Нетоксичные векторы на основе впг для применений в эффективной доставке генов и комплементирующие клетки для их продуцирования - RU2020105656A
Код документа: RU2020105656A
Формула
1. Вектор на основе вируса простого герпеса (ВПГ), содержащий полинуклеотид, кодирующий один или более трансгенов, причем вектор на основе ВПГ не экспрессирует ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27 в качестве предранних генов, и причем вектор на основе ВПГ способен экспрессировать один или более трансгенов в течение по меньшей мере 28 дней после инфицирования некомплементирующих клеток вектором на основе ВПГ.
2. Вектор на основе ВПГ по п.1, причем вектор на основе ВПГ дополнительно не экспрессирует ICP47 в качестве предраннего гена.
3. Вектор на основе ВПГ по п.1 или 2, причем некомплементирующие клетки представляют собой культивируемые клетки кожных фибробластов человека (HDF).
4. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-3, включающий инактивирующую делецию в одном или более локусов ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27.
5. Вектор на основе ВПГ по п.4, в котором инактивирующая делеция в одном или более локусах ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27 представляет собой полную делецию кодирующей последовательности в указанном локусе.
6. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-5, включающий инактивирующую делецию в каждом из локусов ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27.
7. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-6, в котором один или более генов ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27 экспрессируется в качестве раннего или позднего гена.
8. Вектор на основе ВПГ по п.7, в котором ICP22 экспрессируется в качестве раннего гена.
9. Вектор на основе ВПГ по п. 8, в котором ICP22 в указанном геноме находится под контролем раннего промотора.
10. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-9, дополнительно включающий инактивирующую делецию в одном или более несущественных генов.
11. Вектор на основе ВПГ по п. 10, в котором один или более несущественных генов содержат UL41.
12. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-11, который дополнительно включает делецию области внутренних повторов (joint).
13. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-12, который дополнительно содержит ген, кодирующий мутантный гликопротеин, который усиливает инфекционность вектора по отношению к вектору на основе ВПГ, содержащему ВПГ дикого типа, или гликопротеин, который направляет проникновение ВПГ в клетки через неканонические рецепторы.
14. Вектор по п.13, причем указанный гликопротеин выбран из gB, gC, gD, gH и gK.
15. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-14, в котором полинуклеотид, кодирующий один или более трансгенов, функционально связан с конститутивным промотором млекопитающего.
16. Вектор на основе ВПГ по п. 15, в котором промотор представляет собой промотор, специфичный для клетки или ткани.
17. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-16, в котором полинуклеотид, кодирующий один или более трансгенов, является полицистронным.
18. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-17, в котором полинуклеотид, кодирующий один или более трансгенов, содержит один или более сайтов связывания для микроРНК.
19. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-18, в котором один или более трансгенов выбраны из Oct4, Klf4, Sox2, с-Мус, L-Myc, доминантно-негативного р53, Nanog, Glis1, Lin28, TFIID, GATA4, Nkx2.5, Tbx5, MEF2C, Myocd, Hand2, РВСН, Mesp1, SMARCD3, SERCA2a, Pax3, MyoD, Lhx2, FoxGl, FOXP2, Isl1, Ctip2, Tbr1, Ebf1, Gsx2, Srebp2, фактора VIII, фактора IX, дистрофина, CFTR, GlyRб1, энкефалина, изоформы GAD, нейротрофического фактора, Ascl1, Nurr1, Lmxl, Brn2, Mytl1, NeuroD1, Foxa2, Hnf4a, Foxal, Foxa2 или Foxa3, микроРНК, комбинации микроРНК или одной или более некодирующих РНК (нкРНК).
20. Вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-19, причем ВПГ генома дополнительно содержит одну или две консенсусных последовательностей для рекомбиназного фермента.
21. Вектор на основе ВПГ по п.20, в котором консенсусная последовательность для сайт-специфичного рекомбиназного фермента встроена в межгенную область.
22. Вирусный сток, содержащий вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-21.
23. Вектор по любому из пп. 1-21 или вирусный сток по п. 22 для применения в качестве лекарственного средства, причем лекарственное средство предназначено для введения субъекту в количестве и в месте, достаточном для инфекции клеток субъекта, так что один или более указанных трансгенов экспрессируется в клетках субъекта, и причем экспрессируемый трансген(ы) кодирует один или более профилактически или терапевтически активных белков, полипептидов или нкРНК.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор на основе ВПГ по любому из пп. 1-21 и фармацевтически приемлемый носитель.
25. Способ экспрессии трансгена в клетке in vitro, включающий инфекцию некомплементирующих клеток вектором на основе ВПГ по любому из пп. 1-21, так что один или более из указанных трансгенов экспрессируются в клетке.
