся тем, что интересующий экзогенный ген является терапевтическим геном, выбранным из генов колониестимулирующего фактора (GMCSF), альфа-интерферона, тимидинкиназы вируса герпеса простого (HSV-TK).

17. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.11, отличающийся тем, что элемент iv содержит одну или несколько последовательно соединенных подгрупп (субгеномный промотор + интересующий экзогенный ген).

18. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.13, отличающийся тем, что интересующий экзогенный ген является геном-репортером, выбранным из генов LacZ, люциферазы, тимидинкиназы вируса герпеса простого (HSV-TK) и GFP.

19. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по пп.9-18, отличающийся тем, что элемент iv образует репликон, функционально контролируемый промотором iii, и тем, что альфавирусный субгеномный промотор, входящий в состав iv c), функционально контролирует экспрессию интересующего экзогенного гена.

20. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент v представляет последовательность полиаденилирования из SV40.

21. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент v имеет последовательность SEQ ID № 6.

22. Аденовирусный вектор для экспрессии гена по п.2, отличающийся тем, что вторая некодирующая "лишняя" последовательность представляет собой С346.

23. Аденовирусный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что элемент vi имеет последовательность SEQ ID № 2.

24. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он содержит:

i. первую цепь из аденовируса, содержащую последовательность первого инвертированного концевого повтора (ITR) и сигнальную последовательность для упаковки аденовируса;

ii. первую некодирующую "лишнюю" последовательность, которая представляет собой область интрона человеческой геномной гипоксантинфосфорибозилтрансферазы (HPRT);

iii. последовательность, соответствующую тканеспецифическому промотору, который представляет собой промотор AFP;

iv. цепь кДНК, полученную из альфавируса, последовательность которой частично комплементарна РНК альфавируса, полученной из вируса SFV, которая включает последовательность, кодирующую интересующий экзогенный ген, который представляет собой hIL-12;

v. последовательность полиаденилирования из SV40;

vi. последовательность второго инвертированного концевого повтора (ITR) и

vii. вторую некодирующую "лишнюю" последовательность, которая представляет собой человеческую геномную С346, расположенную между элементом v и элементом vi.

25. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он содержит:

i. первую цепь из аденовируса, содержащую последовательность первого инвертированного концевого повтора (ITR) и сигнальную последовательность для упаковки аденовируса;

ii. первую некодирующую «лишнюю» последовательность, которая представляет собой область интрона человеческой геномной гипоксантинфосфорибозилтрансферазы (HPRT);

iii. последовательность, соответствующую тканеспецифическому промотору, который представляет собой промотор AFP;

iv. цепь кДНК, полученную из альфавируса, последовательность которой частично комплементарна РНК альфавируса, полученной из вируса SFV, которая включает последовательность, кодирующую интересующий экзогенный ген, выбранный из mIL-12 и LacZ;

v. последовательность полиаденилирования из SV40;

vi. последовательность второго инвертированного концевого повтора (ITR) и

vii. вторую некодирующую "лишнюю" последовательность, которая представляет собой человеческую геномную С346, расположенную между элементом v и элементом vi.

26. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он имеет длину в пределах от 27 до 38 т.п.н.

27. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он имеет последовательность SEQ ID № 8.

28. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он имеет последовательность SEQ ID № 9.

29. Аденовирусный гибридный вектор для экспрессии гена по п.1, отличающийся тем, что он имеет последовательность SEQ ID № 10.

30. Применение аденовирусного гибридного вектора по любому из предшествующих пп. в способе переноса генетического материала в клетку.

31. Применение по п.30, в котором указанная клетка представляет собой опухолевую клетку.

32. Применение по п.31, в котором указанная клетка представляет собой опухолевую клетку, экспрессирующую AFP.

33. Применение аденовирусного гибридного вектора, определенного по любому из пп.1-29, для получения эффективного лекарственного препарата при лечении опухолей.

34. Применение аденовирусного гибридного вектора, определенного по любому из пп.1-29 для индукции иммунного ответа против чужеродных антигенов.

35. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит, по меньшей мере, один аденовирусный гибридный вектор, определенный по любому из пп.1-29.

36. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит, по меньшей мере, один аденовирусный гибридный вектор, определенный по любому из пп.1-29, где интересующим экзогенным геном является hIL-12.

37. Применение фармацевтической композиции, отличающейся тем, что она содержит, по меньшей мере, один аденовирусный гибридный вектор, определенный по любому из пп.1-29, в способе индукции иммунного ответа против чужеродных антигенов.