Способ получения аденовируса - RU2015135473A
Код документа: RU2015135473A
Формула
1. Способ получения химерного онколитического аденовируса, содержащего геном, который содержит область Е2В, при этом указанная область Е2В содержит последовательность нуклеиновой кислоты, полученную из первого аденовирусного серотипа, и последовательность нуклеиновой кислоты, полученную из второго, отличного аденовирусного серотипа; причем каждый первый и второй указанный серотип выбран из аденовирусных подгрупп В, С, D, Е или F, при этом указанный вирус содержит гексон и фибру из аденовируса группы В, частично или полностью делегированный участок Е3 и указанный вирус является репликативно-компетентным; причем указанный способ включает стадии:
a. культивирования клеток млекопитающего, инфицированных аденовирусом, в присутствии среды, подходящей для поддержания клеток таким образом, что вирус реплицируется, и причем клетки способны к поддержанию вирусной репликации, и
b. в конце культивационного периода выделения вируса, полученного на стадии а) фильтрованием, причем выделение вируса не следует за стадией клеточного лизиса, причем период культивирования составляет от 30 до 100 ч.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вирус имеет гексон и фибру от Ad11 и, в частности тем, что вирус представляет собой ColoAd1.
3. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что культивационный период составляет от 35 до 70 ч.
4. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что культивирование включает стадию перфузионной культуры, периодического культивирования с подпиткой, периодического культивирования, в особенности стадию перфузионной культуры.
5. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что клетки выращены в адгезивной или суспензионной культуре, в частности в суспензионной культуре.
6. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что клетки млекопитающего выбраны из группы, включающей HEK, СНО, HeLa, Viro, PerC6 и GMK, в частности HEK293.
7. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что объем культуры составляет 5 л или больше.
8. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в процессе культивирования концентрация вируса находится в диапазоне 20 - 150 чнк.
9. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в процессе культивирования концентрация вируса находится в диапазоне 40 - 150 чнк, такой как от 50 до 100 чнк.
10. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что клетки инфицированы вирусом с исходной концентрацией 1-9×104 вирусных частиц/мл (вч/мл) или более, такой как 1-9×105, 1-9×106, 1-9×107, 1-9×108, 1-9×109, в частности от 4 до 5×106 вч/мл.
11. Способ по любому из пп. 1 и 2, который обеспечивает фракцию онколитического вируса, причем указанный способ включает дополнительную стадию, такую как объединение первой фракции со второй фракцией или фракциями онколитического вируса, полученными идентичным, или отличным способом.
12. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что указанный способ соответствует производственному способу НПП.
13. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в качестве фильтра используется тангенциальный фильтр.
14. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает стадию очистки, выбранную из градиента CsCl, стадии хроматографии, такой как ионно-обменная хроматография, в частности анионная ионообменная хроматография, и их комбинации.
15. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что от 40 до 93% от общего количества вируса могут быть выделены из среды.
16. Способ по любому из пп. 1 и 2, дополнительно включающий введение вируса в буфер, подходящий для хранения.
17. Вирус или состав, полученный или доступный для получения способом, описанным в любом из п. 1-16.
